本发明属于化学生物学非天然手性氨基酸合成领域，尤其涉及一种含有三氮嗪杂环长链非天然手性氨基酸及其胺的酸盐、制备方法及用途。
背景技术：
天然手性氨基酸是构建多肽和蛋白质的基本结构单元。但用天然手性氨基酸构建的多肽和蛋白质也存在一些问题，例如容易被体内的蛋白酶降解，不易通过血脑屏障，半衰期短的缺点；另外存在定点修饰困难的问题。因此在一个生物活性肽链上或蛋白质中引入合适的非天然氨基酸可以加强其抗降解能力，或者提高与受体的亲和力及生物利用度。也可以将非天然氨基酸引入到多肽或蛋白质中，对其进行定点修饰来研究生物学活性。但非天然手性氨基酸无法从自然界中获得，必须依赖人工合成。化学生物学家已经发展了近百种具有不同生理功能的可编码非天然手性氨基酸，其中类似于赖氨酸的非天然手性氨基酸就有二十多种(l.wang,p.g.schultz,angew.chem.int.ed.2005,44,34–66；李劼，王杰，陈鹏，actachim.sin.2012,70,1439–1445；黄雨佳，王永，胡利明，秦学文，刘涛，sci.sin.chem.2018,48,1394–1406)。尽管如此，结合生物多样性，发展新的非天然手性氨基酸仍然具有非常重要的意义。
最近美国j.a.prescher、英国m.e.webb和捷克m.vrabel尝试利用1,2,4-三氮嗪与反式-环辛烯类化合物的反电子需求狄尔斯-阿尔德环加成反应(inverseelectron-demanddiels-aldercycloaddition，ied-da)，发展新的生物正交反应(j.a.prescher,etal.,j.am.chem.soc.2015,137,8388-8391&m.e.webb,etal.,chem.eur.j.2015,21,14376–14381&m.vrabel,etal.,chem.sci.2017,8,3593–3598.)，其中一个webb将三氮嗪衍生化为短链手性氨基酸。但这些1,2,4-三氮嗪要么富电子，要么在环的3,6-位连有双芳香基取代基团，造成室温环加成反应速率缓慢。因此迫切需要设计合成新型含有三氮嗪杂环长链的非天然手性氨基酸。
技术实现要素：
本发明为克服现有技术的不足，提供一种含有三氮嗪杂环长链的非天然手性氨基酸及其胺的酸盐、用途。含有三氮嗪杂环长链的非天然手性氨基酸可用作氨基酸基元，融合到多肽及蛋白质中，进行快速生物连接和标记。
本发明的技术方案如下：含有三氮嗪杂环长链非天然手性氨基酸化合物，具有如下(i)化学结构：
其中：x为ch2、o、s、se；
r是cf3、cf2h、ar1so2cf2、cn、ar2so2、co2r1、conr2r3、p(o)(or4)2、so3r5；
r1、r2、r3、r4、r5选自c1～c6的烷基；
ar、ar1、ar2选自取代或未取代的c6～c20的芳香基、取代或未取代的c5～c20杂环基；
所述取代的c6～c20的芳香基或取代的c5～c20的杂环基中的取代基各自独立地选自c1～c5的烷基、c1～c5的烷氧基、c6～c14的芳基、取代或未取代的c2～c24的不饱和烷基、含硫基团、卤素、氰基、硝基与酯基中的一种或多种；
所述取代的c2～24的不饱和烷基中的取代基选自c1～c5的烷基、c1～c5的烷氧基、含硫基团、c6～c14的芳基、卤素、氰基、硝基与酯基中的一种或多种。本发明的第二个技术方案是含有三氮嗪杂环长链非天然手性氨基酸化合物的制备方法，将式(ii)所示的氨基和/或羧基保护的手性氨基酸与式(iii)所示的三氮嗪甲酸进行酰胺化反应，得到式(ia)所示的含有三氮嗪杂环长链非天然手性氨基酸化合物及其胺的酸盐:
其中：x为ch2、o、s、se；
r是cf3、cf2h、ar1so2cf2、cn、ar2so2、co2r1、conr2r3、p(o)(or4)2、so3r5；
r1、r2、r3、r4、r5选自c1～c6的烷基；
ar、ar1、ar2选自取代或未取代的c6～c20的芳香基、取代或未取代的c5～c20杂环基；
所述取代的c6～c20的芳香基或取代的c5～c20的杂环基中的取代基各自独立地选自c1～c5的烷基、c1～c5的烷氧基、c6～c14的芳基、取代或未取代的c2～c24的不饱和烷基、含硫基团、卤素、氰基、硝基与酯基中的一种或多种；
