本发明涉及一种烯烃化雌激素类化合物及其制备方法，以及其在制备抗肿瘤药物中的应用。
(二)
背景技术：
内分泌失调会诱发的各类疾病，如乳腺癌、宫颈癌、前列腺癌、子宫内膜癌、卵巢多囊综合症及各类更年期症状等，而其中雌激素失调是主要因素。目前，雌激素依赖性癌症也已成为威胁人类生命安全的重大疾病，其具有恶性肿瘤常见的生长快、易转移、不易根治、高致死等特点。目前调节雌激素的药物有很多，雌激素酮和雌二醇是其中常用的两种，主要用于治疗乳腺癌、前列腺癌以及子宫内膜癌等，它们主要通过介导mapk信号通路来下调雌激素水平，从而实现er蛋白酶的活性调节。
雌激素类药物由于存在羟基基团而难以被修饰，传统对于这类药物修饰的一般需要先对羟基进行保护，再在羟基的其他位点进行修饰，最后脱保护，实现修饰。这需要通过很长的步骤以及严格的条件，并且产率很低，因此对雌激素类抗肿瘤药物的简便重新修饰已然成为药物专家研究的新的方向。
(三)
技术实现要素：
本发明目的是提供一种具有良好的抗肿瘤活性烯烃化雌激素类化合物及其制备方法，以及其在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明采用的技术方案是：
一种烯烃化雌激素类化合物，其结构如下式之一所示：
本发明还涉及制备所述烯烃化雌激素类化合物的方法，所述方法包括：
(1)将式(ii-1)～(ii-3)所示之一雌激素类药物溶于乙腈溶剂中，
加入丙烯酸甲酯、钯催化剂、氧化剂，于70～80℃反应10～15小时；
所述钯催化剂为下列之一：醋酸钯，氯化钯，二乙酰丙酮钯，优选为二乙酰丙酮钯；
所述氧化剂为下列之一：过硫酸钾，二氧化锰，二醋酸碘苯，叔丁基过氧化氢，优选为过硫酸钾；
(2)步骤(1)反应液加入饱和nacl水溶液，用二氯甲烷萃取，取有机层干燥、过滤、旋蒸去除溶剂，得粗品；
(3)将粗品进行硅胶柱层析，以乙酸乙酯和石油醚的体积比为1:3～10的溶液为流动相，tlc跟踪收集rf值为0.3～0.5的洗脱液，收集得到的洗脱液经减压除去溶剂，干燥，得到所述烯烃化雌激素类药物。
所述雌激素类药物、丙烯酸甲酯、钯催化剂、氧化剂物质的量之比为1：1～5：0.1～2：1～6，优选为1：2：0.1：2。
本发明还涉及所述烯烃化雌激素类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
具体的，所述肿瘤为乳腺癌或前列腺癌，所述药物为制备治疗乳腺癌或前列腺癌的药物。
本发明的有益效果主要体现在：(1)本发明提供的烯烃化雌激素类药物结构新颖，具有良好的抗肿瘤活性，尤其是对于乳腺癌细胞系mcf-7和前列腺癌细胞系pc-7具有优异的抑制活性。(2)本发明提供的烯烃化雌激素类药物的制备方法，只需一步便可高产率制得烯烃化雌激素类药物，具有简单、高效、便捷等特点。
(四)具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
实施例1：制备烯烃化雌激素酮
将1mmol雌激素酮(ii-1)加入4ml的乙酸溶剂中，向其中加入0.2mmol乙酰丙酮钯，1.2mmol丙烯酸乙酯，2.0mmol乙酸银，2.0mmol过硫酸钾，80℃下反应12小时，反应结束后，反应液中加入饱和nacl水溶液，用二氯甲烷萃取，取有机层经过无水硫酸钠干燥、过滤、减压蒸干，即得化合物粗品。将化合物粗品进硅胶柱层析，以乙酸乙酯和石油醚的体积比为1：8的溶液为流动相，tlc跟踪收集rf值为0.3-0.5的洗脱液，收集得到的洗脱液经减压除去溶剂，干燥，得到式(i-1)所示的化合物纯品37mg。
式(i-1)化合物nmr数据：1hnmr(500mhz,cdcl3)δppm7.97(d,j＝16.14hz,1h),7.36(s,1h),6.95(br.s.,1h),6.61(s,1h),6.62(d,j＝15.96hz,1h),4.22(t,j＝6.69hz,2h),2.52(dd,j＝19.26,8.44hz,1h),2.39-2.46(m,1h),2.19-2.27(m,1h),2.11-2.18(m,1h),1.94-2.09(m,3h),,1.59-1.65(m,1h),1.48-1.58(m,4h),1.38-1.47(m,3h),0.96(t,j＝7.34hz,3h),0.92(s,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δppm221.3,168.6,153.6,141.0,140.8,132.1,126.2,119.4,117.4,116.3,64.5,50.4,48.0,43.7,38.2,31.5,30.8,29.4,26.4,25.9,21.6,13.9,13.8.
