微孔中通过DNA纳米技术进行单分子检测或定量的制作方法

本发明涉及用于检测靶标结构体的方法和dna纳米结构体。特别地，本发明涉及dna纳米结构体，其通过巧妙地选择dna纳米结构体的形状和附着于其上的标记物分子的位置，不依赖于多个这样的dna纳米结构体的物理排列，确保了标记物分子的数量和测量信号的优选线性依赖性。本发明还涉及在用于借助于多重方法(优选同时)定量多个靶标分子的方法中，使用所述dna纳米结构体和其他纳米报告子，优选与特异性结合靶标分子的接头(衔接头)组合。在研究以及应用医学和生物技术中经常出现的问题是特定靶标结构体的分析，即检测。例如，对于败血症患者，可能需要检测相关毒素，或者，对于需要细胞组成发生改变的疾病，例如患有癌症，可能需要对遗传信息的转换进行定量分析。遗传信息转换的定量分析，即所谓的基因表达图谱(gep)需要检测和识别许多不同的靶标mrna分子(stadler，z.k.等人criticalreviewsinoncologyhematology69，1-11(2009))。mrna是英语术语信使rna(德语“boten-rna”)的既定缩写，也在德语中使用。由于mrna序列是在相应基因的表达过程中特异性产生的，因此可以以此方式定量分析材料的基因表达。gep能够提供有关个体细胞或组织样品(多个细胞)的状态或类型的信息，并且从而能够例如进行肿瘤组织的分子诊断。gep包含至少一种基因表达的分析，优选多种基因表达的分析。为了达到这个最终目的，需要这样的技术：其优选地对尽可能高数量的基因，同时允许定量分析具有尽可能高的特异性和灵敏度。为了在临床实践中全面应用，该技术还必须具有快速分析时间、低成本和易于使用的特点。存在多种gep技术，它们根据所讨论的问题具有不同的优点和缺点。微阵列.使用微阵列进行的gep分析基于荧光dna分子与芯片上特定的物理上分隔的靶标序列的表面杂交(trevino，v.等人molmed13，527-541(2007))。这些分子是通过rna分子的逆转录和聚合酶链反应(pcr)扩增而在先前的步骤中产生的。因此，微阵列允许并行检测最多达数千个序列。但是，精确的定量是不可能的，因为酶促反应(例如逆转录和pcr扩增)会导致系统错误。而且，基于微阵列的方法需要相对较长的处理时间，约一天，因此不适用于大量的临床应用。qpcr/dpcr.使用pcr，可以在酶促过程中以指数方式复制特定的dna分子(vanguilder，h.d.等人biotechniques44，619-626(2008))。对于pcr反应，mrna靶标通常必须使用rna的逆转录酶促转化成dna。通过添加荧光dna结合分子可以对扩增进行测量，并可以粗略确定原始浓度(qpcr)。由于扩增速率很大程度上取决于各种参数(尤其是靶标序列、靶标长度、引物、仪器、试剂、反应体积)，因此必须对所述定量进行精确校准。为了弥补这些缺点，开发了数字pcr(dpcr)。它允许通过分隔各个靶标分子来实现更精确的定量(baker，m.naturemethods9，541-544(2012))。然而，所述dpcr的高精度由于限于通常两个靶标而被抵消。因此，dpcr不适合于gep分析。rna-seq/ngs.借助所谓的下一代测序(ngs)，rna测序(rnaseq)也基于此，每个碱基可以以数个步骤读出并识别序列(wang，z.等人natrevgenet10，57-63(2009))。对于rna测序，也必须首先将rna酶促转化为dna。ngs在转录分析中的优势和独特之处是可以识别新的或改变的序列。由于大量复杂的处理步骤，因此分析设备复杂且昂贵，并且处理时间长。这使其不能用于保健领域。就像上述方法一样，酶促过程会阻止精确的可定量性。ncounter.nanostringtechnologies的ncounter系统基于，一方面使用荧光报告子(条形码)，另一方面使用用于附着至显微芯片的第二dna分子(捕获链)，通过杂交检测rna分子(geiss，g.k.等人natbiotechnol26，317-325(2008))。荧光报告子是线性几何条形码，其长度为微米级并且由荧光染料标记的不同区域的布置组成。ncounter系统的优势之一是无酶且定量检测最多达800个不同的rna靶标分子。该方法的缺点之一是必须在靶标杂交和表面固定后拉伸几何条形码分子，以便能够读取相应的条形码。这有两个重要的含义：(1)报告子的电泳拉伸是复杂的处理步骤，(2)由于该步骤效率低，约80％的靶标分子由于条形码无法识别而被排除在外。此外，必须进行复杂且耗时的纯化步骤，例如使用磁性颗粒。总之，这些工艺步骤导致昂贵的分析装置(>200,000欧元)和较长的测量时间(24-48小时)。因此，这些传统方法不能满足所有对gep的上述优选要求，并为了必要的灵敏度而牺牲了例如部分可定量性。gep的其他有前途的分析方法是基于通过使用荧光报告子的所谓杂交直接标记单个靶标mrna序列。荧光方法允许灵敏地检测单个分子(joo，c.等人annurevbiochem77，51-76(2008))。但是，已建立的方法无法确定大量不同的报告子。采用可用的方法在单细胞基础上进行定量gep仅在有限的方式中可行，但对于科学研究和工业研发以及临床应用都将是非常有利的。gep的重要所需特征是精确定量和有效实施分析。这产生了改善gep的以下优选标准：·直接检测mrna，特别是不翻译成dna，例如通过逆转录·没有扩增靶标分子，因为不精确的扩增会影响定量·由此：检测单个靶标分子·尽可能快的分析(几分钟)·尽可能简单的分析，尤其是：工作步骤少·分析结果与样品原始成分相关的可能性除核酸和蛋白质外，还有许多其他问题，必须检测几纳米到几十纳米数量级的单位并优选计数和/或确定其浓度；例如无机复合物和纳米颗粒。所有这些问题的共同点是，应以快速、简单和准确的方式检测分子或其他结构体并优选对其进行计数。精确计数尤其必须使假阳性和/或假阴性计数事件的概率保持尽可能低。本发明旨在改善所述特性中的一个或多个，特别是降低假阳性和/或假阴性计数事件的可能性。该问题通过如独立权利要求所述的本发明解决。由于多个方面与现有技术相比有利，所以本发明允许解决前述问题。本发明涉及这样的方法：该方法允许对单个细胞或其他结构体在此规模或相似规模下分析。在这方面具有特别有利效果的方法的一个方面是要在微孔中分析的结构体的分离。这样允许减少实际要单独分析的结构体的由于扩散损失、外部输入和/或混合而导致的结果失真。微孔的使用还具有下述优点：可以将错误加载的微孔快速且简单地丢弃，从而导致提高了分析结果的准确性。根据本发明的另一个方面，尽管对要分析的结构体进行单独的分析，也可以对多个要分析的结构体并行分析。与开始时提到的已知方法相比，该方法只涉及少量步骤，从而降低了由分析工艺本身造成伪影形成的风险。分离待分析结构体的方法的步骤有利地保持简单，这与其他分离技术(例如分离成单个液滴)相比，大大简化了方法的执行。可以看出，本发明的特别有利的方面是，对于所要分析的个体结构体，不仅要进行分子分析，而且也可以分析其表型，例如就其形态而言进行分析。可以将这两个分析结果彼此关联，从而可以将分子特性与要分析的结构体的其他表型特征关联，从而允许进行其他评估，诸如例如相关分析。因此，本发明涉及一种靶标结构体的检测(优选定量)方法，包括：p1)将包括具有靶标结构体的宿主体的一组宿主体引入微孔阵列，使得恰好一个宿主体存在于至少一个微孔中；p2)将至少两种3ddna纳米结构体引入所述至少一个微孔，其中每种3ddna纳米结构体包含一种或多种向内布置的荧光染料分子；a)在所述至少一个微孔中形成识别结构体，包括：(i)所述靶标结构体，和(ii)所述至少两种3ddna纳米结构体，其中每种3ddna纳米结构体特异性结合于所述靶标结构体，并且其中所述3ddna纳米结构体结合于所述靶标结构体的成对的不同区域；b)通过测量至少一种荧光信号检测所述靶标结构体，其中，选择所述3ddna纳米结构体和所述荧光测量的参数，使得a)中形成的所述识别结构体的至少一个测量的荧光信号与至少两种分离的3ddna纳米结构体在它们未结合于相应的识别结构体中时的每一种的荧光信号可区分，其中所述识别结构体结合于第一表面，优选所述至少一个微孔的底部。优选的是，单独考虑的3ddna纳米结构体具有相同的荧光信号，而不管它们是否分离存在(即未结合在识别结构体中)或在识别结构体中。因此，步骤b)中测得的至少一种荧光信号通过结合至少两种3ddna纳米结构体的优点而与未结合的(即，分离的)3ddna纳米结构体的单个荧光信号不同。因此，其是不必要的，即使也有可能，3ddna纳米结构体也不需要通过结合到识别结构体中来改变其荧光信号，例如通过迁移光谱和/或改变强度来改变其荧光信号。此处，宿主体是指要分析的结构体，其可包括要分析的靶标结构体。例如，宿主体可以是细胞，例如原核、真核、细菌、植物和/或动物细胞、病毒、外体、囊泡和/或液滴。要分析的靶标结构体可以位于宿主体的表面上和/或宿主体内部。因此，本发明还涉及方法的变体：其中所述靶标结构体存在于宿主体中，其中所述方法还包括：e)破坏所述宿主体，优选通过用破坏缓冲液进行液体交换，从而将所述靶标结构体从所述宿主体中释放。如果宿主体组包含细胞、囊泡和/或外体，破坏步骤e)优选包含裂解，特别优选基于低渗或基于去污剂的裂解(例如见“thermoscientificpiercecelllysistechnicalhandbook”(2nded.),thermoscientific；d.liu和l.huang,“tripsin-inducedlysisoflipidvesicles:effectofsurfacechargeandlipidcomposition”,analbiochem1992,202(1),1-5；l.turnbull等人,“explosivecelllysisasamechanismforthebiogenesisofbacterialmembranevesiclesandbiofilms”,natcommun2016apr14；7:11220；c.等人,“isolationandcharacterizationofrna-containingexosomes”,jvisexp2012,593037和/或pinli等人,“progressinexosomeisolationtechniques”,theranostics2017,7(3):789-804)，优选使用裂解缓冲液，或物理裂解，例如激光诱导的裂解(例如见md.dhawan等人,“developmentofalaser-inducedcelllysissystem”,analbioanalchem2002,373(3):421-6；k.rau等人,“pulsedlasermicrobeam-inducedcelllysis:time-resolvedimagingandanalysisofhydrodynamiceffects”,biophys.j.2006,91(1):317-329)或声波裂解(例如见“thermoscientificpiercecelllysistechnicalhandbook”(2nded.),thermoscientific)。如果宿主体组包括水包油包水型乳剂的液滴，可以使用类似于细胞裂解的方法和/或技术人员已知的等效方法(例如见m.chavez-paez等人,“coalescenceindoubleemulsions”,langmuir2012,28,5934-5939)。对于油包水乳液的液滴形式的宿主体，由于这种液滴直接与亲水性微孔边界，即壁和/或底部融合，因此会自动发生破坏，因此该方法的这一步骤仅包含等待到孵育期结束，优选孵育期为5-120分钟，特别优选为15分钟。如果宿主体组包含病毒，则可以使用病毒裂解的方法，包括例如含有十二烷基硫酸钠(sds)和/或甲酰胺的裂解缓冲液(例如见g.f.steward和a.i.culley，“extractionandpurificationofnucleicacidsfromviruses”，manualofaquaticviralecology，chapter16，americansocietyoflimnologyandoceanography，2010，pp.154-165)。裂解可以例如机械地进行，通过裂解缓冲液、酶学和/或化学地或通过光进行。在
技术领域：
：中已知的用于细胞裂解的方法例如在“thermoscientifipiercecelllysistechnicalhandbook”(第二版，thermoscientific)中提及，并且包括使用表面活性剂tritonx作为裂解缓冲液。因此，本文中将不再讨论该方法的细节。还已知可破坏液滴的类似方法。例如m.chavez-paez等人“coalescenceindoubleemulsions”，langmuir2012，28，5934-5939描述了使用表面活性剂(例如sds或span80)破坏液滴。本发明的另一方面涉及微孔阵列。微孔阵列将宿主体彼此分离，并将单个宿主体的靶标结构体的大部分(取决于几何形状，例如70％，优选85％，特别优选99％)定位到相关的微孔中。微孔阵列可以是载体的优选实施方式。特别地，微孔阵列的第一层可以用作载体。在本说明书的过程中将更详细地描述载体，并且与载体相关联提及的所有特征也特别应用于作为微孔阵列的载体实施方式。微孔阵列优选适合于荧光显微术。微孔阵列是孔(即，凹部)的阵列，具有优选尺寸为10到500微米，其中每个孔包含底部和周壁。微孔的底部优选适合于荧光显微术。每个微孔优选包含敞开的顶侧。微孔阵列优选包含第一层，该第一层优选形成微孔的底部，其中第一层优选适合于荧光显微术并且优选是盖玻片。
技术领域：
：中已知的所有材料，例如玻璃或特种塑料均可考虑作为用于第一层的材料。微孔阵列还优选包含第二层，该第二层施加在第一层上，其中第二层形成微孔的壁。在优选的实施方式中，微孔的底部由第一层形成，不含第二层的材料。然而，在其他实施方式中，微孔的底部可以被覆盖，至少成段地被覆盖，优选地以0-5微米、更优选0-1微米、甚至更优选0-100纳米的第二层材料的薄层覆盖。在优选的实施方式中，第一层包含不同于第二层的材料。以这样的方式优选选择第二层的材料：使其在与分析有关的波长处具有尽可能低的自发荧光，从而使分析不受微孔阵列的自发荧光的干扰。在根据分析方法的荧光测量中，由于第二层的自发荧光引起的荧光信号优选不高于由于具有5种荧光分子、优选4种荧光分子、更优选3种或更少荧光分子的3ddna纳米结构体引起的荧光信号。为了测量微孔阵列第二层的现象学自发荧光δ，根据下述实施例6进行单细胞基因表达分析方法的实验步骤(即不包括在实施例6中所描述的评估步骤)，不同之处在于微孔阵列的第二层由要分析的材料组成。使用nikoneclipseti落射荧光显微镜进行成像。光源是lumencor,inc.beaverton,or,usa生产的solase。该相机是pcogmbh,kehlheim,germany的pco.edge4.2。ahfanalysentechnikag,tübingen,germany的物镜f73-832用作分束器。对于蓝色通道，激发和发射滤光器为f39-480和f37-527；对于绿色通道，滤光器为f39-563和f39-637；对于红色通道，使用f39-640和f37-698。作为目镜，使用nikongmbh,düsseldorf,germany的fiapochromattirf60xoil1.49。为了进行测量，将焦点对准第一层的上表面，使得3ddna纳米结构体在焦点中。对于每个通道，在光源最大强度的情况下，以1秒的曝光时间拍摄两张图像：一张图像是具有3ddna纳米结构体的微孔底部区域，以及一张图像是填充有第二层的区域。分别为每个通道计算第二层的现象学自发荧光δ，并基于第二层图像的平均像素强度与相关通道的图像中可见的所有3ddna纳米结构体的最大像素值的平均值之比来计算。现象学自发荧光δ优选0-0.1，更优选0-10-2，甚至更优选0-10-4，并且特别优选0-10-6。为了分析材料，该材料是针对与本发明方法相关的自发荧光分析对微孔阵列第二层考虑的，以下有关吸收和荧光的考虑是有用的：通常，均质材料中的吸收是由吸收性颗粒引起的，例如可以见于“experimentalphysik2-undoptik”,springer1995,isbn3-540-57095-0,pp.212etseqq和p.atkins:physikalischechemie,第5版,2013,wiley-vhc,weinheim，可以通过辐射强度i与初始值i0相比的降低来描述：i＝i0*exp(-a)其中吸光度a可表示为a＝b*d＝εabs*c*d＝n*σabs其中，d是被照射材料的厚度，b是吸收系数，εabs是与浓度相关的吸收系数(通常称为吸收系数，b和εabs之间的差异对于本领域技术人员而言根据上下文中是清楚的)，而c是吸收类型颗粒的浓度。为了保持散射截面(例如见“experimentalphysik2-undoptik”,springer1995,isbn3-540-57095-0,pp.218etseqq.)，可以对于单个吸收性颗粒定义吸收截面σabs，即颗粒周围的概念表面，其中吸收了任何入射光子。因此，吸收是a＝n*σabs/f＝n*σabs*d/v其中，n是指被照射颗粒的数量，f是指被照射样品的表面，d是指被照射材料的厚度，以及v是指被照射样品的体积。这些关系使浓度相关的吸收系数与吸收截面相关：σabs＝εabs/na其中，na是阿伏伽德罗常数6.022*1023mol-1。在与称为σabs.fluo的荧光颗粒有关的当前情况下，根据吸收截面σabs的上述定义，如果用激发强度iex照射单荧光颗粒，其中iex＝(h*νex)*nexphot/(t*f)，即，在时间t流过表面f的能量为h*νex的nexphot光子流，则nabsphot＝nexphot*σabs.fluo/f光子在上述时间内被吸收。发射的光子数量nemphot是吸收的光子数量与荧光颗粒的荧光量子效率ηfluo的乘积(例如见p.atkins:physikalischechemie,第5版,2013,wiley-vch,weinheim)：nemphot＝ηfluo*nabsphot因此，对于荧光颗粒的发射光子流nemphot/t，它与用显微镜捕获的并由显微镜图像表示的荧光信号成比例，它保持：nemphot/t＝ηfluo*σabs，fluo*iex/(h*νex)＝ηfluo*(εabs，fluo/na)*iex/(h*νex)εabs，fluo(荧光颗粒的εabs)和ηfluo是荧光标记物的参数，且两者均由制造商指示。它们也可以使用本领域技术人员熟悉的方法通过荧光和吸收光谱法独立测定。为此，可以使用市售的和本领域技术人员已知的装置，例如以下装置：horibascientific的fluoromax-4和quanta-phi(由horibajobinyvongmbh，bensheim，germany经销)。fluormax4对于εabs，fluo的测量是必需的，并且两种装置组合在一起对于ηfluo的测量都是必需的。对于具有吸收系数bmat(以下也称为bmat)的一单位材料，如上所述，认为入射强度iex的值按以下方式从入射强度i根据材料厚度d而降低：i＝iex*e-b_mat*d由于节能，吸收以下强度：iabsmat＝iex*(1-e-b_mat*d)然后，在时间t内，在区域fb中吸收的光子的数量nabsphotmat为nabsphotmat/t＝iabs/(h*νex)*fb＝iex*(1-e-b_mat*d)/(h*νex)*fb发射光子数nemphotmat是基于材料的荧光量子产率ηmat所减少的吸收光子数来计算的nemphotmat/t＝ηmat*nabsphot/t＝ηmat*iex*(1-e-b_mat*d)/(h*νex)*fb一单位材料的发射光子流nemphotmat/t与用显微镜获得的并由显微镜图像表示的荧光信号成比例。为了测试可能会阻碍测量的自发荧光材料，必须确定其吸收系数bmat以及其荧光量子产率ηmat。为此，作为本领域技术人员的惯常做法，将材料的样品单元以有利于荧光光谱的形式制备，在许多情况下例如以1cmx1cmx3cm的长方体形式。该样品单位是使用可商购的并且是本领域技术人员已知的装置来测量，例如horibascientific的fluoromax-4和quanta-phi(由horibajobinyvongmbh，bensheim，germany经销)，并且对于不同的波长范围，确定了bmat以及ηmat。与本发明的方法有关的波长范围是与附着在3ddna纳米结构体上的荧光染料分子一起使用的激发和发射波长范围。激发波长可以例如在510-550纳米、570-630纳米和/或660-720纳米的范围内。材料的b和η的测量可以通过horiba的量子效率测量系统进行，该系统由带有ccd的fluoromax-4和quanta-phi组成。为此，将材料长方体放入quanta-phi液体样品支架链(支架/夹持器)的比色杯支架链中。随后，将样品支架链放入quanta-phi的光度计球中，并关闭该光度计球。随后，根据操作手册在quanta-phi和fluoromax之间安装光纤。材料的测量使用horibascientific的fluoressencetm软件根据quanta-phi操作手册(“quanta-phif-3029integratingsphereoperationmanual-partnumberj81089rev。c”，horibascientific2010)进行。测量空样品室作为背景参考样品。对于此参考样品，在软件中将瑞利激发峰设置为106个计数/秒。激发波长设置为488纳米、561纳米和647纳米，用于在蓝色、绿色和红色通道中进行测量。对于背景参考测量，发射范围设置为290纳米至1100纳米。如手册中所述，设置积分时间和累积次数，以使得对于激发波长，测量值为106个计数/秒。随后，以具有相同参数对材料样品长方体进行测量。如使用者手册中指示的使用软件进行评估，并且对于蓝色、绿色和红色将激发波长设置为480-495、555-570和640-655纳米，以及发射波长设置为500-540、575-620和660-700纳米。随后，该软件计算量子效率η的值。为了测量吸收常数b，将普通比色皿样品支架链代替光纤再次安装在fluoromax-4中，并根据操作手册(“fluoromax-4&fluoromax-4pwithusboperationmanual-partnumberj810005rev.d”,horibascientific2012)使用上文对不同通道指示的激发波长进行吸收测量。在没有样品的情况下再次进行的背景测量的测量值再次设置为106个计数/秒。可以通过厚度为d(对应于微孔的高度)的第二层材料的衍射极限面积fb的荧光信号与荧光染料的荧光信号之间的关系γ来确定第二层材料的自发荧光对测量的干扰程度：γ＝ηmat*navogadro*fb*(1-e-b_mat*d)/(εabs，fluo*ηfluo)对于衍射极限面积，使用半径为rairy的瑞利盘((y.soskind,"fieldguidetodiffractiveoptics",spiepress2011,bellingham,washingtonusa,isbn978-0-8194-8690-5,p.14)：fb＝πrairy2＝π*(0，61*λ/na)2其中，π是数学常数pi(3,1415…)，λ是发射波长和/或发射波长范围的中心波长，以及na是所用显微镜的数值孔径。在下文中，γ被称为荧光团相关的自发荧光，并且对于至少一个荧光通道，其优选地小于5，更优选地小于2，特别优选地小于0.5，最特别优选地小于0.01。第二层优选包含su-8，优选peg-da，特别优选pdms，更优选cytop，特别优选液体玻璃。特别优选的是，第二层由这些材料之一组成。液体玻璃是指溶剂、塑料和二氧化硅纳米粉的纳米复合材料，其在室温下为液体，并通过在烤箱中烧结而烘烤成接近纯的，优选是纯的二氧化硅/玻璃(例如参见f.kotz等人,“three-dimensionalprintingoftransparentfusedsilicaglass”,nature2017,544(7650),337-339以及f.kotz等人,“liquidglass:afacilesoftreplicationmethodforstructuringglass”,advancedmaterials2016,28,4646-4650)。在优选的实施方式中，第二层由弹性材料，优选pdms组成，并在顶侧封闭微孔，而第一层和第二层优选通过压力可逆地彼此连接。作为另选或作为附加，微孔也可以被蚀刻成层，特别是如果该层由玻璃组成。结果，存在第一连续的底部层和第二顶部层，以蚀刻的凹部作为微孔，其中第二层与第一层牢固地结合并且其形成微孔的周壁。单个孔的形式优选是均匀的，但是它们可以彼此不同。平面视图中的孔的形式可以例如是正方形、环形、椭圆形、六边形、圆形、三角形、多边形和/或不规则形状。微孔的底部的内切圆直径优选为10μm–1,000μm，优选20μm-500μm，更优选50μm-200μm，和/或面积为1,000,000μm2以下，优选为250,000μm2以下，特别优选40,000μm2以下。微孔的深度优选等于或大于相关微孔的内切圆的直径。在一个方面，本发明还涉及微孔阵列，其中一个或多个载体接头结合到至少一个微孔的底部。优选的是，靶标结构体通过载体接头的介导结合于和/或将结合于载体和/或载体的第一表面，所述载体接头特异性地结合至靶标结构体。因此，优选靶标结构体结合和/或将结合至至少一个微孔的底部，其中该结合优选地由特异性结合靶标结构体的载体接头介导。在特别优选的实施方式中，微孔阵列可形成为微孔腔室的一部分。在微孔腔室中，微孔阵列包含附着于第二层的第三层。第一层、第二层和第三层的布置是优选的，使得第二层位于第一层和第三层之间。第三层包含与微孔阵列的微孔直接相邻的附加腔，即，第三层的附加腔，并且由微孔形成的腔形成连续的工作腔，该工作腔通过第一层、第二层和第三层而对周围环境封闭。优选的是，第三层的腔进一步通过延伸穿过第三层的入口和出口与周围的环境相连。入口和出口优选旨在有效地向工作腔中填充流体和/或排出多余的流体，特别是在本发明方法的步骤中。为此，入口和/或出口可以配备有标准连接器，例如鲁尔连接器。所述实施方式特别有利的原因在于，一方面，由于微孔顶部敞开，所以保持了已经描述的工艺步骤的简单性，并且另一方面，可以更好地控制流动行为和所使用的流体量，因此，最终可以最大程度地减少试剂和样品材料的使用。将包括带有靶标结构体的宿主体的一组宿主体引入微孔阵列，从而使得恰好一个宿主体存在于至少一个微孔中的方法步骤代表了宿主体分离的步骤。在这种情况下，优选的是使用一定体积的合适宿主体组浓度的合适流体。优选的是，宿主体流体添加到微孔中，然后，由于重力作用，允许宿主体有时间沉入微孔底部。对于pbs(配方见例如实施例6)中的hela细胞，沉入的时间可以例如为15-30分钟。优选通过将宿主体流体施加到微孔阵列的开口侧，来进行宿主体流体在微孔中的引入。如果宿主体是细菌、病毒或不会因重力而沉入的其他宿主体，则可以在微孔阵列的第一层和/或第二层的表面上提供阳离子聚合物，诸如例如聚-l-赖氨酸(pll)，从而基于这样的宿主体的统计运动和/或扩散，使足够数量的宿主体与阳离子聚合物足够接近，从而使宿主体粘附于其上(例如，见b.fang等人,“surfacesforcompetitiveselectivebacterialcaptureformproteinsolutions”,acsappl.mater.interfaces,2015,7(19),pp.10275-10282)。优选在方法步骤p1)之前，在为微孔阵列提供载体接头的任选给定步骤的同时、之前和/或之后，对微孔阵列提供阳离子聚合物。例如，在另外的方法步骤cc)中且在方法步骤p1)之前，可以在缓冲液中，优选在rx07中添加具有0.01-5mg/ml，优选0.1-1mg/ml的分子量优选为20000g/mol的聚-l-赖氨酸的溶液(例如可购自sigma-aldrich)，并孵育5-120分钟，优选15-45分钟。为了防止3ddna纳米结构体与阳离子聚合物可能发生不希望的结合，可以在方法步骤p1)之后和方法步骤p2)之前引入其他方法步骤dd)，其中微孔阵列上存在的阳离子聚合物的正电荷被阴离子聚合物饱和。例如，在此步骤中，在缓冲液中，优选rx07中，可以加入0.01-5mg/ml，优选0.1-1mg/ml的pss(聚苯乙烯磺酸盐)溶液，pss(聚苯乙烯磺酸盐)分子量为优选10,000-200,000g/mol，更优选20,000g/mol，并孵育5-120分钟，优选孵育15-45分钟。可以通过用标准移液管和移液管吸头吸移将宿主体流体引入微孔中，特别是微孔阵列的足够大小优选为至少1mm×1mm，更优选为至少2mm×2mm，更优选为至少5mm×5mm，更优选为1cm×1cm，特别优选为1.5cm×1.5cm。作为另选或作为附加，可以通过试管和/或不同的流体通道将宿主体流体引入微孔。流体对宿主体流体的适合性取决于宿主体的类型以及该方法所涉及的其他物质，并且其由技术人员适当地选择。优选的是，流体是水性和/或亲水性流体。例如，它可以是细胞悬浮液，其中细胞(例如，hela细胞)存在于pbs中。合适的宿主体浓度取决于微孔阵列的几何形状，即，取决于微孔的形式、大小和布置(特别是距离)，以及取决于宿主体的形式和大小。浓度应足够高，以使足够数量的微孔含有单个的宿主体。然而，浓度应降低到一定程度，以使含有超过一个宿主体的微孔的数量尽可能少。选择浓度的很好的起点是使填充溶液中每微孔有一个细胞。例如，可以用细胞悬浮液填充表面为1cm2并具有100万个微孔的微孔阵列，该细胞悬浮液覆盖底部，深度为1毫米，每毫升含有1000万个细胞。另一填充选择是用深度为100微米且每毫升含有100万个宿主体的宿主体悬液填充每平方厘米具有一万个微孔的微孔阵列。在一种优选的实施方式中，可以使用模板来填充微孔。为此，可以制备具有凹部的预成型的层，优选pdms，其中凹部的平均体积为宿主体平均体积的0.2-5x，优选0.5-2x，更优选0.8-1.2x(参见例如y.wang等人,“trappingcellsonastretchablemicrowellarrayforsinglecellanalysis”,analbioanalchem2012,402(3):1065-72；c.probst等人,“polydimethylsiloxane(pdms)sub-microntrapsforsingle-cellanalysisofbacteria)。凹部之间的距离可以具有与微孔阵列上的微孔之间的距离相同的尺寸。可以通过倒入致密的宿主体悬浮液(例如，每毫升100万至1000亿个宿主体，优选每毫升1000万至10亿个宿主体)来填充此模板，其中大部分凹部(80％，优选90％，更优选95％，甚至更优选99％)被恰好一个宿主体占据，因为孔不提供用于超过一个宿主体的空间。