本发明涉及生物发酵技术领域，具体涉及一种液体深层发酵生产的富硒冬虫夏草菌丝体粉及其生产方法。
背景技术：
冬虫夏草(cordycepssinesis)生活在青藏高原海拔3000-5200米高寒草甸，是一种虫菌复合体。其虫菌关系在于，冬虫夏草菌(ophiocordycepssinesis)侵染蝙蝠蛾科昆虫的幼虫后，将幼虫躯体内的营养逐渐转化为菌丝体充满整个虫体组织，只残留一层虫皮，在冬季低温干燥土壤中保持虫形不变达数月之久称为冬虫，待夏季温湿适宜时在虫体头部长出棒状子实体(子座)并露出地面称为夏草。冬虫夏草菌也曾用蝙蝠蛾被毛孢(hirsutellahepialichenetshen)、中国被毛孢(hirsutellasinensis)、冬虫夏草头孢(cephalosporiumdongchongxiacaonia)、中华束丝孢(synnematiumsinense)命名，这些都是同种异名，现已统一修订为冬虫夏草菌(ophiocordycepssinesis)。
冬虫夏草具有调节阴阳、肺肾双补之特效，是唯一能同时平衡、调节阴阳的中药。现代药理学已证实，冬虫夏草具有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、抗疲劳、抗应激反应、降血糖血脂以及性激素样作用等。所以，冬虫夏草菌被国家食品药品监督局以蝙蝠蛾被毛孢命名列入“可用于保健品真菌菌种名单”(现行有效)。
硒是人体必需的微量元素，被称为“生命奇效元素”。众多研究表明，硒具有防癌抗癌，增强免疫力，抗氧化，防止心脑血管疾病，对重金属元素解毒、排毒，保护肝脏等作用。硒是人体多种酶的重要组成部分。目前，富硒产品分为无机富硒和有机富硒两类。无机硒的毒性大于有机硒，活性又低于有机硒。无机类富硒产品主要代表是亚硒酸钠，有机类富硒产品可以分为硒化合物制品、微生物富硒产品、植物富硒产品、动物富硒产品四类。
本发明是用冬虫夏草菌为菌种，经过在培养基中添加无机硒或有机硒液体深层发酵生产富硒冬虫夏草菌丝体粉。
由于冬虫夏草菌对温度要求极为严格，适宜生长温度为17-20℃，温度超过22℃就严重影响其生长，温度超过25℃甚至引起死亡；而且，冬虫夏草菌生长缓慢，停滞期较长。已报道的现有技术发酵周期长达15-20天,菌丝体收率较高的报道为20.8g/l(王英燕等发酵科技通讯2014年7月第43期中国被毛孢研究现状及发展趋势)。发酵生产富硒冬虫夏草菌丝体方面的研究成果较少。周坚乔等采用冬虫夏草菌为富硒载体，啤酒糟为基质液体深层发酵，虫草总富硒量为5808.20μg/l(菌丝干质量×硒含量)，干菌丝收率为12.28g/l,折算干菌丝总硒量为472μg/g(《中国酿造》2014)。陈宏伟等以原生质诱变选育高富硒冬虫夏草菌株，总硒含量达125.8μg/g，菌体收率13.445g/l(《食品与发酵工业》2009)。胡敏等采用冬虫夏草菌进行富硒液体发酵，菌体收率2.52％，硒含量7.90mg/kg(湖北大学学报2006.28)。这方面的中国专利也不多，cn201510992589.2公开一种用米糠液体发酵冬虫夏草菌丝体，菌丝富集硒32.97μg/g，菌丝收率4.55g/l。cn201610579616.8公开了一种富硒低铅、砷的冬虫夏草菌丝体的培养基及其培植方法，生产的菌丝体中硒含量52.01μg/kg，菌丝体收率未做描述。
在现有技术中，深层发酵富硒冬虫夏草菌丝体收率都较低，同时也存在无机硒利用率较低，产品硒含量较低，以及有机化程度不高的缺陷。所以，目前还没有液体深层发酵富硒冬虫夏草菌丝体粉产业化的报道。申请人经过对培养基的筛选和培养方法的改进，克服了现有技术的缺陷，取得了富硒冬虫夏草菌丝体收率35g/l，含总硒1350ug/g，其中有机硒占总硒量的92％以上，无机硒利用率85％以上的研究成果。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种冬虫夏草菌丝体粉及其生产方法。具体是以冬虫夏草菌为菌种，通过在培养基中添加无机硒或/和有机硒液体深层发酵生产富硒冬虫夏草菌丝体粉，干菌丝体收率28-35g/l，干菌丝体内含总硒25-1350ug/g，有机化率92％以上，培养基中无机硒的利用率85％以上；干菌丝体内还含有虫草酸4-8％，虫草多糖5-8％，腺苷0.03-0.17％。将该菌丝体粉碎成80-100目制备成富硒冬虫夏草菌丝体粉。
本发明的冬虫夏草菌(ophiocordycepssinesis)菌种选自工业微生物菌种保藏管理中心cicc，编号14088。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种发酵冬虫夏草菌丝体粉，该冬虫夏草菌丝体粉是以冬虫夏草菌为菌种，经过在培养基中添加亚硒酸钠或/和富硒酵母液体深层发酵培养，发酵液经过固液分离和干燥过程，所得干菌丝体内含总硒25-1350ug/g，其中有机硒不低于92％；将该菌丝体粉碎成80-100目制成菌丝体粉，菌丝体粉呈灰黄色至黄褐色粉末状，具有微腥味无异味，取少量加亚甲蓝染色后，置显微镜下油镜镜检可见有隔多核菌丝。
一种发酵冬虫夏草菌丝体粉，该冬虫夏草菌丝体粉是以冬虫夏草菌为菌种，经过在培养基中添加亚硒酸钠或/和富硒酵母液体深层发酵培养，发酵液经过固液分离和干燥过程，所得干菌丝体内含总硒25-1350ug/g，其中有机硒不低于92％，还含有7-8％的虫草酸，5-8％虫草多糖和0.03-0.17％的腺苷；将该菌丝体粉碎成80-100目制成菌丝体粉成品，成品呈灰黄色至黄褐色，具有微腥味无异味，取本品少量，加亚甲蓝染色后，置显微镜下油镜镜检可见有隔多核菌丝。
一种发酵冬虫夏草菌丝体粉，该冬虫夏草菌丝体粉是以冬虫夏草菌为菌种，经过在培养基中添加亚硒酸钠或/和富硒酵母液体深层发酵培养，发酵液经过固液分离和干燥过程，所得干菌丝体内含总硒500-1350ug/g，其中有机硒不低于92％，还含有7-8％的虫草酸，5-8％虫草多糖和0.03-0.17％的腺苷，将该菌丝体粉碎成80-100目制成菌丝体粉成品，成品呈灰黄色至黄褐色粉末状，具有微腥味，无异味，取本品少量，加亚甲蓝染色后，置显微镜下油镜镜检可见有隔多核菌丝。
一种发酵冬虫夏草菌丝体粉，该冬虫夏草菌丝体粉是以冬虫夏草菌为菌种，经过在培养基中添加亚硒酸钠或/和富硒酵母液体深层发酵培养，发酵液经过固液分离和干燥，所得干菌丝体内含总硒1000-1350ug/g，其中有机硒不低于92％，还含有7-8％的虫草酸，5-8％虫草多糖和0.03-0.17％的腺苷，将该菌丝体粉碎成80-100目制成菌丝体粉成品，成品物理性状呈灰黄色至黄褐色，具有微腥味，无异味，取本品少量，加亚甲蓝染色后，置显微镜下油镜镜检可见有隔多核菌丝。
以上所述的冬虫夏草菌丝体粉的培养方法，包括：斜面菌种培养，摇瓶种子培养，一级种子罐培养，二级种子罐培养，发酵罐培养，固液分离，干燥，检测，粉碎的工艺过程。具体步骤如下：
(1)斜面菌种培养
斜面菌种培养选择中国工业微生物菌种保藏管理中心dch培养基，按重量体积比(％)计：蔗糖5.0％，酵母粉0.3％，胰蛋白胨1.0％，琼脂粉1.0％，无机离子溶液ph5.6-6.0(硫酸镁0.5克，磷酸二氢钾1克，氯化钠1克、氯化钙0.3克、硫酸锰0.01克、硫酸锌0.01克、硫酸亚铁0.01克、硫酸铜0.01克，蒸馏水定容1000毫升)。分装后121℃灭菌，倾制斜面，将经过活化的菌种接种于斜面培养基，在15-18℃培养30-40天。