实施例2：制备烯烃化雌二醇
将1mmol雌二醇(ii-2)加入4ml的乙酸溶剂中，向其中加入0.2mmol乙酰丙酮钯，1.2mmol丙烯酸乙酯，2.0mmol乙酸银，2.0mmol过硫酸钾，80℃下反应12小时，反应结束后，反应液中加入饱和nacl水溶液，用二氯甲烷萃取，取有机层经过无水硫酸钠干燥、过滤、减压蒸干，即得(i-2)化合物粗品。将(i-2)化合物粗品进硅胶柱层析，以乙酸乙酯和石油醚的体积比为1：5的溶液为流动相，tlc跟踪收集rf值为0.3-0.5的洗脱液，收集得到的洗脱液经减压除去溶剂，干燥，得到式(i-2)所示的化合物纯品29mg。
式(i-2)化合物nmr数据：1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.92(brs,1h),7.96(d,j＝16.5hz,1h),7.51(s,1h),6.68(s,1h),6.63(d,j＝16.5hz,1h),4.22(t,j＝6.69hz,2h),3.73(s,3h),3.69(brs,1h),2.81-2.78(m,2h),2.46-2.42(m,1h),2.18-2.13(m,1h),2.02-1.95(m,2h),1.89-1.85(m,1h),1.69-1.65(m,1h),1.52-1.16(m,7h),0.79(s,3h)；13cnmr(126mhz,cdcl3)δ167.7,154.7,141.3,140.9,132.4,126.3,119.2,116.4,116.1,81.1,50.8,50.2,44.1,43.4,39.2,37.0,30.3,29.6,27.2,26.4,23.1,10.9.
实施例3：制备烯烃化雌炔醇
将1mmol雌炔醇(ii-3)加入4ml的乙酸溶剂中，向其中加入0.2mmol乙酰丙酮钯，1.2mmol丙烯酸乙酯，2.0mmol乙酸银，2.0mmol过硫酸钾，80℃下反应12小时，反应结束后，反应液中加入饱和nacl水溶液，用二氯甲烷萃取，取有机层经过无水硫酸钠干燥、过滤、减压蒸干，即得(i-3)化合物粗品。将(i-3)化合物粗品进硅胶柱层析，以乙酸乙酯和石油醚的体积比为1：5的溶液为流动相，tlc跟踪收集rf值为0.3-0.5的洗脱液，收集得到的洗脱液经减压除去溶剂，干燥，得到式(i-3)所示的化合物纯品29mg。
式(i-3)化合物nmr数据：1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.39(d,j＝8.7hz,2h),7.14(s,1h),7.00(d,j＝8.7hz,2h),6.71(s,1h),5.19(brs,1h),3.86(s,3h),3.73(t,j＝9.6hz,1h),2.88-2.84(m,2h),2.34-2.05(m,2h),1.95-1.88(m,2h),1.75-1.18(m,9h),0.78(s,3h)；13cnmr(126mhz,cdcl3)δ159.0,150.3,137.5,132.7,130.2(2c),129.7,127.2,125.3,115.5,114.5(2c),81.9,55.3,50.0,43.9,43.2,38.8,36.6,30.5,29.3,27.2,26.3,23.1,11.0
实施例4：抗肿瘤检测