所述取代的c2～24的不饱和烷基中的取代基选自c1～c5的烷基、c1～c5的烷氧基、含硫基团、c6～c14的芳基、卤素、氰基、硝基与酯基中的一种或多种。
所述酰胺化反应试剂由选自dcc、dic、edci、bop、pybop、aop、pyaop、hbtu、hatu、hobt、hoat、bop-cl、tffh、pybrop、eedq、iidq、cip、dppa、comu或pyoxim的第一试剂与由选自et3n、dipea、nmm或dmap的第二试剂组成。
所述酰胺化反应溶剂选自n,n-二甲基甲酰胺(dmf)、n,n-二甲基乙酰胺(dma)、n-甲基吡咯烷酮(nmp)、二甲亚砜、乙腈、氯仿、二氯甲烷或二氯乙烷。
本发明的第三个技术方案是含有三氮嗪杂环长链非天然手性氨基酸化合物的制备方法，将式(iv)所示的boc保护的l-硒代半胱氨酸与式(v)所示的三氮嗪甲酰胺乙基溴还原-亲核取代反应，得到式(ib)所示的含有三氮嗪杂环长链非天然手性氨基酸化合物及其胺的酸盐:
其中：x为ch2、o、s、se；
r是cf3、cf2h、ar1so2cf2、cn、ar2so2、co2r1、conr2r3、p(o)(or4)2、so3r5；
r1、r2、r3、r4、r5选自c1～c6的烷基；
ar、ar1、ar2选自取代或未取代的c6～c20的芳香基、取代或未取代的c5～c20杂环基；
所述取代的c6～c20的芳香基或取代的c5～c20的杂环基中的取代基各自独立地选自c1～c5的烷基、c1～c5的烷氧基、c6～c14的芳基、取代或未取代的c2～c24的不饱和烷基、含硫基团、卤素、氰基、硝基与酯基中的一种或多种；
所述取代的c2～24的不饱和烷基中的取代基选自c1～c5的烷基、c1～c5的烷氧基、含硫基团、c6～c14的芳基、卤素、氰基、硝基与酯基中的一种或多种。
所述还原-亲核取代反应试剂由选自硼氢化锂、硼氢化钠、硼氢化钾、氰基硼氢化钠或氰基硼氢化钾的第一试剂与由选自et3n、dipea、nmm或dmap的第二试剂组成。
所述还原-亲核取代反应溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、乙二醇、n,n-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、n-甲基吡咯烷酮、乙腈、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、乙醚、二乙醇二甲醚、氯仿、二氯甲烷、二氯乙烷或四氯化碳。
本发明的第四个技术方案是含有三氮嗪杂环长链非天然手性氨基酸化合物之胺的酸盐，与盐酸、硫酸、磷酸、乙酸、三氟乙酸、甲磺酸、三氟甲磺酸、对甲苯磺酸、酒石酸、顺丁烯二酸或反丁烯二酸组成相应的酸盐。
在本发明中，所述式(i)所示的含有三氮嗪杂环长链非天然手性氨基酸化合物，最优选为下结构的一种：
本发明的第五个技术方案是含有三氮嗪杂环长链非天然手性氨基酸化合物的用途，作为氨基酸基元融合到多肽及蛋白质中，进行快速生物连接和标记
本发明的第六个技术方案是含有三氮嗪杂环长链非天然手性氨基酸化合物的胺的酸盐用途，作为氨基酸基元融合到多肽及蛋白质中，进行快速生物连接和标记。
有益效果
1.制备的含有三氮嗪杂环长链的非天然手性氨基酸是一类全新的手性氨基酸化合物；
2.相对于天然手性氨基酸，制备的含有三氮嗪杂环长链的非天然手性氨基酸脂溶性高，生物相容性更好；
3.相对于天然手性氨基酸，制备的三氮嗪杂环长链的非天然手性氨基酸引入的三氮嗪杂环相对比较稳定，与生物体内的水分子、氨基和巯基类分子不易进行亲核副反应，从而有利于生物正交反应；
4.相对于天然手性氨基酸，制备的三氮嗪杂环长链的非天然手性氨基酸中的三氮嗪杂环有较好的紫外吸收性能，便于生物活体监测。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：n6-[5-苯基-6-(三氟甲基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰]-l-赖氨酸(化合物1)
