本发明涉及海藻多糖提取技术领域，具体是一种从海藻中提取活性多糖的方法。
背景技术：
近年来，数量庞大，种类繁多的海洋生物在食品、药物、化妆品和生物材料等领域得到广泛应用，从海洋生物中提取分离生物活性物质己成为天然产物研究的热点。海洋生物最引人注目的是其丰富的药用资源，科学家已从海洋生物中分离和鉴定出多种海洋天然活性物质，其中许多具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤和抗凝血等生物活性作用，为研制开发海洋新药奠定基础。与蛋白质、脂肪、核酸等其他生物大分子相比，糖类具有更强的亲水性。海洋生物通过合成多糖类物质，以保持体内生命活动所需要的自由水分，来适应海洋这个特殊的环境。多糖广泛参与细胞识别、细胞生长、分化、代谢、胚胎发育、细胞癌变、病毒感染和免疫应答等各项生命活动，具有抗病毒、抗凝血、抗肿瘤、抗突变、抗溃疡、抗氧化、降血糖和降血脂等生物活性，成为现代医学和功能食品工作者共同关注的焦点。海藻多糖是海藻所含的各种高分子碳水化合物，占干重的20、70％，是海藻的主要成分。20世纪60年代以来，人们逐渐发现海藻多糖具有多方面的生物活性，如抗病毒、抗肿瘤、免疫调节、活血化癖、抗衰老和保护肌体细胞等，且多数无毒，在开发成为海洋药物方面有较大的潜力。
但是，由于人体内缺乏相应的分解酶，通过食用海藻，人体无法直接吸收海藻多糖，因此需要从海藻中提取海藻多糖。但是，现在的提取方法，不能保证提取的纯度和效果，且提取效率低，得到的产品不能满足社会的需求，存在产品质量差的问题，同时也不能使得被人体很好的吸收，最后海藻多糖的保健效果不能很好的保证。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种从海藻中提取活性多糖的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种从海藻中提取活性多糖的方法，具体包括以下步骤：
s1、海藻清洗：取新鲜海藻，洗净晾干后将海藻切碎；
s2、海藻粉碎处理：将切碎后的海藻先后置于粉碎机和超微粉碎机中进行粉碎，得到粒径为10-30μm海藻超微粉；
s3、海藻脱脂处理：将超微海藻粉利用石油醚进行脱脂处理得到脱脂海藻粉；
s4、酶解处理：将脱脂海藻粉加入蒸馏水和复合酶，辅助微波进行酶解，酶解结束后灭酶，过滤得沉淀物和过滤液；
s5、超生提取：往步骤s4得到的沉淀物中加入10-12倍沉淀物质量的蒸馏水，进行超声提取，提取结束后离心，取上清液；
s6、浓缩：合并步骤s4中的过滤液和步骤s5中的上清液，进行减压浓缩，得浓缩液；
s7、去蛋白处理：往浓缩液中加入去蛋白处理剂，搅拌均匀后静置一段时间，离心去除沉淀得上清液；
s8、脱色处理：往步骤s7得到的上清液中脱色剂进行脱色处理，脱色处理后进行固液分离，收集滤液；
s9、醇沉：往步骤s8得到的滤液加入3-5倍体积的乙醇，搅拌均匀后于0-5℃下冷藏静置15-25h，离心处理去上清液得到沉淀；
s10、真空干燥：对步骤s9得到的沉淀进行真空干燥，得到海藻活性多糖。
进一步的：所述步骤s1中，先将海藻置于碱水池中漂洗10-15min，后将海藻捞出置于清水池中清洗2-4次，每次清洗时间为5-10min，清洗完成后将海藻取出置于切片机中进行剪切得海藻碎料。
进一步的：所述步骤s3中，超微海藻粉与石油醚的质量比为1:3.5-5.5，在温度为50-60℃下浸提3-4次进行脱脂处理，浸提结束后离心，沉淀物质在50-80℃下干燥，得到脱脂海藻粉。