将肿瘤细胞mcf-7、pc-7接种4000个细胞/瓶至含有10％胎牛血清的dmem高汤培养液的细胞培养瓶中，置于5％co2、37℃的培养箱中培养3天、取出细胞培养瓶在无菌操作台中收集细胞。将细胞以4000个/孔的浓度接种至含有10％胎牛血清的dmem高汤培养液的96孔板中，并在板盖上加上注释，于5％co2、37℃培养12小时，待细胞在96孔板上贴壁，在无菌操作台中用移液枪加待测药物(实施例1制备的化合物(i-1))，使每孔药物浓度分别为0.01、0.1、1、10.0、100.0μm五个浓度梯度，每个浓度设置有五个平行组，以雌激素酮作为对照)，并再次将96孔板置于5％co2、37℃培养24小时。取出96孔板，向每个孔中加入20μl的mts试剂盒试剂(购自promega公司)，避光孵化40分钟，利用酶标仪测其吸光度。从而计算出细胞抑制率和细胞毒性，用icestimatorsoftware软件处理，计算ic50以及ic5095％可信区间，结果表1所示。
由表1可见，丙烯酸乙酯修饰后的雌二醇对mcf-7的抑制毒性可以提高1.2倍，而对pc-7细胞的抑制效果可以提高1.21倍。
实施例5：抗肿瘤检测
将肿瘤细胞mcf-7、pc-7分别接种4000个细胞/瓶至含有10％胎牛血清的dmem高汤培养液的细胞培养瓶中，置于5％co2、37℃的培养箱中培养3天、取出细胞培养瓶在无菌操作台中收集细胞。将细胞以4000个/孔的浓度接种至含有10％胎牛血清的dmem高汤培养液的96孔板中，并在板盖上加上注释，于5％co2、37℃培养12小时，待细胞在96孔板上贴壁，在无菌操作台中用移液枪加待测药物(实施例2制备的化合物(i-2))使每孔药物浓度分别为0.01、0.1、1、10.0、100.0μm五个浓度梯度，每个浓度设置有五个平行组，以雌二醇作为对照)，并再次将96孔板置于5％co2、37℃培养24小时。取出96孔板，向每个孔中加入20μl的mts试剂盒试剂(购自promega公司)，避光孵化40分钟，利用酶标仪测其吸光度。从而计算出细胞抑制率和细胞毒性，用icestimatorsoftware软件处理，计算ic50以及ic5095％可信区间，结果见表1所示。
由表1可见，丙烯酸乙酯修饰后的雌二醇对mcf-7的抑制毒性可以提高2.3倍，而对pc-7细胞的抑制效果可以提高1.5倍。
实施例6：抗肿瘤检测
将肿瘤细胞mcf-7、pc-7分别接种4000个细胞/瓶至含有10％胎牛血清的dmem高汤培养液的细胞培养瓶中，置于5％co2、37℃的培养箱中培养3天、取出细胞培养瓶在无菌操作台中收集细胞。将细胞以4000个/孔的浓度接种至含有10％胎牛血清的dmem高汤培养液的96孔板中，并在板盖上加上注释，于5％co2、37℃培养12小时，待细胞在96孔板上贴壁，在无菌操作台中用移液枪加待测药物(实施例3制备的化合物(i-3))使每孔药物浓度分别为0.01、0.1、1、10.0、100.0μm五个浓度梯度，每个浓度设置有五个平行组，以雌二醇作为对照)，并再次将96孔板置于5％co2、37℃培养24小时。取出96孔板，向每个孔中加入20μl的mts试剂盒试剂(购自promega公司)，避光孵化40分钟，利用酶标仪测其吸光度。从而计算出细胞抑制率和细胞毒性，用icestimatorsoftware软件处理，计算ic50以及ic5095％可信区间，结果见表1所示。
表1：烯烃化雌激素类化合物的抗肿瘤检测检测结果
由表1可见，丙烯酸乙酯修饰后的雌炔醇对mcf-7的抑制毒性可以提高2.3倍，而对pc-7细胞的抑制效果可以提高1.6倍。