(2)摇瓶种子培养
摇瓶培养基：按重量体积比(％)计：葡萄糖1.0-2.0％，玉米粉1.0-2.5％，糖蜜0.5-1.5％，土豆1.0-6.0％；蚕蛹粉0-3.0％，活蚕蛹0-6.0％，黄豆芽粉0-1.5％，酵母粉0.2-1.0％，麸皮0.5-1.5％；硫酸镁0.01-0.05％，磷酸二氢钾0.02-0.1％，其余为水。培养基分装后，121℃灭菌，降温后将培养好的斜面种子接种于摇瓶培养基于摇床上，温度17-19℃，转速100-150rpm培养12-18天。
(3)一级种子罐种子培养
一级种子罐培养基：按重量体积比(％)计：葡萄糖1.0-2.0％，玉米粉1.5-2.5％，糖蜜0.5-1.5％，土豆0-2.0％，淀粉0-2.0％；蚕蛹粉1.5-3.5％，黄豆饼粉0-1.5％，黄豆芽粉0-1.5％，酵母粉0.2-1.0％，麸皮0.5-1.5％，蛋白胨0-1.0％；硫酸镁0.01-0.05％，磷酸二氢钾0.02-0.1％，亚硒酸钠0-0.001％，其余为水。一级种子罐培养基经消毒降温后，将摇瓶种子以5-10％接种量接种于一级种子罐，控制温度17-19℃,通气1：0.2-0.4vvm,培养6-8天。
(4)二级种子罐种子培养
二级种子罐培养基：按重量体积比(％)计：葡萄糖1.0-2.0％，玉米粉1.5-2.5％，糖蜜0.5-1.5％，土豆0-2.0％，淀粉0-2.0％；蚕蛹粉1.5-3.5％，黄豆饼粉0-1.5％，黄豆芽粉0-1.5％，酵母粉0.2-1.0％，麸皮0.5-1.5％，蛋白胨0-1.0％；硫酸镁0.01-0.05％，磷酸二氢钾0.02-0.1％，亚硒酸钠0-0.002％，其余为水。二级种子罐培养基经消毒降温后，将一级种子罐种子以10-20％接种量接种于二级种子罐，控制温度17-19℃,通气1：0.2-0.4vvm,培养6-8天。
(5)发酵罐培养
发酵罐培养基：按重量体积比(％)计：葡萄糖1.0-2.0％，玉米粉1.5-2.5％，糖蜜0.5-1.5％，土豆0-2.0％，淀粉0-2.0％；蚕蛹粉1.5-3.5％，黄豆饼粉0-1.5％，黄豆芽粉0-1.5％，酵母粉0-1.0％，富硒酵母粉0-2.5％，麸皮0.5-1.5％，蛋白胨0-1.0％；硫酸镁0.01-0.05％，磷酸二氢钾0.02-0.1％，亚硒酸钠0-0.01％，其余为水。发酵罐培养基经过消毒、降温后，以10-30％接种量接入二级种子罐种子，控制温度17-19℃，通气1：0.2-0.4vvm,培养8-10天；
(6)固液分离、干燥、检测和粉碎
将放罐发酵液进行固液分离，将固体烘干，检测所得干燥菌丝体内成分含量：总硒25-1350ug/g(检测方法：gb5009.93)，有机硒占总硒质量百分比w/％≥92％(检测方法：gb1903.22-2016附录a中a.2)，还有4-8％的虫草酸(检测方法：百令胶囊药典标准2015年版1.6-1.6.1)，5-8％虫草多糖(检测方法：苯酚-硫酸法)和0.03-0.17％的腺苷(检测方法：百令胶囊药典标准2015年版1.6-1.6.2)；将该菌丝体粉碎成80-100目制成菌丝体粉成品，成品物理性状：呈灰黄色至黄褐色粉末状，具有微腥味，无异味，取本品少量，加亚甲蓝染色后，置显微镜下油镜镜检可见有隔多核菌丝。
本发明具有以下积极效果：
1.将微量元素硒与冬虫夏草菌有机结合，获得兼具冬虫夏草和硒优良特性的富硒冬虫夏草菌丝体粉，本产品不仅含有冬虫夏草的生理活性物质，还含有0.1％以上的有机硒。众多研究已证明，与普通冬虫夏草菌产品相比，其保健或治疗效果大于冬虫夏草菌丝体粉单品和有机硒单品。能够一剂同时发挥冬虫夏草与硒固有的以及协同的生理作用。无论作为药品、保健食品以及硒的营养补充剂均具有实用性。
2.本发明在富硒冬虫夏草菌丝体培养过程中，采用种子罐加亚硒酸钠驯化培养逐步适应工艺，克服了培养基中亚硒酸钠量增加对冬虫夏草菌生长的抑制，首次实现了菌丝体收率接近3％(实施例12)的情况下菌丝体含总硒量达1350μg/g，首次实现了发酵富硒冬虫夏草菌对无机硒的利用率超过85％，有机化程度超过92％。克服了现有技术的缺陷，适合产业化生产。
具体实施方式
实施例1
斜面种子的制备：dch斜面培养基：蔗糖5.0％，酵母粉0.3％，胰蛋白胨1.0％，琼脂粉1.0％，用ph5.6-6.0的无机离子溶液(硫酸镁0.5克，磷酸二氢钾1克，氯化钠1克、氯化钙0.3克、硫酸锰0.01克、硫酸锌0.01克、硫酸亚铁0.01克、硫酸铜0.01克，蒸馏水定容1000毫升)配制。培养基配制、分装、消毒后，倾制斜面。将通过活化的cicc编号14088的冬虫夏草菌种接种于斜面培养基，在15-16℃培养40天。
摇瓶种子的制备：摇瓶培养基：葡萄糖1.5％，玉米粉2.0％，糖蜜0.5％，土豆6.0％；蚕蛹粉2.5％，黄豆芽粉1.0％，酵母粉0.5％，麸皮1.0％；硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.02％，其余为水。首先将土豆切小块，蚕蛹粉、玉米粉、麦麸和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，分装后灭菌，降温后将斜面菌种接于摇瓶培养基于摇床上，温度17-19℃，100-130rpm培养17天。
种子罐种子制备：培养基为葡萄糖1.5％，糖蜜1.0％，淀粉1.5％，蚕蛹粉3.0％，黄豆芽粉0.5％，酵母粉0.5％，蛋白胨0.5％，麸皮1.5％，硫酸镁0.01％，磷酸二氢钾0.02％，其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆芽粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以10％的接种量接种摇瓶种子，温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养8天。
发酵罐培养：培养基为葡萄糖1.5％，糖蜜1.0％，淀粉1.5％，蚕蛹粉3.0％，黄豆饼粉0.5％，酵母粉0.5％，蛋白胨0.5％，麸皮1.5％，硫酸镁0.01％，磷酸二氢钾0.02％，亚硒酸钠0.0002％，其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆饼粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以10％接种量接入种子罐种子于发酵罐，温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养7天生长浓稠。
下游处理：放罐发酵液进行固液分离，将固体烘干，干菌丝体收率为34.2千克/吨发酵液。干菌丝体内总硒含量为25ug/g，有机硒24ug/g(无机硒利用率93.9％，有机化率96％)，虫草酸71.60mg/g,虫草多糖72.83mg/g,腺苷0.41mg/g。将该干菌丝体粉碎过80-100目筛制成冬虫夏草菌丝体粉，菌丝体粉呈灰黄色至黄褐色粉末状，具有微腥味，无异味，取少量，加亚甲蓝染色后，置显微镜下油镜镜检可见有隔多核菌丝。