随后，可以将模板的开口侧朝下放置在微孔阵列上，并可以可选地通过压力用模板将微孔封闭。由于凹部和微孔的精确对应的距离，一个凹部正好位于微孔的正上方，并且宿主体由于重力从模板下降到微孔中。该实施方式的优点是宿主体更有效地一次占据微孔。在本发明方法的优选实施方式中，可以在步骤e)之后进行方法步骤h)，其中去除微孔的周壁，优选第二层的周壁。为此，例如可以使用本发明的微孔阵列的实施方式，其中第二层由弹性材料组成，优选pdms，并在顶部封闭微孔。如上所述，可以在步骤p1)中用宿主体将第二层的微孔倒置填充，然后，例如通过压力，用设有载体接头的第一层反向封闭。因此，可以在步骤e)中优选物理地，特别优选通过激光感应或声学地裂解宿主体。特别地，微孔阵列可以例如以50-500毫瓦输出，用400纳米至2,000纳米，优选1.064纳米的激光照射持续1分钟至120分钟，优选15分钟，从而裂解细胞。然后，然后的游离细胞结构体可以在5分钟至24小时，优选10至120分钟，更优选15至45分钟的孵育时间内结合至第一层的载体接头。随后，在方法步骤h)中，可以从第一层去除第二层。在优选的变型中，可以将其完全去除，从而在没有它的情况下进行其他方法步骤。可替换地，在特别优选的变型中，可以将其去除10微米至5毫米，优选地100至200微米，从而形成流体室，通过该流体室可以进行涉及流体交换的后续方法步骤。这种实施方式的优点在于，在后续方法步骤中的流体和组分交换可以更自由地进行，并且不受第二层屏障的阻碍。因此，各个方法可以更快且更经济地进行。将至少两种3ddna纳米结构体引入至少一个微孔的步骤可以按照与引入宿主体流体相同的方式进行，即，例如，通过移液和/或用上述或下述方式用试管或类似物进行施加。引入3ddna纳米结构体可以在引入宿主体之前、同时和/或之后进行。顺序尤其取决于方法中涉及的结构体是否并且可选的是哪种结构体与载体结合。在本发明优选实施方式中，方法还包括：f)通过在第二层上施加优选氟化油层来封闭微孔的顶侧。将优选氟化的油层施加到第二层上的步骤在步骤p1)之后进行，并且优选通过将优选氟化的油倒在微孔阵列上，该微孔阵列优选填充有水性宿主体体液。由此，多余的水性流体被冲走，并且仅微孔中之前已经存在的水性流体才保留在那里。在微孔中已经存在的水性流体在保留之前已经存在于微孔中，由于其疏水性，优选氟化的油被微孔中的水性流体阻止进入微孔。因此，优选氟化的油不具有从微孔中冲洗微孔内的水性流体的靶标。另外，优选氟化的油的密度低于水性流体的密度，因此抵消了用优选荧光油对微孔的填充。一旦在微孔上倾倒优选氟化的油结束，就剩下优选氟化的油层，该层将微孔相对于周围环境密封。由于已经提到的优选氟化油的疏水性，因此不会与微孔内的水性流体混合。在优选的实施方式中，所述油包含脂质。众所周知，脂质具有疏水段和亲水段。因此，在油与微孔之间的界面处会形成脂质层。当用水溶液代替油层时，第二脂质层覆盖单个脂质层，从而形成脂质双层。因此，该方法的优选实施方式还包括：g)通过在微孔阵列上倾倒水溶液来去除油由此，不再需要的油从微孔阵列中去除，并保留了脂质双层。微孔仍然被脂质双层封闭。在优选的实施方式中，在方法步骤g)中，水溶液包含膜通道，例如离子通道。这些自主地并入封闭微孔的脂质双层中(参见例如r.wanatabe等人,“arrayedlipidbilayerchambersallowsinglemoleculeanalysisofmembranetransporteractivity”,nat.commun.5,ncomms5519(2014))。因此，有可能使脂质双层对离子可渗透但对于较大分子不可渗透。因此，随后可以通过用低渗溶液(具有较低的盐浓度)交换微孔外部的水溶液来降低微孔中的盐浓度，从而低渗地裂解宿主体(即，以通过渗透作用破坏它们，参见例如等人，“arapidmethodtoseparateendosomesfromlysosomalcontentsusingdifferentialcentrifugationandhypotoniclysisofliposomes”,journalofimmunologicalmethods1999,227(1-2),pages161-168)，同时确保靶标结构体保留在微孔中，并不将它扩散出去。因此，在所述方法的优选实施方式中，步骤g)包括：g)通过在微孔阵列上倾倒包含膜通道的水溶液来去除油为了将膜通道添加至脂质双层，在方法步骤g)中，可以在缓冲液(优选为pbs或rx07)中使用例如0.01-5mg/ml的α-溶血素(αhl，可购自例如sigma-aldrich)，优选0.5-1mg/mlαhl，并孵育5至120分钟，优选15至45分钟(参见例如x.zhang等人,“naturalchannelproteininsertsandfunctionsinacompletelyartificial,solid-supportedbilayermembrane”,scientificreports2013,3:2196,doi:10.1038/srep02196)。在本发明的替代实施方式中，可以在步骤g)中将膜通道trpm8掺入脂质双层中。为此，将胶束rgpm8溶液(描述于e.zakharian,“recordingofionchannelactivityinplanarlipidbilayerexperiments”,methodsmolbiol.2013,998,pp.109-118)在方法步骤g)中用作含有膜通道的水溶液。含有膜通道的水溶液的至少一部分保留在微孔阵列上，并孵育5分钟至24小时，优选2小时，使得膜通道从含有膜通道的水溶液掺入脂质双层中。借助于油层和/或脂质双层(方法步骤f)和g))的微孔的封闭优选在引入dna纳米结构体之前和/或在破坏宿主体之后进行，以防止仍然未结合的靶标结构体离开，并提高它们结合载体接头的效率。在方法步骤f)和g)之间的15分钟，优选30分钟，特别优选1小时，非常特别优选24小时的充分孵育时间之后，几乎所有的，优选所有的靶标结构体都结合到载体接头上并且不再有有从微孔扩散的风险。因此，可以在方法步骤g)之后添加3ddna纳米结构体。在此，必须考虑的是，在没有脂质的油的情况下，这可以在步骤g)之后进行，因为在步骤g)中已经冲洗掉了密封油层。在该方法包括形成脂质层(即，使用含脂质的油)的情况下，必须在添加3ddna纳米结构体之前首先去除脂质(双)层。脂质双层的去除可以通过用基于表面活性剂的裂解方法的裂解缓冲液冲洗来进行(参见例如“thermoscientificpiercecelllysistechnicalhandbook”(第二版)，thermoscientific)并孵育5-120分钟，优选15-45分钟。随后，可以将3ddna纳米结构体引入微孔，这些微孔现在没有油层和/或脂质双层。上述借助油层和/或脂质双层封闭微孔的实施方式(方法步骤f)和g))优选使用微孔腔室进行。为此，如已经描述的那样执行所有步骤，其中通过微孔腔室的入口将所有流体引入微孔中，并且多余的流体和/或冲洗掉的流体通过微孔腔室的出口排出。如已经描述的那样，微孔腔室的优点是，被冲洗和冲洗掉的(一种或多种)流体的流动方向被特别地控制并且是特别有利的。这尤其适用于用水溶液和油交替冲洗的情况。如由微孔腔室中的布置促进的，平行于第二层的表面移动的流的剪切作用特别有利于促进用油从微孔阵列的表面冲洗掉过量的水溶液。这同样适用于借助水溶液冲洗掉油，并保留脂质双层。此外，本发明尤其涉及一种3ddna纳米结构体，其上附着有至少一种荧光染料分子，其中3ddna纳米结构体的形状防止了当接近其上附着有至少一种荧光染料分子的第二3ddna纳米结构体时，两种3ddna纳米结构体的荧光染料分子发生显著相互作用。优选的是，本发明的3ddna纳米结构体是具有空腔和至少一种向内布置的荧光染料分子的3ddna纳米结构体，其中所述至少一种向内布置的荧光染料分子到3ddna纳米结构体的边缘的距离为至少2nm，优选至少3nm，并且特别优选至少5nm。对3d纳米结构体的形状的巧妙选择以及荧光染料分子在3d纳米结构体的内部/腔内的布置确保了染料分子不会与周围环境发生立体相互作用。如所附实验实施例所示，本发明的3d纳米结构体因此与例如玻璃表面等表面相互作用的程度例如比包含相同染料的2d纳米结构体小得多。这对于在根据本发明的方法中使用这种3ddna纳米结构体是非常有利的。例如，可以以这种方式降低对靶标结构体的假阳性检测率，特别是在使用载体结构体(例如微孔阵列)的情况下。此外，屏蔽荧光染料分子的优点是两种3ddna纳米结构体的荧光染料分子不显著相互作用(光学和/或立体地)。这允许本发明的3ddna纳米结构体的荧光信号不受非常接近的相邻3ddna纳米结构体的显著影响。此外，防止了由荧光染料分子介导的3ddna纳米结构体的非特异性相互作用。总的来说，这在使用所述3d纳米结构体用于靶标结构体的检测中是非常有利的。特别地，像本发明的方法一样，这允许至少两种3ddna纳米结构体与靶标结构体的结合，而单个3ddna纳米结构体的荧光信号不会由于它们的接近而受到影响(例如，通过淬灭、荧光淬灭或fret)。取决于测量方法，甚至可能需要使用至少两种dna纳米结构体，以便将由靶标结构体和结合的dna纳米结构体构成的识别结构体与游离dna纳米结构体区分开。对于在溶液中实施的测量方法尤其如此。当在检测方法中将识别结构体结合到载体和/或载体表面上时(如本发明方法的优选实施方式中，特别是使用微孔阵列作为载体的情况下)，这允许使用一个或多个洗涤步骤去除游离的dna纳米结构体。在使用载体的方法中，使用与靶标结构体结合的至少两种dna纳米结构体的优点是可以降低假阳性检测率。首先，具有至少两种dna纳米结构体的识别结构体可以与以非特异性方式与表面相互作用的dna纳米结构体清楚地区分开。在仅一种dna纳米结构体识别靶标结构体的类似方法中，这是不可能的。第二，使用都识别靶标结构体不同区域的至少两种dna纳米结构体可能会显著减少，并且在许多情况下排除了错误地将其他相似靶标结构体检测为所谓的靶标结构体的可能性。此外，通过将至少两种3ddna纳米结构体(例如不同的正交可测量的纳米报告子)独立偶联至靶标分子，可以显著提高测量的灵敏度。它随着独立偶联反应数目的增加而增加。这对于高动态性，即例如对于同时测量具有非常低表达的基因和非常高表达的基因，都是特别有利的。在优选的实施方式中，本发明还涉及检测和/或定量至少两种不同的靶标结构体(例如，两种mrna，分别来自不同的基因，即包含不同的核酸序列)、优选多种不同的靶标结构体的方法。不同的靶标结构体可成对区分。优选的是，所述方法包括以下步骤：a)对于至少两种不同的靶标结构体中的每一种，形成识别结构体，其包括：(i)各自的靶标结构体，和(ii)至少两种3ddna纳米结构体，其中至少两种3ddna纳米结构体中的每一种包含一种或多种向内布置的荧光染料分子，并且其中至少两种3ddna纳米结构体的每一种特异性结合于各自的靶标结构体，并且其中至少两种3ddna纳米结构体结合于各自的靶标结构体的成对不同的区域；b)通过测量至少一种荧光信号检测至少两种靶标结构体，其中，选择所有3ddna纳米结构体和荧光测量参数，使得a)中形成的识别结构体的至少一个测量的荧光信号与所有分离的3ddna纳米结构体(当这些未结合在各自的识别结构体中的一种中时)的荧光信号是可区分的，并且对于单个不同的靶标结构体形成的识别结构体的测量的荧光信号可彼此成对区分。优选的是，不同的靶标结构体的每一种被检测几次，即，分配给特定靶标结构体的每种标识结构体形成多次。特别地，方法步骤p1)和p2)的组合是优选的。根据本发明的方法的所有上述优点在进行必要的修改后都适用于这种情况。具有相关形式，dna纳米结构体提供了附着多个相同和/或不同荧光染料分子的可能性。如从wo2016/1407727a2和wo2016/1407726a2中已知的，因此可以产生具有可区分的荧光信号的多种dna纳米结构体。然而，可区分的组合的量关键地取决于dna纳米结构体的大小，dna纳米结构体的大小限制了可以附着在其上而彼此不相互作用的荧光染料分子的数量。然而，在靶标结构体的检测方法中，大的dna纳米结构体的生产需要更多的努力并且更昂贵，并且就动力学而言比小结构体差。由于使用了至少两种dna纳米结构体，它们成为识别结构体的一部分，因此本发明的方法的优点是，也通过显著较小的dna纳米结构体，也可生成结合到靶标结构体上的类似的多种荧光分子组合。此外，在识别结构体中使用至少两种dna纳米结构体允许在靶标结构体上和/或在具有与wo2016/1407727a2和wo2016/1407726a2中所述的最大尺寸相同的识别结构体中，进一步增加荧光染料分子的不同可区分组合的数量。因此，原则上可以大大增加在方法中可以检测到的不同靶标结构体的数量。除了使用至少两种dna纳米结构体，特别是3d纳米结构体的形式和荧光染料分子向结构体内部的取向是决定性的。如上所述，只有这样，才能防止两种dna纳米结构体的染料的相互作用，并且可两种或多种3ddna纳米结构体组合的信号是可靠地可预测和可测量的。根据本发明，使用核酸纳米结构体，也称为dna纳米结构体或dna折纸。核酸纳米结构体，也称为dna纳米结构体或dna折纸，是二维或三维结构体，其尤其由核酸组成。术语“折纸”描述了核酸(优选dna)的一条或多条链或组分可以折叠成几乎任何预定的结构体或形状。这样的dna链也称为脚手架链。一条或多条脚手架链通过较短的核酸链(相对于至少一条脚手架链较短)保持形状，较短的核酸链也被称为钉链。在此，最重要的是将较短的链(钉链)非常精确地放置在dna折纸上明确限定的位置上。dna折纸详细描述于例如rothemund,"foldingdnatocreatenano-scaleshapesandpatterns",nature,march2006,pp.297-302,vol.440；douglas等,nature,459,pp.414-418(2009)；和seeman,"nanomaterialsbasedondna",an.rev.biochem.79,pp.65-87(2010)中。所有这些文件在此整体引用作为本申请的一部分。所述dna折纸纳米结构体可以用光活性分子官能化，特别是用一种或多种荧光染料分子。由此，dna折纸整体成为荧光颗粒。这样的dna纳米结构体基于dna折纸，描述于wo2016/140727a2和wo2016/1407726a2中。所有这些文件在此整体引用作为本申请的一部分。优选的是，本发明的dna纳米结构体是其上附着有至少一种荧光染料分子的3ddna纳米结构体，其中3ddna纳米结构体的形状阻止这样的情况：接近第二相似或相同的在其上附着至少一种荧光染料分子的3ddna纳米结构体，两种3ddna纳米结构体的荧光染料分子显著相互作用。因此，借助于空间效应，dna纳米结构体的几何形状防止了不同dna纳米结构体的荧光染料分子彼此太靠近。从其名称可以推断出，dna纳米结构体优选由dna组成。然而，原则上本发明的dna纳米结构体还可以含有其他核酸，诸如例如rna，rna类似物(如lna)或dna类似物或由其组成。因此，本发明还包括本文中描述的所有实施方式，其中dna纳米结构体和/或3ddna纳米结构体是核酸纳米结构体和/或3d核酸纳米结构体。由dna形成的纳米结构体是优选的，例如由于这种纳米结构体的生产成本显著更低。荧光染料分子可以是例如rfp、gfp、yfp或其任何衍生物(参见例如，pjcranfill等人,"quantitativeassessmentoffluorescentproteins",naturemethods,13,557–562(2016))、atto染料(例如atto647n、atto565或atto488)、alexa染料、dapi、罗丹明、罗丹明衍生物、花菁、花菁衍生物、香豆素、香豆素衍生物(关于不同的有机荧光染料，参见例如q.zheng和llavis,"developmentofphotostablefluorophoresformolecularimaging",curr.op.chem.biol.39p32-38(2017))或量子点(量子点，请参见e.petryayeva等人,"quantumdotsinbioanalysis:areviewofapplicationsacrossvariousplatformsforfluorescencespectroscopyandimaging",appl.spectroscopy67(2013)。3ddna纳米结构体优选是指基本上延伸到三维并且因此不同于基本上二维的结构体，诸如例如，稍微弯曲、粗糙或波纹的表面。换句话说，在彼此垂直的三个空间方向上的最小尺寸为至少2nm，优选至少5nm，更优选至少10nm，并且特别优选至少20nm。两种荧光染料分子的相互作用可以特别地包括荧光淬灭和/或fret。特别地，至少两种荧光染料分子可以附着在3ddna纳米结构体上，其中至少两种荧光染料分子之间的距离成对地大于荧光染料分子显著成对相互作用的距离。对于具有两种荧光染料分子的3ddna纳米结构体的示例性情况，这意味着这两种荧光染料分子的距离大于相互作用的距离。对于具有三种荧光染料分子的3ddna纳米结构体的示例性情况，这意味着每种荧光染料分子与其他两种荧光染料分子之间的距离大于各自的相互作用距离。对于更多的荧光染料分子，同样适用。这意味着，不管观察到3ddna纳米结构体的哪种荧光染料分子对，被观察到成对的荧光染料分子的距离总是大于被观察到成对的相互作用半径。“相互作用半径”是指为了显示可忽略的相互作用(例如，荧光淬灭或fret)，荧光染料分子必须具有的最小距离。哪种染料对具有哪种相互作用半径是技术人员已知的。例如，相应的相互作用半径描述于novotny,lukas:principlesofnano-optics2.ed,cambridgeuniv.press,2013,kapitel"opticalinteractions",pp224etseqq.；peteratkins:physikalischechemie,5thedition,2013,wiley-vch,weinheim,chapter17"wechselwirkungenzwischenmolekülen",pp657etseqq.；t:zwischenmolekulareenergiewanderungundfluoreszenz.in:ann.physik.437,1948,s.55.doi:10.1002/andp.19484370105。关于fret，相互作用半径可以是例如给出50％的fret率的距离。dna纳米结构体优选地用于精确布置一种或多种种类的明确限定数量的标记物分子(优选荧光染料分子)的目的。为了防止标记物分子(优选荧光染料分子)之间的相互作用，几何布置至关重要。限定数量的标记物分子(优选是荧光染料分子)允许对强度值进行编程，因此可以进行随后的明确识别。不同组合的数量为n＝k^m，其中k为强度水平的数量，m为不同(在这种情况下可正交测量的)标记物分子(优选是荧光染料分子)的数量。通过这种多路复用，可以区分出许多不同的dna纳米结构体，而无需多路复用，其数目仅为m。在实施例中，存在5种强度水平和三种类型的标记物分子，因此是124种而不是3种同时可区分的物类。因此，dna纳米结构体是纳米报告子。dna纳米结构体优选地用于精确排列一种或多种种类的确定数量的标记物分子(优选荧光染料分子)的目的。为了防止标记物分子(优选荧光染料分子)之间的相互作用，几何布置至关重要。确定数量的标记物分子(优选荧光染料分子)允许对强度值进行编程，因此可以进行随后的明确识别。不同组合的数量为n＝k^m，其中k为强度水平的数量，m为不同(在这种情况下可正交测量)标记物分子(优选荧光染料分子)的数量。通过这种多路复用，可以区分出许多不同的dna纳米结构体，而无需多路复用，其数目仅为m。在实施例中，存在5种强度水平和三种类型的标记物分子，因此是124种而不是3种同时可区分的物类。因此，dna纳米结构体是纳米报告子。因此，本文中使用术语“纳米报告子”以便定义具有附着的标记物分子的结构体，该标记物分子具有可测量的和识别的特征，尺寸在纳米范围内。特别地，本发明的dna纳米结构体可以是纳米报告子。其他dna折纸，例如根据rothemund的说法，它也可以是纳米报告子以及荧光蛋白的级联。术语“正交可测量的”'描述了可以清楚地从标记物分子(例如荧光染料分子)的测量值的线性组合推断出基础标记物分子的线性组合和/或纳米结构体组合的特性。以荧光检测为例，这可以通过光谱上相距较远的染料，从而使激发和检测波长(例如蓝色和红色)相隔很远，或者通过与较近邻的染料结合多光谱检测来实现，以便正交分量可以通过“线性分解”来计算。本发明的dna纳米结构体优选地特征在于，附着了一种或多种标记物分子的一个或多个标记物分子(例如荧光染料分子)，使得两个标记物分子之间的距离大于它们显著相互作用时的距离，其形式可以防止在接近相似的dna纳米结构体时，其标记物分子与其他dna纳米结构体的分子显著相互作用。本发明优选的dna纳米结构体是dna纳米结构体，在其上附着一种或多种标记物分子中的一个或多个标记物分子，使得相同标记物分子之间的距离大于发生荧光淬灭的距离，并且不同标记物分子之间的距离大于共振能量转移(fret)半径，并且其形状可防止在接近相似的dna纳米结构体时，其标记物分子通过荧光淬灭或fret与另一dna纳米结构体的一个或多个标记物分子相互作用。“标记物分子”是指发出可测量信号的颗粒。特别是，荧光染料分子是标记物分子。荧光染料分子的信号可以是强度，还可以是寿命、极化、闪烁动力学或类似数量。金颗粒也是这个意义上的标记物分子。当两种标记物分子中的至少一种标记物分子发出的信号明显取决于另一种标记物分子的存在或不存在时，两种标记物分子，特别是两种荧光染料分子会发生显著相互作用。就我们的目的而言，例如可以忽略由于另一种分子的存在而导致的信号强度下降1％，而不能忽略20％的下降。在第一种情况下，标记物分子(特别是荧光染料分子)没有显著相互作用，而在第二种情况下，它们发生了显著相互作用。对于相似的荧光染料分子，我们常见的相互作用机制是荧光淬灭，这根据荧光染料分子而不同，但是从大约2-3纳米的荧光染料分子之间的距离开始可以忽略不计。对于不同类型的荧光染料分子，主要的相互作用机制是共振能量转移(fret)，并且荧光染料分子对不再相互作用的距离(也称为fret距离)具体取决于单个对在2–20纳米范围内变化。多种荧光染料对的fret距离是已知的，例如，许多染料生产商会发布其染料fret距离的列表(例如://www.atto-tec.com/fileadmin/user_upload/katalog_flyer_support/r_0_-tabelle_2016_web.pdf)。此外，可以使用荧光染料分子的光谱特性来计算fret距离(请参阅atkins，physikalischechemie)。优选的是，两种荧光染料分子之间的显著相互作用是这样的相互作用：与不存在其他分子的情况下一个分子的测量的荧光信号相比，在该互相作用中，该一个分子的测量的荧光信号(通过共同激发)由于另一分子的存在而降低至80％或以下，优选90％或以下，特别优选95％或以下，高度特别优选99％或以下。本发明的3ddna纳米结构体优选包含腔，其中腔的容积是至少0.1仄升(1e-22升)，优选至少10仄升，并且特别优选至少100仄升。本发明的3ddna纳米结构体可以基本上形成为中空圆柱形dna纳米结构体，即，中空圆筒(中空圆柱体)，其中至少一种荧光染料分子附着在中空圆筒dna纳米结构体的内部。中空圆筒的腔优选具有如上所述的容积。3ddna纳米结构体的对应于中空圆筒壳的部分可能包含间隙(空隙)。对应于中空圆筒的顶部表面和底部表面的3ddna纳米结构体的那些部分优选地是开放的，但是也可以分别至少部分地封闭和/或完全封闭。中空圆筒的筒以及顶部表面和底部表面(可选)由3ddna纳米结构体形成，这意味着它不是数学上精确的圆筒，因为例如纳米结构体的各个螺旋形成具有凸部和凹部的不平坦表面。但是，3d纳米结构体的包壳(包封)基本上是圆筒的形式。优选的是，在本发明的3ddna纳米结构体中附着有，至少2种、更优选至少3种、更优选至少4种、更优选至少5种、更优选至少6种、更优选至少15种、特别优选至少30种、特别优选至少60种荧光染料分子。优选的是，在3ddna纳米结构体上的荧光染料分子是均一的，即是相同类型的。优选的是，本发明的3ddna纳米结构体包括腔和至少一种向内布置的荧光染料分子，其中至少一种向内布置的荧光染料分子到3ddna纳米结构体的包壳的边缘和/或外表面的距离为至少2nm，优选至少3nm，特别优选至少5nm。其优点是，由于在3ddna纳米结构体内部的布置以及到3ddna纳米结构体边缘的最小距离，3ddna纳米结构体的染料也具有到与3ddna纳米结构体可以在方法过程中相互作用的其他结构体的最小距离。例如，当3ddna纳米结构体接触所述表面时，染料到载体(例如基底部)的表面的距离大于或等于最小距离。优选的是，本发明的3ddna纳米结构体包含至少两种向内布置的荧光染料分子，其中至少两种向内布置的荧光染料分子的成对距离为至少2nm，优选至少5nm，特别优选至少9nm。对于具有两种染料分子的3ddna纳米结构体的示例性情况，这意味着这两种染料分子的距离为至少2nm，优选至少5nm，特别优选至少9nm。对于具有三种染料分子的3ddna纳米结构体的示例性情况，这意味着每种染料与另外两种染料的距离为至少2nm，优选至少5nm，特别优选至少9nm。对于更多染料，比照适用。这意味着，无论观察到3ddna纳米结构体的哪个染料对，所观察到的染料对的距离始终为至少2nm，优选至少5nm，特别优选至少9nm。染料分子的距离可以例如通过识别3ddna纳米结构体的结构来确定，从中可以推断出染料分子所处的位置。为此，例如可能需要序列分析。为此目的，例如通过降低盐浓度，将具有dna纳米结构体的溶液转移至具有单个核酸链的溶液中。随着盐浓度的降低，与形成碱基对的氢键的永久恒定结合能相比，由于屏蔽作用的降低，dna主链的负电荷变得更加普遍。因此，随着盐浓度的降低，dna纳米结构体开始不稳定，并且随着进一步降低，单个dna双螺旋断裂并进行测序，例如使用myseq或illumina，inc.提供的其他方法按照制造商指示的协议进行。因此，得知样品中存在的所有核酸链的序列。dna纳米结构体的形式可以用该序列信息重建。为此，可以使用任何序列编辑器(例如ape2.0(http：//biologylabs.utah.edu/jorgensen/wayned/ape/)。分析最长的dna链是脚手架链。将其加载到编辑器中，并对于每个单一的钉链序列计算并记录与脚手架链互补的序列区域。对于每个钉链，在脚手架链上有两个不同的区域。如本说明书在不同位置所述，利用该信息，可以在cadnano中依次限定拓扑，因此可以重建dna纳米结构体设计。在下一步骤中，必须确定哪些钉链带有染料。这通过使用染料接头而是简单的，因为特定数量的钉链具有其他相同的序列，这些序列在上述dna纳米结构体的重建后仍保持单链。如果直接对钉链进行修饰，则必须将各个钉链分离，并对其荧光性质进行分析。通过与互补链杂交，可以使每个单独的钉链加载有额外的分子量，并在琼脂糖凝胶电泳中从上述溶液中与单个核酸链分离。最后，相应的荧光测量显示哪些钉链标记有荧光团。这些可以在cadnano中识别，并且可以计算荧光分子之间的距离。作为该方法的替代方法，使用质谱分析法(sauers,lechnerd,berlink等人(2000)fullflexibilitygenotypingofsinglenucleotidepolymorphismsbythegoodassay.nucleicacidsres28:e100；haffla,smirnovip(1997)single-nucleotidepolymorphismidentificationassaysusingathermostablednapolymeraseanddelayedextractionmaldi-tofmassspectrometry.genomeres7:378–388；wenzelt,elssnert,fahrk等人(2003)genosnip:snpgenotypingbymaldi-tofmsusingphotocleavableoligonucleotides.nucleosidesnucleotidesnucleicacids22:1579–1581；brauna,littledp,kosterh(1997)detectingcftrgenemutationsbyusingprimeroligobaseextensionandmassspectrometry.clinchem43:1151–1158；sunx,dingh,hungk等人(2000)anewmaldi-tofbasedmini-sequencingassayforgenotypingofsnps.nucleicacidsres28:e68)，具有dna纳米结构体的溶液可以直接测序，并且可以同时确定哪些钉链上附着了荧光分子。与上述类似，随后可以使用钉链和脚手架链(也是最长的链)的互补序列分析在cadnano中重建dna结构体的拓扑。共同测量的信息(荧光分子附着在这些信息上)可以利用cadnano直接用于计算荧光分子的距离。在优选的实施方式中，3ddna纳米结构体基本上形成为椭圆圆筒，优选基本上形成圆筒。如上所述，根据本发明的结构体不是数学上精确的圆筒，因为单原子水平的结构体表面极其不均匀，并且例如在纳米结构体的单个螺旋的水平上可能包含螺旋半径或螺旋直径的数量级的不均匀性。但是，对于本领域技术人员来说，这些结构体还是圆筒形的，因为例如3d纳米结构体的包壳可能基本上是圆筒的形式。在优选的实施方式中，3ddna纳米结构体的中空圆筒是圆形圆筒，其外径为至少5nm，至少10nm，优选至少20nm，优选至少20nm，优选30nm至80nm，优选50nm至70nm，并且特别优选60nm的外径。外径是指包壳的外半径的结构体。在优选的实施方式中，3ddna纳米结构体的中空圆筒，优选是圆形圆筒，高度为最大200nm，优选高度为60nm-30nm，特别优选高度为30nm。结构体的高度是指包壳的高度。优选的实施方式确保3ddna纳米结构体有足够的尺寸，以便优选在3ddna纳米结构体内部以距每个其他染料分子有足够的距离的位置附着足够数量的染料分子。在优选的实施方式中，3ddna纳米结构体的中空圆筒的壁厚为至少2nm，优选2nm至7nm，特别优选5nm。结构体的壁厚是指外径与内径之间的差。换句话说，壁厚相当于圆筒的外部包壳与圆筒腔的内部包壳之间的距离。优选的是，本发明的3ddna纳米结构体的壁厚至少对应于dna双螺旋的直径。优选的是，壁厚具有2-4个，特别优选3个dna双链的空间，其中dna链优选在其长度上垂直于壁厚布置，并且另外布置在蜂窝状晶格的相邻晶格位置上。中空圆筒的内径定义为中空圆筒的外径与壁厚之差。