一种草菇菌丝复壮方法与流程

本发明属于食用菌遗传育种领域，具体涉及一种草菇菌丝复壮的方法。

背景技术：

草菇[volvariellavolvacea（bull.exfr.）sing]，又名苞脚菇、南华菇、兰花菇、麻菇、贡菇、秆菇和中国菇等。草菇在分类中隶属于无隔担子菌亚纲，伞菌目，草菇属，是热带和亚热带高温多雨地区广泛栽培的食用菌，富含8种人体必需氨基酸、维生素c及纤维素，其鲜品肥嫩脆滑，鲜美爽口，干品浓郁芳香，被视为美味佳肴，宴席珍品，深受消费者喜爱。草菇生长周期短，从播种到出菇仅需两周，其菌丝生长快，菌种老化、退化现象经常发生，菌种退化后其菌丝长势、产量等明显下降，严重制约了草菇产业的快速发展，因此如何对草菇菌种进行复壮具有重要意义。一方面，草菇为同宗结合真菌，生活史复杂，且菌丝间无锁状联合，杂种选择缺乏遗传标记，生物转化率低，草菇的杂交育种也变得十分困难，另一方面，传统复壮方法采用一级种转接二级种，待二级种出现较理想的生长态势后，将之回接到试管培养基上，需反复进行多次，操作繁琐且菌种复壮后过段时间仍会出现退化。因此寻找简单高效的复壮方法成为限制草菇产业化发展的关键问题。潮霉素作为一种常用抗性筛选药物，在草菇复壮过程中可作为抗性因子对其进行胁迫刺激，筛选出优良性状的草菇菌株，从而达到复壮草菇菌株的目的，且操作简单，复壮时间短、成本低、效果好。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种草菇菌丝复壮的方法，本发明的方法操作简单，成本低，效果好。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种草菇菌丝复壮方法，包括以下步骤：种菇选择、组织分离、尖端分离、出菇验证。

一种草菇菌丝复壮方法，包括以下具体步骤：

（1）种菇选择：选取草菇菇蕾小的子实体。

（2）组织分离：对所选种菇表面用酒精擦拭后用无菌水冲洗，切块处理后于无菌操作下接种于pda固体培养基中，25℃培养1-2天即可观察到分离子实体块表面长出白色绒毛状菌丝。

（3）尖端分离：将组织分离得到的菌丝培养2-3天，挑取菌落尖端的单根菌丝分离至均匀涂布1ml浓度15-45μg/ml潮霉素a的pda培养基中，25℃培养5天，获得经潮霉素胁迫后的复壮草菇菌株。

（4）出菇验证：将复壮后的草菇菌株进行液体摇瓶培养，接种于栽培基质中进行出菇实验。以菇蕾大小正常作为复壮成功的标准。

上述pda固体培养基的制备：准确称取去皮土豆200g，葡萄糖20g，琼脂粉20g，蒸馏水1000ml配制pda固体培养基，ph自然，分装于锥形瓶中，于高压灭菌锅中121℃灭菌30min，取出备用。