实施例2
斜面种子的制备：dch斜面培养基：蔗糖5.0％，酵母粉0.3％，胰蛋白胨1.0％，琼脂粉1.0％，用ph5.6-6.0的无机离子溶液(硫酸镁0.5克，磷酸二氢钾1克，氯化钠1克、氯化钙0.3克、硫酸锰0.01克、硫酸锌0.01克、硫酸亚铁0.01克、硫酸铜0.01克，蒸馏水定容1000毫升)配制。培养基配制、分装、消毒后，倾制斜面，将经过活化的cicc编号14088的冬虫夏草菌种接种于斜面培养基，在17-18℃培养35天。
摇瓶种子的制备：摇瓶培养基：葡萄糖1.5％，玉米粉2.0％，糖蜜1.0％，土豆6.0％；蚕蛹粉2.5％，黄豆芽粉1.0％，酵母粉0.5％，麸皮1.0％；硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.02％，其余为水。首先将土豆切小块，加蚕蛹粉、玉米粉、麦麸和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，分装后灭菌，降温后将斜面菌种接种于摇瓶培养基于摇床上，温度17-19℃，100-130rpm培养16天。
种子罐种子制备：培养基为：葡萄糖1.5％，糖蜜1.0％，玉米粉1.5％，蚕蛹粉3.0％，黄豆芽粉0.5％，酵母粉0.5％，蛋白胨0.3％，麸皮2.0％，硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.03％，其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆芽粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以10％的接种量接种摇瓶种子，温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养8天。
发酵罐培养：培养基为葡萄糖1.5％，糖蜜1.0％，玉米粉1.5％，蚕蛹粉3.0％，黄豆饼粉0.5％，酵母粉0.5％，蛋白胨0.3％，麸皮2.0％，硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.03％，亚硒酸钠0.0005％，其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆饼粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以10％接种量接种种子罐种子于发酵罐，温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养8天生长浓稠。
下游处理：放罐发酵液进行固液分离，将固体烘干，干菌丝体收率为33.5千克/吨发酵液。干菌丝体内总硒含量为63ug/g，有机硒60ug/g(无机硒利用率92.6％，有机化率95.2％)，虫草酸76.44mg/g,虫草多糖73.13mg/g,腺苷0.36mg/g。将该干菌丝体粉碎，过80-100目筛，制成冬虫夏草菌丝体粉，菌丝体粉呈灰黄色至黄褐色粉末状，具有微腥味，无异味，取少量，加亚甲蓝染色后，置显微镜下油镜镜检可见有隔多核菌丝。
实施例3
斜面种子的制备：dch斜面培养基：蔗糖5.0％，酵母粉0.3％，胰蛋白胨1.0％，琼脂粉1.0％，用ph5.6-6.0的无机离子溶液(硫酸镁0.5克，磷酸二氢钾1克，氯化钠1克、氯化钙0.3克、硫酸锰0.01克、硫酸锌0.01克、硫酸亚铁0.01克、硫酸铜0.01克，蒸馏水定容1000毫升)配制。培养基配制、分装、灭菌后，倾制斜面，将经过活化的cicc编号14088的冬虫夏草菌种接种于斜面培养基，在17-18℃培养35天。
摇瓶种子的制备：摇瓶培养基：葡萄糖1.8％，玉米粉2.0％，糖蜜0.5％，土豆6.0％；活蚕蛹6.0％，黄豆芽粉1.0％，酵母粉0.5％，麸皮1.0％；硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.04％，其余为水。首先将土豆切小块，活蚕蛹剪碎，加玉米粉、麦麸和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，分装后灭菌，降温后将斜面菌种接种于摇瓶培养基于摇床上，温度17-19℃，100-130rpm培养14天。
种子罐种子制备：培养基为葡萄糖1.5％，糖蜜1.0％，淀粉1.5％，蚕蛹粉3.5％，黄豆芽粉0.5％，酵母粉0.5％，蛋白胨0.2％，麸皮1.5％，硫酸镁0.01％，磷酸二氢钾0.02％，其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆芽粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以10％的接种量接种摇瓶种子，温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养7天。
发酵罐培养：培养基为：葡萄糖1.5％，糖蜜1.0％，淀粉1.5％，蚕蛹粉3.5％，黄豆芽粉0.5％，酵母粉0.5％，蛋白胨0.2％，麸皮1.5％，硫酸镁0.01％，磷酸二氢钾0.02％，亚硒酸钠0.001％，其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆芽粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，消毒降温后，以10％接种量接种种子罐种子于发酵罐，控制温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养8天生长浓稠。
下游处理：放罐发酵液进行固液分离，将固体烘干，干菌丝体收率为34.1千克/吨发酵液。干菌丝体内总硒含量为125ug/g,有机硒117ug/g(无机硒利用率94.24％，有机化率93.6％)，虫草酸69.07mg/g,虫草多糖78.45mg/g,腺苷0.50mg/g。将该干菌丝体粉碎，过80-100目筛，制成冬虫夏草菌丝体粉，菌丝体粉呈灰黄色至黄褐色粉末状，具有微腥味，无异味，取少量，加亚甲蓝染色后，置显微镜下油镜镜检可见有隔多核菌丝。
实施例4
斜面种子的制备：dch斜面培养基：蔗糖5.0％，酵母粉0.3％，胰蛋白胨1.0％，琼脂粉1.0％，用ph5.6-6.0的无机离子溶液(硫酸镁0.5克，磷酸二氢钾1克，氯化钠1克、氯化钙0.3克、硫酸锰0.01克、硫酸锌0.01克、硫酸亚铁0.01克、硫酸铜0.01克，蒸馏水定容1000毫升)配制。将通过活化的cicc编号14088的冬虫夏草菌种接种于斜面培养基，在15-18℃培养36天。
摇瓶种子的制备：摇瓶培养基：葡萄糖1.8％，玉米粉2.0％，糖蜜0.5％，土豆6.0％；蚕蛹粉2.5％，黄豆芽粉1.0％，酵母粉0.5％，麸皮1.0％；硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.04％，其余为水。首先将土豆切小块，加蚕蛹粉、玉米粉、麦麸和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，分装后灭菌，降温后将斜面菌种接种于摇瓶培养基于摇床上，温度17-19℃，100-130rpm培养16.5天。