因此，优选的内径由如本文所示的外径和壁厚的具体情况得出。所描述的最小壁厚与将染料与周围环境屏蔽的3ddna纳米结构体的形状相结合，也有助于以下事实：空间位阻可防止3ddna纳米结构体的染料与载体表面和/或其他染料(可能附着在其他3ddna纳米结构体中)的相互作用。因此，特别地，防止了与其他染料的淬灭和/或fret，和/或与载体非特异性结合，特别是基材表面。如对于dna折纸一样常见，本发明的3d纳米结构体优选包含dna单链作为“脚手架链”。脚手架链优选包含至少3000个碱基，优选5000-50000个碱基，特别优选10000-11000个碱基。但是，可以使用其他数量的碱基。优选的是，脚手架链是圆形(环状)的。在此，圆形表示dna链包含未开放的5'末端和未开放的3'末端。在所附的实施例中提及了脚手架链的非限制性实例，并在seqidno:1258中示出。此外，如对于dna折纸一样，3d纳米结构体优选地包括多个其他的更短的单链dna分子。这些优选地被称为“钉链”。根据本发明，优选地选择3ddna纳米结构体的钉链的数量，以将其调整为3ddna纳米结构体的至少一条脚手架链的长度。3ddna纳米结构体优选包含100–500条钉链。钉链优选地包括30-100个碱基。在所附的实施例中提及和/或在seqidno:1至504中示出了钉链的非限制性实例。3ddna纳米结构体可以是圆筒形的，其中标记物分子向内布置，与边缘的距离至少为相互作用半径的一半。这确保了不同dna结构体的标记物分子不会彼此接近达到相互作用半径，而与dna结构体相对于彼此的位置无关。为此，近似正方形的侧视图的圆筒提供了良好的位阻比(并因此具有屏蔽性)、较小的流体力学半径(并因此较小的扩散速度)以及向内布置的标记物分子位置，并在标记物分子之间具有足够的距离。特别地，设想了具有约30-90纳米的直径和约30-90纳米的高度的dna纳米结构体中空圆筒。作为另选，dna结构体可以是篮状的，染料位于篮的“底部”，以及篮边缘，篮边缘至少与标记物分子类型的所有组合的最大相互作用半径一样大。篮边缘相对于篮底部可以具有任何角度，但是优选地该角度在-45°至+45°的范围内。优选的是，篮边缘具有至多200nm的高度，优选为60nm至30nm的高度，特别优选为30nm的高度。结构体的高度再次指的是包壳的高度。篮的开口侧优选地具有至少5nm的外径，优选地具有30nm至60nm的内半径，特别优选地具有60nm的内半径。具有开放和封闭的顶侧的中空圆筒是篮的特定情况。本发明的3ddna纳米结构体可以包括基本上方形(正方形)的投影，即高度与宽度和/或直径的比率在0.8至1.2的范围内。特别地，设计为中空圆筒和/或篮的3ddna纳米结构体可以包括基本上方形的投影。本发明的3ddna纳米结构体可以包括中空球的形式，并且优选地具有向内布置的标记物分子。本发明的3ddna纳米结构体也是线框几何形状，例如四面体、八面体、立方体、六面体、金字塔等。产生dna折纸并因此产生不同形状的dna纳米结构体的一般原理是众所周知的，可获知自rothemund,"foldingdnatocreatenano-scaleshapesandpatterns",nature,march2006,pp.297-302,vol.440；douglas等,nature,459,pp.414-418(2009)；undseeman,"nanomaterialsbasedondna",an.rev.biochem.79,pp.65-87(2010)。如已经提到的，dna折纸的生产原理是基于至少一条脚手架链(优选为单链)和多个钉链的共同孵育。钉链包括至少两种结合片段(区段)，其目的是将每个结合至脚手架链的互补段。孵育过程优选在50-70℃温度下开始，随后温度降低，在孵育过程中所述钉链和脚手架链通过它们各自的互补结合区段结合。由此，产生的dna纳米结构体折叠成构象。通过直接设计脚手架链和钉链以及它们的互补结合区段，可以根据使用者的需要设计和生产dna折纸。为了设计dna折纸，可以使用可免费访问的软件。例如，程序cadnano2.5(源代码位于：https://github.com/cadnano；使用者手册位于：http://cadnano.org/docs.html和/或http://cando-dna-origami.org/tutorial/(另请参见s.m.douglas等人,"rapidprototypingof3ddna-origamishapeswithcadnano,nucleicacidsres.,37(15),2009)。在该程序中，预先定义了优选可用于生产dna纳米结构体的任何脚手架链序列；特别优选的是脚手架链p7308(seqidno:1258)或p7249(seqidno:1257)。另外，指定了dna纳米结构体的所需拓扑。具体而言，cadnano根据以下条件来计算所需的脚手架链和钉链的数量和序列：脚手架链的(1)长度和(2)序列，(3)脚手架链的空间形状和(4)脚手架链的起始位置。脚手架链的空间形状定义了所设想的结构体的形状，并包含螺旋的数量和布置以及脚手架链通过这些螺旋的路线。按下按钮时，程序便能够以自主方式将确定的脚手架链线与钉链连接起来。随后，钉链可以以表格形式输出。该表特别包含钉链的开始和结束位置(由螺旋线和距螺旋线边缘的碱基数确定，例如7[128]是指第7螺旋线的位置，距任意但统一定义的左边缘128个碱基)，用于明确标识、碱基数(即，钉链的长度)和钉链的顺序。值得注意的是，通过相同的结构体设计(点(1)-(3))但不同的圆形脚手架链的起始位置，会生成其他钉链序列。它们与具有不同起始位置但与它们不兼容的那些相同地使用而没有限制。对于偶尔在3d结构体中有用的dna螺旋的弯曲，可以定义沿脚手架链的位置，在该位置相应的钉链包含多或少的一碱基。还可以限定额外的钉链-钉链对，其在脚手架链的规定长度之外向结构体增加额外的dna-螺旋轮廓长度。值得注意的是，cadnano仅在一个平面上显示示像，并且3d示像必须由使用者的空间想象力或设计程序autodeskmaya的cadnano插件产生(dselnihinundesandersen,"computer-aideddesignofdnaorigamistructures",comp.meth.synth.biol.1244,pp23-44(2014))。cadnano最终提供了一系列钉链，通过它们可以产生所需的结构体。这些钉链中的每条原则上都可以配备有荧光团/荧光染料分子。但是，该程序没有设想用于定义荧光染料分子位置的功能，以便直接在输出的钉链列表中进行标记物。但是，该程序有助于可视化此过程，因为它显示了链的开始和结束位置以及脚手架链的形状和螺旋的布置。使用该工具，使用者可以轻松计算出设计的3ddna纳米结构体内钉链上可能位置的相对距离。具体且优选的是，使用者选择要改变的钉链的位置。这些是例如5'端或3'端。随后，使用者选择满足荧光染料分子定位要求的钉链，例如，它们被定位在腔结构体内部并且与结构体的边缘具有期望的足够的距离。如上所述，这可以从cadnano中推断。最后，使用者计算仍可选择的钉链上要修改的位置的最小距离，该距离仅限于2-3次计算，并且由于设计的晶格结构体和cadnano中的可视化效果而易于实现。最后，根据要实现的荧光染料分子的数量，使用者选择可选钉链的任意子集，记下钉链id，并在输出的钉链列表中预定相应序列，并在选定位置进行荧光染料分子修饰。对于基于荧光染料分子接头的荧光染料分子在dna纳米结构体上的附着，该策略是相似的，唯一的区别是输出的钉链序列不与荧光染料分子修饰一起使用，而是与和荧光染料分子接头互补的接头序列延伸的序列一起使用。此外，沿着钉链的选定位置优选地是钉链的端部，其特别优选地从结构体突出到内部(和/或进入腔)。通过这种基于接头的荧光染料分子在dna结构体上的附着，许多具有荧光染料分子的相似类型的接头链(以及用于不同的荧光染料分子颜色的seqidno例如1259-1261)结合到许多dna纳米结构体上的不同钉链上，每个钉链都具有相同的接头互补序列。当使用荧光染料分子接头时，优选将荧光染料分子结合在荧光染料分子接头的结构体的指向边缘和/或壁的一侧上。这使得移动性降低。例如，当cadnano限义的钉链的5'末端通过互补接头序列延伸时，这是荧光染料分子接头的3'末端。然而，相反的情况也是可以想到的。根据与用于荧光团接头的钉链的相同模型，针对每个3ddna纳米结构体为靶标接头设计一条钉链，其中钉链位置的选择标准可能不同，例如暴露度用于实现与靶标结构体的良好结合效率。还从knudsenj.等人(naturenanotechnology10,892–898(2015)doi:10.1038/nnano.2015.190)中已知，例如在中空圆筒的结构体中以不同的3d形状产生3d纳米结构体。为了产生基于其中的设计的本发明的3ddna纳米结构体，全部或部分寡聚物全部结合指向中空圆筒内部且不位于中空圆筒的边(边缘)之一处的螺旋，优选将全部或部分寡聚物在一端布置染料和/或通过接头序列延伸(其可以结合荧光接头，荧光接头包含荧光染料分子)。对于靶标接头或载体接头，可以选择寡聚物，该寡聚物并入位于中空圆筒边缘的螺旋中。此外，在所附的实施例中(特别是在实施例1中)，说明了用于产生本发明的3ddna纳米结构体的方法的示例性实施例。基于用于该方法的序列和基于为生产提供的方法，技术人员还可以产生相似的3ddna纳米结构体(例如具有完全不同的序列(但是，例如，在相似或相同的位置具有互补dna序列))。在另一方面，本发明涉及一组多个3ddna纳米结构体(其中这些优选是本申请中所述的3ddna纳米结构体)，其中该组包含n对的不同3ddna纳米结构体，并且其中该组的n对不同的3ddna纳米结构体在荧光染料分子方面成对彼此不同。优选的是，n对的不同3ddna纳米结构体包含不同数量的荧光染料分子和/或不同的荧光染料分子，使得通过在该组中的n对的不同3ddna纳米结构体中，可以产生彼此可区分的k个强度水平和/或彼此可区分的m个的颜色水平。优选的是，该组中多次包含n对成对不同3ddna纳米结构体的至少一部分，从而通过强度分布形成k个强度水平中的每一个，并且其中k个强度分布可彼此区分，优选统计上区分。优选的是，该组中多次包含n对成对的不同3ddna纳米结构体的至少一部分，从而通过颜色分布形成m个颜色水平中的每一个，并且其中m个颜色分布可彼此区分，优选统计上区分。相邻分布的重叠低于30％，优选低于20％，优选低于10％，更优选低于5％，甚至更优选低于2％，特别优选低于1％。在这种情况下，优选采用以下条件：k>2，优选k>3，更优选k>4，甚至更优选k>5，特别优选k>6；和/或m>2，优选m>3，更优选m>4，甚至更优选m>5，特别优选m>6。。。。在另一方面，本发明还涉及靶标结构体的检测方法。该方法包括：a)形成识别结构体，其包括：(i)靶标结构体，和(ii)至少两种3ddna纳米结构体，其中每种3ddna纳米结构体包含一种或多种向内布置的荧光染料分子，并且其中每种3ddna纳米结构体(特异性)结合靶标结构体，b)通过测定至少一种荧光信号检测靶标结构体，其中，选择3ddna纳米结构体和荧光测量参数，从而使得a)中形成的识别结构体的至少一个测得的荧光信号有别于至少两种分离的3ddna纳米结构体中每一个(当这些未结合在识别结构体中时)的荧光信号。优选的是，至少两种3ddna纳米结构体结合成对不对的靶标分子的区域/片段。因此，实现了对靶标结构体的更高特异性检测。特别是，优选所述方法与方法步骤p1)和p2)的组合。用本发明的方法检测的靶标结构体可以是分子、几个分子的复合物或颗粒。特别地，靶标结构体可以是dna(优选至少部分单链dna)、rna(优选至少部分单链rna，例如mrna)、lna(优选至少部分单链的lna)或蛋白质。然而，也适用作为复合物的靶标结构体，所述复合物包含一个或多个dna(优选至少至少部分单链的dna)、一个或多个rna(优选至少至少部分单链的rna)一个或多个lna(优选至少至少部分单链的lna)和/或一个或多个蛋白质和/或由它们组成。原则上，靶标结构体也可以是无机颗粒。优选的是，靶标结构体包含或是多核苷酸(即，例如dna、rna或lna)，特别优选至少部分单链的多核苷酸，并且特别优选单链的多核苷酸。特别优选的是，靶标结构体包含或为单链dna、单链rna或单链lna。在优选的方面，本发明的方法用于基因表达分析。在这种情况下，靶标结构体优选为mrna或蛋白质，特别优选为mrna。因此，靶标结构体可以是蛋白质或mrna。“部分”单链是指多核酸(即例如，dna、rna或lna)包含至少10个碱基，优选至少15个碱基，特别优选至少21个碱基的单链区域。因此，在所述方法的优选实施方式中，靶标结构体可具有或是多核苷酸，优选部分单链的多核苷酸，优选单链的多核苷酸，并且特别优选mrna。因此，在优选的实施方式中，本发明的方法可以是基因表达分析的方法，其中检测mrna(因此，mrna是靶标结构体)，并且所述方法包括：a)形成识别结构体，其包括：(i)mrna，和(ii)至少两种3ddna纳米结构体，其中每种3ddna纳米结构体包含一种或多种向内布置的荧光染料分子，并且其中每种3ddna纳米结构体(特异性)结合成对不同的mrna序列段，b)通过测定至少一种荧光信号检测靶标结构体，其中，选择3ddna纳米结构体和荧光测量参数，从而使得a)中形成的识别结构体的至少一个测得的荧光信号有别于至少两种分离的3ddna纳米结构体中每一个(当这些未结合在识别结构体中时)的荧光信号。特别是，优选与方法步骤p1)和p2)组合，从而使优选实施方式是基因表达分析方法，其中检测mrna(因此，mrna是靶标结构体)，并且所述方法包括：p1)将包含带有mrna的宿主体的一组宿主体引入微孔阵列，使得恰好一个宿主体存在于至少一个微孔中；p2)将至少两种3ddna纳米结构体引入至少一个微孔中，其中每种3ddna纳米结构体包含一种或多种向内布置的荧光染料分子；a)形成识别结构体，其包括：(i)mrna，和(ii)至少两种3ddna纳米结构体，其中每种3ddna纳米结构体包含一种或多种向内布置的荧光染料分子，并且其中每种3ddna纳米结构体(特异性)结合对不同的mrna的序列段；b)通过测定至少一种荧光信号检测mrna，其中，选择3ddna纳米结构体和荧光测量参数，从而使得a)中形成的识别结构体的至少一个测得的荧光信号有别于至少两种分离的3ddna纳米结构体中每一个(当这些未结合在识别结构体中时)的荧光信号。关于本发明的方法，“3ddna纳米结构体”与以上结合本发明的3ddna纳米结构体所定义的相同。换句话说，3ddna纳米结构体可以称为dna折纸。优选的是，作为识别结构体的一部分的至少两种3ddna纳米结构体中的至少一个，优选全部是本文所述的本发明的3ddna纳米结构体。本领域技术人员知道如何彼此依赖地选择3ddna纳米结构体和测量参数，以及可以通过何种测量方法和何种测量参数来区分哪些荧光信号。彼此不同的3ddna纳米结构体的荧光响应可以彼此不同，例如在颜色和/或强度方面。对于本领域技术人员显而易见的是，当使用不同的颜色时，因此必须使用合适的激发波长和针对该颜色调整的滤光片。可获得的颜色水平的最大数量m尤其取决于技术上可以如何精确地解析两个相邻的颜色分布。这同样适用于可达到的强度级别的最大数，因为该方法基于以下事实：两个相邻的强度分布(强度水平k1和k1+1)仍然可以分开(至少在统计上)。例如，可以对个体强度分布进行建模，并且可以基于多个部分重叠的强度分布的混合分布，通过反卷积或统计干扰(优选为贝叶斯推断)来计算个体分布的相对群大小。然而，除了颜色和/或强度之外，还可以采用其他变量，这些变量适合于区分不同的识别结构体的荧光信号，例如，有色分子的漂白速率或荧光寿命。对靶标结构体的检测可以包括对靶标结构体存在的检测。然而，原则上，检测还可以包括排除不存在靶标结构体。特别地，本发明的方法也适合于靶标结构体的定量。换句话说，靶标结构体的检测优选地包括(例如在样品溶液中)靶标结构体的定量。定量可以是相对的，即相对于另一组分(例如，样品溶液中的第二结构体/靶标结构体)，或绝对的(即，以浓度或绝对数的形式)。例如，当在溶液中检测识别结构体时，例如在流式细胞术、fcs或基于光片显微镜的测量几何结构体时，可以绝对值定量。然后，可以测量给定样品体积中的所有识别结构体，并可以指示绝对数量和/或浓度。为获得更精确的表述，可以在不同的稀释步骤中多次测量样品，和/或可以通过统计方法估算未考虑的靶标结构体的数量，优选可以通过贝叶斯推断来估算归类测量事件(例如由于小于测量事件中dna纳米结构体的预期数量)。为了测量与载体和/或载体表面结合的识别结构体，可以想到类似的方法。为此，必须选择参数，使得识别结构体不与载体和/或(第一)载体表面结合的可能性低。例如，这可以通过载体表面和/或第一载体表面与样品体积的高比率(例如0.01/μm，优选为0.1/μm，更优选为0.5/μm，非常优选为1/μm)，和/或通过较长的孵育时间(例如30min，优选2h，更优选10h，高度优选24h)来实现。然后，可以再次测量所有识别结构体，并且可选地将其数量除以样品量。与上述情况一样，分析中的其他步骤可以精确估算。优选的是，可以在样品腔室中执行测量，其中仅一个表面包括载体接头(优选最容易测量的表面)，并且所有其他表面被钝化(例如，如本文中其他地方所述)，从而所有识别结构体的测量为更简单。定量也可以基于内标或经验数据进行。优选的是，内标定义具有已知浓度的比较值。本发明的用于检测靶标结构体的方法可以进一步包括：将在a)中形成的识别结构体结合或将结合至载体。因此，可以将形成的识别结构体结合到载体，优选结合到载体的第一表面。因此，该方法可以包括以下步骤：将形成的识别结构体结合至载体，优选结合至载体的第一表面。如果识别结构体结合至载体，则优选地意味着识别结构体在载体上形成。可以介导识别结构体与载体的结合，因为在形成识别结构体之前，靶标结构体和/或至少两种3ddna纳米结构体之一(优选靶标结构体)已预先结合或已经结合到载体上。换句话说，靶标结构体和/或至少两种3ddna纳米结构体之一(优选靶标结构体)可以与载体结合(在形成识别结构体之前)。因此，该方法可以进一步包括将靶标结构体和/或至少两种3ddna纳米结构体中的至少一个(优选靶标结构体)结合到载体上的步骤。例如，该步骤可以包括将载体和/或第一载体表面与包含靶标结构体(以及任选地还包括其他组分，例如其他多核苷酸，优选mrna)的样品溶液一起孵育。此外，该步骤可以包括一个或多个洗涤步骤(用缓冲溶液)。与至少一个洗涤步骤组合的将靶标结构体预先结合到载体和/或第一载体表面上具有以下优点：在形成所述识别结构体之前，已经从样品溶液的环境中去除了靶标结构体。这对于具有许多且可选地相似成分的复杂样品特别有利。缓冲溶液可包含1x至8xssc，优选3x至5xssc，特别优选4xssc。其中，ssc是指所谓的柠檬酸钠盐水缓冲液，例如ssc，其由150mm氯化钠和15mm柠檬酸三钠的水溶液组成，其用hcl调节至ph7.0。作为缓冲剂的基础，tris或pbs也可用作柠檬酸盐缓冲剂(如ssc)的替代品。该缓冲液还可以包含nacl和/或mgcl2(优选作为ssc的替代物)。nacl的浓度优选为50mm至1200mm，特别优选为200mm至800mm。例如，nacl浓度可以为600mm，优选为500mm，特别优选为300mm。mgcl2的浓度可以为2mm至20mm，优选5mm至15mm，优选8mm至12mm，并且特别优选10mm。此外，缓冲溶液可包含4％至6％，2％至10％，15％或20％的硫酸葡聚糖。优选的是，缓冲液包含例如5％的硫酸葡聚糖。缓冲溶液还可以包含聚乙二醇(peg)，例如peg8000、peg2000、peg4000、peg1000。该缓冲液还可包含0.01至5％的tween-20。任选地，缓冲液可以包含edta，优选浓度为0.1mm至5mm，特别优选1mm。缓冲液的另一可选成分是“剪切的鲑鱼精子”(可商购)，优选浓度为0.1mg/ml。“剪切的鲑鱼精子”可以增加特异性。缓冲液还可以包含denhardts介质(由0.02％(w/v)bsa(组分v)水溶液、0.02％ficoll400(可商购)以及0.02％聚乙烯吡咯烷酮(pvp)组成)，另请参见coldspringharbprotoc2008，doi：10.1101/pdb.rec11538)，优选为1倍、2倍、3倍、4倍或5倍浓度。特别优选的缓冲液包含或具有以下组成：4xssc、5％硫酸葡聚糖和0.1％tween20。当要检测的靶标结构体中的至少一个(优选是全部)中的至少一个是多核酸，例如mrna时，特别优选使用该缓冲剂。如果识别结构体结合至载体，则这优选意味着识别结构体不仅形成，而且结合在载体上，优选在载体的第一表面上。换句话说，标识结构体的所有组分都不是预先结合的。因此，该方法可以包括将识别结构体结合至载体，优选地结合至载体的第一表面的步骤。结合可以在a)中与识别结构体的形成在一个步骤中发生(即，载体和形成识别结构体所需的所有组分(以及任选地与载体结合所必需的组分，例如下文所述的载体接头)在一个步骤中混合并孵育)。作为另选，可以随后(优选在b)中的测量之前)发生与载体的结合。在两种情况下，在将识别结构体结合到载体和/或第一载体表面上之后，该方法可以进一步包括至少一个洗涤步骤(例如，用上述缓冲溶液之一)以从载体上去除未结合的组分(例如，3ddna纳米结构体和/或样品溶液中包含的其他成分)。当识别结构体被结合时，结合可以由靶标结构体和/或类似于“被结合”的至少两种3ddna纳米结构体(优选靶标结构体)之一介导。识别结构体的键(如果识别结构体与载体结合)或结合(如果识别结构体正在与载体结合)可以由靶标结构体和/或至少两种3ddna纳米结构体之一(优选靶标结构体)介导。特别优选的是，键和/或结合由靶标结构体介导。识别结构体与载体和/或载体的第一表面的结合和/或将结合可以直接或通过载体接头介导。因此，靶标结构体和/或在识别结构体中结合的至少一个3ddna纳米结构体(优选靶标结构体)的结合和/或将结合可以直接至载体和/或第一载体表面(例如，通过共价键或非共价键)或由载体接头介导(即是间接的)。为此，载体接头(特异性地)结合靶标结构体并且结合于和/或将结合于载体和/或第一载体表面。载体接头与载体和/或第一载体表面的结合可以再次是直接的(例如通过共价或非共价键)或由中间载体接头介导，该中间载体接头特异性地结合载体接头并且特异性地结合或被直接或间接结合至载体和/或其第一表面本身。原则上，可以想到根据相同概念的其他中间载体接头。优选的是，载体接头本身直接结合/将结合到载体和/或第一载体表面。载体和/或第一载体表面可以例如用载体接头涂覆。“载体接头”优选是指可以与靶标结构体(例如靶标分子)或纳米报道分子(即至少两种3ddna纳米结构体之一)的子区域特异性结合并且可以与载体(直接或间接)偶联的颗粒。与靶标结构体的特异性结合可以例如通过watson-crick碱基配对，通过范德华相互作用或氢桥来实现，并且尤其可以通过核酸、抗体、适体、粘合子或纳米抗体(取决于靶标结构体)。结合/正在结合有识别结构体的载体可以具有不同的形状，并且可以由不同的材料形成。优选的是，载体具有第一载体表面，并且识别结构体结合在第一载体表面上。因此，在用于检测靶标结构体的方法中，优选将识别结构体结合和/或将结合至载体表面。载体的第一载体表面可包括载体结构体的完整侧面。作为另选，载体结构体的侧表面的仅一部分可以是第一表面。第一载体表面可以是至少0.01mm2，优选至少1mm2或特别优选至少10mm2的表面。第一载体表面可以具有至多1000mm2，优选至多400mm2或特别优选至多100mm2的面积。载体表面和/或载体的第一表面优选包括玻璃表面(例如硼硅酸盐玻璃表面或石英玻璃表面)或聚合物表面(诸如例如ibidigmbh的μ-载玻片vi0.1，或基于适用于荧光显微镜的其他聚合物)。此外，载体表面和/或载体的第一表面可以是玻璃表面(例如硼硅酸盐玻璃表面或石英玻璃表面)或聚合物表面(诸如例如ibidigmbh的μ-载玻片vi0.1，或基于适用于荧光显微镜的其他聚合物的表面)。换句话说，载体的第一表面优选是玻璃表面(例如硼硅酸盐玻璃表面或石英玻璃表面)或聚合物表面(诸如例如ibidigmbh的μ-载玻片vi0.1，或基于适用于荧光显微镜的其他聚合物的表面)。因此，载体可以包括第一表面，该第一表面包括玻璃表面(例如，硼硅酸盐玻璃表面或石英玻璃表面)或聚合物表面(诸如例如ibidigmbh的μ-载玻片vi0.1，或基于适用于荧光显微镜的其他聚合物的表面)。载体还可以包含聚合物网络，该聚合物网络优选包含以下材料之一或组合：生物聚合物、琼脂糖、胶原蛋白。在本发明的上下文中，优选的载体是显微镜芯片、孔或板(优选适合于高分辨率荧光显微镜；例如ibidi的μ板)或盖玻片，最优选的是微孔阵列和/或微孔腔室。载体和/或第一载体表面优选被钝化。“钝化”是指载体和/或第一载体表面被涂覆或处理，使得可以最小化靶标结构体和/或3ddna纳米结构体和/或接触载体和/或第一载体表面(例如，包含靶标结构体的其他组分)可选地其他组分的非特异性结合。优选的是，钝化可以意指该表面与浓度为0.1mg/ml至10mg/ml，优选0.5mg/ml至1mg/ml的bsa溶液接触和/或洗涤。钝化也可以通过peg化进行(例如，在以下出版物中进行描述：schandradoss等人,jove2014,"surfacepassivationforsingle-moleculeproteinstudies",jpiehler等人,biosensors&bioelectronics2000,"ahigh-densitypoly(ethyleneglycol)polymerbrushforimmobilizationonglass-typesurfaces",rschlapak等人,langmuir2006,"glasssurfacesgraftedwithhigh-densitypoly(ethyleneglycol)assubstratesfordnaoligonucleotidemicroarrays")或硅烷化(用于下列出版物中描述的实例：bhua等人undtjha,naturemethods2014,"animprovedsurfacepassivationmethodforsingle-moleculestudies",a.kumar等人,nucacresearch2000,"silanizednucleicacids:ageneralplatformfordnaimmobilization",hlabit等人,biotechniques2008,"asimpleandoptimizedmethodofproducingsilanizedsurfacesforfishandreplicationmappingoncombeddnafibers")。此外，钝化还可以包括用溶液洗涤载体或载体表面，该溶液包含与靶标结构体相同类型但与靶标结构体不同的结构体(即单链多核苷酸)。当第一载体表面是玻璃表面或包括玻璃表面时，特别优选地将载体和/或载体的第一表面钝化。对于玻璃表面，优选用bsa溶液、聚乙二醇化或硅烷化将其钝化。载体还可包含基质，诸如例如聚合物基质。这对于单细胞水平的分析特别有利。在这种情况下，优选识别结构体被/或正被嵌入聚合物基质中。作为另选或作为附加，识别结构体可以结合/将结合至聚合物基质的表面。作为基质和/或聚合物基质的起始物质，特别是琼脂糖、胶原蛋白、dna和/或它们的组合是适合的。琼脂糖是特别优选的。产生和嵌入识别结构体和/或识别结构体的组分的方法(在预结合靶标结构体和/或至少两种3ddna纳米结构体之一的情况下)是技术人员众所周知的。为此，琼脂糖基质可以由琼脂糖和生物素化的琼脂糖(可商购)或链霉亲和素琼脂糖(可商购)的混合物生产，并且靶标接头或载体接头可以与这些功能化结合(在生物素化的琼脂糖与先前的链霉亲和素漂洗)。作为另选，并且对于其他任选的基质材料，可以将接头偶联(直接或通过生物素-链霉亲和素)与特异性结合基质材料的抗体(即抗琼脂糖，抗胶原蛋白等)。还可能以马来酰亚胺或nhs酯改性的形式购买接头，并直接共价结合到基质材料的相应化学基团上。在dna聚合物基质作为载体的情况下，其本身可以包含具有载体序列的单链区段。这种基质的使用可以与微孔阵列结合使用。上述聚合物基质可以限制通过裂解从细胞或另一宿主体内释放的靶标结构体的扩散。因此，这样的基质的使用特别有利，特别是作为替代方案，而且除了方法步骤f)和g)之外，用于防止待分析的微孔的内容物因从外部进入微孔和/或从外部流出微孔(例如通过扩散)而改变，从而使分析结果失真。当使用这样的载体基质时，必须确保以如此快的方式生产聚合物基质，使得宿主体在破坏宿主体之前不能改变其靶标结构体组成，或者聚合物基质得意产生，从而使得宿主体的靶标结构体组成不受此影响。后者例如可以通过使用低熔点琼脂糖来确保。在优选的实施方式中，在方法步骤aa)中，优选在方法步骤p1)之后，在微孔阵列中产生载体基质，并且优选在方法步骤bb)中将载体接头固定在载体基质上。特别地，方法步骤aa)和bb)与已经描述的方法步骤的组合是优选的，因此优选的实施方式是用于基因表达分析的方法，其中检测到mrna(因此，mrna是靶标结构体)，并且方法包括：p1)将包含带有mrna的宿主体的一组宿主体引入微孔阵列，使得恰好一个宿主体存在于至少一个微孔；aa)在至少一个微孔中产生载体基质。bb)连接载体接头至载体基质。p2)将至少两种3ddna纳米结构体引入至少一个微孔，其中每种3ddna纳米结构体包含一种或多种向内布置的荧光染料分子；a)形成识别结构体，其包括：(i)mrna，和(ii)至少两种3ddna纳米结构体，其中每种3ddna纳米结构体包含一种或多种向内布置的荧光染料分子，并且其中每种3ddna纳米结构体(特异性)结合对不同的mrna的序列段；b)通过测量至少一种荧光信号来检测mrna，其中，选择3ddna纳米结构体和荧光测量参数，从而使得a)中形成的识别结构体的至少一个测得的荧光信号有别于至少两种分离的3ddna纳米结构体中每一个(当这些未结合在识别结构体中时)的荧光信号。所述方法也可以比照地用于mrna以外的其他靶标结构体。聚合物网络优选地具有1μm至50μm，优选2μm至10μm的中等筛孔尺寸。这是为了限制扩散并为载体接头和/或载体接头结合位点提供足够的结合位点。载体接头和/或载体接头结合位点的成对最小距离基本上可以为200nm至10μm，优选500nm至5μm，特别优选2μm至3μm。在本文中，基本上是指至少80％，优选至少90％，并且特别优选至少99％的载体接头和/或载体接头结合位点具有相邻的载体接头和/或载体接头的至少上述距离。识别结构体与载体和/或载体表面的键合和/或结合(例如通过靶标结构体或识别结构体的至少两种dna纳米结构体中的至少一个)可以通过不同的共价键和/或非共价键进行，所述共价键和/或非共价键是技术人员已知的，无论它是直接的，还是通过载体接头或与载体接头结合的中间载体接头。