进一步的：所述步骤s4中，脱脂海藻粉与蒸馏水的质量比为1:6-8，复合酶为纤维素酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶的混合物，复合酶的添加量为沉淀物质量的0.8-1.2％，酶解过程中控制ph为6.5-7.5，酶解温度为45-55℃，酶解时间为2-3h；所述微波的功率为400-600w，频率为700-1000mhz。
进一步的：所述步骤s5中，超生提取的功率为200-300w，超生提取温度为70-80℃，超生提取时间为70-100min。
进一步的：所述步骤s6中，浓缩为减压浓缩，即在0.1-0.5mpa真空度，55-85℃条件下将过滤液和上清液浓缩至原体积的1/5-1/10。
进一步的：所述步骤s7中，所述去蛋白处理剂为三氯乙酸，使浓缩液中的三氯乙酸浓度为1-2g/ml，搅拌均匀后静置12-24h，离心除去蛋白质沉淀。
进一步的：所述步骤s8中，脱色剂为活性炭、活性白土和β-环糊精的混合物，其中活性炭、活性白土和β-环糊精的质量比为14-18:10-14:5-7；脱色剂的添加量为步骤s7得到的上清液质量的3-5％。
进一步的：所述步骤s9中，加入的乙醇浓度为93-95％。
进一步的：所述步骤s10中，真空干燥的温度为60-80℃，压力为5-10pa。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明一种从海藻中提取活性多糖的方法，先对海藻进行超微粉碎，再采用微波辅助酶解和超生提取结合的方式对海藻的多糖进行提取，达到良好的细胞破壁效果，有效的提高了多糖的浸出率，进而缩短提取时间，大大的提高了提取效率，工艺路线简单，生产成本低。
本发明的提取方法简单可行，多糖的提取转化率和纯度均较高，易于工业化生产，安全性更高，大大提高海藻的经济价值。
本发明的提取方法去蛋白和脱色过程温和，缩短了工艺流程，降低了能耗，减少了有机溶剂用量，同时离子液体可以得到有效的回收再利用，降低了物耗，更适合大规模生产与应用。
本发明提取方法得到的海藻多糖能增强机体的免疫力，能有效杀伤肿瘤细胞达到抗肿瘤的目的，能够影响细胞生化代谢、抑制肿瘤细胞周期和抑制肿瘤组织中sod活性，同时具有清除自由基、提高抗氧化酶活性和抑制脂质过氧化的活性，起到保护生物膜和延缓衰老的作用。
具体实施方式
为了加深对本发明的理解，下面将结合实施例对本发明作进一步详述，以下实施例仅用于解释本发明，并不构成对本发明保护范围的限定。
实施例1
一种从海藻中提取活性多糖的方法，具体包括以下步骤：
s1、海藻清洗：取新鲜海藻，先将海藻置于碱水池中漂洗10min，后将海藻捞出置于清水池中清洗2次，每次清洗时间为5min，清洗完成后将海藻取出置于切片机中进行剪切得海藻碎料；
s2、海藻粉碎处理：将切碎后的海藻先后置于粉碎机和超微粉碎机中进行粉碎，得到粒径为10μm海藻超微粉；
s3、海藻脱脂处理：将超微海藻粉利用石油醚进行脱脂处理得到脱脂海藻粉；其中超微海藻粉与石油醚的质量比为1:3.5，在温度为50℃下浸提3次进行脱脂处理，浸提结束后离心，沉淀物质在50℃下干燥，得到脱脂海藻粉，
s4、酶解处理：将脱脂海藻粉加入蒸馏水和复合酶，辅助微波进行酶解，酶解结束后灭酶，过滤得沉淀物和过滤液；其中脱脂海藻粉与蒸馏水的质量比为1:6，复合酶为纤维素酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶的混合物，复合酶的添加量为沉淀物质量的0.8％，酶解过程中控制ph为6.5，酶解温度为45℃，酶解时间为2h；所述微波的功率为400w，频率为700mhz。
s5、超生提取：往步骤s4得到的沉淀物中加入10倍沉淀物质量的蒸馏水，进行超声提取，提取结束后离心，取上清液；其中超生提取的功率为200w，超生提取温度为70℃，超生提取时间为70min。