种子罐种子制备：培养基为葡萄糖1.5％，糖蜜1.0％，淀粉1.5％，蚕蛹粉3.5％，黄豆芽粉0.5％，酵母粉0.5％，蛋白胨0.2％，麸皮1.5％，硫酸镁0.01％，磷酸二氢钾0.02％，亚硒酸钠0.001％，其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆芽粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以10％的接种量接种摇瓶种子，温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养7天。
发酵罐培养：培养基为葡萄糖1.5％，糖蜜1.0％，淀粉1.5％，蚕蛹粉3.5％，黄豆饼粉0.5％，酵母粉0.5％，蛋白胨0.2％，麸皮1.5％，硫酸镁0.01％，磷酸二氢钾0.02％，亚硒酸钠0.003％，其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆饼粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以20％接种量接种二级种子罐种子于发酵罐，温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养8天生长浓稠。
下游处理：放罐发酵液进行固液分离，将固体烘干、粉碎而成冬虫夏草菌丝粉。干菌丝体收率为33.6千克/吨发酵液。干菌丝体总硒含量为365ug/g,有机硒340ug/g，虫草酸63.77mg/g,虫草多糖75.43mg/g,腺苷0.32mg/g。无机硒利用率89.7％，有机化率93.2％。将该干菌丝体粉碎过80-100目筛制成冬虫夏草菌丝体粉。菌丝体粉呈灰黄色至黄褐色粉末状，具有微腥味，无异味，取少量，加亚甲蓝染色后，置显微镜下油镜镜检可见有隔多核菌丝。
实施例5
斜面种子的制备：dch斜面培养基：蔗糖5.0％，酵母粉0.3％，胰蛋白胨1.0％，琼脂粉1.0％，用ph5.6-6.0的无机离子溶液(硫酸镁0.5克，磷酸二氢钾1克，氯化钠1克、氯化钙0.3克、硫酸锰0.01克、硫酸锌0.01克、硫酸亚铁0.01克、硫酸铜0.01克，蒸馏水定容1000毫升)配制。灭菌降温后，将通过活化的cicc编号14088的冬虫夏草菌种接种于斜面培养基，在15-18℃培养35天。
摇瓶种子的制备：摇瓶培养基：葡萄糖1.0％，玉米粉2.5％，糖蜜1.0％，土豆2.0％；活蚕蛹6.0％，黄豆芽粉0.5％，酵母粉0.2％，麸皮1.0％；硫酸镁0.01％，磷酸二氢钾0.1％，其余为水。首先将土豆切小块，活蚕蛹剪碎，加玉米粉、麦麸和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，分装后灭菌，降温后将斜面菌种接种于摇瓶培养基于摇床上，温度17-19℃，100-130rpm培养12天。
一级种子罐种子制备：培养基为：葡萄糖1.0％，玉米粉2.5％，糖蜜1.5％；蚕蛹粉1.5％，黄豆饼粉1.5％，酵母粉0.5％，麸皮0.5％，蛋白胨1.0％；硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.05％；其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆饼粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以5％的接种量接入摇瓶种子，温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养8天。
二级种子罐种子培养：培养基为葡萄糖1.0％，玉米粉2.5％，糖蜜1.5％；蚕蛹粉1.5％，黄豆饼粉1.5％，酵母粉0.5％，麸皮0.5％，蛋白胨1.0％；硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.05％，亚硒酸钠0.001％；其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆饼粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以10％的接种量接入一级种子罐种子，温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养8天。
发酵罐培养：培养基为：葡萄糖1.0％，玉米粉2.5％，糖蜜1.5％；蚕蛹粉1.5％，黄豆饼粉1.5％，酵母粉0.5％，麸皮0.5％，蛋白胨1.0％；硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.05％，亚硒酸钠0.0045％；其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆饼粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以20％的接种量接种二级种子罐种子，温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养9天。
下游处理：放罐发酵液进行固液分离，将固体烘干、粉碎而成富硒冬虫夏草菌粉。菌丝体收率为28.6千克/吨发酵液。菌粉硒含量为625ug/g，有机硒585ug/g,虫草酸83.66mg/g,虫草多糖83.66mg/g,腺苷0.30mg/g。硒的利用率87.2％，有机化率93.6％。将该干菌丝体粉碎过80-100目筛制成冬虫夏草菌丝体粉。菌丝体粉呈灰黄色至黄褐色粉末状，具有微腥味，无异味，取少量，加亚甲蓝染色后，置显微镜下油镜镜检可见有隔多核菌丝。
实施例6
斜面种子的制备：dch斜面培养基：蔗糖5.0％，酵母粉0.3％，胰蛋白胨1.0％，琼脂粉1.0％，用ph5.6-6.0的无机离子溶液(硫酸镁0.5克，磷酸二氢钾1克，氯化钠1克、氯化钙0.3克、硫酸锰0.01克、硫酸锌0.01克、硫酸亚铁0.01克、硫酸铜0.01克，蒸馏水定容1000毫升)配制。将通过活化的cicc编号14088的冬虫夏草菌种接种于斜面培养基，在15-18℃培养40天。
摇瓶种子的制备：摇瓶培养基：葡萄糖1.5％，玉米粉1.5％，糖蜜1.5％，土豆3.0％；活蚕蛹4.0％，黄豆芽粉1.0％，酵母粉1.0％，麸皮1.5％；硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.05％，其余为水。首先将土豆切小块，活蚕蛹剪碎，加玉米粉、麦麸和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，分装后灭菌，降温后将斜面菌种接种于摇瓶培养基于摇床上，温度17-19℃，100-130rpm培养15天。