例如，可以通过生物素-链霉亲和素偶联来实现结合。因此，与载体直接相互作用的组分(例如，载体接头、靶标结构体、dna纳米结构体之一或中间载体接头)可以包含生物素或链霉亲和素。因此，载体和/或载体表面可包含抗生蛋白链菌素和/或生物素作为对应物，使得抗生蛋白链菌素-生物素相互作用成为可能。除了抗生蛋白链菌素-生物素相互作用之外，还可以使用其他相互作用，诸如例如抗体结合。也可以想到的是，与载体直接相互作用的组分(例如，载体接头，靶标结构体，dna纳米结构体之一或中间载体接头)通过nhs反应通过载体接头连接(正在连接)到胺改性的载体上和/或胺改性的载体表面。点击化学方法的应用(例如，描述于h.c.kolb；m.g.finn；k.b.sharpless(2001)."clickchemistry:diversechemicalfunctionfromafewgoodreactions".angewandtechemieinternationaledition.40(11):2004–2021)也是可以想象的。通过本发明的方法，可以检测靶标结构体的几个拷贝。如果检测到靶标结构体的几个拷贝(即，如果识别结构体形成多次)，则优选为所述靶标结构体形成的大多数(优选全部)识别结构体优选结合至载体，优选结合至载体的第一表面。优选的是，大多数或基本上所有的识别结构体附着到载体，使得它们仍然可以通过b)中用于测量至少一种荧光信号的测量方法来分辨。这可能意味着所有或基本上所有识别结构体和/或其测量事件在空间上不重叠(例如，使用荧光显微镜检查时识别结构体的衍射极限图像)。优选所有或基本上所有识别结构体具有至少250nm，优选至少500nm，并且特别优选至少1μm的距离。这可能意味着将多个载体接头或中间载体接头以上述最小距离安装在载体和/或第一载体表面上。基本上所有是指至少80％，优选至少90％并且特别优选至少95％的所形成的识别结构体满足这些要求。优选的是，将多个识别结构体结合到载体和/或载体表面，使得可以分别测量各个识别结构体的荧光信号。通过表面上结合位点的密度和/或距离，即例如通过链霉亲和素和/或生物素和/或附着到载体和/或其表面上/中的载体接头或中间载体接头的密度和/或其表面，可以在其中调节识别结构体与载体和/或载体表面结合的空间距离。优选的是，结合位点，例如链霉亲和素、生物素、载体接头或中间载体接头以以下距离/图案/密度排列在载体和/或载体表面上。优选的是，所有或基本上所有结合位点的距离为至少250nm，优选至少500nm，特别优选至少1μm。优选的是，结合位点排列成具有上述边缘长度的六边形格。结合位点还可以优选以任意方式布置在载体和/或其表面上，其表面密度为1e-5/μm2-1e3/μm2，优选1e-3/μm2-4/μm2，并且特别优选0.1/μm2-1/μm2。所述表面密度确保结合位点足够的距离。作为附加或作为另选，识别结构体在载体和/或其表面上的空间距离的调节可以通过识别结构体的浓度来调节。如果选择浓度使得不发生在载体上结合位点的饱和，则浓度的每次进一步降低(即稀释)都会导致载体上的附着密度降低。任选地，为了确定必要的稀释度，该方法以一系列稀释度进行一次或多次，直到建立了合适的稀释度/浓度。因此，在形成识别结构体(一种或多种)之后，本发明的方法还可以包括稀释在其中形成识别结构体的溶液的步骤，该步骤是在将识别结构体结合到载体之前。如上所述，本方法中的靶标结构体可以是或包括部分单链的多核苷酸或单链多核苷酸。在这种情况下，特别优选的是，载体接头包含寡核苷酸或为寡核苷酸，其核酸序列被设计为使其特异性结合权利要求2的靶标结构体的核酸序列的第一单链区段。特别优选的是，靶标结构体是具有聚-(a)尾巴的mrna，其中载体接头包含或为寡核苷酸，其核酸序列经设计以使其特异性结合于mrna靶标结构体的聚-(a)尾巴。为了结合至聚-(a)尾巴而进行的设计可以包括包含聚-(t)序列区段。如上所述，本方法中的靶标结构体也可以是蛋白质或包含蛋白质。在这种情况下，特别优选的是，载体接头包含或者是(特异性地)与靶标结构体结合的抗体或抗体的抗原结合结构体域。在a)之后和b)之前，用于检测靶标结构体的方法可以进一步包括用缓冲溶液洗涤载体和/或第一载体表面。这样的洗涤步骤可以具有去除未结合到表面的组分的作用。特别地，这种洗涤步骤可以确保将未结合在识别结构体上的游离3ddna纳米结构体从载体和/或第一载体表面上洗去。这尤其具有以下优点：减少或防止了游离的3d纳米结构体对荧光信号背景的可能破坏。洗涤步骤优选用缓冲溶液进行。缓冲剂的组成优选如上文结合其他洗涤步骤所定义。在识别结构体中，3ddna纳米结构体可以直接结合靶标结构体，或者可以通过靶标接头与靶标结构体结合。因此，至少两种3ddna纳米结构体中的至少一个，优选全部，可以被设计用于直接结合至靶标结构体和直接结合至靶标分子。优选的是，对至少两种3ddna纳米结构体中的至少一个，特别优选全部进行设计，使得其直接被设计为靶标结构体的各个区域(一个或多个)并直接结合至靶标分子。直接结合可例如通过碱基配对(例如，以部分单链或单链多核苷酸作为靶标结构体)发生。因此，至少两种3ddna纳米结构体中的至少一个，优选全部可以包含单链序列区段，其可以特异性地结合至靶标结构体(例如，部分单链或单链的多核酸)。优选的是，所述序列区段向外和/或布置在3ddna纳米结构体的外表面。由此确保以最佳可能的方式可访问序列片段。作为另选，至少一个，优选地所有3ddna纳米结构体的特异性结合可以由分别分配的靶标接头介导。靶标接头或每个靶标接头被设计为结合各自的dna纳米结构体和靶标结构体的各个区域(一个或多个)。因此，靶标接头可以包含被设计成(特异性地)结合到各个3ddna纳米结构体的第一片段。此外，靶标接头可以包含第二区段(也称为靶标结合区段)，其被设计为(特异性地)结合至靶标结构体。优选的是，其与靶标结构体的结合由靶标接头介导的3ddna纳米结构体包含至少一个单链dna片段，其被设计为使其特异性结合靶标接头。该单链dna片段优选向外放置，即可以从外部接近。靶标接头的上述第一区段优选是多核酸序列(例如dna、lna或rna序列)，其经设计使得其通过杂交特异性结合至3ddna纳米结构体的单链dna区段(即与3ddna纳米结构体的单链dna片段的至少一部分互补)。结合通过碱基配对发生。优选的是，两个单链区段的至少15个，优选至少18个，并且特别优选21个碱基杂交。结合接头的靶标优选包含一个(和/或至少一个)靶标结合片段。优选设计靶标结合区段，使得其介导与靶标结构体和/或靶标结构体的各个区域(结合各自的识别结构体)特异性结合。如果靶标结构体是或包含部分单链多核苷酸或优选单链多核苷酸(例如mrna)，则靶标结合片段优选地包含经设计以使其特异性结合于靶标结构体的单链片段的核酸序列。优选的是，靶标结合区段与靶标结构体的单链区段互补。与靶标结构体的结合优选地通过碱基配对发生。优选的是，两个单链区段的至少14个碱基，优选至少18个，特别优选21个碱基杂交。如果靶标结构体是蛋白质或包含蛋白质，则靶标接头的靶标结合片段可以包含或是特异性结合蛋白质的肽/蛋白质或抗体(和/或抗体的抗原结合片段)。用于检测靶标结构体的方法可以进一步包括提供优选地包含靶标结构体的水溶液和至少两种3ddna纳米结构体。样品溶液可以例如包含细胞裂解物，从细胞悬浮液和/或组织和/或mrna提取的核酸。可选地，该方法可以进一步包括提供载体、载体接头(一种或多种)和/或靶标接头(一种或多种)。所述提供步骤中的一个或两个可以包括在形成识别结构体的步骤中。该方法可以进一步包括将包含靶标结构体的优选水溶液样品溶液与至少两种3ddna纳米结构体和任选的载体接头和/或靶标接头混合。样品溶液可以例如包含细胞裂解物，从细胞悬浮液和/或组织和/或mrna提取的核酸。此外，该方法可以包括使所述混合物与载体和/或第一载体表面接触。组分的混合也可以是逐步的。含有靶标结构体的样品溶液可以是细胞裂解物，优选单个细胞的细胞裂解物。样品溶液也可以是核酸的混合物，例如纯化的核酸。特别地，样品溶液也可以是细胞的纯化的全rna。所述全rna可以通过市售试剂盒从细胞中获得(例如thermoscientific的reagent，ls，purelinktmtotalrnabloodkit，用于ffper的ecoveralltmtotalnucleicacidisolationkit，或qiagengmbh的rneasykits，paxgenebloodrnakit或rnalaterreagent)。优选的是，本发明的用于检测靶标结构体的方法还配置用于检测与第一靶标结构体不同的其他靶标结构体(其中，不同的靶标结构体成对地不同)。因此，该方法也可以被称为用于检测至少两种不同的靶标结构体的方法，其中，至少两种不同的靶标结构体可成对地彼此区分。在其他方面，发明尤其涉及这样的方法：该方法还可以适合于检测一个或多个彼此不同的其他靶标结构体，其中其中不同的靶标结构体成对不同，其中，对于每个靶标结构体，在步骤p1)中的宿主体组包含具有各自的靶标结构体的包含至少一个宿主体；并且，其中方法还包括：c)对于每个一个或多个彼此不同的其他靶标结构体：形成分别已分配的识别结构体，其中每个其他识别结构体包括：(i)各自的已分配的其他靶标结构体，和(ii)至少两种3ddna纳米结构体，其中至少两种3ddna纳米结构体中的每种包含一种或多种向内布置的荧光染料分子，并且其中至少两种3ddna纳米结构体中的每种特异性结合于各自的其他靶标结构体，并且其中至少两种3ddna纳米结构体结合于各自的靶标结构体的成对的不同区域；并且，其中步骤a)还包括：d)通过测定至少一种荧光信号检测一个或多个其他靶标结构体，其中，选择所有3ddna纳米结构体和荧光测量参数，使得a)和c)中形成的所述识别结构体的至少一个测得的荧光信号有别于所有分离的3ddna纳米结构体(当这些未结合在各自的识别结构体中的一种中时)的荧光信号，和所形成的识别结构体的测得的荧光信号彼此可成对区分，其中每个不同的靶标结构体可存在多次，并且所述方法可包括对一个或多个不同的靶标结构体的多次检测。因此，这是对第一类型的一个或多个相似靶标结构体的先前检测和/或定量的上位化，用于检测和/或定量彼此成对不同并且也不同于第一类的一种或多种其他类型的一个或多个相似靶标结构体。在这种情况下，按照以上对一个靶标结构体所述，针对每个靶标结构体执行该方法。然而，用于要检测和/或定量的多个靶标结构体的方法以基本上平行的方式进行，并且优选地分别总结相同的方法步骤。优选的是，每个不同的靶标结构体检测多次，即，每个识别结构体优选地被形成多次。换句话说，例如可以检测到n个不同的靶标结构体，它们可以成对地彼此区分，其中，n个不同的靶标结构体中的每一个或多个中的每个被多次检测。这意味着被分配给多次检测到的靶标结构体的那些识别结构体相应地多次形成。当然，针对各个相同的靶标结构体形成的相同的识别结构体的荧光信号不必彼此不同。而是，对相同荧光信号的重复测量用于定量相应的靶标结构体。例如，本发明的方法可以具有检测水溶液中彼此不同的靶标结构体a、b和c的目的。为此，提供分配给它们的3ddna纳米结构体a1、a2、b1、b2、c1和c2，它们与靶标结构体a、b和c一起形成识别结构体aa1a2、bb1b2和cc1c2。在此，识别结构体aa1a2、bb1b2和cc1c2的荧光信号彼此成对不同，并且与分离的3ddna纳米结构体a1、a2、b1、b2、c1和c2不同。如果分别提供靶标结构体a、b和c多次，则例如相同的识别结构体aa1a2的荧光信号不必彼此不同。识别结构体aa1a2的荧光信号的每次测量于是对应于靶标结构体a的检测，从而可以从测量点的数量得出浓度。上面提到的用于检测靶标结构体的内容比照适用于检测不同靶标结构体的其他和/或每个其他靶标结构体。特别地，以上关于靶标结构体，识别结构体，识别结构体与载体、载体接头、3ddna纳米结构体(一种或多种)、靶标接头的结合或结合，和其他可选方法步骤的一切比照适用于至少一个，优选地所有其他识别结构体。对于多个不同的靶标结构体的优选检测，本发明一方面还涉及检测至少两种不同的靶标结构体的方法，其中至少两种不同的靶标结构体均彼此成对不同，并且方法包括：a)对于至少两种靶标结构体中的每一个，形成识别结构体，其包括：(i)各自的靶标结构体，和(ii)至少两种3ddna纳米结构体，其中每种3ddna纳米结构体包含一种或多种向内布置的荧光染料分子，并且其中每种3ddna纳米结构体(特异性)结合靶标结构体，b)通过测定至少一种荧光信号检测至少两种靶标结构体，其中，选择所有3ddna纳米结构体和荧光测量参数，使得a)中形成的识别结构体的至少一个测得的荧光信号有别于所有分离的3ddna纳米结构体(当这些未结合在各自的识别结构体中的一种中时)的荧光信号，并且对于各个不同的靶标结构体形成的识别结构体的测得的荧光信号可彼此成对区分。同样在这种情况下，可以比照适用上面为靶标结构体的检测方法指定的优选特征。特别地，以上关于靶标结构体、识别结构体、识别结构体与载体的结合或将结合、载体接头、3ddna纳米结构体(一种或多种)、靶标接头和其他可选方法步骤的所有内容可以比照适用于至少两种识别结构体中的至少一个，优选每个。特别是，优选与方法步骤p1)和p2)的组合。如果靶标结构体的检测方法被设计用于检测与第一靶标结构体不同的其他靶标结构体，或者如果该方法用于检测至少两种不同的靶标结构体，则靶标结构体可以是具有成对的不同结构体/序列的相同类型的靶标结构体(例如，数种mrna)，或者靶标结构体包含相同类型的几个不同的靶标结构体。作为另选，也可以设想不同的类型的靶标结构体(例如，至少一个部分单链的dna或单链的dna和至少一个部分单链的或单链的rna；或至少一个部分单链的或单链的rna)。然而，优选的是，靶标结构体是相同类型的，并且在结构体或顺序上可成对地彼此区分。特别地，本发明的方法预期是用于基因表达分析的方法。对于基因表达分析，优选所有靶标结构体是rna，特别优选mrna，或蛋白质。在基因表达分析的情况下，特别优选所有靶标结构体是rna，特别优选mrna。如果该方法用于检测超过一个的靶标结构体，则特别优选包含其他靶标结构体，优选所有其他识别结构体的至少一个其他识别结构体与载体结合。特别优选的是，所有识别结构体都结合于同一载体。与识别结构体相关提及的上述“将结合”和“结合”在更多/其他识别结构体的情况下比照适用于“结合”和“将结合”。在一个或多个或全部识别结构体结合/将结合到载体和/或第一载体表面的实施方式中，优选的是，所有或基本上所有识别结构体都将结合/将结合到载体，使得它们仍然可以通过b)中用于测量至少一种荧光信号的测量方法来解析。这可能意味着所有或基本上所有的识别结构体和/或其测量事件(例如，在荧光显微镜的情况下(衍射受限)图像)在空间上不重叠。优选的是，(相同靶标结构体或几个靶标结构体的)的所有识别结构体的距离为至少250nm，优选至少500nm，并且特别优选至少1μm。在本文中，基本上全部是指所形成的识别结构体中的至少80％，优选至少90％，并且特别优选95％满足该要求。对于如何实现靶标结构体的这种密度，基于用于检测靶标结构体的方法的实例的以上阐释的方法相应地适用。特别地，载体和/或第一载体表面可包含与一个或多个靶标结构体结合的的(预)结合的载体接头。这些可以以上述距离结合到载体和/或第一载体表面。在本发明的用于检测一个或多个靶标结构体的方法中，应如何理解“特异性结合”或“特异性结合”是本领域技术人员已知的。特别地，在多核苷酸单链杂交的情况下，“特异性结合”可以表示至少14个，优选至少18个，特别优选至少21个互补碱基对。特别地，“特异性结合”还可以意指两个互补的多核苷酸单链对的至少90％，优选95％，特别优选99％的碱基(优选具有前一句中提及的最小数目的碱基对)。在蛋白质-蛋白质相互作用(例如抗体抗原结合)的情况中，“特异性结合”可优选表示至少5kcal/mol，优选至少8kcal/mol，并且特别优选至少11kcal/mol的结合亲和力(-δδg)。结合亲和力可以例如通过热泳测量来确定(m.jerabek-willemsen等人,"molecularinteractionstudiesusingmicroscalethermophoresis",assaydrugdevtechnol,9(4):342-353(2011))。另一种可能性是例如由dynamicbiosensorsgmbh提供的电动测量(a.langer等人,"proteinanalysisbytime-resolvedmeasurementswithanelectro-switchablednachip",nat.comm.4:2099(2013))。在本发明的方法中，一种或多种不同的靶标结构体可以存在于细胞悬浮液的细胞、液滴乳液、具有细菌、病毒或外来体的水溶液、全血样品、唾液样品或任何动物或人类来源液体中。优选的是，多个或全部靶标结构体在相同液体中存在于宿主体中。优选的是，液体中宿主体的浓度高至单独占用微孔的可能性高的程度。优选的是，当填充微孔阵列时，液体中存在0.5-1.5个宿主体/微孔，更优选0.8-1.2，更优选0.9-1.1，并且特别优选1个宿主体/微孔。如果期望溶液中更高浓度的一个或多个宿主体，则该方法可以进一步包括在形成识别结构体(一种或多种)之前稀释样品溶液。优选的是，优选的是，每个靶标结构体存在于至少一个宿主体的量为至少1，优选至少10，并且特别优选100个。在本发明的方法中，一个或多个识别结构体的形成优选在缓冲溶液中进行，该缓冲溶液优选被称为杂交缓冲液。缓冲溶液可包含1x至8xssc，优选3x至5xssc，特别优选4xssc。“ssc”是指由150mm氯化钠和15mm柠檬酸三钠的水溶液组成的所谓的盐水柠檬酸钠缓冲液，其用hcl调节至ph7.0。作为柠檬酸盐缓冲液(例如scc)的替代品，tris或pbs也可用作缓冲液碱。缓冲液可以(优选作为ssc的替代物)也包含nacl和/或mgcl2。nacl优选为50mm至1200mm，特别优选200mm至800mm。例如nacl浓度可以为600mm，优选500mm，并且特别优选300mm。mgcl2的浓度可以为2mm至20mm，优选5mm至15mm，优选8mm至12mm，并且特别优选10mm。此外，缓冲溶液可包含4％至6％、2％至10％、15％或20％的硫酸葡聚糖。优选的是，缓冲液包含例如5％硫酸葡聚糖。缓冲溶液还可以包含聚乙二醇(peg)，例如peg8000、peg2000、peg4000、peg1000。该缓冲液还可包含0.01至5％的tween-20。任选地，缓冲液也可以包含edta，优选浓度为0.1至5mm，特别优选1mm。缓冲液的另一可选成分是“剪切的鲑鱼精子”(可商购)，优选浓度为0.1mg/ml。剪切的鲑鱼精子可以可选地增加特异性。缓冲液还可以包含denhardt介质(由0.02％(w/v)bsa(组分v)水溶液、0.02％ficoll400(可商购)和0.02％polyvinylpyrrolidone(pvp)组成，还可见coldspringharbprotoc2008，doi：10.1101/pdb.rec11538)，优选为1倍、2倍、3倍、4倍或5倍浓度。特别优选的缓冲液包含或具有以下组成：4xssc、5％硫酸葡聚糖和0.1％tween20。如果至少一种、优选所有要检测的靶标结构体是多核酸(一种或多种)，例如mrna，则特别优选使用该缓冲剂。在本发明的方法中，在本发明的方法中识别结构体(一种或多种)的形成优选在4℃至50℃，优选18℃至40℃的温度下进行。例如，温度可以是40℃。特别优选使用30℃。如果要检测一个或多个部分单链的或单链的多核苷酸，则特别优选所述温度。识别结构体的形成可以包括结合在其中的组分的混合物的孵育期。优选的是，孵育时间可以是5min至20h，优选1h至20h(例如1h、2h、4h、8h)并且特别优选10h至20h。在本发明的方法中，一个或多个识别结构体也可以在一个步骤中而不是顺序地(优选在上述缓冲溶液中)形成，并结合到载体上。为了一步形成识别结构体，将dna纳米结构体(每个靶标结构体至少2个；优选以上述浓度)添加到含有宿主体的液体中。可选地，也可以将一个或多个载体接头添加到溶液中。但是，载体接头可以已经预先结合到载体。在微孔中的宿主体被破坏后，识别结构体的所有组分就已经存在于微孔中并可以形成它们。因此，可以大大减少从准备开始到分析结果的时间，并且可以减少工作量。这尤其对于时间敏感的临床样品的单细胞基因表达分析(例如，确定败血症病原体)非常重要。但是，一般来说，在经济上也是有利的。例如，可以以每个待与载体接头结合的靶标结构体1nm的浓度添加载体接头。优选的是，以每个靶标结构体的3ddna纳米结构体的总浓度(例如3nm，每个靶标具有1nm的3ddna纳米结构体)的总浓度添加载体接头。用于形成识别结构体(一种或多种)的总体积可以例如为1μl至500μl。为了结合所形成的识别结构体，优选的是，将上述用于形成识别结构体的混合物添加至载体和/或第一载体表面。载体接头可以预先结合(如果它不是用于形成识别结构体的溶液的一部分)，也可以在孵育过程中结合到载体表面。结合/键是共价或非共价的(例如生物素链霉抗生物素蛋白相互作用)。与载体的结合可以包括1min至2h、5min至1h、8min至25min并且特别优选10min的孵育时间。孵育时间的其他示例是2min、5min、20min。孵育可在4℃至30℃，优选在室温(例如20℃至25℃)下进行。在施用于载体表面之前，可以再次稀释溶液(例如，用pbs或用于形成识别结构体的上述缓冲液)稀释，例如以减少葡聚糖的量，覆盖更大的面积或调整浓度。测量之前，可用缓冲液清洗表面。优选的是，可以使用如上所定义的用于洗涤步骤的缓冲液。优选的是，在本发明的方法中至少一种荧光信号的测量包括：q)借助于荧光显微镜，优选地在落射荧光、tirf、光片和/或共聚焦显微镜中，创建包含关于从样品部分/片中发射的荧光信号的数据的数据集。换句话说，至少一种荧光信号的测量可以包括几种荧光信号或多种荧光信号的测量，例如，测量由二维或三维样品部分发射的强度并将其存储在像素或体素。在这种情况下，测量还可以包括具有几个激发波长和/或几个检测波长(带)的同时或顺序测量。优选的是，靶标结构体和/或一个或多个其他靶标结构体的检测包括：w)识别数据集中包含的一个或多个基准，代表一个识别结构体的荧光信号。该识别可以包括，例如，将具有特定激发波长和/或检测波长的像素或体素的测量强度与一组这样的预定组合比较，从而该比较指示组合所归属的识别结构体。因此，步骤q)可以包括：记录至少一个包含样品部分/片段的荧光数据的图像文件。此外，步骤w)中的标识可以包括以下步骤：w1)读出(并且优选)基准和/或图像元素的颜色和/或强度信息；和w2)将所述(并且优选)基准和/或图像元素的颜色和/或强度信息与代表标识结构体的颜色和/或强度信息进行比较。优选的是，借助于荧光显微镜技术使样品可视化。为了进一步处理信息，可以直接分析提供的图像。但是，优选将其保存。图像优选以数字方式保存；但是，图像也可以类似地记录。图像信息可以包括一个或多个图像元素的图示。图像元素是图像的一部分。图像元素可以是例如第二强度背景上的第一强度的扩展点或其他结构体。根据dna纳米结构体上荧光染料的选择，靶标结构体可以通过其颜色和/或强度来区分。优选的是，样品部分分别以每种颜色记录并保存在单独的图像中。但是，样品部分也可以同时以几种颜色记录，其中不同颜色的记录保存在共有图像或单独的图像中。这些步骤可以手动进行，也可以手动但由软件支持，也可以由分析软件自动进行。在手动分析中，知道要检测的靶标结构体的颜色和/或强度信息的使用者可以搜索和识别图像中的相应颜色和/或强度信息。可选地，使用者可以分析这种识别出的靶标结构体的数量和/或相应的位置信息。如果多色标识结构体中的颜色和/或强度信息存在于不同的图像中，则可以针对每种颜色(即，每个图像)分别分析图像元素，包括位置信息。随后，可以通过识别具有足够相似的位置信息的不同颜色的图像元素来识别有色元素。作为另选，首先，可以通过叠加各个单色图像来创建彩色图像。然后可以将彩色标识结构体标识为具有相应混合色的图像元素。必须注意，图像不必以真实颜色存储。当然，可以在以后的某个时间将颜色添加到图像中，无论是真实颜色还是假颜色。可以通过软件支持借助于图像分析软件，例如fiji等进行手动分析。朝着全自动分析的方向平稳过渡。通常，可以手动或使用软件执行任何单个步骤。本发明的一个方面涉及利用软件的分析，其中该分析具有噪声的应用的基于密度的空间聚类方法(densitybasedspatialclusteringofapplicationswithnoisemethod)(简称dbscan)。该描述基于待分析图像具有多个荧光元素的情况的应用。如果图像中仅存在一个荧光元素或不存在荧光元素，则该分析当然会以相同的方式进行。优选的是，为此目的而编程的分析软件是基于python的。基于python的分析软件会加载图像数据。优选的是，它确定图像框中的局部最大值。优选的是，根据所使用的物镜的放大率和数值孔径来调整图像盒的尺寸，并且例如为9至15个像素。优选的是，软件将梯度的累积绝对值计算为与背景无关的信号的测量值。为了区分具有和不具有dna纳米结构体的图像框，优选使用dbscan(具有噪声的应用的基于密度的空间聚类)(发布于：ester,martin；kriegel,hans-peter；sander,xu,xiaowei"adensity-basedalgorithmfordiscoveringclustersinlargespatialdatabaseswithnoise",proceedingsofthesecondinternationalconferenceonknowledgediscoveryanddatamining(kdd-96).aaaipress.pp.226–231(1996))。作为另选，可以使用其他聚类算法，例如hdbscan(ricardoj.g.b.campello,davoudmoulavi,joergsander；"density-basedclusteringbasedonhierarchicaldensityestimates",advancesinknowledgediscoveryanddatamining2013,pp.160-172),k-均值或层次聚类(rokach,lior,andodedmaimon."clusteringmethods."dataminingandknowledgediscoveryhandbook.springerus,2005.321-352)。可选地，将图像框分成梯度的累积绝对值的不同值的组，其对应于根据不同数量的荧光团的划分。如果借助于不同强度的识别结构体识别出不同的靶标结构体，则这尤其可能发生。由于它们的横向(x，y)位置，可以将具有颜色通道的dna纳米结构体的图像框与具有其他颜色通道的dna纳米结构体的所有图像框进行比较，以便识别彩色荧光元素，例如图片中的点。如果仅存在单一颜色的识别结构体，则当然完全不必这样做。该软件可以存储确定的单色点数量的值以及可选的它们在图像中的位置，以及多色点数量的值及可选的它们在图像中的位置，以供进一步使用。该软件还可以存储点的强度值。例如，与多色荧光元件相比，该软件可用于确定单色荧光元件的数量。例如，该软件可用于比较以带有或不带有靶标结构体的样品在实验中检测到的荧光元素的数量。这在所附的实施例1至3中进行了详细说明。由于在其生产过程中可能偶尔发生以及由于测量误差导致的每3d纳米结构体的彩色染料分子数量的变化，通常会面临例如强度分布。如果两个相邻的强度分布具有不可忽略的重叠，则可能仅仅由于身份测量而无法毫无疑义地得出确定恰好存在一个识别结构体。为了解决该问题，优选统计方法，通过该统计方法可以实现统计分配。这些分布可以沿强度或颜色梯度一维或多维地延伸，并且可以分别通过一个或多个测量值来描述，例如所提到的累积梯度、框上的平均值、框内的最大像素值或其他测量值。所测量的可选的多维分布是具有相同靶标结构体的识别结构体的混合分布。分析的目的是计算这些单独分布对混合物分布的贡献，从而确定不同的靶标结构体的相对数量。这些单独的分布既可以通过单独的测量来确定，也可以通过模型进行近似(例如高斯分布和/或泊松分布或它们的混合物，可能在不同维度上有所不同)。因此，可以通过反卷积或通过统计方法来计算不同的贡献，优选基于贝叶斯推论(参见d.s.sivia"dataanalysis,abayesiantutorial",oxfordsciencepublications,secondedition,isbn:0198568320和/或a.b.downey,"thinkbayes",o'reilly,sebastopolca,fourthedition2013isbn:9781449370787)。在这种情况下，有可能首先假设靶标结构体数量的均匀分布，然后从那里开始，针对每个测量事件，计算源自每个分布的概率，从而将假设更新为靶标结构体数量的分布。在具有足够高数量的识别结构体测量事件的情况下(超过50个，优选大于100个，特别优选大于1000个)，该方法独立于靶标结构体数量分布的初始假设。我们考虑到这样的情况：不同的纳米报告的强度分布是重叠的，并且仅通过统计学方法通过考虑方法步骤(h/ii)中所述的分布直方图才能清楚地区分彼此。这增加了分析的复杂性，因为对于每个测量事件，都将计算出要从各种纳米报告程序得出的概率，并且在更大的重叠度和相同数量的测量事件下，结果变得更加不确定。但是，由于降低了强度水平，因此可以增加不同的纳米报道分子组合的数量，从而增加靶标分子的数量。因此，在强度分布的重叠的大小与可同时定量的靶标分子的数量之间存在权衡。因此，可以为每种应用选择最佳配置。优选的是，为各个不同的靶标结构体形成的识别结构体的荧光信号与所有分离的3ddna纳米结构体(当它们没有结合在识别结构体之一中时)的荧光信号不同，并且为各个不同的靶标结构体形成的识别结构体的荧光信号也成对彼此不同，其成对的不同之处在于相应的荧光信号包括颜色和/或强度信息的不同的可区分组合。如上所述，“不同的可区分的组合”可以是可以在统计学上区分的组合，即，可区分性是通过统计方法来保证的。优选的是，在3ddna纳米结构体中，使用k个成对的(统计地)可区分的强度水平和/或m个成对的(统计地)可区分的颜色水平，其中优选的是，k个强度水平中每一个由强度分布形成，并且其中k个强度分布可以优选地在统计上彼此区分，和/或，其中优选的是，m个颜色等级中的每一个由颜色分布形成，并且其中m个颜色分布可以优选地在统计学上彼此区分。为此目的，相邻分布的重叠优选小于30％，优选小于10％，特别优选小于5％，特别优选小于2％，高度特别优选小于1％。在这种情况下，优选适用以下条件：k＞2，优选k＞3，更优选k＞4，甚至更优选k＞5，特别优选k＞6。此外，优选适用以下：m＞2，优选m＞3，更优选m＞4，甚至更优选m＞5，特别优选m＞6。进一步优选的是，步骤w1)包括以下步骤和/或技术中的一种或组合：确定图像元素的平均值，确定图像元素的最大值，计算累积梯度，计算一个或多个统计矩，诸如例如图像元素中像素的方差、变化系数、法诺因子。