本发明的优点在于：

1、操作简便、成本低。本发明操作方法简单易行，潮霉素的添加采用涂布法，且潮霉素a属于普通抗生素，成本低廉，易获取，十分适用于工厂化复壮草菇菌株。

2、菌株复壮周期短，效果好。本发明从组织分离到复壮菌株的获得只需10天且复壮菌株性状优良，复壮效果显著。

附图说明

图1不同浓度潮霉素复壮处理草菇。

具体实施方式

实施例1

不同浓度潮霉素复壮处理草菇。

pda固体培养分别均匀涂布1ml浓度为0μg/ml、15μg/ml、30μg/ml、45μg/ml、60μg/ml、75μg/ml潮霉素a，将组织分离得到的菌丝培养3天，挑取菌落尖端的单根菌丝分离培养基中，25℃培养，菌丝长满平板后转接于pda固体培养基中，获得经潮霉素胁迫后的复壮草菇菌株，结果见图1。图1所示用0μg/ml潮霉素a涂布的平板对草菇菌丝的生长不表现胁迫生长作用，菌丝细弱，气生菌丝旺盛，15μg/ml、30μg/ml、45μg/ml潮霉素a涂布的平板对草菇菌丝的生长表现出不同程度的胁迫作用，菌丝粗壮，气生菌丝较少。60μg/ml、75μg/ml潮霉素a涂布的平板对草菇菌丝的生长表现出明显的抑制作用，菌丝几乎不生长。

实施例2

一种草菇菌丝复壮的方法，具体步骤：

（1）种菇选择:选取草菇菇蕾小的子实体。

（2）组织分离：对所选种菇表面用酒精擦拭后，无菌水冲洗，切块处理后于无菌操作下接种于pda固体培养基中，25℃培养1-2天即可观察到分离子实体块表面长出白色绒毛状菌丝。

（3）尖端分离：将组织分离得到的菌丝培养2天，挑取菌落尖端的单根菌丝分离至均匀涂布1ml浓度15μg/ml潮霉素a的pda固体培养基中，25℃培养5天，获得经潮霉素胁迫后的复壮草菇菌株。

（4）出菇验证：将复壮后的草菇菌株进行液体摇瓶培养，接种于栽培基质中进行出菇实验,

以菇蕾大小正常作为复壮成功的标准。

pda固体培培养基的制备：准确称取去皮土豆200g，葡萄糖20g，琼脂20g，蒸馏水1000ml配制pda固体培养基，分装于锥形瓶中，于高压灭菌锅中121℃灭菌30min，取出备用。

实施例3

一种草菇菌丝复壮的方法，包括以下具体步骤：

（1）种菇选择：选取草菇菇蕾较小的子实体。

（2）组织分离：对所选种菇表面用酒精擦拭后，无菌水冲洗，切块处理后于无菌操作下接种于pda固体培养基中，25℃培养2天即可观察到分离子实体块表面长出白色绒毛状菌丝。

（3）尖端分离：将组织分离得到的菌丝培养3天，挑取菌落尖端的单根菌丝分离至均匀涂布1ml浓度45μg/ml潮霉素a的pda固体培养基中，25℃培养5天，获得经潮霉素胁迫后的复壮草菇菌株。

（4）出菇验证：将复壮后的草菇菌株进行液体摇瓶培养，接种于栽培基质中进行出菇实验。以菇蕾正常大小作为复壮成功的标准。

pda固体培养基的制备：准确称取去皮土豆200g，葡萄糖20g,琼脂20g,蒸馏水1000ml配制pda固体培养基，分装于锥形瓶中，于高压灭菌锅中121℃灭菌30min，取出备用。

实施例4

一种草菇菌丝复壮的方法，包括以下具体步骤：

（1）种菇选择：选取草菇菇蕾较小的子实体。

（2）组织分离：对所选种菇表面用酒精擦拭后，无菌水冲洗，，切块处理后于无菌操作下接种于pda培养基中，25℃培养1天即可观察到分离子实体块表面长出白色绒毛状菌丝。

（3）尖端分离：将组织分离得到的菌丝培养2天，挑取菌落尖端的单根菌丝分离至均匀涂布1ml浓度30μg/ml潮霉素a的pda固体培养基中，25℃培养5天，获得经潮霉素胁迫后的复壮草菇菌株。

（4）出菇验证：将复壮后的草菇菌株进行液体摇瓶培养，接种于栽培基质中进行出菇实验，以菇蕾大小正常作为复壮成功的标准。

pda固体培养基的制备：准确称取去皮土豆200g，葡萄糖20g，琼脂20g，蒸馏水1000ml配制pda固体培养基，分装于锥形瓶中，于高压灭菌锅中121℃灭菌30min，取出备用。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。