s6、浓缩：合并步骤s4中的过滤液和步骤s5中的上清液，进行减压浓缩，得浓缩液；其中浓缩为减压浓缩，即在0.1mpa真空度，55℃条件下将过滤液和上清液浓缩至原体积的1/5。
s7、去蛋白处理：往浓缩液中加入去蛋白处理剂，搅拌均匀后静置一段时间，离心去除沉淀得上清液；其中所述去蛋白处理剂为三氯乙酸，使浓缩液中的三氯乙酸浓度为1g/ml，搅拌均匀后静置12h，离心除去蛋白质沉淀。
s8、脱色处理：往步骤s7得到的上清液中脱色剂进行脱色处理，脱色处理后进行固液分离，收集滤液；其中脱色剂为活性炭、活性白土和β-环糊精的混合物，其中活性炭、活性白土和β-环糊精的质量比为14:10:5；脱色剂的添加量为步骤s7得到的上清液质量的3％。
s9、醇沉：往步骤s8得到的滤液加入3倍体积的乙醇，搅拌均匀后于0℃下冷藏静置15h，离心处理去上清液得到沉淀；其中加入的乙醇浓度为93％。
s10、真空干燥：对步骤s9得到的沉淀进行真空干燥，得到海藻活性多糖；其中真空干燥的温度为60℃，压力为5pa。
实施例2
一种从海藻中提取活性多糖的方法，具体包括以下步骤：
s1、海藻清洗：取新鲜海藻，先将海藻置于碱水池中漂洗10min，后将海藻捞出置于清水池中清洗3次，每次清洗时间为5min，清洗完成后将海藻取出置于切片机中进行剪切得海藻碎料；
s2、海藻粉碎处理：将切碎后的海藻先后置于粉碎机和超微粉碎机中进行粉碎，得到粒径为15μm海藻超微粉；
s3、海藻脱脂处理：将超微海藻粉利用石油醚进行脱脂处理得到脱脂海藻粉；其中超微海藻粉与石油醚的质量比为1:4，在温度为50℃下浸提3次进行脱脂处理，浸提结束后离心，沉淀物质在55℃下干燥，得到脱脂海藻粉，
s4、酶解处理：将脱脂海藻粉加入蒸馏水和复合酶，辅助微波进行酶解，酶解结束后灭酶，过滤得沉淀物和过滤液；其中脱脂海藻粉与蒸馏水的质量比为1:6.5，复合酶为纤维素酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶的混合物，复合酶的添加量为沉淀物质量的0.9％，酶解过程中控制ph为6.5，酶解温度为45℃，酶解时间为2.5h；所述微波的功率为450w，频率为750mhz。
s5、超生提取：往步骤s4得到的沉淀物中加入10.5倍沉淀物质量的蒸馏水，进行超声提取，提取结束后离心，取上清液；其中超生提取的功率为200w，超生提取温度为70℃，超生提取时间为75min。
s6、浓缩：合并步骤s4中的过滤液和步骤s5中的上清液，进行减压浓缩，得浓缩液；其中浓缩为减压浓缩，即在0.2mpa真空度，55-85℃条件下将过滤液和上清液浓缩至原体积的1/5-1/10。
s7、去蛋白处理：往浓缩液中加入去蛋白处理剂，搅拌均匀后静置一段时间，离心去除沉淀得上清液；其中所述去蛋白处理剂为三氯乙酸，使浓缩液中的三氯乙酸浓度为1.2g/ml，搅拌均匀后静置14h，离心除去蛋白质沉淀。
s8、脱色处理：往步骤s7得到的上清液中脱色剂进行脱色处理，脱色处理后进行固液分离，收集滤液；其中脱色剂为活性炭、活性白土和β-环糊精的混合物，其中活性炭、活性白土和β-环糊精的质量比为15:11:5.5；脱色剂的添加量为步骤s7得到的上清液质量的3.5％。
s9、醇沉：往步骤s8得到的滤液加入3.5倍体积的乙醇，搅拌均匀后于1℃下冷藏静置18h，离心处理去上清液得到沉淀；其中加入的乙醇浓度为93.5％。
s10、真空干燥：对步骤s9得到的沉淀进行真空干燥，得到海藻活性多糖；其中真空干燥的温度为65℃，压力为6pa。
实施例3
一种从海藻中提取活性多糖的方法，具体包括以下步骤：