进一步优选的是，步骤w2)基于聚类方法，优选地基于dbscan(具有噪声的应用的基于密度的空间聚类)方法。进一步优选步骤w1)和/或w2)基于概率考虑，优选考虑贝叶斯定理。特别地，可以例如通过改变数量、距离或取向来不同地选择每个正交可测量类型的纳米报道分子和/或3ddna纳米结构体的强度等级。梯度可能很大，以至于由于诸如光子的泊松统计或不完全的标记物分子附着等因素而扩展的强度分布不会重叠。因此，分析简单，并且可以通过纳米报告子直接识别测量值。另一方面，梯度也可以较小，使得相邻强度梯度的强度分布重叠高达0.1至10％，甚至5至80％。然后，在测量之后，可以将正交测量结果的分布中的向量与预期的向量进行比较，并可以通过基于最小二乘或最大似然的方法确定靶标分子的相对频率。使用基于聚类的机器学习方法，无论是否包含预期的分布，都可以实现相同的靶标。还优选的是，将正交可测量的纳米报告子之一设计为固定的振幅值，其测量值可明显地与双振幅值之一区分开，并设计在每个靶标分子上。因此，可以直接测量测量事件中靶标分子的数量，这有助于检测和排除测量事件，这些测量事件是由与载体紧密结合的靶标结构体引起的。对于上述方法，优选的是，使用一组几个3ddna纳米结构体(其中3ddna纳米结构体优选地是如本申请中所述的那些)，其中该组包含彼此不同的n个3ddna纳米结构体，并且其中组中彼此不同的n个3ddna纳米结构体由于荧光染料分子而彼此成对不同。优选的是，彼此不同的n个3ddna纳米结构体包含不同数量的荧光染料分子和/或不同的荧光染料分子，从而可以通过该组的n个可区分的3ddna纳米结构体，产生k个可区分的强度水平和/或m个可区分的颜色水平。优选的是，n个可区分的3ddna纳米结构体的至少一部分被包含在组中几次，从而通过强度分布形成k个强度水平中的每一个，并且其中k个强度分布可相互区分，优选地是统计学上的相互区分。优选的是，n个不同的3ddna纳米结构体的至少一部分被包含在组中几次，从而通过颜色分布形成m个颜色水平中的每一个，并且其中m个颜色分布可彼此区分，优选地是统计学上的相互区分。相邻分布的重叠小于30％，优选小于10％，更优选小于5％，甚至更优选小于2％，特别优选小于1％。同样在该情况中，优选地适用以下：k＞2，优选地k＞3，更优选地k＞4，甚至更优选地k＞5，特别优选地k＞6；和/或m>2，优选m>3，更优选m>4，甚至更优选m>5，特别优选m>6。一方面，本发明涉及一种试剂盒，其包括：微孔阵列，优选已经描述的实施方式中的任何一个；至少两种3ddna纳米结构体，其中每个3ddna纳米结构体包含至少一种向内布置的荧光染料分子。3ddna纳米结构体优是上文或下文描述的选3ddna纳米结构体。特别地，本发明涉及一种试剂盒，其中至少一个3ddna纳米结构体包含至少2向内布置的荧光染料分子，并且其中至少两种向内布置的荧光染料分子的成对距离为至少2nm，优选至少5nm，并且特别优选至少9nm。本发明的一个方面涉及一种试剂盒，其被提供用于检测和/或定量多个不同的靶标结构体。优选的是，本发明的试剂盒因此包含一组多个3ddna纳米结构体，其中该组包含n个不同的3ddna纳米结构体，并且其中该组的n个不同的3ddna纳米结构体在荧光染料分子中彼此成对地不同。在本发明的方法中，至少一种荧光信号的测量可以通过荧光显微术进行，优选通过以下技术中的一种或组合进行：点扫描、宽视场显微镜、(旋转盘)共聚焦显微镜；两光子光谱、落射荧光、光片显微镜；tirf；其中优选每次发生借助于脉冲交错光源的交替激光激发(alex)或激发。利用所述dna纳米结构体或其他纳米报告子实现期望目的的示例性方法具有以下步骤或由以下步骤组成：a.对于每种类型的靶标结构体，分配一种或多种可正交测量的纳米报告子(例如，本发明的3ddna纳米结构体)的明确组合，以使每种类型的靶标结构体都可以以明确的方式被区分和识别。b.对于每种类型的靶标结构体，至少识别出与纳米报道分子一样多的结合区，并选择能够特异性地和明确地结合至结合区的接头，c.分配给一种靶标结构体的纳米报道分子和接头明确配对和偶联，d.可选地，未分配给纳米报告基因的接头与底部物、载体或基质偶联，e.将由纳米报道分子和接头组成的复合物与靶标结构体在溶液中孵育，f.由靶标分子，接头和纳米报告子组成的所得复合物用存在的标记物的测量仪器进行测量，使得只有在可接受的低概率下，超过1个的复合物才引起测量事件，g.没有最小数量正交信号的测量事件被滤除，h.其他测量事件是i.通过各个信号直接分配纳米报告子的组合，或ii.通过比较测量信号的测量分布和每个纳米报告子的预期分布，统计地分配从纳米报告子组合中得出的概率，或iii.通过基于簇的算法分配了从纳米报告子组合中得出的概率；i.靶标结构体的相对数目取决于所计算的纳米报告子组合的总数或其概率；和j.可选地，通过至少一种靶标结构体的已知绝对浓度或通过已知的测量体积，确定靶标结构体的绝对数量；和k.可选地，可以针对所有靶标结构体设计可以相对于所有其他纳米报告子正交测量的纳米报告子，使得其测量信号提供有关一个测量事件所基于的靶标结构体数目的信息。特别地，设想将本发明的方法和/或3ddna纳米结构体用于基因表达分析，优选用于单细胞水平的基因表达分析。为了以单水平分析基因表达，优选使用聚合物基质作为载体，其优选部分或完全包封宿主体。在这种情况下，识别结构体的形成优选包括：1)在微孔中提供宿主体；2)用聚合物基质(即载体)包裹宿主体；必须确保以如此快的方式生产聚合物基质，以使在破坏宿主体之前宿主体不会改变其靶标结构体组成，或者要确保产生聚合物基质，以使宿主体的靶标结构体组成不受此影响。后者例如可以通过使用低熔点琼脂糖来确保。3)破坏宿主体，例如在宿主体是细胞的情况下，通过裂解(例如通过超声、渗透或冷冻等以机械方式进行；或通过化学方式，例如通过修改ph值、引入edta、酶学(例如溶菌酶)、甲苯、triton-x或trizol进行处理，它们都会使细胞壁或细胞膜不稳定或诱导自溶)，从而使mrna从宿主体，例如细胞内释放。通过相应选择宿主体宿主体(例如细胞)的浓度和聚合物基质的密度，聚合物基质限制了从宿主体释放的靶标结构体的扩散，使得它们不会扩散出相应的微孔。优选的是，聚合物网络具有1μm至50μm，优选2μm至10μm的中等筛孔尺寸。这是为了限制扩散并为载体接头和/或载体接头结合位点提供足够的结合位点。载体接头和/或载体接头结合位点的成对最小距离基本上可以为200nm至10μm，优选500nm至5μm，特别优选2μm至3μm。在本文中，基本上是指至少80％，优选至少90％，并且特别优选至少99％的载体接头和/或载体接头结合位点具有相邻的载体接头和/或载体接头结合位点的至少上述的距离。为了分析单个宿主体的靶标结构体组成，可优选(a)用微孔中的聚合物基质部分或全部包覆细胞；(b)用能够与靶标分子结合的元素如互补寡核苷酸装饰聚合物基质；(c)破坏宿主体，使靶标结构体扩散并与装饰元素结合；(d)添加3ddna纳米结构体或其他元素，并在适当的孵育期后洗净；(e)例如在落射荧光、光片或共聚焦显微镜上成像样品，并如上所述进行分析。在此情况下，重要的是要牢记，与聚合物基质上的靶标结构体结合的元素的装饰密度应足够低，以使大多数复合物在图像中不重叠。用于聚合物基质的合适的起始材料特别是琼脂糖，但是也可以是胶原蛋白、dna或其他材料。在此，术语“细胞”包括所有生物有机体，特别是人类细胞、组织样品中的细胞、动物细胞、细菌、真菌、藻类。特别是，针对细胞描述的所有特征都可以比照适用于其他宿主体。术语“基质”包括由琼脂糖或其他物质制成的凝胶，其目的是：o限制靶标分子的扩散，以最大程度地减少由于扩散引起的微孔中靶标结构体的损失；o和/或为靶标结构体提供更多的锚点，以便可以分析每微孔更多的靶标结构体。具有单细胞准确性的基因表达分析可包括：1.将要分析的宿主体沉积在微孔阵列中。2.用聚合物基质包裹宿主体。3.破坏宿主体，以便释放靶标结构体。4.在载体(聚合物基质和/或微孔第一层和第二层的表面)上形成识别结构体。5.用相应的仪器检测识别结构体。6.对检测到的识别结构体和相应的靶标结构体进行分析，并将其分配给其原始宿主体。本发明特别涉及以下方面：1.一种检测靶标结构体的(优选定量)的方法，所述方法包括：p1)将包括具有靶标结构体的宿主体的一组宿主体引入微孔阵列，使得恰好一个宿主体存在于至少一个微孔中；p2)将至少两种3ddna纳米结构体引入所述至少一个微孔，其中每种所述3ddna纳米结构体包含一种或多种向内布置的荧光染料分子；a)在所述至少一个微孔中形成识别结构体，其包括：(i)所述靶标结构体，和(ii)所述至少两种3ddna纳米结构体，其中每个所述3ddna纳米结构体特异性结合于所述靶标结构体，并且其中所述3ddna纳米结构体结合于所述靶标结构体的成对的不同区域；b)通过测定至少一种荧光信号检测所述靶标结构体，其中，选择所述3ddna纳米结构体和所述荧光测量的参数，使得a)中形成的所述识别结构体的至少一个测得的荧光信号有别于每个所述至少两种分离的3ddna纳米结构体在未结合于识别结构体中时的所述荧光信号，其中所述识别结构体结合于第一表面，优选所述至少一个微孔的底部。2.如方面1所述的方法，其中靶标结构体包含或者是部分单链的多核苷酸，优选单链的多核苷酸，并且特别优选mrna。3.如前述方面中任一项所述的方法，其中识别结构体结合于载体，优选结合于载体的第一表面，和/或其中，所述方法还包括所形成的识别结构体结合于载体，优选结合于载体的第一表面的步骤。4.如方面3所述的方法，其中载体和/或载体的第一表面包含玻璃表面和/或聚合物表面和/或由玻璃表面和/或聚合物表面组成，其中载体和/或载体的第一表面被可选地钝化，和/或其中，载体包含聚合物网络，其优选包含以下材料之一或组合：生物聚合物、琼脂糖、胶原蛋白。5.如方面3或4所述的方法，其中载体是显微镜芯片或盖玻片。6.如方面3至5所述的方法，其中识别结构体与载体和/或载体的第一表面的键合和/或结合由靶标结构体介导和/或将介导。7.如方面6所述的方法，其中靶标结构体结合于和/或将结合于载体和/或载体的第一表面，其中键合和/或结合由特异性结合和/或将结合在靶标结构体上的载体接头介导。8.如方面7所述的方法，其中载体接头直接结合和/或将结合到载体或载体的第一表面。9.如方面7或8所述的方法，其中载体接头通过共价键或通过非共价键结合于和/或将结合于载体或载体的第一表面。10.如方面7至9中任一项所述的方法，其中载体接头经由生物素链霉亲和素键结合于和/或将结合于载体或载体的第一表面，其中载体接头包含生物素和载体和/或载体的第一表面包含链霉亲和素，或者其中载体接头包含链霉亲和素和载体和/或载体的第一表面包含生物素。11.如方面7至10中任一项所述的方法，其中靶标结构体是方面2的靶标结构体，并且其中载体接头是寡核苷酸或多核苷酸，设计其核酸序列，使得其特异性结合，优选通过杂交，结合至方面2的靶标结构体的核酸序列的第一单链的段。12.如方面7至10中任一项所述的方法，其中靶标结构体是具有聚-(a)尾的mrna，和，其中载体接头是寡核苷酸，设计其核酸序列，使得其特异性结合至mrna的聚-(a)尾。13.如方面3至12中任一项所述的方法，其中所述方法在a)之后和b)之前包括用缓冲溶液洗涤载体和/或第一载体表面。14.如前述方面中任一项所述的方法，其中一个，优选多个，并且特别优选所有3ddna纳米结构体设计用于直接结合靶标结构体的各区域(一个或多个)和直接结合至靶标分子。15.如前述方面中任一项所述的方法，其中至少一个，优选所有3ddna纳米结构体的特异性结合由分配至相应3ddna纳米结构体的靶标接头介导，其中靶标接头和/或每个靶标接头经设计以结合至各自的dna纳米结构体和结合至靶标结构体的各自的区域(一个或多个)，和/或其中，靶标接头和/或每个靶标接头包含或者是优选寡核苷酸或多核苷酸，特别优选dna。16.如方面15所述的方法，其中3ddna纳米结构体(一种或多种)包含至少一个单链的dna片段，该dna片段布置在纳米结构体上或其外，并且经设计从而使其特异性结合至各自的靶标接头。17.如方面15或16中任一项所述的方法，其中一个或多个靶标接头各自包含单链的dna片段，所述dna片段各自经设计从而使其介导特异性结合至各自的3ddna纳米结构体。18.如方面15至17中任一项所述的方法，其中一个或多个靶标接头各自包含靶标结合片段，所述靶标结合片段各自经设计从而使其介导特异性结合至靶标结构体的各自的区域(一个或多个)。19.如方面18所述的方法，其中靶标结构体是第2方面定义的靶标结构体，并且其中各自的靶标结合片段包含核苷酸序列，其特异性结合至靶标结构体的一个单链的片段。20.如方面18所述的方法，其中靶标结构体包含或者是蛋白质，并且其中各自的靶标结合片段包含特异性结合所述靶标结构体的蛋白质的肽，优选抗体。21.如前述方面中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括提供优选包含靶标结构体的水性样品溶液并提供至少两种3ddna纳米结构体，并且任选地进一步包括提供载体，载体接头和/或靶标接头，其中样品溶液优选包含细胞裂解物，从细胞悬液和/或组织提取的核酸和/或mrna。22.如前述方面中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括将包含靶标结构体的优选水溶液样品溶液与至少两种3ddna纳米结构体和可选地载体接头和/或靶标接头混合，其中样品溶液优选包含细胞裂解物，从细胞悬液和/或组织提取的核酸和/或mrna。23.如前述方面中任一项所述的方法，其中方法还额外适合于检测一个或多个彼此不同的其他靶标结构体，其中不同的靶标结构体成对不同，并且其中方法还包括：c)对于每个一个或多个彼此不同的其他靶标结构体：形成各自已分配的识别结构体，其中每个其他识别结构体包括：(i)分配的其他靶标结构体，和(ii)至少两种3ddna纳米结构体，其中至少两种3ddna纳米结构体中的每种包含一种或多种向内布置的荧光染料分子，并且其中至少两种3ddna纳米结构体中的每种特异性结合于各自的其他靶标结构体，和，其中至少两种3ddna纳米结构体结合于各自的靶标结构体的成对不同的区域；并且其中步骤b)还包括：d)通过测量至少一种荧光信号检测一个或多个其他靶标结构体，其中，选择所有3ddna纳米结构体和荧光测量参数，使得a)和c)中形成的所述识别结构体的至少一个测得的荧光信号有别于所有分离的3ddna纳米结构体(当这些未结合在各自的识别结构体中的一种中时)的荧光信号，和所形成的识别结构体的测得的荧光信号彼此可成对区分，其中每个不同的靶标结构体可存在多次，并且所述方法可包括对一个或多个不同的靶标结构体的多次检测。24.如方面23所述的方法，其中其他靶标结构体各自包含或者是部分单链的多核苷酸，优选单链的多核苷酸，并且特别优选mrna。25.如方面23或24中任一项所述的方法，其中至少一个，优选所有识别结构体结合于载体，优选结合于载体的第一表面，和/或其中所述方法还包括使至少一个，优选所有所形成的识别结构体(一种或多种)结合至载体，优选结合于载体的第一表面的步骤。26.如方面25所述的方法，其中载体表面包含或者是玻璃表面和/或聚合物表面并且可选地钝化和/或其中，载体包含聚合物网络，其优选包含以下材料之一或组合：生物聚合物、琼脂糖、胶原蛋白。27.如方面25或26所述的方法，其中载体是显微镜芯片或盖玻片。28.如方面25至27所述的方法，其中至少一个，结合/将结合至载体和/或载体的第一表面至少一个，优选所有识别结构体(一种或多种)的结合和/或结合经由各自的靶标结构体介导和/或将介导。29.如方面28所述的方法，其中各自的靶标结构体与载体和/或载体的第一表面的键合和/或结合由特异性结合各自的靶标结构体的各自已分配的载体接头介导。30.如方面29所述的方法，其中各自的载体接头直接结合和/或将结合至载体或载体的第一表面。31.如方面29或30所述的方法，其中各自的载体接头通过共价键或通过非共价键结合和/或将结合至载体或载体的第一表面。32.如方面29至31中任一项所述的方法，其中各自的载体接头经由生物素-链霉亲和素键结合于和/或将结合于载体或载体的第一表面，其中各自的载体接头包含生物素和载体和/或载体的第一表面包含链霉亲和素，或者其中各自的载体接头包含链霉亲和素和载体和/或载体的第一表面包含生物素。33.如方面29至32中任一项所述的方法，其中各自的靶标结构体是方面2的靶标结构体，并且其中各自的载体接头是多核苷酸或寡核苷酸，设计其核酸序列，使得其特异性结合至方面2的各自的靶标结构体核酸序列的第一单链的段。34.如方面29至33中任一项所述的方法，其中与载体和/或载体的第一表面结合的靶标结构体是具有聚-(a)尾的mrna，并且其中所述结合的靶标结构体(一种或多种)的各自的载体接头是寡核苷酸，设计其核酸序列，使得其特异性结合至mrna的聚-(a)尾。35。如方面23至34中任一项所述的方法，其中a)和c)在一个步骤中，优选同时进行。36.如方面25至35中任一项所述的方法，其中所述方法在a)和c)之后以及在b)之前，进一步包括用缓冲溶液洗涤载体和/或第一载体表面。37.如方面23至36中任一项所述的方法，其中一个，优选多个，并且特别优选所有3ddna纳米结构体设计用于直接结合靶标结构体的各区域(一个或多个)和直接结合至靶标分子。38.如方面23至37中任一项所述的方法，其中至少一个，优选所有3ddna纳米结构体(一种或多种)特异性结合由分别已分配的靶标接头介导，其中靶标接头和/或每个靶标接头经设计以结合至各自的dna纳米结构体且结合至各自的靶标结构体的各自的区域(一个或多个)。39.如方面38所述的方法，其中至少一个，优选所有的3ddna纳米结构体(一种或多种)包含至少一个单链的dna片段，该dna片段布置在纳米结构体上或其外，并且经设计从而使其特异性结合至各自的靶标接头。40.如方面38或39中任一项所述的方法，其中一个或多个靶标接头各自包含单链的dna片段，所述dna片段各自经设计从而使其介导特异性结合至各自的3ddna纳米结构体。41.如方面38至40中任一项所述的方法，其中一个或多个靶标接头各自包含靶标结合片段，所述靶标结合片段各自经设计从而使其介导特异性结合至靶标结构体的各自的区域(一个或多个)。42.如方面23至41中任一项所述的方法，其中所有靶标结构体存在于同一样品中，并且优选地以样品溶液提供。43.如前述方面中任一项所述的方法，其中使用荧光显微镜法测量至少一种荧光信号优选地通过以下技术中的一种或组合来进行：点扫描、宽视场显微镜、(旋转盘)共聚焦显微镜；其中，优选的是，脉冲交替地进行交替激发(alex)或使用脉冲光源的激发。44.如方面1、2、14至24、35或37至42中任一项所述的方法，其中所述至少一种荧光信号的测量优选通过流式细胞术和/或荧光相关光谱法(fcs)进行，优选通过以下一种技术或以下技术的组合：共聚焦显微镜、双光子光谱、落射荧光、光片显微镜、tirf；其中，优选的是，脉冲交替地进行交替激发(alex)或使用脉冲光源的激发。45.如前述方面中任一项所述的方法，其中识别结构体或至少一个和/或所有的识别结构体形成多次。46.一种检测至少两种不同的靶标结构体的方法，其中至少两种不同的靶标结构体可相互成对区分，并且所述方法包括：p1)将一组宿主体引入微孔阵列，使得恰好一个宿主体存在于至少一个微孔；其中对于每个靶标结构体，宿主体组包含具有相关靶标结构体的至少一个宿主体；p2)将至少两种3ddna纳米结构体引入至少一个微孔，其中每种3ddna纳米结构体包含一种或多种向内布置的荧光染料分子；a)对于至少两种不同的靶标结构体中的每一个，形成各自的识别结构体，其包括：(i)各自的靶标结构体，和(ii)至少两种3ddna纳米结构体，其中至少两种3ddna纳米结构体中的每种包含一种或多种向内布置的荧光染料分子，并且其中至少两种3ddna纳米结构体中的每种特异性结合于各自的靶标结构体，并且其中至少两种3ddna纳米结构体结合于各自的靶标结构体的成对的不同区域；b)通过测量至少一种荧光信号检测一个或多个不同的靶标结构体，其中，选择所有3ddna纳米结构体和荧光测量参数，使得a)中形成的识别结构体的至少一个测得的荧光信号有别于所有分离的3ddna纳米结构体在未结合于识别结构体中时的荧光信号，并且对于各靶标结构体所形成的不同的识别结构体的测得的荧光信号可相互成对区分，其中每个不同的靶标结构体可存在多次，并且所述方法可包括对一个或多个不同的靶标结构体的多次检测。47.如方面46所述的方法，其中至少两种靶标结构体存在于同一样品中。48.如方面1所述的方法，其中至少一个，优选每个靶标结构体包含或者是部分单链的多核苷酸，优选单链的多核苷酸，并且特别优选mrna。49.如方面46至48中任一项所述的方法，其中至少一个，优选所有识别结构体(一种或多种)结合于载体，优选结合于载体的第一表面，和/或其中，所述方法还包括将至少一个，优选所有所形成的识别结构体(一种或多种)结合于载体，优选结合于载体的第一表面的步骤。50.如方面49所述的方法，其中载体和/或载体的第一表面包含玻璃表面和/或聚合物表面或由玻璃表面和/或聚合物表面组成，并且可选地钝化。51.如方面49或50所述的方法，其中载体是显微镜芯片或盖玻片。52.如方面49至51所述的方法，其中至少一个，优选结合/将结合的至少一个，优选所有识别结构体(一种或多种)与载体和/或载体的第一表面的键合和/或结合由靶标结构体介导或将介导。53.如方面52所述的方法，其中各自的靶标结构体结合于和/或将结合于载体和/或载体的第一表面，其中键合和/或结合由异性结合和/或将结合在各靶标结构体上的载体接头介导。54.如方面53所述的方法，其中各自的载体接头直接结合和/或将结合到载体或载体的第一表面。55.如方面53或54所述的方法，其中各自的载体接头通过共价键或通过非共价键结合和/或将结合于载体或载体的第一表面。56.如方面53至55中任一项所述的方法，其中各自的载体接头经由生物素-链霉亲和素键结合和/或将结合至载体或载体的第一表面，其中各自的载体接头包含生物素和载体和/或载体的第一表面包含链霉亲和素，或者其中各自的载体接头包含链霉亲和素和载体和/或载体的第一表面包含生物素。57.如方面53至56中任一项所述的方法，其中各自的靶标结构体是方面2的靶标结构体，并且其中各自的载体接头是寡核苷酸，设计其核酸序列，使得其特异性结合至方面2的各靶标结构体的核酸序列的第一单链的段。58.如方面53至57中任一项所述的方法，其中与载体和/或载体的第一表面结合的靶标结构体(一种或多种)是具有聚-(a)尾的mrna，并且其中所结合的靶标结构体的各自的载体接头是寡核苷酸，设计其核酸序列，使得其特异性结合至mrna的聚-(a)尾。59.如方面49至58中任一项所述的方法，其中所述方法在a)之后和b)之前包括用缓冲溶液洗涤载体和/或第一载体表面。60.如方面46至59中任一项所述的方法，其中一个，优选多个，并且特别优选所有3ddna纳米结构体设计用于直接结合各靶标结构体的各区域(一个或多个)和直接结合至靶标分子。61.如方面46至60中任一项所述的方法，其中至少一个，优选所有3ddna纳米结构体(一种或多种)特异性结合由分别已分配的靶标接头介导，其中靶标接头和/或每个靶标接头经设计以结合至各自的dna纳米结构体和结合至各自的靶标结构体的各自的区域(一个或多个)。62.如方面61所述的方法，其中至少一个，优选所有的3ddna纳米结构体(一种或多种)包含至少一个单链的dna片段，该dna片段向外放置，并且经设计从而使其特异性结合至各自的靶标接头。63.如方面61或62中任一项所述的方法，其中一种或多种靶标接头各自包含单链的dna片段，所述dna片段各自经设计从而使其介导特异性结合至各自的3ddna纳米结构体。64.如方面61至63中任一项所述的方法，其中一种或多种靶标接头各自包含靶标结合片段，所述靶标结合片段各自经设计从而使其介导特异性结合至各自的靶标结构体的各自的区域(一个或多个)。65.如方面64所述的方法，其中所述至少两种靶标结构体中的第一个是如方面48中定义的靶标结构体，并且其中与第一靶标结构体结合的靶标结合接头的靶标结合区段包含核苷酸序列，其特异性结合至第一靶标结构体的一个单链区段。66.如方面65所述的方法，其中方面63的特征还适用于所有其他靶标结构体和相应靶标结合接头的相应靶标结合片段。67.如方面64所述的方法，其中至少两种靶标结构体中的第一个包含或为蛋白质，并且其中与第一靶标结构体结合的靶标结合接头的靶标结合区段包含特异地结合第一靶标结构体的肽，优选抗体。68.如方面67所述的方法，其中方面63的特征还适用于所有其他靶标结构体和相应靶标结合接头的相应靶标结合片段。69.如方面46至68中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括提供样品溶液，其包含至少两种靶标结构体，并且其包括提供至少两种3ddna纳米结构体，并且任选地还包括提供载体，载体接头(一种或多种)和/或靶标接头(一种或多种)。70.如方面46至69中任一项所述的方法，其中所述方法还包括将包含所述至少两种靶标结构体的样品溶液与至少两种3ddna纳米结构体和可选地载体接头(一种或多种)和/或靶标接头(一种或多种)混合。71.如前述方面中任一项所述的方法，其中测量至少一种荧光信号包括：q)创建数据集，其包含通过使用荧光显微镜，优选地在落射荧光、tirf、光片和/或共焦显微镜中由样品的一部分发射的荧光信号的数据；并且其中检测靶标结构体和/或一个或多个其他靶标结构体包括：w)识别数据集中包含的一个或多个基准，这些基准表示其中一个识别结构体的荧光信号。72.如方面71所述的方法，其中步骤q)包括：记录至少一个包含样品部分荧光数据的图像文件。73.如方面71或72所述的方法，其中步骤w)中的识别包括以下步骤：w1)读出基准和/或图像元素的颜色和/或强度信息；和w2)将基准和/或图像元素的颜色和/或强度信息与代表识别结构体的颜色和/或强度信息进行比较。74.如方面73所述的方法，其中其中步骤w)中的识别包括以下步骤：w1)读出数据和/或图像元素的颜色和强度信息；和w2)将基准和/或图像元素的颜色和强度信息与代表识别结构体的颜色和强度信息进行比较。75.如方面73或74所述的方法，其中为单个不同的靶标结构体形成的识别结构体的荧光信号不同于所有分离的3ddna纳米结构体在未结合于识别结构体中的一个中时的荧光信号，并且针对各个不同的靶标结构体形成的识别结构体的荧光信号成对地不同，因为相应的荧光信号包括颜色和/或强度信息的可区分地不同的组合。76.如方面75所述的方法，其中在3ddna纳米结构体中，使用彼此可区分的k个强度水平和/或彼此可区分的m个颜色水平，其中优选的是，k个强度水平中的每一个通过强度分布形成，并且其中k个强度分布可相互区分，优选统计地区分，和/或其中优选的是，m个颜色等级中的每一个由颜色分布形成，并且其中m个颜色分布可彼此区分，优选统计地区分，其中相邻分布的各自重叠优选小于30％，更优选小于10％，甚至更优选小于5％，特别优选小于2％，高度特别优选小于1％。77.如方面76所述的方法，其中k>2，优选k>3，更优选k>4，甚至更优选k>5，特别优选k>6。78.如方面76或77所述的方法，其中m>2，优选m>3，更优选m>4，甚至更优选m>5，特别优选m>6。79.如方面73至78中任一项所述的方法，其中步骤w1)包括以下步骤和技术中的一种或组合：确定图像元素的平均值，确定图像元素的最大值，计算累积梯度，计算一个或多个统计矩，例如图像元素中像素的方差、方差系数、fano因子；和/或其中步骤w2)基于聚类方法，优选dbscan(具有噪声的应用的基于密度的空间聚类方法)执行；和/或其中步骤f1)和/或f2)是基于概率观察的，优选考虑贝叶斯定理。80.一种3ddna纳米结构体，其上附着有至少一种荧光染料分子，其中3ddna纳米结构体的形状可防止在接近第二3ddna纳米结构体(其上附着有至少一种荧光染料分子)时，两个3ddna纳米结构体的荧光染料分子显著相互作用。81.如方面80所述的3ddna纳米结构体，其中所述相互作用包括淬灭和/或fret。82.如方面80或81所述的3ddna纳米结构体，其中至少两种荧光染料分子附着在3ddna纳米结构体上，并且其中至少两种荧光染料分子之间的距离成对大于它们显著相互作用的距离。83.如方面80至82中任一项所述的3ddna纳米结构体，其中所述3ddna纳米结构体基本上形成为中空圆筒，并且其中所述至少一种荧光染料分子或所述至少两种荧光染料分子附着在圆筒dna纳米结构体内部。84..一种具有腔和至少一种向内布置的荧光染料分子的3ddna纳米结构体，其中所述至少一种向内布置的荧光染料分子与所述3ddna纳米结构体的边缘的距离为至少2nm，优选至少3nm，并且特别优选至少5nm。85.如方面84所述的3ddna纳米结构体，其中3ddna纳米结构体包含至少两种向内布置的荧光染料分子，并且其中该至少两种向内布置的荧光染料分子的距离是至少2nm，优选至少5nm，并且特别优选至少9nm。86.如方面80至85中任一项所述的3ddna纳米结构体，其中该3ddna纳米结构体基本上形成为椭圆形中空圆筒，优选形成为圆形中空圆筒。87.如方面86所述的3ddna纳米结构体，其中所述中空圆筒是圆筒，并且内半径为至少5nm，优选为30nm至60nm，特别优选为60nm，和/或高度为至多200nm，优选30nm至60nm，特别优选30nm。88.如方面86至87中任一项所述的3ddna纳米结构体，其中所述中空圆筒的壁厚为至少2nm，优选为2nm至7nm，特别优选为5nm，和/或其中所述中空圆筒包含具有螺旋直径的dna螺旋，并且其中壁厚测量为至少一个，优选至少两种螺旋直径，和/或其中壁厚测量为至多四个，优选至多三个螺旋直径。89.如方面80至88中任一项所述的3ddna纳米结构体，其中3ddna纳米结构体包含单链的dna脚手架链，其至少3000个碱基，优选5000–50000个碱基，特别优选10000–11000个碱基，其中dna脚手架链优选环形。90.如方面89所述的3ddna纳米结构体，其中3ddna纳米结构体还包含多个钉链，优选包含100至500个钉链，每个钉链优选30至100个碱基。91.如方面90所述的3ddna纳米结构体，其中向内布置的荧光染料分子之一结合至钉链的向内布置的片段，优选的是，其中每个向内布置的荧光染料分子结合于钉链的各自的向内布置的片段。92.如方面89至91中任一项所述的3ddna纳米结构体，其进一步包含至少一种向内布置的单链染料接头dna寡聚物，其经设计以使其特异性结合至脚手架链或钉链之一的向内布置的单链序列片段，并且其中至少一个染料接头dna寡聚物包含向内布置的染料分子之一。93.如方面92所述的3ddna纳米结构体，其中钉链的向内布置的单链的序列片段是突出端，其向内布置并且对于3ddna纳米结构体的组装不是必需的。94.