一种生产水解过敏原的方法与流程

文档序号:18259127发布日期:2019-07-24 10:33阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种从过敏原生产水解过敏原的方法,包括以下步骤:

a)对包含过敏原蛋白的过敏原来源进行提取,从而形成提取物,

b)纯化所述提取物,以除去非蛋白组分,从而形成纯化的提取物,

c)使用第一变性剂在pH7.0到11.0对所述纯化的提取物进行变性,从而形成纯化的变性提取物,

d)精制所述纯化的变性提取物,以除去杂质,从而形成精制的变性提取物,

e)使用第二变性剂在pH1.0到7.0对所述精制的变性提取物进行变性,从而形成变性的过敏原混合物,和

f)对所述变性的过敏原混合物进行水解,从而形成所述的水解过敏原,和

g)纯化所述水解过敏原,从而去除分子量大于10,000道尔顿且低于1,000道尔顿的肽,其中70%或更多的所述肽在1,000-10,000道尔顿之间。

2.如权利要求1所述的方法,其中提取在溶液中操作,所述溶液不含盐或含选自下组的盐:碳酸盐、碳酸氢盐、磷酸盐、醋酸盐、TRIS和HEPES,其中提取优选用提取介质进行操作。

3.如权利要求1所述的方法,其中所述纯化和/或精制包括一步或多步的离子交换色谱步骤、凝胶过滤法或尺寸排阻色谱步骤、沉淀步骤、疏水作用色谱步骤、假亲和色谱或亲合色谱步骤或透析过滤步骤。

4.如权利要求3所述的方法,其中所述沉淀步骤用含三氯乙酸的溶液进行。

5.如权利要求1所述的方法,其中变性用选自下组的变性剂进行:离散剂、还原剂或其混合物,优选地所述变性剂选自下组:尿素、盐酸胍、二硫苏糖醇、硫代甘油、β-巯基乙醇,TCEP(三(2-羧乙基)盐酸膦)及其混合物,优选地所述第二变性剂是TCEP(三(2-羧乙基)盐酸膦)。

6.如权利要求5所述的方法,其中所述变性剂包括浓度大于4M的尿素和浓度高于3M的盐酸胍。

7.如前述权利要求1所述的方法,其中所述水解用酶进行,所述酶优选胃蛋白酶、胰蛋白酶或胰凝乳蛋白酶,更优选地,其中水解在离液剂和还原剂存在下进行。

8.如权利要求1所述的方法,其中对肽的去除通过尺寸排阻色谱和/或超滤法进行,其中所述尺寸排阻色谱在离散剂的存在下进行操作。

9.如前述权利要求1所述的方法,其中所述过敏原来源为花生,优选至少2个种/亚种/变株/杂交种和/或转基因花生的混合物,其中,所述花生可选自花生属(Arachis genus),更优选地选自密枝种(hypogaea)或疏枝种(fastigiata)。

10.用权利要求1-9中任一项所述的方法制得的水解过敏原。

11.如权利要求10所述的水解过敏原,其用作药物组合物和/或食物组合物用于诱导耐受性和脱敏。

12.权利要求11所述的水解过敏原,其用于治疗或预防过敏反应。

13.一种药物组合物,包含权利要求10所述的水解过敏原。

14.权利要求13所述的药物组合物,还包括至少一种选自下组的物质:核苷三磷酸、核苷二磷酸、核苷单磷酸、核酸、肽核酸、核苷或它们的类似物、抑制免疫的细胞因子、诱导免疫蛋白酶体表达的化合物、1,25-二羟基维生素D3或它们的类似物、脂多糖、内毒素、热休克蛋白、硫氧还蛋白与NADPH或NADP-硫氧还蛋白还原酶、还原剂、二硫苏糖醇、肾上腺素受体激动剂如沙丁胺醇、肾上腺素受体拮抗剂如布托沙明、调控粘附分子ICAM-1表达的化合物、N-乙酰基-L-半胱氨酸、y-L-谷氨酰-L-半胱氨酰-甘氨酸(还原型L-谷胱甘肽)、α-2-巨球蛋白、FoxP3基因表达的诱导剂、黄酮类、异黄酮类、紫檀烷类化合物(pterocarpanoids)、芪类化合物(stilbenes)如白藜芦醇、速激肽受体拮抗剂、糜酶抑制剂、疫苗佐剂或免疫调节剂如CpG、氢氧化铝、磷酸钙、TLR-4激动剂(即MPL)和TLR-9激动剂或耐受原性佐剂如酵母多糖、β-1,3-葡聚糖、调控型T-细胞诱导剂、用于将颗粒粘附至肠粘膜内层的粘膜粘附剂如植物凝集素、锌、锌盐、多糖、维生素和细菌溶解物或显示表面连有抗体的颗粒。

15.如权利要求13或14所述的药物组合物,其中用于口服、皮下给药、经鼻给药、经皮给药或淋巴内给药、舌下给药、肠道给药。

16.三氯乙酸的用途,其用作对过敏原蛋白进行沉淀和纯化的沉淀手段。

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