s1、海藻清洗：取新鲜海藻，先将海藻置于碱水池中漂洗10min，后将海藻捞出置于清水池中清洗3次，每次清洗时间为7min，清洗完成后将海藻取出置于切片机中进行剪切得海藻碎料；
s2、海藻粉碎处理：将切碎后的海藻先后置于粉碎机和超微粉碎机中进行粉碎，得到粒径为20μm海藻超微粉；
s3、海藻脱脂处理：将超微海藻粉利用石油醚进行脱脂处理得到脱脂海藻粉；其中超微海藻粉与石油醚的质量比为1:4.5，在温度为55℃下浸提3次进行脱脂处理，浸提结束后离心，沉淀物质在60℃下干燥，得到脱脂海藻粉，
s4、酶解处理：将脱脂海藻粉加入蒸馏水和复合酶，辅助微波进行酶解，酶解结束后灭酶，过滤得沉淀物和过滤液；其中脱脂海藻粉与蒸馏水的质量比为1:7，复合酶为纤维素酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶的混合物，复合酶的添加量为沉淀物质量的1.0％，酶解过程中控制ph为7.0，酶解温度为50℃，酶解时间为2.5h；所述微波的功率为500w，频率为850mhz。
s5、超生提取：往步骤s4得到的沉淀物中加入11倍沉淀物质量的蒸馏水，进行超声提取，提取结束后离心，取上清液；其中超生提取的功率为250w，超生提取温度为75℃，超生提取时间为85min。
s6、浓缩：合并步骤s4中的过滤液和步骤s5中的上清液，进行减压浓缩，得浓缩液；其中浓缩为减压浓缩，即在0.3mpa真空度，70℃条件下将过滤液和上清液浓缩至原体积的1/7。
s7、去蛋白处理：往浓缩液中加入去蛋白处理剂，搅拌均匀后静置一段时间，离心去除沉淀得上清液；其中所述去蛋白处理剂为三氯乙酸，使浓缩液中的三氯乙酸浓度为1.5g/ml，搅拌均匀后静置20h，离心除去蛋白质沉淀。
s8、脱色处理：往步骤s7得到的上清液中脱色剂进行脱色处理，脱色处理后进行固液分离，收集滤液；其中脱色剂为活性炭、活性白土和β-环糊精的混合物，其中活性炭、活性白土和β-环糊精的质量比为16:12:6；脱色剂的添加量为步骤s7得到的上清液质量的4。
s9、醇沉：往步骤s8得到的滤液加入4倍体积的乙醇，搅拌均匀后于3℃下冷藏静置20h，离心处理去上清液得到沉淀；其中加入的乙醇浓度为94％。
s10、真空干燥：对步骤s9得到的沉淀进行真空干燥，得到海藻活性多糖；其中真空干燥的温度为70℃，压力为8pa。
实施例4
一种从海藻中提取活性多糖的方法，具体包括以下步骤：
s1、海藻清洗：取新鲜海藻，先将海藻置于碱水池中漂洗12min，后将海藻捞出置于清水池中清洗3次，每次清洗时间为8min，清洗完成后将海藻取出置于切片机中进行剪切得海藻碎料；
s2、海藻粉碎处理：将切碎后的海藻先后置于粉碎机和超微粉碎机中进行粉碎，得到粒径为25μm海藻超微粉；
s3、海藻脱脂处理：将超微海藻粉利用石油醚进行脱脂处理得到脱脂海藻粉；其中超微海藻粉与石油醚的质量比为1:5，在温度为55℃下浸提4次进行脱脂处理，浸提结束后离心，沉淀物质在70℃下干燥，得到脱脂海藻粉，
s4、酶解处理：将脱脂海藻粉加入蒸馏水和复合酶，辅助微波进行酶解，酶解结束后灭酶，过滤得沉淀物和过滤液；其中脱脂海藻粉与蒸馏水的质量比为1:7.5，复合酶为纤维素酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶的混合物，复合酶的添加量为沉淀物质量的1.1％，酶解过程中控制ph为7.0，酶解温度为55℃，酶解时间为2.5h；所述微波的功率为550w，频率为900mhz。
s5、超生提取：往步骤s4得到的沉淀物中加入11.5倍沉淀物质量的蒸馏水，进行超声提取，提取结束后离心，取上清液；其中超生提取的功率为250w，超生提取温度为78℃，超生提取时间为90min。