一级种子罐种子制备：培养基为葡萄糖1.5％，玉米粉2.0％，糖蜜1.5％；蚕蛹粉2.5％，黄豆芽粉0.5％，酵母粉1.0％，麸皮1.0％，蛋白胨1.0％；硫酸镁0.05％，磷酸二氢钾0.1％，亚硒酸钠0.001％；其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆芽粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以10％的接种量接入摇瓶种子，温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养7天。
二级种子罐种子培养：培养基为葡萄糖1.5％，玉米粉2.0％，糖蜜1.5％；蚕蛹粉2.5％，黄豆芽粉0.5％，酵母粉1.0％，麸皮1.0％，蛋白胨1.0％；硫酸镁0.05％，磷酸二氢钾0.1％，亚硒酸钠0.002％；其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆芽粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以15％的接种量接入一级种子种子，温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养8天。
发酵罐培养：培养基为葡萄糖：1.5％，玉米粉2.0％，糖蜜1.5％；蚕蛹粉2.5％，黄豆芽粉0.5％，酵母粉1.0％，麸皮1.0％，蛋白胨1.0％；硫酸镁0.05％，磷酸二氢钾0.1％，亚硒酸钠0.006％；其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆芽粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以20％的接种量接入二级种子罐种子。温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养8天生长浓稠。
下游处理：放罐发酵液进行固液分离，将固体烘干、粉碎而成冬虫夏草菌粉。菌粉收率为32.1千克/吨发酵液。菌粉硒含量为760ug/g，有机硒710ug/g，虫草酸71.60mg/g,虫草多糖53.0mg/g,腺苷1.05mg/g。无机硒的利用率89.2％，有机化率93.4％。将该干菌丝体粉碎过80-100目筛制成冬虫夏草菌丝体粉。菌丝体粉呈灰黄色至黄褐色粉末状，具有微腥味，无异味，取少量，加亚甲蓝染色后，置显微镜下油镜镜检可见有隔多核菌丝。
实施例7
斜面种子的制备：dch斜面培养基：蔗糖5.0％，酵母粉0.3％，胰蛋白胨1.0％，琼脂粉1.0％，用ph5.6-6.0的无机离子溶液(硫酸镁0.5克，磷酸二氢钾1克，氯化钠1克、氯化钙0.3克、硫酸锰0.01克、硫酸锌0.01克、硫酸亚铁0.01克、硫酸铜0.01克，蒸馏水定容1000毫升)配制。将通过活化的cicc编号14088的冬虫夏草菌种接种于斜面培养基，在15-18℃培养38天。
摇瓶种子的制备：摇瓶培养基：葡萄糖1.5％，玉米粉2.0％，糖蜜1.0％，土豆5.0％；活蚕蛹5.0％，黄豆芽粉1.0％，酵母粉0.4％，麸皮1.5％；硫酸镁0.01％，磷酸二氢钾0.02％，其余为水。首先将土豆切小块，活蚕蛹剪碎，加玉米粉、麦麸和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，分装后灭菌，降温后将斜面菌种接种于摇瓶培养基于摇床上，温度17-19℃，100-130rpm培养16天。
一级种子罐种子制备：培养基为葡萄糖1.5％，糖蜜1.0％，玉米粉2.0％蚕蛹粉2.5％，黄豆芽粉1.0％，酵母粉0.5％，蛋白胨1.0％，麸皮1.0％，硫酸镁0.01％，磷酸二氢钾0.02％，亚硒酸钠0.001％，其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆芽粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以8％接种量接种摇瓶种子于一级种子罐，温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养8天。
二级种子罐种子制备：培养基为：葡萄糖1.5％，糖蜜1.0％，玉米粉2.0％，蚕蛹粉2.5％，黄豆芽粉1.0％，酵母粉0.5％，蛋白胨1.0％，麸皮1.0％，硫酸镁0.01％，磷酸二氢钾0.02％，亚硒酸钠0.002％，其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆芽粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以20％的接种量接种一级种子罐种子，温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养6天。
发酵罐培养：培养基为：葡萄糖1.5％，糖蜜1.0％，玉米粉2.0％蚕蛹粉2.5％，黄豆芽粉1.0％，酵母粉0.5％，蛋白胨1.0％，麸皮1.0％，硫酸镁0.01％，磷酸二氢钾0.02％，亚硒酸钠0.007％，其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆芽粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以25％接种量接种二级种子罐种子，温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养10天。
下游处理：放罐发酵液进行固液分离，将固体烘干、粉碎而成冬虫夏草菌丝粉。干菌丝体收率为30.4千克/吨发酵液，干菌丝体总硒含量为855ug/g,有机硒830ug/g，虫草酸48.79mg/g,虫草多糖78.53mg/g,腺苷0.88mg/g。无机硒利用率94.05％，有机化率97.1％。将该干菌丝体粉碎过80-100目筛制成冬虫夏草菌丝体粉。菌丝体粉呈灰黄色至黄褐色粉末状，具有微腥味，无异味，取少量，加亚甲蓝染色后，置显微镜下油镜镜检可见有隔多核菌丝。
实施例8
斜面种子的制备：dch斜面培养基：蔗糖5.0％，酵母粉0.3％，胰蛋白胨1.0％，琼脂粉1.0％，用ph5.6-6.0的无机离子溶液(硫酸镁0.5克，磷酸二氢钾1克，氯化钠1克、氯化钙0.3克、硫酸锰0.01克、硫酸锌0.01克、硫酸亚铁0.01克、硫酸铜0.01克，蒸馏水定容1000毫升)配制。将通过活化的cicc编号14088的冬虫夏草菌种接种于斜面培养基，在15-18℃培养37天。
摇瓶种子的制备：摇瓶培养基：葡萄糖2.0％，玉米粉2.0％，糖蜜0.5％，土豆6.0％；蚕蛹粉2.5％，黄豆芽粉1.0％，酵母粉0.5％，麸皮1.0％；硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.04％，其余为水。首先将土豆切小块，蚕蛹粉、玉米粉、麦麸和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，分装后灭菌，降温后将斜面菌种接种于摇瓶培养基于摇床上，温度17-19℃，100-130rpm培养18天。
