本发明涉及水体固氮菌，具体地，涉及一种水体高效固氮菌的培育方法。
背景技术：
随着我国水体养殖业规模化、集约化和产业化程度不断调高，水体富营养化明显加剧，局部地区水域生态环境不断恶化，水体生态失衡。对水体富营养化现象国内外学者开展了大量研究，主要集中在无机氮磷的转化及去除等方面，而对于有机氮在水体氮素循环中的作用缺乏有效认识，对能利用转化有机氮的氨化细菌和固氮菌研究较少。但随着富营养化的水体越来越多，藻类水华爆发越来越频繁，大量藻类死亡分解后释放的有机氮如何快速被转化为氨氮，或通过固氮菌产物移出水体，成为陆生植物的氮源，是亟需解决的技术难题，也已经成为近来世界各国相关领域的研究热点
虽然现有技术中报道一些水体菌种固氮的方法，但是普遍存在固氮周期长，固氮效果不理想的缺陷。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种水体高效固氮菌的培育方法，该培育方法能够培育出高效固氮效果的菌种，同时该培育方法具有操作简便和周期短的特点。
为了实现上述目的，本发明提供了一种水体高效固氮菌的培育方法，包括：
1)将巨大芽孢杆菌接种于培养基中进行初步培养；
2)将培养基置于γ射线下进行二步培养；
3)将培养基置于进行冷冻处理，接着升温至15-35℃；
4)选取培养基中的混合菌群通过平板划线法筛选出水体高效固氮菌；
其中，培养基含有亚硝基乙基脲和/或亚硝基甲基脲。
优选地，培养基为ms培养基或1/2ms培养基。
优选地，在步骤1)中，接种量为3％-5％。
优选地，在步骤1)中，初步培养满足以下条件：培养温度为15-35℃，培养时间为5-10天，相对湿度为40-60％。
优选地，在培养基中，亚硝基乙基脲和亚硝基甲基脲的总含量为1.2-2重量％。
优选地，二步培养满足以下条件：培养温度为15-35℃，培养时间为15-24h，相对湿度为40-60％，γ射线的能量为0.8-1.5mev。
优选地，冷冻处理满足以下条件：处理温度为-15～-10℃，处理时间为8-10h。
优选地，在步骤1)中，平板划线法在平板设计沿线依次连接的a、b、c和d四区，四区面积的为d>c>b>a；最后选取d区的菌为水体高效固氮菌。
在上述技术方案中，本发明首先通过亚硝基乙基脲和/或亚硝基甲基脲进行化学诱变，接着通过物理诱变，然后通过冷冻处理，最后通过平板划线法筛选出水体高效固氮菌；该水体高效固氮菌能够高效地对污水进行固氮，进而实现了水体的清洁。
本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
具体实施方式
以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
本发明提供了一种水体高效固氮菌的培育方法，包括：
1)将巨大芽孢杆菌接种于培养基中进行初步培养；
2)将培养基置于γ射线下进行二步培养；
3)将培养基置于进行冷冻处理，接着升温至15-35℃；
4)选取培养基中的混合菌群通过平板划线法筛选出水体高效固氮菌；
其中，培养基含有亚硝基乙基脲和/或亚硝基甲基脲。
在本发明中，培养基的具体种类可以在宽的范围内选择，但是从成本上考虑，优选地，培养基为ms培养基或1/2ms培养基。
在本发明的步骤1)中，初始菌的接种量可以在宽的范围内选择，但是为了能够进一步地快速扩大菌群，优选地，在步骤1)中，接种量为3％-5％。
在本发明的步骤1)中，初步培养的条件可以在宽的范围内选择，但是为了能够进一步地快速扩大菌群，优选地，在步骤1)中，初步培养满足以下条件：培养温度为15-35℃，培养时间为5-10天，相对湿度为40-60％。
在本发明的步骤1)中，亚硝基乙基脲和亚硝基甲基脲的含量可以在宽的范围内选择，但是为了能够快速地促进巨大芽孢杆菌的诱变，优选地，在培养基中，亚硝基乙基脲和亚硝基甲基脲的总含量为1.2-2重量％。
在本发明的步骤2)中，二步培养的条件可以在宽的范围内选择，但是为了能够快速地促进巨大芽孢杆菌的诱变，优选地，二步培养满足以下条件：培养温度为15-35℃，培养时间为15-24h，相对湿度为40-60％，γ射线的能量为0.8-1.5mev。
在本发明的步骤2)中，冷冻处理的条件可以在宽的范围内选择，但是为了能够快速地促进巨大芽孢杆菌的筛选，优选地，冷冻处理满足以下条件：处理温度为-15～-10℃，处理时间为8-10h。
在本发明的步骤4)中，平板划线法的具体操作可以在宽的范围内选择，但是为了能够更好地筛选出目标菌种，优选地，在步骤4)中，平板划线法在平板设计沿线依次连接的a、b、c和d四区，四区面积的为d>c>b>a；最后选取d区的菌为水体高效固氮菌。
以下将通过实施例对本发明进行详细描述。
实施例1
1)将巨大芽孢杆菌接以3％-5％的接种量接种于ms培养基(含有亚硝基乙基脲，总含量为1.8重量％)中进行初步培养(培养温度为25℃，培养时间为8天，相对湿度为50％)；
2)将培养基置于γ射线下进行二步培养(培养温度为25℃，培养时间为20h，相对湿度为50％，γ射线的能量为1mev)；
3)将培养基置于进行冷冻处理(处理温度为-12℃，处理时间为9h)，接着升温至25℃；
4)选取培养基中的混合菌群通过平板划线法(在平板设计沿线依次连接的a、b、c和d四区，四区面积的为d>c>b>a)；选取d区的菌为水体高效固氮菌。
实施例2
1)将巨大芽孢杆菌接以3％的接种量接种于ms培养基(含有亚硝基乙基脲和亚硝基甲基脲，总含量为1.2重量％)中进行初步培养(培养温度为15℃，培养时间为10天，相对湿度为60％)；
2)将培养基置于γ射线下进行二步培养(培养温度为15℃，培养时间为24h，相对湿度为60％，γ射线的能量为1.5mev)；
3)将培养基置于进行冷冻处理(处理温度为-15℃，处理时间为8h)，接着升温至15℃；
4)选取培养基中的混合菌群通过平板划线法(在平板设计沿线依次连接的a、b、c和d四区，四区面积的为d>c>b>a)；选取d区的菌为水体高效固氮菌。
实施例3
1)将巨大芽孢杆菌接以5％的接种量接种于1/2ms培养基(含有亚硝基乙基脲和/或亚硝基甲基脲，总含量为2重量％)中进行初步培养(培养温度为35℃，培养时间为5天，相对湿度为40％)；
2)将培养基置于γ射线下进行二步培养(培养温度为35℃，培养时间为15h，相对湿度为40％，γ射线的能量为0.8mev)；
3)将培养基置于进行冷冻处理(处理温度为-10℃，处理时间为10h)，接着升温至35℃；
4)选取培养基中的混合菌群通过平板划线法(在平板设计沿线依次连接的a、b、c和d四区，四区面积的为d>c>b>a)；选取d区的菌为水体高效固氮菌。
应用例1
将上述菌种投放于污水中处理15天，然后检测污水处理前后的bod，具体结果见表1。
表1
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。