如方面80至93中任一项所述的3ddna纳米结构体，其中3ddna纳米结构体包含单链的dna片段，该单链的dna片段可特异性结合靶标结构体，优选结合多核苷酸靶标结构体，并且特别优选结合单链的多核苷酸靶标结构体。95.如方面80至94中任一项所述的3ddna纳米结构体，其中3ddna纳米结构体还包含至少一个靶标接头，其中靶标接头可以介导与靶标结构体的特异性结合。96.如方面95所述的3ddna纳米结构体，其中靶标接头包含第一单链的多核苷酸序列，并且其中第一单链的多核苷酸序列结合于3ddna纳米结构体的单链的序列片段，优结合于脚手架链或钉链之一的单链的序列片段，并且特别优选结合于钉链之一的单链的序列片段。97.如方面95或96所述的3ddna纳米结构体，其中靶标接头还包含可特异性结合靶标结构体的靶标结合片段。98.如方面97所述的3ddna纳米结构体，其中靶标结合片段包含或者是第二单链的多核苷酸序列，并且其中靶标结构体包含单链的多核苷酸，优选mrna。99.如方面97所述的3ddna纳米结构体，其中靶标结合片段包含特异性结合所述靶标结构体的蛋白质，优选抗体或抗体的抗体结合片段。100.如方面95至99中任一项所述的3ddna纳米结构体，其中靶标接头，优选至少靶标结合片段向外。101.如方面80至100中任一项所述的3ddna纳米结构体，其中3d纳米结构体不包含向外定位的荧光染料分子。102.如方面80至101中任一项所述的3ddna纳米结构体在如方面1至79中任一项所述的方法中的应用。103.一种组，其包含多个方面80至101中任一项所述的3ddna纳米结构体，其中所述组包含彼此不同的n个3ddna纳米结构体，并且其中所述组的n个不同的3ddna纳米结构体由于荧光染料分子而成对彼此不同。104.如方面103所述的组，其中彼此不同的n个3ddna纳米结构体包含不同数目的荧光染料分子和/或不同的荧光染料分子，使得通过彼此不同的该组的n个3ddna纳米结构体，可产生k个彼此可区分的强度水平和/或m个彼此可区分的颜色水平。105.如方面104所述的组，其中所述组中多次包含彼此不同的n个3ddna纳米结构体的至少一部分，从而通过强度分布形成k个强度水平中的每一个，并且其中k个强度分布可彼此区分，优选统计上可区分。106.如方面105或106所述的组，其中所述组中多次包含彼此不同的n个3ddna纳米结构体的至少一部分，从而通过颜色分布形成m个颜色水平中的每一个，并且其中m个颜色分布可彼此区分，优选在统计学上可区分。107.如方面105或106所述的组，其中相邻分布的重叠小于30％，优选小于10％，更优选小于5％，甚至更优选小于2％，特别优选小于1％。108.如方面104至107中任一项所述的组，其中k>2，优选k>3，更优选k>4，甚至更优选k>5，特别优选k>6。109.如方面104至108中任一项所述的组，其中m>2，优选m>3，更优选m>4，甚至更优选m>5，特别优选m>6。110.如方面103至109中任一项所述的组在如方面1至79中任一项所述的方法中的应用。在下文中，参考附图更详细地解释本发明的优选实施方式。附图显示：图1示意性地示出了基因表达分析的示例性情况的本发明的基本原理；图2示意性地示出了根据本发明方法的优选实施方式的单细胞基因表达分析的过程；图3是实验结果；和图4是根据优选实施方式的3ddna纳米结构体；图5示意性地示出了优选实施方式的微孔阵列；图6示意性地示出了优选实施方式的微孔微孔腔室；和图7示意性地示出了用于单细胞基因表达分析的方法步骤。图1示意性地示出了基因表达分析的示例性情况的本发明的基本原理。如图所示，通过弯曲和/或滚动形成圆筒壁的2ddna纳米结构体1a，形成所示情况的具有向内布置的荧光染料分子1b(距离为1c)的圆筒形3ddna纳米结构体1d(见图1的上图)，并通过其形式的相应的钉链稳定圆筒壁和圆筒。该圆筒包括与其偶联的接头1f，通过该接头1d，3ddna纳米结构体1d可以与靶标结构体1g结合(参见图1的下图)，在这种情况下通过杂交与mrna结合。附图标记物1h例如表示用于3ddna纳米结构体和靶标结构体的特异性结合的watsoncrick碱基配对。所指示的顺序仅是示例性地说明了机制，并不反映实际顺序。靶标结构体通过接头耦合到基体1j的可选情况用方括号1i表示。在图1的下图，以示例性方式将三个3ddna纳米结构体1e结合至靶标结构体1g，其中在荧光条件下测量的三个3ddna纳米结构体1e的强度彼此不同，用“亮”、“弱”和“中等”表示，并且是由3ddna纳米结构体中存在的荧光分子数量不同引起的。图2示意性地示出了根据本发明方法的优选实施方式的单细胞基因表达分析的过程。由第二层2j限制的微孔2a中的单个细胞2c(在此，宿主体是细胞)位于聚合物基质2b的下方和/或之中。放大到聚合物基质中(请参见下面的图)显示了该基质的聚合物细丝2g，载体接头2h位于其上。在步骤1和步骤2之间，将细胞裂解，以使靶标结构体例如mrna(2d)以及其他细胞成分(2e)可以自由移动。靶标结构体结合至载体接头并形成靶标结构体-载体接头复合体2i。在步骤3中，其他一些细胞成分被洗掉。步骤4显示了添加的3ddna纳米结构体2f和与靶标结构体结合的靶标接头。由于载体接头的高局部密度，可以特别好地捕获单个细胞的靶标结构体。特别地，聚合物基质阻止靶标结构体从其微孔中扩散和/或扩散到其他微孔中。然而，由于聚合物基体的三维性，可以例如通过使用共聚焦显微镜以令人满意的方式彼此分开地对密集排列的识别结构体进行成像。图4a示意性地示出了根据优选实施方式的中空圆筒形式的3ddna纳米结构体，该中空圆筒的直径d为60nm，高度h为30nm。在所示的示例中，圆筒由22个直径约为2nm的dna双螺旋组成，每个圆圈代表一个螺旋的横截面。可以很容易地看出，中空圆筒的壁的外表面是不光滑的(或者甚至在数学上是完美的)。而是，壁的外表面在圆周方向上包括凸起和凹陷。内壁也是如此。螺旋以这样的方式布置在栅格状或蜂窝状结构体上，使得壁厚b对应于大约2.5螺旋直径(或大约5nm)。图5.1以平面图示出了根据本发明的微孔阵列的示意图。图5.2示出了沿着标记物s穿过图5.1的微孔阵列的截面。微孔阵列在底部包括第1(第一)层5a。第一层优选是显微镜盖玻片，优选适合于荧光显微镜的盖玻片。第一层的材料优选包括玻璃，但是也可以包括塑料。在第一层上，施加第2(第二)层5b，其形成微孔6c的周向壁6e。因此，微孔5c形成为第二层5b中的凹部。微孔5c在此以矩形轮廓示出，即矩形底部5f和垂直于其的圆周壁5e。微孔5c的底部5f由第一层5a形成，在此为显微镜盖玻片。在顶部，即在第二层5b上方，微孔5c是敞开的。深度5h也显示在图5.2中。然而，如已经描述的，微孔5c也可以采用完全不同的形式。特别是对于具有不规则形成的轮廓的微孔，微孔的尺寸可以通过内接圆5d的直径或通过指示微孔5c的体积来指示。微孔的圆周壁5b不必垂直于其底部5f。圆周壁5e也可以相对于底部5f成角度≠90°。重要的是，周向壁5b相对于底部5f的倾斜度足以将宿主体(其在重力的作用下朝向微孔5c的底部5f下沉)转移至微孔5c的底部5f。优选的是，角度相对于底部5f的垂线偏离±15°或更小，更优选±10°或更小，更优选±5°或更小，特别优选±2°或更小。图6.1以平面图示出了根据本发明的微孔腔室的示意图。图6.2示出了根据标记物s的通过图6.1的微孔腔室的截面的示意图。在所示的实施方式中，微孔腔包括盖玻片的第1(第一)层6a，优选的是，该盖玻片的第1(第一)层6a适合用于显微镜，特别是用于荧光显微镜。第一层优选由玻璃组成，但是也可以由塑料组成。在第一层6a上涂布第2(第二)层6b。第二层6b包括凹部6g。凹部6g在其底部被第一层限制。由此，形成微孔，每个微孔包括由第一层6a形成的底部和由第二层6b形成的周壁。微孔在顶部敞开。第一和第二层一起形成微孔阵列。在图6所示的实施例中，在第二层6b和/或微孔阵列的顶侧上附着了第3(第三)层6c。第三层6c包括腔6f。腔6f在微孔附近延伸并穿过微孔。因此，给出了第三层6c的腔6f和微孔阵列的顶部开口的微孔之间的直接连接。这产生了工作腔，该工作腔包含第三层的腔6f和微孔。第一层、第二层和第三层将工作腔与周围环境隔离。工作腔与周围环境之间的预期连接以入口6d和出口6e的形式提供。经由入口6d，该方法所需的液体可以被添加到工作空间中，并且因此被施加到微孔阵列。多余的液体体积，尤其是空气，可能会通过出口6e流出。由此，确保了液体的顺序添加和冲洗。图7示出了根据本发明的一系列方法步骤的示意图。在图7.1中，将一组宿主体7a引入微孔阵列7b中。优选的是，通过使宿主体7a存在于合适的液体中并且将宿主体液体施加到微孔阵列的顶侧上来完成。在该步骤中，宿主体7a优选以各个宿主体7a不彼此附着的形式使用。宿主体7a在本文中以示例性方式示出为细胞。在图7.2中，施加到微孔阵列的宿主体7a在重力的影响下落入单个微孔7c中并沉入底部。为此所需的孵育时间取决于微孔的深度和所用的宿主体7a以及所用液体的粘度。技术人员将容易地找到合适的潜伏期。为此，每个微孔可以不被一个或多于一个的宿主体7a占据。为了以后进行评估，每个微孔优选地被恰好一个宿主体7a占据。为了确保这种条件，分析微孔的内容物。这可以例如借助于明视野显微镜和/或任何其他合适的成像技术来进行。那些包含几个或没有细胞的微孔7d在图中用x标识，并从随后的分析中排除。在随后的分析中考虑了那些恰好包括一个宿主体7a的微孔7c(图中未附加标识)。在图7.3中，通过添加破坏缓冲液7e(在此为裂解缓冲液)来破坏宿主体7a(在此为细胞)。以这种方式，释放存在于宿主体7a中的靶标结构体7f。释放的靶标结构体7f结合到微孔7c的底部。所述结合可以由载体接头介导，所述载体接头各自结合底部结构体和靶标结构体。随后，在图7.4中添加了3ddna纳米结构体7g。将3ddna纳米结构体调整为一个或多个要分析的靶标结构体。选择3ddna纳米结构体，使得对于一个或多个彼此不同的靶标结构体中的每一个，可以形成分别分配的识别结构体，其中每个识别结构体包括各自分配的靶标结构体和至少两种3ddna纳米结构体，其中至少两种3ddna纳米结构体中的每种均包含一种或多种向内布置的荧光染料分子，并且其中至少两种3ddna纳米结构体中的每种都与各自的靶标结构体特异性结合，并且其中至少两种3ddna纳米结构体为结合到相应靶标结构体的成对的不同区域。图7.5示意性地示出了用显微镜的分析，其中仅示出了物镜7i。在此，仅分析先前在图7.2中批准用于分析的微孔7c。该分析是通过荧光显微镜进行的。选择3ddna纳米结构体7g和荧光测量的参数，使得识别结构体的至少一个测得的荧光信号有别于所有分离的3ddna纳米结构体在未结合于识别结构体之一中时的荧光信号，并且使得所有成对不同的识别结构体的测得的荧光信号可成对彼此区分。当然，每个不同的靶标结构体可以多次出现，从而每个不同的靶标结构体的信号可以多次出现在荧光测量中。以下非限制性实施例用于说明本发明。实施例1：本发明3d纳米结构体的制备1.所制备3ddna纳米结构体的描述以三种不同的染料变体(即，变体3d_1、3d_2和3d_3)制备具有中空圆筒形式的3ddna纳米结构体，每个圆筒具有60个向内布置的染料分子，与相同3ddna纳米结构体中的相邻染料分子之间的成对距离至少为9nm：·3ddna纳米结构体变体3d_1：红色荧光：3d_1dna纳米结构体包含60个向内布置的dna钉链，钉链具有与用于红色染料的荧光团接头互补的额外单链序列(指定为序列s1)，以及60个相关的荧光团接头，每一个均配有atto647n染料分子(寡聚物seq_id_no1259)。在设计程序cadnano中，根据以下标准选择了要延伸用于荧光团接头结合的钉链，即：它们位于中空圆筒内，且距中空圆筒的边缘的距离大于2nm，在中空圆筒的内表面上有自由端，并且彼此之间的距离大于5nm(由于设计和序列长度的关系，后一种情况适用于所有满足上述条件的钉链)。染料接头在3'端进行了染料修饰。选择该末端是为了确保染料尽可能靠近中空圆筒的内表面，并且具有很小的回旋余地，因此可以使彼此之间的接触尽可能少。几种修改/染料接头都是可以想到的，但是，这将意味着更高的成本和对位置控制的一定程度损失。此外，为3d_1纳米结构体布置有t1靶标接头(寡聚物seq_id_no1263)。在以下定义寡聚物池3d_s1中总结了用于3d_1纳米结构体的所有钉链的seqidno。链p7308(seqidno1258)用作脚手架链。·3ddna纳米结构体变体3d_2：绿色荧光：3d_2dna纳米结构体包含60个向内布置的dna钉链，钉链具有与用于红色染料的荧光团接头互补的额外单链序列(指定为序列s2)，以及60个相关的荧光团接头，每一个均配有atto565染料分子(寡聚物seq_id_no1260)。在设计程序cadnano中，根据以下标准选择了要延伸用于荧光团接头结合的钉链，即：它们位于中空圆筒内，且距中空圆筒的边缘的距离不超过2nm，在中空圆筒的内表面上有自由端，并且彼此之间的距离大于5nm(由于设计和序列长度的关系，后一种情况适用于所有满足上述条件的钉链)。染料接头在3'端进行了染料修饰。选择该末端是为了确保染料尽可能靠近中空圆筒的内表面，并且具有很小的回旋余地，因此可以使彼此之间的接触尽可能少。几种修改/染料接头都也是可以想到的，但是，这将意味着更高的成本和对位置控制的一定程度损失。为3d_2纳米结构体布置有t2靶标接头(寡聚物seq_id_no1264)。在以下定义寡聚物池3d_s2中总结了用于3d_2纳米结构体的所有钉链的seqidno。链p7308(seqidno1258)用作脚手架链。·3ddna纳米结构体变体3d_3：蓝色荧光：3d_3dna纳米结构体包含60个向内布置的dna钉链，钉链具有与用于红色染料的荧光团接头互补的额外单链序列(指定为序列s3)，以及60个相关的荧光团接头，每一个均配有atto488染料(寡聚物seq_id_no1261)。在设计程序cadnano中，根据以下标准选择了要延伸用于荧光团接头结合的钉链，即：它们位于中空圆筒内，且距中空圆筒的边缘的距离不超过2nm，在中空圆筒的内表面上有自由端，并且彼此之间的距离大于5nm(由于设计和序列长度的关系，后一种情况适用于所有满足上述条件的钉链)。染料接头在3'端进行了染料修饰。选择该末端是为了确保染料尽可能靠近中空圆筒的内表面，并且具有很小的回旋余地，因此可以使彼此之间的接触尽可能少。几种修改/染料接头都也是可以想到的，但是，这将意味着更高的成本和对位置控制的一定程度损失。为3d_3纳米结构体布置有t3靶标接头(寡聚物seq_id_no1265)。在以下定义寡聚物池3d_s3中总结了用于3d_3纳米结构体的所有钉链的seqidno。链p7308(seqidno1258)用作脚手架链。所有的dna寡聚物(以及提供有荧光染料的dna寡聚物)均购自eurofinsgenomicsgmbh。实施例1的3ddna纳米结构体的图示在上面已经讨论过的图5中示出。图5a示出了3ddna纳米结构体3d_1、3d_2和3d_3的示意图，它们仅在所附着的荧光染料分子的类型方面不同。图5b示出了被切割和展开(出于说明目的)的图5a的中空圆筒，其中图5a的中空圆筒的内表面以平面图示出。每个x代表荧光染料分子。在最邻近的成对染料分子之间，距离a为9nm。在其他染料分子之间，成对的距离(例如，距离g)更大。染料分子各自位于图5a的最里面的螺旋，以使染料分子与中空圆筒外缘的距离大致对应于圆筒壁的壁厚，即约2.5螺旋直径(约等于5nm)。2.制备方案：在本实施例中，3ddna纳米结构体3d_1-3根据以下所述的制备方案制备。为了制备3ddna纳米结构体3d_1、3d_2和3d_3，首先混合以下组分，以获得最终体积200μl：·10nmp7308脚手架链(seqidno1258)·100nm的每个钉链(寡聚物池3d_s1的seqidno用于dna纳米结构体3d_1，寡聚物池3d_s2的seqidno用于dna纳米结构体3d_2，并且寡聚物池3d_s3的seqidno用于dna纳米结构体3d_3)·120nm荧光染料修饰的dna低聚(seqidno1259用于dna纳米结构体3d_1，seqidno1260用于dna纳米结构体3d_2，并且seqidno1261用于dna纳米结构体3d_3)·400nm结合靶标的dna低聚(seqidno1263用于dna纳米结构体3d_1，seqidno1264用于dna纳米结构体3d_2，并且seqidno1265用于dna纳米结构体3d_3)·1x缓冲液fb02(缓冲液组成见下文)为了使dna纳米结构体折叠成它们的形状，首先将上述混合物加热以熔化可能存在的二级结构体，然后缓慢冷却，使得碱基对能够找到热平衡并因此找到计划的构象。为此，使用了以下热循环程序(使用通过eppendorfgmbh，hamburg，germany的mastercyclernexusx2)：·在65℃保持15分钟，并在1分钟内冷却至50℃·在66小时内以恒定速度从50℃降低至40℃·66h结束时(任选地，可以在40℃再保温几个小时)，在1分钟内冷却至4℃并储存在2-8℃随后，从单dna寡聚物或较小的dna寡聚物复合物中分离出正确折叠的3ddna纳米结构体。为此，采用以下peg纯化(用聚乙二醇纯化)：·将来自热循环仪的液体与相同体积的pegx01混合(有关缓冲液组成，请见下文)·在室温(20-25℃)下于13000-16000rfc离心35min·用移液器去除上清液·重悬于200μlfb02(有关缓冲液组成，请见下文)和200μlpegx01(有关缓冲液组成，请见下文)·在室温(20-25℃)下于13000-16000rfc离心35min·重悬于100μlfb01中(有关缓冲液组成，请见下文)·在室温在黑暗中在摇床上以600rpm孵育8至16，优选10小时(在这种情况下是过夜)，以便完全溶解沉淀物·存放在4℃以便进一步使用(可能最长达12个月，但是，在本情况下，存放仅几天)尽管在当前情况下，采用了dna纳米结构体的peg纯化，但作为另选可以用琼脂糖凝胶电泳进行纯化，然后从凝胶中提取dna纳米结构体。基于琼脂糖凝胶电泳的纯化可以例如以下述方式进行：·制备1.5％w/v琼脂糖凝胶·添加5xorangeg加载缓冲液至样品·在冰冷却下，以4.5v/cm的电压电泳1.5h·切下带有dna折纸带的凝胶块。后者的宽度大约为2mm，并且可以通过在相邻泳道中装入脚手架链来更容易地识别，将其放入freeze'nsqueezetmdna凝胶提取离心柱(bioradlaboratoriesgmbh)中，并在室温和1050rcf下离心4.5min。所用缓冲液pegx01：·15％peg8000·1xtae(三乙酸edta缓冲液：40mmtris，20mm乙酸，1mmedta)·12.5mmmgcl2·500mmnaclfb01：·10mmtrisph8.0·1mmedta·12.5mmmgcl2fb02：·10mmtrisph8.0·1mmedta·10mmmgcl2dna寡聚物池：为了制备各自的3ddna纳米结构体，寡聚物基于以下池中其seq_id_no(方括号中的数值表示其相应的seqidno)结合：寡聚物池_3d-s1：[1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、277、286、287、288、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、469、478、479、480、470、471、472、473、474、475、476、477、478、479、480、265、274、275、276、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、301、310、311、312、302、303、304、305、306、307、308、309、310、311、312、253、262、263、264、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、289、298、299、300、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、241、250、251、252、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252]寡聚物池_3d-s2：[1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、277、286、287、288、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、481、490、491、492、482、483、484、485、486、487、488、489、490、491、492、337、346、347、348、338、339、340、341、342、343、344、345、346、347、348、361、370、371、372、362、363、364、365、366、367、368、369、370、371、372、325、334、335、336、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、336、349、358、359、360、350、351、352、353、354、355、356、357、358、359、360、241、250、251、252、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252]寡聚物池_3d-s3：[1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、277、286、287、288、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、493、502、503、504、494、495、496、497、498、499、500、501、502、503、504、385、394、395、396、386、387、388、389、390、391、392、393、394、395、396、409、418、419、420、410、411、412、413、414、415、416、417、418、419、420、373、382、383、384、374、375、376、377、378、379、380、381、382、383、384、397、406、407、408、398、399、400、401、402、403、404、405、406、407、408、241、250、251、252、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252]实施例2：用于比较的2ddna纳米结构体的制备1.所制备2ddna纳米结构体的制备以三种变体(即，变体2d_1、2d_2和2d_3)制备长方形2ddna纳米结构体，每个2ddna纳米结构体具有48个染料分子，这些染料分子与相同2ddna纳米结构体(这种2ddna纳米结构体例如显示在wo002016140727的图1a中)内的各自最近的染料分子成对距离为5nm：·2ddna纳米结构体变体2d_1：红色荧光：2d_1dna纳米结构体包含48个dna钉链，钉链具有与用于红色染料的荧光团接头互补的额外单链序列(指定为序列s1)，以及48个相关的荧光团接头，每一个均配有atto647n染料(寡聚物seq_id_no1259)。在设计程序cadnano中，根据以下标准选择了要延伸用于荧光团接头结合的钉链，即：它们均位于矩形的同一侧，并且与相互之间的距离足以使它们不会显著相互作用。染料接头在3'端进行了染料修饰。选择该末端是为了确保染料尽可能靠近中空圆筒的表面，并且具有很小的回旋余地，因此可以使彼此之间的接触尽可能少。几种修改/染料接头也都是可以想到的，但是，这将意味着更高的成本和对位置控制的一定程度损失。2d_1dna纳米结构体布置有t1靶标接头(寡聚物seq_id_no1266)，该接头根据布置位于结构体的边缘。用于2d_1dna纳米结构体的所有钉链的seqidno总结在以下的定义寡聚物池2d_s1中。链p7249(seqidno1257)用作脚手架链。·2ddna纳米结构体变体2d_2：绿色荧光：2d_2dna纳米结构体包含48个dna钉链，钉链具有与用于红色染料的荧光团接头互补的额外单链序列(指定为序列s2)，以及48个相关的荧光团接头，每一个均配有atto565染料(寡聚物seq_id_no1260)。在设计程序cadnano中，根据以下标准选择了要延伸用于荧光团接头结合的钉链，即：它们均位于矩形的同一侧，并且与相互之间的距离足以使它们不会显著相互作用。染料接头在3'端进行了染料修饰。选择该末端是为了确保染料尽可能靠近中空圆筒的内表面，并且具有很小的回旋余地，因此可以使彼此之间的接触尽可能少。几种修改/染料接头也都是可以想到的，但是，这将意味着更高的成本和对位置控制的一定程度损失。2d_2dna纳米结构体布置有t2靶标接头(寡聚物seq_id_no1267)，该接头根据布置位于结构体的边缘。使用的所有钉链的seqidno总结在以下的定义寡聚物池2d_s2中。链p7249(seqidno1257)用作脚手架链。·2ddna纳米结构体变体2d_3：蓝色荧光：2d_1dna纳米结构体包含48个dna钉链，钉链具有与用于红色染料的荧光团接头互补的额外单链序列(指定为序列s3)，以及48个相关的荧光团接头，每一个均配有atto488染料(寡聚物seq_id_no1261)。在设计程序cadnano中，根据以下标准选择了要延伸用于荧光团接头结合的钉链，即：它们均位于矩形的同一侧，并且与相互之间的距离足以使它们不会显著相互作用。染料接头在3'端进行了染料修饰。选择该末端是为了确保染料尽可能靠近中空圆筒的表面，并且具有很小的回旋余地，因此可以使彼此之间的接触尽可能少。几种修改/染料接头也都是可以想到的，但是，这将意味着更高的成本和对位置控制的一定程度损失。2d_3dna纳米结构体布置有t3靶标接头(寡聚物seq_id_no1268)，该接头根据布置位于结构体的边缘。使用的所有钉链的seqidno总结在以下的定义寡聚物池2d_s3中。链p7249(seqidno1257)用作脚手架链。2.制备方案：在本实施例中，2ddna纳米结构体2d_1-3根据以下所述的制备方案制备.为了制备2ddna纳米结构体2d_1-3，首先混合以下组分，以获得最终体积200μl：·10nmp7249脚手架链(seqidno1257)·100nm的每个钉链(寡聚物池2d_s1的seqidno用于dna纳米结构体2d_1，寡聚物池2d_s2的seqidno用于dna纳米结构体2d_2，并且寡聚物池2d_s3的seqidno用于dna纳米结构体2d_3)·120nm荧光染料修饰的dna低聚(seqidno1259用于dna纳米结构体2d_1，seqidno1260用于dna纳米结构体2d_2，并且seqidno1261用于dna纳米结构体2d_3)·400nm结合靶标的dna低聚(seqidno1266用于dna纳米结构体2d_1，seqidno1267用于dna纳米结构体2d_2，并且seqidno1268用于dna纳米结构体2d_3)·1x缓冲液fb02(缓冲液组成见实施例1)为了使dna纳米结构体折叠成它们的形状，首先将上述混合物加热以熔化可能存在的二级结构体，然后缓慢冷却，使得碱基对能够找到热平衡并因此找到计划的构象。为此，使用了以下热循环程序(使用通过eppendorfgmbh，hamburg，germany的mastercyclernexusx2)：·在65℃保持15分钟，并在1分钟内冷却至60℃。·在1小时内以恒定速度从60℃降低至20℃··在1分钟内冷却至4℃并储存在4℃随后，从单dna寡聚物或较小的dna寡聚物复合物中分离出正确折叠的2ddna纳米结构体。为此，采用以下peg纯化(用聚乙二醇纯化)：·将来自热循环仪的液体与相同体积的pegx01混合(有关缓冲液成分，请参见下文)·在室温(20-25℃)下于13000-16000rfc离心35min·重悬于200μlfb01和200μlfb02(对于缓冲液成分，请参见实施例1)·在室温(20-25℃)下于13000-16000rfc离心35min·重悬于100μlfb01中·在室温(20-25℃)在黑暗中在摇床上以600rpm孵育过夜·存放在-20℃(例如，最多可长达3年)或在4℃(例如，最多可长达12个月)以便进一步使用(在本情况下，存放仅几天)同样在这种情况下，原则上可以使用实施例1中提到的基于琼脂糖凝胶电泳的纯化来替代基于peg的纯化。