一级种子罐种子制备：培养基为：葡萄糖1.5％，糖蜜1.0％，淀粉1.5％，蚕蛹粉3.5％，黄豆芽粉0.5％，酵母粉0.5％，蛋白胨0.2％，麸皮1.5％，硫酸镁0.01％，磷酸二氢钾0.02％，亚硒酸钠0.001％，其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆芽粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以10％的接种量接种摇瓶种子于一级种子罐，温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养6天。
二级种子罐种子制备：培养基为：葡萄糖1.5％，糖蜜1.0％，淀粉1.5％，蚕蛹粉3.5％，黄豆芽粉0.5％，酵母粉0.5％，蛋白胨0.2％，麸皮1.5％，硫酸镁0.01％，磷酸二氢钾0.02％，亚硒酸钠0.002％，其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆芽粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以20％接种量接种一级种子于二级种子罐，温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养8天。
发酵罐发酵培养：培养基为葡萄糖：1.5％，糖蜜1.0％，淀粉1.5％，蚕蛹粉3.5％，黄豆芽粉0.5％，酵母粉0.5％，蛋白胨0.2％，麸皮1.5％，硫酸镁0.01％，磷酸二氢钾0.02％，亚硒酸钠0.008％，其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆芽粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以30％接种量接种二级种子罐种子于发酵罐，温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养9.5天生长浓稠。
下游处理：放罐发酵液进行固液分离，将固体烘干、粉碎而成冬虫夏草菌丝体粉。干菌丝体收率为29.8千克/吨发酵液，干菌丝体总硒含量为1120ug/g,有机硒1031ug/g，虫草酸50.00mg/g,虫草多糖80.20mg/g,腺苷0.89mg/g。无机硒利用率91.5％，有机化率92.1％。将该干菌丝体粉碎过80-100目筛制成冬虫夏草菌丝体粉。菌丝体粉呈灰黄色至黄褐色粉末状，具有微腥味，无异味，取少量，加亚甲蓝染色后，置显微镜下油镜镜检可见有隔多核菌丝。
实施例9
斜面种子的制备：dch斜面培养基：蔗糖5.0％，酵母粉0.3％，胰蛋白胨1.0％，琼脂粉1.0％，用ph5.6-6.0的无机离子溶液(硫酸镁0.5克，磷酸二氢钾1克，氯化钠1克、氯化钙0.3克、硫酸锰0.01克、硫酸锌0.01克、硫酸亚铁0.01克、硫酸铜0.01克，蒸馏水定容1000毫升)配制。将通过活化的cicc编号14088的冬虫夏草菌种接种于斜面培养基，在15-18℃培养38天。
摇瓶种子的制备：摇瓶培养基：葡萄糖1.5％，玉米粉2.0％，糖蜜1.0％，土豆5.0％；活蚕蛹5.0％，黄豆芽粉1.0％，酵母粉0.4％，麸皮1.5％；硫酸镁0.01％，磷酸二氢钾0.02％，其余为水。首先将土豆切小块，活蚕蛹剪碎，加玉米粉、麦麸和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，分装后灭菌，降温后将斜面菌种接种于摇瓶培养基于摇床上，温度17-19℃，100-130rpm培养16天。
一级种子罐种子制备：培养基为葡萄糖1.5％，糖蜜1.0％，玉米粉2.0％蚕蛹粉2.5％，黄豆芽粉1.0％，酵母粉0.5％，蛋白胨1.0％，麸皮1.0％，硫酸镁0.01％，磷酸二氢钾0.02％，其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆芽粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以8％接种量接种摇瓶种子于一级种子罐，温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养8天。
二级种子罐种子制备：培养基为：葡萄糖1.5％，糖蜜1.0％，玉米粉2.0％，蚕蛹粉2.5％，黄豆芽粉1.0％，酵母粉0.5％，蛋白胨1.0％，麸皮1.0％，硫酸镁0.01％，磷酸二氢钾0.02％，亚硒酸钠0.002％，其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆芽粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以20％的接种量接种一级种子罐种子，温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养8天。
发酵罐培养：培养基为：葡萄糖1.5％，糖蜜1.0％，玉米粉2.0％蚕蛹粉2.5％，黄豆芽粉1.0％，酵母粉0.5％，蛋白胨1.0％，麸皮1.0％，硫酸镁0.01％，磷酸二氢钾0.02％，亚硒酸钠0.009％，其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆芽粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以25％接种量接种二级种子罐种子，温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养9.5天。
下游处理：放罐发酵液进行固液分离，将固体烘干、粉碎而成冬虫夏草菌丝粉。干菌丝体收率为28.2千克/吨发酵液，干菌丝体总硒含量为1250ug/g,有机硒1156ug/g,虫草酸60.79mg/g,虫草多糖76.05mg/g,腺苷0.68mg/g。无机硒利用率85.9％，有机化率92.48％。将该干菌丝体粉碎过80-100目筛制成冬虫夏草菌丝体粉。菌丝体粉呈灰黄色至黄褐色粉末状，具有微腥味，无异味，取少量，加亚甲蓝染色后，置显微镜下油镜镜检可见有隔多核菌丝。
实施例10
斜面种子的制备：dch斜面培养基：蔗糖5.0％，酵母粉0.3％，胰蛋白胨1.0％，琼脂粉1.0％，用ph5.6-6.0的无机离子溶液(硫酸镁0.5克，磷酸二氢钾1克，氯化钠1克、氯化钙0.3克、硫酸锰0.01克、硫酸锌0.01克、硫酸亚铁0.01克、硫酸铜0.01克，蒸馏水定容1000毫升)配制。将通过活化的cicc编号14088的冬虫夏草菌种接种于斜面培养基，在15-18℃培养40天。
摇瓶种子的制备：摇瓶培养基：葡萄糖2.0％，玉米粉2.0％，糖蜜0.5％，土豆6.0％；蚕蛹粉2.5％，黄豆芽粉1.0％，酵母粉0.5％，麸皮1.0％；硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.04％，其余为水。首先将土豆切小块，加蚕蛹粉、玉米粉、麦麸和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，分装后灭菌，降温后将斜面菌种接种于摇瓶培养基于摇床上，温度17-19℃，100-130rpm培养16天。