s6、浓缩：合并步骤s4中的过滤液和步骤s5中的上清液，进行减压浓缩，得浓缩液；其中浓缩为减压浓缩，即在0.4mpa真空度，75℃条件下将过滤液和上清液浓缩至原体积的1/8。
s7、去蛋白处理：往浓缩液中加入去蛋白处理剂，搅拌均匀后静置一段时间，离心去除沉淀得上清液；其中所述去蛋白处理剂为三氯乙酸，使浓缩液中的三氯乙酸浓度为1.8g/ml，搅拌均匀后静置22h，离心除去蛋白质沉淀。
s8、脱色处理：往步骤s7得到的上清液中脱色剂进行脱色处理，脱色处理后进行固液分离，收集滤液；其中脱色剂为活性炭、活性白土和β-环糊精的混合物，其中活性炭、活性白土和β-环糊精的质量比为17:13:6.5；脱色剂的添加量为步骤s7得到的上清液质量的4.5％。
s9、醇沉：往步骤s8得到的滤液加入4.5倍体积的乙醇，搅拌均匀后于4℃下冷藏静置20h，离心处理去上清液得到沉淀；其中加入的乙醇浓度为94.5％。
s10、真空干燥：对步骤s9得到的沉淀进行真空干燥，得到海藻活性多糖；其中真空干燥的温度为75℃，压力为9pa。
实施例5
一种从海藻中提取活性多糖的方法，具体包括以下步骤：
s1、海藻清洗：取新鲜海藻，先将海藻置于碱水池中漂洗15min，后将海藻捞出置于清水池中清洗4次，每次清洗时间为5min，清洗完成后将海藻取出置于切片机中进行剪切得海藻碎料；
s2、海藻粉碎处理：将切碎后的海藻先后置于粉碎机和超微粉碎机中进行粉碎，得到粒径为30μm海藻超微粉；
s3、海藻脱脂处理：将超微海藻粉利用石油醚进行脱脂处理得到脱脂海藻粉；其中超微海藻粉与石油醚的质量比为1:5.5，在温度为60℃下浸提4次进行脱脂处理，浸提结束后离心，沉淀物质在80℃下干燥，得到脱脂海藻粉，
s4、酶解处理：将脱脂海藻粉加入蒸馏水和复合酶，辅助微波进行酶解，酶解结束后灭酶，过滤得沉淀物和过滤液；其中脱脂海藻粉与蒸馏水的质量比为1:8，复合酶为纤维素酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶的混合物，复合酶的添加量为沉淀物质量的1.2％，酶解过程中控制ph为7.5，酶解温度为55℃，酶解时间为3h；所述微波的功率为600w，频率为1000mhz。
s5、超生提取：往步骤s4得到的沉淀物中加入12倍沉淀物质量的蒸馏水，进行超声提取，提取结束后离心，取上清液；其中超生提取的功率为300w，超生提取温度为80℃，超生提取时间为100min。
s6、浓缩：合并步骤s4中的过滤液和步骤s5中的上清液，进行减压浓缩，得浓缩液；其中浓缩为减压浓缩，即在0.5mpa真空度，85℃条件下将过滤液和上清液浓缩至原体积的1/10。
s7、去蛋白处理：往浓缩液中加入去蛋白处理剂，搅拌均匀后静置一段时间，离心去除沉淀得上清液；其中所述去蛋白处理剂为三氯乙酸，使浓缩液中的三氯乙酸浓度为2g/ml，搅拌均匀后静置24h，离心除去蛋白质沉淀。
s8、脱色处理：往步骤s7得到的上清液中脱色剂进行脱色处理，脱色处理后进行固液分离，收集滤液；其中脱色剂为活性炭、活性白土和β-环糊精的混合物，其中活性炭、活性白土和β-环糊精的质量比为18:14:7；脱色剂的添加量为步骤s7得到的上清液质量的5％。
s9、醇沉：往步骤s8得到的滤液加入5倍体积的乙醇，搅拌均匀后于5℃下冷藏静置25h，离心处理去上清液得到沉淀；其中加入的乙醇浓度为95％。
s10、真空干燥：对步骤s9得到的沉淀进行真空干燥，得到海藻活性多糖；其中真空干燥的温度为80℃，压力为10pa。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明的范围内。本发明要求的保护范围由所附的权利要求书及其等同物界定。