使用的dna寡聚物池：为了制备各自的2ddna纳米结构体，寡聚物基于以下池中其seq_id_no(方括号中的数值表示其相应的seqidno)结合：寡聚物池_2d-s1：[529、538、539、540、530、531、532、533、534、535、536、537、538、539、540、563、572、573、574、564、565、566、567、568、569、570、571、572、573、574、623、632、633、634、624、625、626、627、628、629、630、631、632、633、634、657、666、667、668、658、659、660、661、662、663、664、665、666、667、668、693、702、703、704、694、695、696、697、698、699、700、701、702、703、704、705、714、715、716、706、707、708、709、710、711、712、713、714、715、716、787、796、797、798、788、789、790、791、792、793、794、795、796、797、798、799、808、809、810、800、801、802、803、804、805、806、807、808、809、810、575、584、585、586、576、577、578、579、580、581、582、583、584、585、586、587、596、597、598、588、589、590、591、592、593、594、595、596、597、598、669、678、679、680、670、671、672、673、674、675、676、677、678、679、680、681、690、691、692、682、683、684、685、686、687、688、689、690、691、541、548、549、550、542、543、544、545、546、547、548、549、550、551、560、561、562、552、553、554、555、556、557、558、559、560、561、562、635、642、643、644、636、637、638、639、640、641、642、643、644、645、654、655、656、646、647、648、649、650、651、652、653、654、655、656]寡聚物池_2d-s2：[529、538、539、540、530、531、532、533、534、535、536、537、538、539、540、563、572、573、574、564、565、566、567、568、569、570、571、572、573、574、623、632、633、634、624、625、626、627、628、629、630、631、632、633、634、657、666、667、668、658、659、660、661、662、663、664、665、666、667、668、505、514、515、516、506、507、508、510、512、514、515、516、517、526、527、528、518、519、520、522、524、526、527、528、599、608、609、610、600、601、602、604、606、608、609、610、611、620、621、622、612、613、614、616、618、620、621、622、697、699、701、709、711、713、791、793、795、803、805、807、951、960、961、962、952、953、954、955、956、957、958、959、960、961、962、963、972、973、974、964、965、966、967、968、969、970、971、972、973、974、1045、1054、1055、1056、1046、1047、1048、1049、1050、1051、1052、1053、1054、1055、1056、1057、1066、1067、1068、1058、1059、1060、1061、1062、1063、1064、1065、1066、1067、1068、541、548、549、550、542、543、544、545、546、547、548、549、550、551、560、561、562、552、553、554、555、556、557、558、559、560、561、562、635、642、643、644、636、637、638、639、640、641、642、643、644、645、654、655、656、646、647、648、649、650、651、652、653、654、655、656]寡聚物池_2d-s3：[529、538、539、540、530、531、532、533、534、535、536、537、538、539、540、563、572、573、574、564、565、566、567、568、569、570、571、572、573、574、623、632、633、634、624、625、626、627、628、629、630、631、632、633、634、657、666、667、668、658、659、660、661、662、663、664、665、666、667、668、505、514、515、516、506、507、508、510、512、514、515、516、517、526、527、528、518、519、520、522、524、526、527、528、599、608、609、610、600、601、602、604、606、608、609、610、611、620、621、622、612、613、614、616、618、620、621、622、697、699、701、709、711、713、791、793、795、803、805、807、575、584、585、586、576、577、578、579、580、581、582、583、584、585、586、587、596、597、598、588、589、590、591、592、593、594、595、596、597、598、669、678、679、680、670、671、672、673、674、675、676、677、678、679、680、681、690、691、692、682、683、684、685、686、687、688、689、690、691、1105、1112、1113、1114、1106、1107、1108、1109、1110、1111、1112、1113、1114、1115、1124、1125、1126、1116、1117、1118、1119、1120、1121、1122、1123、1124、1125、1126、1199、1206、1207、1208、1200、1201、1202、1203、1204、1205、1206、1207、1208、1209、1218、1219、1220、1210、1211、1212、1213、1214、1215、1216、1217、1218、1219、1220]实施例3：以实施例1的3d纳米结构体进行的靶标结构体的检测与以实施例2的2ddna纳米结构体进行的靶标结构体的检测的比较1.概述为了比较通过本发明的方法在其实施方式中以2ddna纳米结构体或本发明的3ddna纳米结构体能够检测靶标结构体的程度，在该实施方式中具有靶标结构体和各自的结合的dna纳米结构体的识别结构体结合于和/或将结合于载体多的表面(在本情况中，为盖玻片的表面)，在上述实施例中，相同的靶标dna寡聚物用作靶标结构体，并且一方面基于实施例2所述的变体2d_1、2d_2和2d_3的红色、绿色和蓝色2ddna纳米结构体(2d样品)进行检测，另一方面基于实施例1所述的变体3d_1、3d_2和3d_3的红色、绿色和蓝色3ddna纳米结构体(2d样品)红色，绿色和蓝色3ddna的结合如实施例1所述的变体3d_1、3d_2和3d_3的纳米结构体(3d样品)进行检测。另外，对于两个实验都进行了对照实验，其中检查如果没有靶标结构体，则在盖玻片的表面上是否发送以及在何种程度上发生假阳性检测。比较表明，由于染料分子的优化和精心设计的定位，3ddna纳米结构体以小得多的程度附着到显微镜盖玻片的表面。2.材料和方法：为了检测靶标结构体(在本情况中，为靶标dna寡聚物，简写为靶标寡聚物)，首先将它们与各自的dna纳米结构体(即，2d_1、2d_2和2d_3或3d_1、3d_2和3d_3)和捕获链在合适的缓冲液中在杂交反应中进行孵育，以便所有这些组分都能相互结合并形成识别结构体(见图1，1k)。对于2d和3ddna纳米结构体，这是分别进行的。对于具有3ddna纳米结构体的样品，在具有以下成分的溶液中进行杂交：·4μl根据实施例1所述的dna纳米颗粒3d_1-3与200pm每dna纳米颗粒的混合物·10μl2x缓冲液rx07(组成见下文)·1μl20nm具有生物素接头的载体接头(本文中也称为捕获链)(seqidno1262)，其中具有生物素接头的捕获链(5'端以生物素修饰)由eurofins公司提供。·1μl750pm单链的靶标dna寡聚物(seqidno1269)。该寡聚物具有t1、t2和t3的互补区，因此3ddna纳米结构体3d_1、3d_2和3d_3能够以它们各自的t1、t2和t3区域结合靶标dna寡聚物的相应互补区域，以及用于捕获链的互补区域。靶标结构体和各自的结合区域经设计从而使所有3个3ddna寡聚物和捕获链可以同时结合靶标dna寡聚物。为进行对照实验，将该体积替换为h2o。·4μlh2o将其在30℃下孵育16小时，以使捕获链、靶标寡聚物和3ddna纳米结构体相互结合。对于具有2ddna纳米结构体的样品，在具有相同成分的溶液中进行杂交，但是，使用4μl实施例2所述的dna纳米颗粒2d_1-3与200pm/dna纳米颗粒的混合物，代替4μl实施例1所述的dna纳米颗粒3d_1-3与200pm/dna纳米颗粒的混合物。同样在这种情况下，确保所有三种2ddna纳米结构体以及捕获链都可以与靶标寡聚物结合。所使用的靶标dna寡聚物也具有seqidno1269的序列。同样对于2ddna纳米结构体，进行了不包含靶标dna寡聚物的对照反应。因此，总共进行了四个实验。为了进行测量，将每个实验的捕获链置于各自的显微镜样品载体的显微镜表面上。来自ibidigmbh(martinsried，germany)的vi0.1型μ-载玻片被用作显微镜样品载体。为此，根据以下规程对其进行处理，以制备显微镜载玻片作为样品：·用100μl缓冲液a(组成，请参见下文)冲洗μ-载玻片vi0.1(ibidigmbh，martinsried)。·吸取40μl的1mg/ml生物素化的bsa(sigma-aldrichgmbh)到μ-载玻片相应通道的第一通道末端，孵育2min，然后通过吸取从μ-载玻片相应通道的另一个第二通道末端去除液体，将100μl缓冲液a吸到上述第一通道末端，并通过吸取通过上述第二通道末端去除流体。·在上述第一通道末端移液40μl0.5mg/ml链霉亲和素(thermoscientific)，孵育2min，通过吸取从上述第二通道末端去除液体，在上述第一通道末端移液100μl缓冲液a，并通过吸取从上述第二通道末端去除液体。·吸取100μl缓冲液b(组成见下文)到上述第一通道末端，并通过吸取从上述第二通道末端去除液体·在上述第一通道末端移液40μl来自上述步骤的杂交溶液(用于2d样品探针的2d纳米结构体的溶液，或用于3d样品的3ddna纳米结构体的溶液，或没有靶标dna寡聚物的相应对照实验)。孵育15min。在这段时间内，捕获链的生物素与表面结合的链霉亲和素结合。另外，一些dna纳米结构体非特异性地粘附于表面。这不是预定的，与3ddna纳米结构体相比，以2ddna纳米结构体发生的频率要高得多。通过移液从上述第二通道端移除。·通过将200μl缓冲液rx07(组成见下文)移液到上述第一通道末端并通过移液经由上述第二通道末端去除，洗去未结合的dna纳米结构体·将50μl缓冲液rx07(组成见下文)移液到上述第一通道末端对于完成上述步骤，有两个样品，一个2d样品和一个3d样品。此外，对于2d和3d纳米结构体分别有对照(没有靶标dna)。选择上述方法中所选浓度的生物素-bsa、链霉亲和素和靶标结构体的浓度组合，从而使得可以在随后的分析中容易地分辨出各个识别结构体。随后，用落射荧光显微镜对两个样品中的识别结构体进行成像。为此，采用了“elite”显微镜(deltavision)。也可以考虑使用“tieclipse”类型的显微镜(nikon)。使用的相机是scmos相机(pco的edge4.2)，像素尺寸为6.5μm。以100倍的物镜放大倍率和1.4的数值孔径，给出了60nm的像素分辨率，即，图像中的一个像素对应于实际上的60nm。因此，获得了dna纳米结构体的衍射极限图像。滤光片组对于红色激发是chroma49914，对于绿色激发是chroma49008，对于蓝色激发是chroma49020。对于2d样品和3d样品以及没有靶标dna的两个对照，每种颜色均拍摄了10张图像。颜色顺序成像。这些图像中的每一个都在样品的特定部分拍摄，该特定部分不与其他图像的部分重叠，并且位于沿通道宽度的平均一半处。分析了每个样品的相关10张图像。本文提出的分析的目的是比较在具有靶标dna的各个样品中与在没有靶标dna的各个样品中检测到的点的数量，和/或指定与多色点相比单色的点的数量。分析手动进行。为此，使用图像处理程序fiji(www.fiji.sc)打开图像，并计数单色、三色的数量以及荧光点的总数。对于2ddna纳米结构体和3ddna纳米结构体，分别确定了各10张图像的不同参数的平均值和标准偏差，并绘制在图3中。虽然在本实施例中未采用，但也可以使用专门编程的分析软件来代替手动分析。在本实施例中，编程的分析软件是基于python的。基于python的分析软件加载测量数据，确定9-15像素尺寸的图像框中的局部最大值(取决于物镜的放大倍率和数值孔径)，并计算梯度的累积绝对值作为与噪声无关的测量值信号。为了区分具有和不具有dna纳米结构体的图像框，使用dbscan(具有噪声的应用的基于密度的空间聚类)(发表于ester,martin；kriegel,hans-peter；sander,xu,xiaowei"adensity-basedalgorithmfordiscoveringclustersinlargespatialdatabaseswithnoise",proceedingsofthesecondinternationalconferenceonknowledgediscoveryanddatamining(kdd-96)aaaipress.pp.226–231(1996))。可选地，将图像框划分为梯度的累积绝对值的不同值的组，这对应于根据不同数量的荧光团的分类。根据其横向(x，y)位置，将具有每个颜色通道的dna纳米结构体的图像框与具有其他颜色通道的dna纳米结构体的所有图像框进行比较，以识别图像中的多色点。使用本文介绍的基于python的软件进行分析的目的还在于比较在有和没有靶标dna寡聚物的情况下在实验中检测到的点数量，和/或指定与多色点相比单色点的数量。该软件存储单色点数量及其在图像中的位置的确定值，以及多色点数量及其在图像中的位置的值以供进一步使用。3.结果和讨论：为了评估所述dna纳米结构体对于所述方法的适用性，与具有靶标dna寡聚物的相应样品相比，测量了在各个对照(没有靶标dna寡聚物)中发现了多少dna纳米结构体(图3的顶部)。这可以得出结论：在存在靶标结构体的情况下，样品中所测量的dna纳米结构体的多少比例是由于与表面结合的非特异性纳米结构体所致。发现：3ddna纳米结构体显示出对显微镜样品载体的显微表面的非特异性粘附的程度明显较低(3d为1.2％，相比于2d为4.0％)。3ddna纳米结构体的误差线(标准偏差)穿过零线，因此表明对于3ddna纳米结构体，非特异性结合的率低于测量系列的分辨率极限。进一步测量了与具有靶标dna寡聚物的样品相比，可以在对照中发现多少三色点，即可以解释为靶标分子的数据点，同样对于2d样品与2d对照相比，对于3d样品与3d对照相比。这提供了关于在2ddna纳米结构体的情况中，和在3ddna纳米结构体的情况中，假阳性识别的靶标结构体的信息。对照中三色测量点的存在，例如，可能是由于不同dna纳米结构体的向外暴露的染料之间的相互作用而引起的。通过设计具有向内布置的染料的3ddna纳米结构体，可以避免这种情况。图3(中)显示2ddna纳米结构体的结果为0.7％，3ddna纳米结构体的结果为0.0％。在3d情况下，未进行单个假阳性测量。因此，结果表明，由于使用了结合靶标结构体的多个dna纳米结构体，因此测得的假阳性信号的发生率非常低。结果进一步表明，本发明的具有向内布置的荧光染料分子的3ddna纳米结构体与实施例中使用的载体表面的相互作用较小。这是由于它们在3d结构体中的位置。另一个参数是三色测量点在具有靶标dna寡聚物的测量点总数中所占的百分比。基于图像分析的结果对2d样品和3d样品都进行了计算，并在图3中(底部)表示。由于反应动力学，预期在某些情况下识别结构体仅部分杂交。例如，如果dna纳米结构体的浓度对于杂交反应持续时间内反应的饱和度而言不够高，则可能是这种情况。如果在测量时反应未达到饱和，则可以对内标进行绝对定量或基于经验数据。内标优选地指示具有已知浓度的参考值，而经验数据优选地允许在不饱和和饱和测量之间进行比较。但是，对于相对测量(如此处进行)，这是不相关的，因为部分杂交的识别结构体与靶标结构体的比例不取决于靶标结构体和3ddna纳米结构体的具体实施方式，因此其中完全杂交的识别结构体的相对频率与后者中靶标结构体的相对频率相同。然而，在这方面，由于尺寸相似，因此2d和3d纳米结构体具有可比性。但是，彼此结合的dna纳米结构体以及与表面非特异性结合的dna纳米结构体可能会大大改变结果。这在图3(底部)中很明显，其中对于2ddna纳米结构体，表面上仅6.8％的测量点可被视为可识别的结构体，而对于3ddna纳米结构体，25.7％的测量点可被视为可识别的结构体。因此，与2ddna纳米结构体相比，显微镜表面可以更有效地用于3ddna纳米结构体。总而言之，可以注意到，与2ddna纳米结构体相比，本发明的3ddna纳米结构体粘附在显微镜样品载体的显微镜表面上的非特异性趋势低三倍多，并且彼此粘附具有急剧且无法定量的低趋势。3ddna纳米结构体的面积使用效率几乎高出四倍。本发明的方法使用dna纳米结构体的多重结合来增加特异性，即它降低了假阳性识别率。对于仅具有一个dna纳米结构体结合的测量方法，该率将如图3(顶部)所示那么高，即，4.0％(2d)和1.2％(3d)，而在本发明的方法中为0.7％(2d)和0％(3d)。所用缓冲液rx07缓冲液·4xssc(盐水柠檬酸钠缓冲液，由150mm氯化钠和15mm柠檬酸三钠的水溶液组成，用hcl调节至ph7.0)·5％硫酸葡聚糖·0.1％tween20·5xdenhardts缓冲液a·10mmtris-hclatph7.5·100mmnacl·0.05％tween20缓冲液b·10mmtris-hclatph8.0·10mmmgcl2·1mmedta·0.05％tween20实施例4：基于组织样品的基因表达分析在此，组织样品，例如乳腺肿瘤的组织样品将对于许多标志物基因的表达进行分析，例如100个基因，如her2/neu、雌激素受体、孕激素受体、tfrc、gapdh等。首先可以将组织样品溶解在单细胞的悬浮液中，例如通过酶促和/或通过剪切力裂解。随后，可破坏细胞，例如机械方式、裂解缓冲液、酶促和/或化学方式或通过光破坏。裂解物可以被进一步处理，例如，可以提取rna，可以过滤组分，可以例如通过乙醇沉淀分离核酸。作为另选，可将裂解物直接用于其他用途。裂解物、至少两种纳米报告子(针对与待分析基因相对应的各自的mrna序列设计)、在某些应用中还有底部物结合接头(靶标接头)和反应缓冲液混合并孵育足够的时间，例如12h，其中形成复合物(识别结构体)。随后，在某些应用中，在表面或溶液中检测复合物。可以通过对检测和识别的单个mrna序列进行计数来确定相对基因表达，例如如果检测到200次mrna1和300次mrna2，则基因2的基因表达是基因1的3/2。另外，可以添加以已知浓度与确定的纳米报告子(与mrna序列完全可比)结合的核酸，作为孵育步骤的参考。这允许其他检测到的mrna序列的标准化和绝对定量。如果这个参考是例如以100pm的初始浓度识别100次，则可以确定mrna1的浓度为200pm。实施例5：蛋白检测蛋白质靶标分子的检测和识别可以以类似于核酸靶标分子的检测和识别的方式进行。前提条件是蛋白质靶标分子具有至少两种可区分的表位，这些表位可以被相应的结合物(抗体、适体、纳米抗体、粘合子)结合。这些接头可以与识别它们的纳米报告子特异性结合。为此，可以使用特定的短(15-35nt)dna序列(通过snap标签、halo标签、点击化学、smcc接头、nhs/氨基反应或等)修饰基于蛋白质的结合物(抗体、粘合子、纳米抗体)，其反向补体附着于相应的dna纳米结构体(纳米报告子)，因此成为接头。可以将基于核酸的结合物(rna或dna适体)通过相应序列延长为接头，其中它们的反向互补序列附着于相应的dna纳米结构体。通过将蛋白质靶标分子和接头在dna纳米结构体上混合并以足够的反应时间混合，可检测的复合物由靶标蛋白质和至少两种分别以dna纳米结构体形式偶联的接头组成。可以通过同时检测至少两种dna纳米结构体来识别复合物。两个蛋白靶标的检测实施例：具有分别与抗体a和抗体b结合的表位a和表位b的蛋白质靶标1。具有分别与抗体c和抗体d结合的表位c和表位d的蛋白质靶标2。抗体a偶联到用红色荧光染料标记物的dna纳米结构体上。抗体b偶联到用绿色荧光染料标记物的dna纳米结构体上。抗体c偶联到用黄色荧光染料标记物的dna纳米结构体上。抗体d偶联到用蓝色荧光染料标记物的dna纳米结构体上。将蛋白质靶标和偶联的抗体/dna纳米结构体混合并反应足够的时间，例如12小时。流检测中复合物的测量。稀释反应溶液，以使仅在极少数情况下才能检测到超过一个复合物。红色/绿色的同时检测可识别一个单一蛋白质靶标1，黄色/蓝色的同时检测可识别一个单一蛋白质靶标2。经过先前的校准，可以通过对不同的检测进行计数来定量蛋白质靶标1和2。使用相同的方法，可以识别蛋白质簇，其中在这种情况下不同的抗体可以识别在靶标簇中的不同的蛋白质(而不是不同的表位)。实施例6：三种基因的基因表达分析为了证明该方法的特别优选的实施方式，更详细地描述了对hela细胞的基因gapdh、tfrc和actb的基因表达的分析。因此，基因gapdh、tfrc和actb的mrna是靶标结构体，hela细胞是宿主体。为此，制备一组合适的3ddna纳米结构体。它由3ddna纳米结构体3d_1_1、3d_1_2、3d_2_1、3d_2_2、3d_3_1和3d_3_2组成。这些类似于实施例1中所述的3ddna纳米结构体3d_1、3d_2和3d_3，但具有以下差异：在3d_1_1的情况下，其组成如3d_1，不同之处在于所用的靶标结合dna寡核苷酸部分地与gapdh的mrna区域部分互补(seq_id_no1270代替seq_id_no1263)，在3d_1_2的情况下，其组成如3d_2，不同之处在于所用的靶标结合dna寡核苷酸部分地与gapdh的mrna另一区域部分互补(seq_id_no1276代替seq_id_no1264)，在3d_2_1的情况下，其组成如3d_1，不同之处在于所用的靶标结合dna寡核苷酸部分地与tfrc的mrna区域部分互补(seq_id_no1271代替seq_id_no1263)，在3d_2_2的情况下，其组成如3d_3，不同之处在于所用的靶标结合dna寡核苷酸部分地与tfrl的mrna另一区域的一部分部分地互补(seq_id_no1277代替seq_id_no1265)，在3d_3_1的情况下，其组成如3d_2，不同之处在于所用的靶标结合dna寡核苷酸部分地与actb的mrna区域部分互补(seq_id_no1272代替seq_id_no1264)，在3d_3_2的情况下，其组成如3d_3，不同之处在于所用的靶标结合dna寡核苷酸部分地与actb的mrna另一区域部分互补(seq_id_no1278代替seq_id_no1265)。微孔腔室用于此实施例。所述腔室包括微孔阵列，其中第一层是170μm厚的石英晶片，第二层是液体玻璃。本发明的通常可用于对于所有实施方式的液体玻璃的组成如下：49体积％的hema(单体，甲基丙烯酸羟乙酯)；5vol％的tegda(聚合物，四(乙二醇)二丙烯酸酯)；18vol％poe(裂解介质，苯氧乙醇)，28vol％气溶胶ox50(二氧化硅纳米粉)；0.5wt％dmpap(光引发剂，2,2二甲氧基-2-苯基苯乙酮(参见，例如f.kotz等人,"three-dimensionalprintingoftransparentfusedsilicaglass",nature2017,544(7650),337-339和.f.kotz等人"liquidglass:afacilesoftreplicationmethodforstructuringglass",advancedmaterials2016,28,4646-4650)。此处，微孔腔室的第3层由粘贴在第二层上的ibidi粘载玻片vi0.4(ibidigmbh)形成。作为另选，可以使用其他粘合剂或其他粘合技术。第三层包括用于形成腔的凹部。第一层、第二层和第三层排列成，使得它们根据已经描述的方式形成具有微孔的工作腔。包括微孔的工作腔的体积在这种情况下例如为40微升。在随后的步骤中，将1mg/ml生物素化的bsa在缓冲液a中的溶液(生物素-bsa：产品a8549，sigma-aldrichgmbh)冲洗到工作腔中并孵育10分钟。随后，以0.5ml缓冲液a进行冲洗步骤(配方见下文)。然后，冲入浓度为0.5mg/ml的链霉亲和素在缓冲液a中的溶液并孵育10分钟。在孵育期间，链霉亲和素的至少一部分结合至微孔的表面。随后，进行0.5ml缓冲液a的冲洗步骤，随后是0.5ml缓冲液rx07(配方见下文)的进一步冲洗步骤。之后，冲入1nm生物素接头寡核苷酸(seq_id_no1262)在rx07中的溶液，并孵育10分钟。在孵育期间，至少一部分生物素-接头寡核苷酸通过生物素-链霉亲和素键与结合至表面的链霉亲和素结合，因此，其自身与表面结合。随后，进行0.5ml缓冲液rx07的冲洗步骤。然后，冲入缓冲液rx07中浓度分别为1nm的具有seq_id_no1273、1274和1275的溶液(参见下文)，并孵育10分钟，以便seq_id_no1273、1274和1275与生物素接头寡核苷酸seq_id_no1262结合。随后，在0.5ml缓冲液rx07冲洗步骤之后，冲入密度为100万个细胞/ml的细胞悬液。该细胞悬液的缓冲液是pbs(磷酸盐缓冲盐水，组成参见下文)。细胞静置10分钟以使其沉入微孔中。随后，将微孔腔室和恰好被一个细胞占据的微孔的选择放到显微镜上进行进一步分析。也可以在较早的时点，例如在在所述步骤的最开始进行在显微镜上布置微孔腔室。优选的是，显微镜适合于所有后续的显微镜分析步骤。作为另选，可以将不同的显微镜用于不同的显微镜技术。然后，对单个微孔根据其包含多个细胞、恰好一个细胞、还是不包含细胞来进行分类。在随后的分析中仅考虑那些仅包含恰好一个细胞的微孔。所述分类可以通过任何合适的显微镜技术进行，优选地通过明场、相差、暗场或dic(微分干涉对比)显微镜或荧光显微镜进行，尤其优选表荧光显微镜、tirf显微镜、点扫描共聚焦显微镜、旋转盘共聚焦显微镜、光片显微镜。随后，将破坏缓冲液，更准确地说是裂解缓冲液(配方见下文)添加到微孔腔室中，并孵育30分钟。因此，细胞被裂解，并且潜在地包含在其中的靶标结构体被释放。现在，靶标结构体结合到其中释放了靶标结构体的单个微孔底部的载体接头上。用0.5mlrx07冲洗步骤后，其中靶标结构体由于其与底部的结合而保留在微孔中，然后分别注入rx07中的各种50nm3d_1_1、3d_1_2、3d_2_1、3d_2_2、3d_3_1和3d_3_2溶液，并孵育60分钟。在孵育过程中，许多3ddna纳米结构体与相应的靶标结构体结合。随后进行各自0.5mlrx07的三个漂洗步骤。随后，对先前选择进行分析的微孔底部附近的区域进行荧光记录，包括3ddna纳米结构体中使用的波长。由于在本实施例中，仅分析了3个基因，因此可以选择3ddna纳米结构体，以使两种类型的3ddna纳米结构体(此处为3d_1_1和3d_2_1)具有第一种颜色，优选红色，两种第二类型的3ddna纳米结构体(此处为3d_1_2和3d_3_1)具有第二种颜色，优选为绿色，并且两种第三类型的3ddna纳米结构体(此处为3d_2_2和3d_3_2)具有第三种颜色，优选为蓝色。随后，进行评估，即靶标结构体的检测和/或定量，其中在选择用于分析的每个微孔中搜索相应颜色的点。红绿点表示gapdhmrna，红蓝点表示tfrcmrna，绿蓝点表示actbmrna。如果需要，可以在两个散点图中表示每个微孔中检测到的彩色点的数量，以便进行进一步评估。在第一散点图中，对于红色v.s.绿色，绘制了检测点的数量/微孔，而在第二散点图中，对于绿色v.s.蓝色(作为另选，为红色v.s.蓝色)，绘制了检测点的数量/微孔。例如，可以从散点图中推断出三个被分析基因的基因表达水平以及细胞的不同亚群。实施例6的制剂：缓冲液a：见实施例3的缓冲液arx07缓冲液：见实施例3的rx07缓冲液裂解缓冲液·20mmtrisph7.5·150mmnacl·1mmedta·1mmegta·1％蛋白酶抑制剂混合物，用于哺乳动物细胞的p-8340，sigma-aldrichpbs缓冲液(磷酸盐缓冲盐水)·137mmnacl·2.7mmkcl·10mmna2hpo4·1.8mmkh2po4seqidseq_id_no:1270t4_gapdhttgtgtcgtgacgagaaacaccaaatttcaacttttttttccattgatgacaagcttcccgttctcagccttseq_id_no:1271t4_tfrcttgtgtcgtgacgagaaacaccaaatttcaactttttcgagttttgagcgctgtctttgacctgaatcttaacseq_id_no:1272t4_actbttgtgtcgtgacgagaaacaccaaatttcaactttttaatgatcttgatcttcattgtgctgggtgccagseq_id_no:1273载体接头_gapdhgccatgggtggaatcatattggaacatgtaaaccttcggttgtactgtgaccgattcseq_id_no:1274载体接头_tfrccacgccagactttgctgagtttaaattcacgttcggttgtactgtgaccgattcseq_id_no:1275载体接头_actbatgatggagttgaaggtagtttcgtggatgccacattcggttgtactgtgaccgattcseq_id_no1276t5_gapdhttgtgtcgtgacgagaaacaccaaatttcaacttttctgggtggcagtgatggcatggactgtggtcatgagtcctseq_id_no1277t5_tfrcttgtgtcgtgacgagaaacaccaaatttcaactttttacccatcttttaagaccatatctgagaacatctgggcseq_id_no1278t5_actbttgtgtcgtgacgagaaacaccaaatttcaactttttcagtgtacaggtaagccctggctgcctccaccc序列表<110>慕尼黑路德维希马克西米利安斯大学（ludwig-maximilians-universitätmünchen）<120>微孔中通过dna纳米技术进行单分子检测或定量<130>aa3126uss5<150>ep17207476.7<151>2017-12-14<160>1278<170>bissap1.3.6<210>1<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0000，来自3ddna纳米结构体.<400>1agagtccactattttaatgaacgctttccagtcgggggtcgacgt45<210>2<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0001，来自3ddna纳米结构体.<400>2tatctaaaatatcttttgaatacctgaaagcgtaagagcaataca45<210>3<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0002，来自3ddna纳米结构体.<400>3cagtacataaatcgcacgtaaatggaagggttagaaagattaggt45<210>4<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0003，来自3ddna纳米结构体.