一级种子罐种子制备：培养基为：葡萄糖1.5％，糖蜜1.0％，淀粉1.5％，蚕蛹粉3.5％，黄豆芽粉0.5％，酵母粉0.5％，蛋白胨0.2％，麸皮1.5％，硫酸镁0.01％，磷酸二氢钾0.02％，亚硒酸钠0.001％，其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆芽粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以10％的接种量接种摇瓶种子于一级种子罐，温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养7天。
二级种子罐种子制备：培养基为：葡萄糖1.5％，糖蜜1.0％，淀粉1.5％，蚕蛹粉3.5％，黄豆芽粉0.5％，酵母粉0.5％，蛋白胨0.2％，麸皮1.5％，硫酸镁0.01％，磷酸二氢钾0.02％，亚硒酸钠0.002％，其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆芽粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以20％接种量接种一级种子于二级种子罐，温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养8天。
发酵罐发酵培养：培养基为葡萄糖：1.5％，糖蜜1.0％，淀粉1.5％，蚕蛹粉3.5％，黄豆芽粉0.5％，酵母粉0.5％，蛋白胨0.2％，麸皮1.5％，硫酸镁0.01％，磷酸二氢钾0.02％，亚硒酸钠0.01％，其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆芽粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以30％接种量接种二级种子罐种子于发酵罐，温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养10天生长浓稠。
下游处理：放罐发酵液进行固液分离，将固体烘干、粉碎而成冬虫夏草菌丝粉。干菌丝体收率为28.7千克/吨发酵液，干菌丝体总硒含量为1350ug/g,有机硒1251ug/g,虫草酸61.00mg/g,虫草多糖70.20mg/g,腺苷0.78mg/g。无机硒利用率85.2％，有机化率92.7％。将该干菌丝体粉碎过80-100目筛制成冬虫夏草菌丝体粉。菌丝体粉呈灰黄色至黄褐色粉末状，具有微腥味，无异味，取少量，加亚甲蓝染色后，置显微镜下油镜镜检可见有隔多核菌丝。
实施例11
斜面种子的制备：dch斜面培养基：蔗糖5.0％，酵母粉0.3％，胰蛋白胨1.0％，琼脂粉1.0％，用ph5.6-6.0的无机离子溶液(硫酸镁0.5克，磷酸二氢钾1克，氯化钠1克、氯化钙0.3克、硫酸锰0.01克、硫酸锌0.01克、硫酸亚铁0.01克、硫酸铜0.01克，蒸馏水定容1000毫升)配制。培养基配制、分装、消毒后，倾制斜面，将通过活化的cicc编号14088的冬虫夏草菌种接种于斜面培养基，在17-18℃培养35天。
摇瓶种子的制备：摇瓶培养基：葡萄糖1.6％，玉米粉2.0％，糖蜜0.8％，土豆6.0％；活蚕蛹5.0％，黄豆芽粉1.0％，酵母粉0.5％，麸皮1.0％；硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.04％，其余为水。首先将土豆切小块，活蚕蛹剪碎，加玉米粉、麦麸和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，分装后灭菌，降温后将斜面菌种接种于摇瓶培养基于摇床上，温度17-19℃，100-130rpm培养17天。
种子罐种子制备：培养基为葡萄糖1.5％，糖蜜1.0％，淀粉1.5％，蚕蛹粉3.5％，黄豆芽粉0.5％，酵母粉0.5％，蛋白胨0.2％，麸皮1.5％，硫酸镁0.01％，磷酸二氢钾0.02％，其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆芽粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以10％的接种量接种摇瓶种子，温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养8天。
发酵罐培养：培养基为葡萄糖1.5％，糖蜜1.0％，淀粉1.5％，蚕蛹粉3.5％，黄豆芽粉0.5％，富硒酵母粉(总硒1000ug/g)0.5％，蛋白胨0.2％，麸皮1.5％，硫酸镁0.01％，磷酸二氢钾0.02％，其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆芽粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以20％接种量接入种子罐种子于发酵罐，温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养9天生长浓稠。
下游处理：放罐发酵液进行固液分离，将固体烘干，干菌丝体收率40.2千克/吨发酵液；干菌丝体总硒含量为95ug/g,有机硒92ug/g；该干菌丝体内含虫草酸70.67mg/g,虫草多糖75.80mg/g,腺苷0.39mg/g。将该干菌丝体粉碎过80-100目筛制成冬虫夏草菌丝体粉。菌丝体粉呈灰黄色至黄褐色粉末状，具有微腥味，无异味，取少量，加亚甲蓝染色后，置显微镜下油镜镜检可见有隔多核菌丝。
实施例12
斜面种子的制备：dch斜面培养基：蔗糖5.0％，酵母粉0.3％，胰蛋白胨1.0％，琼脂粉1.0％，用ph5.6-6.0的无机离子溶液(硫酸镁0.5克，磷酸二氢钾1克，氯化钠1克、氯化钙0.3克、硫酸锰0.01克、硫酸锌0.01克、硫酸亚铁0.01克、硫酸铜0.01克，蒸馏水定容1000毫升)配制。培养基配制、分装、消毒后，倾制斜面，将通过活化的cicc编号14088的冬虫夏草菌种接种于斜面培养基，在17-18℃培养38天。
摇瓶种子的制备：摇瓶培养基：葡萄糖1.6％，玉米粉2.0％，糖蜜1.0％，土豆6.0％；活蚕蛹6.0％，黄豆芽粉1.0％，酵母粉0.5％，麸皮1.0％；硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.04％，其余为水。首先将土豆切小块，活蚕蛹剪碎，加玉米粉、麦麸和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，分装后灭菌，降温后将斜面菌种接种于摇瓶培养基于摇床上，温度17-19℃，100-130rpm培养16天。
种子罐种子制备：培养基为葡萄糖1.5％，糖蜜1.0％，玉米粉2.0％，蚕蛹粉3.5％，黄豆饼粉0.5％，酵母粉0.5％，蛋白胨0.2％，麸皮1.5％，硫酸镁0.01％，磷酸二氢钾0.02％，其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆芽粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以10％的接种量接种摇瓶种子，温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养8天。