<400>4aacatgttcagctccgtgtgaatcttctgacctaaatgcttctaa45<210>5<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0004，来自3ddna纳米结构体.<400>5gggtaattgagcgttaaatcatagcgaacctcccgacaacaatac45<210>6<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0005，来自3ddna纳米结构体.<400>6cgtcagactgtagaatagaaaaaagacaccacggaacaagaatga45<210>7<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0006，来自3ddna纳米结构体.<400>7accgtactcaggagcgtcatatggaaagcgcagtctgtcatagag45<210>8<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0007，来自3ddna纳米结构体.<400>8aacggctacagagcgaataatcggagtgagaatagaaaccgcctc45<210>9<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0008，来自3ddna纳米结构体.<400>9aataaaacgaactgtacagacgaactgaccaacttttcatgaggc45<210>10<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0009，来自3ddna纳米结构体.<400>10tgttttaaatatgatgaccatccccctcaaatgctttagaaagtt45<210>11<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0010，来自3ddna纳米结构体.<400>11gtaatcgtaaaacgggagaagtgtaccaaaaacattagtttcaca45<210>12<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0011，来自3ddna纳米结构体.<400>12aaaacgacggccacatcgtaaccgtaatgggataggccggttgcg45<210>13<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0012，来自3ddna纳米结构体.<400>13tcccttataaatccggtttgcaagcctggggtgcctcaagtccgg45<210>14<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0013，来自3ddna纳米结构体.<400>14aaccctcaatcaaaactgatacagtcacacgaccagtcacttgaa45<210>15<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0014，来自3ddna纳米结构体.<400>15caagaaaacaaaaagattttcatcagatgatggcaattgaggaca45<210>16<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0015，来自3ddna纳米结构体.<400>16aagagaatataaataaacacctccaatcgcaagacaattttccat45<210>17<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0016，来自3ddna纳米结构体.<400>17ataaaaacagggacagctacaatagcaagcaaatcaaataataat45<210>18<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0017，来自3ddna纳米结构体.<400>18caatgaaaccatcaaagacaagtatgttagcaaacgagcaagaac45<210>19<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0018，来自3ddna纳米结构体.<400>19accaggcggataagtgtactgcaggtcagacgattgtcttttcac45<210>20<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0019，来自3ddna纳米结构体.<400>20ggccgcttttgcgccaaaaaaacgttagtaaatgaaagagccagt45<210>21<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0020，来自3ddna纳米结构体.<400>21tgcgattttaagattcatcaagacctgctccatgttaaatacgaa45<210>22<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0021，来自3ddna纳米结构体.<400>22gaggtcatttttgcctgactaaaatgtttagactggaataccata45<210>23<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0022，来自3ddna纳米结构体.<400>23ctacaaaggctataaaattttaaggcaaagaattagcaattctaa45<210>24<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0023，来自3ddna纳米结构体.<400>24ggatgtgctgcaaggacgacgttaaatgtgagcgagacaggaaat45<210>25<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0024，来自3ddna纳米结构体.<400>25acgctggtttgccttcttttctgaaattgttatccggctagtagc45<210>26<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0025，来自3ddna纳米结构体.<400>26gctgagagccagcaataccgaatacctacattttgatatcggccc45<210>27<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0026，来自3ddna纳米结构体.<400>27gcgcagaggcgaaacagtaaccattttgcggaacaaaaacaatac45<210>28<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0027，来自3ddna纳米结构体.<400>28atcgccatatttagcctgtttcctttttaacctccggcgatagtc45<210>29<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0028，来自3ddna纳米结构体.<400>29agaaacgatttttcgctaacgctcatcgagaacaagtgtagaaga45<210>30<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0029，来自3ddna纳米结构体.<400>30aattagagccagcagggagggacgcaataataacggatcttacta45<210>31<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0030，来自3ddna纳米结构体.<400>31agtattaagaggcgtgccttgcagagccgccaccagagagccagg45<210>32<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0031，来自3ddna纳米结构体.<400>32aacaaccatcgccattgtatcattccacagacagccgcaagccaa45<210>33<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0032，来自3ddna纳米结构体.<400>33gagtagtaaattgatattcatcgaaacaaagtacaaaacctaaac45<210>34<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0033，来自3ddna纳米结构体.<400>34ccggaagcaaactttgcatcaaaaaccaaaatagcgtaacgccac45<210>35<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0034，来自3ddna纳米结构体.<400>35gatattcaaccgttgcaatgcaaggtggcatcaattgaccattga45<210>36<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0035，来自3ddna纳米结构体.<400>36aactgttgggaagcgcactccaggaacgccatcaaaaattgtaat45<210>37<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0036，来自3ddna纳米结构体.<400>37ctggccaacagaggattagtgatagggttgagtgtacgcgcggct45<210>38<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0037，来自3ddna纳米结构体.<400>38tgattgtttggataatagatcaaatcaacagttgaagtctttatt45<210>39<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0038，来自3ddna纳米结构体.<400>39tttttcaaatatagtcgctaaatttcatttgaattataaagaacc45<210>40<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0039，来自3ddna纳米结构体.<400>40ccggtattctaagtcctgaaaaagtaattctgtccggcgttaaac45<210>41<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0040，来自3ddna纳米结构体.<400>41aaaggtggcaacaagcccaaagaattaactgaacattgctattat45<210>42<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0041，来自3ddna纳米结构体.<400>42acaaataaatcctattagcgatcagtagcgacagatggtttacat45<210>43<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0042，来自3ddna纳米结构体.<400>43ttgctaaacaactgaaccgcttgatataagtatagtttgatgaaa45<210>44<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0043，来自3ddna纳米结构体.<400>44gcgcagacggtcaccattaagcagcgaaagacagctcacgttgtt45<210>45<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0044，来自3ddna纳米结构体.<400>45cggaatcgtcataagttgagcagtcaggacgttggataggctgag45<210>46<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0045，来自3ddna纳米结构体.<400>46agcctcagagcattaacagtttaattgctgaatataaatcaggtg45<210>47<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0046，来自3ddna纳米结构体.<400>47tctccgtgggaacgaaaagcgagtctggagcaaacttcaacgcaa45<210>48<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0047，来自3ddna纳米结构体.<400>48cacattaattgcgctttgattaacgccagggtttttctgccagat45<210>49<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0048，来自3ddna纳米结构体.<400>49atggattatttacagaagaacctgtttgatggtgggcgccaggca45<210>50<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0049，来自3ddna纳米结构体.<400>50agcggaattatcagtattagtaaagcatcaccttgaacatcgcaa45<210>51<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0050，来自3ddna纳米结构体.<400>51ataactatatgtatccttgaacctgagcaaaagaaacgtcagagg45<210>52<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0051，来自3ddna纳米结构体.<400>52tcatcgtaggaatctaatttaatttaggcagaggctaattactat45<210>53<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0052，来自3ddna纳米结构体.<400>53ggcatgattaagaaaatagcatgaaaatagcagcccctgaatctt45<210>54<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0053，来自3ddna纳米结构体.<400>54gccgccagcattgaaatcacaccattaccattagcacattcaact45<210>55<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0054，来自3ddna纳米结构体.<400>55cgatctaaagtttcattttcgaaggattaggattagttttaaccc45<210>56<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0055，来自3ddna纳米结构体.<400>56cgcctgataaattactacgatattcggtcgctgagcaaaaggaaa45<210>57<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0056，来自3ddna纳米结构体.<400>57gaagttttgccagctaatgcaatttcaactttaatcttgacaaat45<210>58<211>45<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_0057，来自3ddna纳米结构体.<400>58cattaacatccaaagtagattagagagtacctttacagaagcaaa45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77，来自2ddna纳米结构体.<400>1178gtataagccaacccgtcggattctgacgacagttaccatctctcctaaactcg53<210>1179<211>51<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1178，来自2ddna纳米结构体.<400>1179gcgagtaaaaatatttaaattgttacaaagttaccatctctcctaaactcg51<210>1180<211>53<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1179，来自2ddna纳米结构体.<400>1180tatcggccgcaaggcgattaagtttaccgagcttaccatctctcctaaactcg53<210>1181<211>51<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1180，来自2ddna纳米结构体.<400>1181gatgtgcttcaggaagatcgcacaatgtgattaccatctctcctaaactcg51<210>1182<211>53<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1181，来自2ddna纳米结构体.<400>1182tcgaattcgggaaacctgtcgtgcagctgattttaccatctctcctaaactcg53<210>1183<211>51<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1182，来自2ddna纳米结构体.<400>1183ttccagtcgtaatcatggtcataaaaggggttaccatctctcctaaactcg51<210>1184<211>53<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1183，来自2ddna纳米结构体.<400>1184gcccttcagagtccactattaaagggtgccgtttaccatctctcctaaactcg53<210>1185<211>51<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1184，来自2ddna纳米结构体.<400>1185tggaacaaccgcctggccctgaggcccgctttaccatctctcctaaactcg51<210>1186<211>51<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1185，来自2ddna纳米结构体.<400>1186aaagcactaaatcggaaccctaatccagttttaccatctctcctaaactcg51<210>1187<211>53<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1186，来自2ddna纳米结构体.<400>1187taaatcatataacctgtttagctaacctttaattaccatctctcctaaactcg53<210>1188<211>53<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1187，来自2ddna纳米结构体.<400>1188taggtaaactatttttgagagatcaaacgttattaccatctctcctaaactcg53<210>1189<211>53<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1188，来自2ddna纳米结构体.<400>1189gagggtaggattcaaaagggtgagacatccaattaccatctctcctaaactcg53<210>1190<211>53<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1189，来自2ddna纳米结构体.<400>1190atattttggctttcatcaacattatccagccattaccatctctcctaaactcg53<210>1191<211>53<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1190，来自2ddna纳米结构体.<400>1191tgtagccattaaaattcgcattaaatgccggattaccatctctcctaaactcg53<210>1192<211>53<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1191，来自2ddna纳米结构体.<400>1192gctttccgattacgccagctggcggctgtttcttaccatctctcctaaactcg53<210>1193<211>53<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1192，来自2ddna纳米结构体.<400>1193tcttcgctgcaccgcttctggtgcggccttccttaccatctctcctaaactcg53<210>1194<211>53<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1193，来自2ddna纳米结构体.<400>1194ctgtgtgattgcgttgcgctcactagagttgcttaccatctctcctaaactcg53<210>1195<211>53<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1194，来自2ddna纳米结构体.<400>1195cacattaaaattgttatccgctcatgcgggccttaccatctctcctaaactcg53<210>1196<211>53<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1195，来自2ddna纳米结构体.<400>1196agcaagcgtagggttgagtgttgtagggagccttaccatctctcctaaactcg53<210>1197<211>53<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1196，来自2ddna纳米结构体.<400>1197gcccgagagtccacgctggtttgcagctaactttaccatctctcctaaactcg53<210>1198<211>53<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1197，来自2ddna纳米结构体.<400>1198cccgatttagagcttgacggggaaaaagaatattaccatctctcctaaactcg53<210>1199<211>53<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1198，来自2ddna纳米结构体.<400>1199ttctactacgcgagctgaaaaggttaccgcgcttaccatctctcctaaactcg53<210>1200<211>51<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1199，来自2ddna纳米结构体.<400>1200gagacagctagctgataaattaatttttgtttaccatctctcctaaactcg51<210>1201<211>53<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1200，来自2ddna纳米结构体.<400>1201caaccgtttcaaatcaccatcaattcgagccattaccatctctcctaaactcg53<210>1202<211>65<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1201，来自2ddna纳米结构体.<400>1202taaatcaaaataattcgcgtctcggaaaccaggcaaagggaaggttaccatctctcctaa60actcg65<210>1203<211>53<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1202，来自2ddna纳米结构体.<400>1203gccatcaagctcattttttaaccacaaatccattaccatctctcctaaactcg53<210>1204<211>53<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1203，来自2ddna纳米结构体.<400>1204caactgttgcgccattcgccattcaaacatcattaccatctctcctaaactcg53<210>1205<211>53<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1204，来自2ddna纳米结构体.<400>1205aagcctggtacgagccggaagcatagatgatgttaccatctctcctaaactcg53<210>1206<211>59<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1205，来自2ddna纳米结构体.<400>1206cccagcaggcgaaaaatcccttataaatcaagccggcgttaccatctctcctaaactcg59<210>1207<211>53<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1206，来自2ddna纳米结构体.<400>1207tcggcaaatcctgtttgatggtggaccctcaattaccatctctcctaaactcg53<210>1208<211>52<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1207，来自2ddna纳米结构体.<400>1208aacgtggcgagaaaggaagggaaaccagtaattaccatctctcctaaactcg52<210>1209<211>51<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1208，来自2ddna纳米结构体.<400>1209ttttatttaagcaaatcagatattttttgtttaccatctctcctaaactcg51<210>1210<211>53<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1209，来自2ddna纳米结构体.<400>1210gtaataagttaggcagaggcatttatgatattttaccatctctcctaaactcg53<210>1211<211>51<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1210，来自2ddna纳米结构体.<400>1211catgtaatagaatataaagtaccaagccgtttaccatctctcctaaactcg51<210>1212<211>53<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1211，来自2ddna纳米结构体.<400>1212atcgcaagtatgtaaatgctgatgataggaacttaccatctctcctaaactcg53<210>1213<211>51<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1212，来自2ddna纳米结构体.<400>1213tataactaacaaagaacgcgagaacgccaattaccatctctcctaaactcg51<210>1214<211>53<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1213，来自2ddna纳米结构体.<400>1214agaaaacaaagaagatgatgaaacaggctgcgttaccatctctcctaaactcg53<210>1215<211>51<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1214，来自2ddna纳米结构体.<400>1215ctgagcaaaaattaattacattttgggttattaccatctctcctaaactcg51<210>1216<211>53<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1215，来自2ddna纳米结构体.<400>1216gcaattcacatattcctgattatcaaagtgtattaccatctctcctaaactcg53<210>1217<211>51<212>dna<213>人工序列<220><223>钉链_1216，来自2ddn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