发酵罐培养：培养基为葡萄糖1.5％，糖蜜1.0％，玉米粉2.0％，蚕蛹粉3.0％，黄豆饼粉1.0％，富硒酵母粉(总硒1000ug/g)1.0％，蛋白胨0.2％，麸皮1.5％，硫酸镁0.01％，磷酸二氢钾0.02％，其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆芽粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以20％接种量接种种子罐种子于发酵罐，温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养8天生长浓稠。
下游处理：放罐发酵液进行固液分离，将固体烘干，干菌丝体收率36.1千克/吨发酵液。干菌丝体总硒含量为245ug/g,有机硒236ug/g；该干菌丝体内含虫草酸59.23mg/g,虫草多糖63.95mg/g,腺苷1.68mg/g，将该干菌丝体粉碎过80-100目筛制成冬虫夏草菌丝体粉。菌丝体粉呈灰黄色至黄褐色粉末状，具有微腥味，无异味，取少量，加亚甲蓝染色后，置显微镜下油镜镜检可见有隔多核菌丝。
实施例13
斜面种子的制备：dch斜面培养基：蔗糖5.0％，酵母粉0.3％，胰蛋白胨1.0％，琼脂粉1.0％，用ph5.6-6.0的无机离子溶液(硫酸镁0.5克，磷酸二氢钾1克，氯化钠1克、氯化钙0.3克、硫酸锰0.01克、硫酸锌0.01克、硫酸亚铁0.01克、硫酸铜0.01克，蒸馏水定容1000毫升)配制。培养基配制、分装、消毒后，倾制斜面，将通过活化的cicc编号14088的冬虫夏草菌种接种于斜面培养基，在17-18℃培养35天。
摇瓶种子的制备：摇瓶培养基：葡萄糖1.6％，玉米粉2.0％，糖蜜1.0％，土豆6.0％；活蚕蛹6.0％，黄豆芽粉1.0％，酵母粉0.5％，麸皮1.0％；硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.04％，其余为水。首先将土豆切小块，活蚕蛹剪碎，加玉米粉、麦麸和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，分装后灭菌，降温后将斜面菌种接种于摇瓶培养基于摇床上，温度17-19℃，100-130rpm培养16天。
种子罐种子制备：培养基为葡萄糖1.5％，糖蜜1.0％，玉米粉2.0％，蚕蛹粉3.5％，黄豆饼粉0.5％，酵母粉0.5％，蛋白胨0.2％，麸皮1.5％，硫酸镁0.01％，磷酸二氢钾0.02％，其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆芽粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以10％的接种量接种摇瓶种子，温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养8天。
发酵罐培养：培养基为葡萄糖1.5％，糖蜜1.0％，玉米粉2.0％，蚕蛹粉3.0％，黄豆饼粉1.0％，富硒酵母粉(总硒1000ug/g)2.0％，蛋白胨0.2％，麸皮1.5％，硫酸镁0.01％，磷酸二氢钾0.02％，亚硒酸钠0.003％，其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆芽粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以15％接种量接入种子罐种子于发酵罐，温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养8天生长浓稠。
下游处理：放罐发酵液进行固液分离，将固体烘干，干菌丝体收率36.1千克/吨发酵液。干菌丝体总硒含量为740ug/g,有机硒715ug/g；该干菌丝体内含虫草酸69.30mg/g,虫草多糖56.92mg/g,腺苷1.08mg/g，将该干菌丝体粉碎过80-100目筛制成冬虫夏草菌丝体粉。菌丝体粉呈灰黄色至黄褐色粉末状，具有微腥味，无异味，取少量，加亚甲蓝染色后，置显微镜下油镜镜检可见有隔多核菌丝。
实施例14
斜面种子的制备：dch斜面培养基：蔗糖5.0％，酵母粉0.3％，胰蛋白胨1.0％，琼脂粉1.0％，用ph5.6-6.0的无机离子溶液(硫酸镁0.5克，磷酸二氢钾1克，氯化钠1克、氯化钙0.3克、硫酸锰0.01克、硫酸锌0.01克、硫酸亚铁0.01克、硫酸铜0.01克，蒸馏水定容1000毫升)配制。培养基配制、分装、消毒后，倾制斜面，将通过活化的cicc编号14088的冬虫夏草菌种接种于斜面培养基，在17-18℃培养35天。
摇瓶种子的制备：摇瓶培养基：葡萄糖1.6％，玉米粉2.0％，糖蜜1.0％，土豆6.0％；活蚕蛹6.0％，黄豆芽粉1.0％，酵母粉0.5％，麸皮1.0％；硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.04％，其余为水。首先将土豆切小块，活蚕蛹剪碎，加玉米粉、麦麸和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，分装后灭菌，降温后将斜面菌种接种于摇瓶培养基于摇床上，温度17-19℃，100-130rpm培养17天。
种子罐种子制备：培养基为葡萄糖1.5％，糖蜜1.0％，玉米粉2.0％，蚕蛹粉3.5％，黄豆饼粉0.5％，酵母粉0.5％，蛋白胨0.2％，麸皮1.5％，硫酸镁0.01％，磷酸二氢钾0.02％，其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆芽粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以10％的接种量接种摇瓶种子，温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养8天。
发酵罐培养：培养基为葡萄糖1.5％，糖蜜1.0％，玉米粉2.0％，蚕蛹粉3.0％，黄豆饼粉1.0％，富硒酵母粉(总硒1000ug/g)2.5％，蛋白胨0.2％，麸皮1.5％，硫酸镁0.01％，磷酸二氢钾0.02％，其余为水。首先将蚕蛹粉、玉米粉、麦麸、黄豆芽粉和适量水微沸提取30min,过滤后取滤液，加入其它成分，灭菌降温后，以15％接种量接入种子罐种子于发酵罐，温度17-19℃，搅拌转速100-120rpm,通气1：0.2-0.4vvm,培养8天生长浓稠。
下游处理：放罐发酵液进行固液分离，将固体烘干，干菌丝体收率38.0千克/吨发酵液。干菌丝体总硒含量为525ug/g,有机硒506ug/g；该干菌丝体内含虫草酸70.35mg/g,虫草多糖56.09mg/g,腺苷0.78mg/g，将该干菌丝体粉碎过80-100目筛制成冬虫夏草菌丝体粉。菌丝体粉呈灰黄色至黄褐色粉末状，具有微腥味，无异味，取少量，加亚甲蓝染色后，置显微镜下油镜镜检可见有隔多核菌丝。