将5-苯基-6-(三氟甲基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸(135mg,0.5mmol)和dmf(8ml)加入25ml反应瓶中。在室温下，向反应瓶中加入cbz和bn保护氨基及羧基的l-赖氨酸(185mg,0.5mmol)、hatu(231mg,0.6mmol)和dipea(193mg,1.5mmol)。混合物加热升温至60℃，在此温度搅拌反应6小时。减压脱除溶剂后，残渣溶解于30ml乙酸乙酯中，并用饱和食盐水15ml洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，经快速硅胶柱层析分离，得到202mg中间体。将此中间体溶解于15ml甲醇中，加入pd/c(20mg,10％)，连接氢气球，室温反应4小时，薄层硅胶色谱(tlc)监测表明含有保护基的中间体完全消失。经硅藻土过滤后，薄膜旋蒸脱除溶剂，得到浅灰色固体(119mg,总收率60％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.32-1.40(m,2h),1.55-1.68(m,2h),1.78-1.88(m,2h),3.45(t,2h),3.56(t,1h),7.45-7.55(m,3h),7.76-7.84(m,2h)；19fnmr(376mhz,dmso-d6),δ(ppm):–61.8(s,3f)。
实施例2：n6-[5-(4-氟苯基)-6-(三氟甲基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰]-l-赖氨酸(化合物2)
与实施例1类似的方法，采用氨基及羧基保护的l-赖氨酸与5-(4-氟苯基)-6-(三氟甲基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物2(112mg,总收率54％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.30-1.39(m,2h),1.52-1.67(m,2h),1.79-1.87(m,2h),3.43(t,2h),3.52(t,1h),7.32(t,2h),7.85-7.89(m,2h)；19fnmr(376mhz,dmso-d6),δ(ppm):–61.4(s,3f),–105.8～–105.9(m,f)。
实施例3：n6-[5-(4-氯苯基)-6-(三氟甲基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰]-l-赖氨酸(化合物3)
与实施例1类似的方法，采用氨基及羧基保护的l-赖氨酸与5-(4-氯苯基)-6-(三氟甲基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物3(97mg,总收率45％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.33-1.38(m,2h),1.53-1.66(m,2h),1.77-1.86(m,2h),3.45(t,2h),3.55(t,1h),7.30-7.35(m,2h),7.85-7.87(m,2h)；19fnmr(376mhz,dmso-d6),δ(ppm):–62.0(s,3f)。
实施例4：n6-[5-(4-溴苯基)-6-(三氟甲基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰]-l-赖氨酸(化合物4)
与实施例1类似的方法，采用氨基及羧基保护的l-赖氨酸与5-(4-溴苯基)-6-(三氟甲基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物4(115mg,总收率48％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.30-1.37(m,2h),1.51-1.63(m,2h),1.75-1.82(m,2h),3.40(t,2h),3.52(t,1h),7.64-7.73(m,4h)；19fnmr(376mhz,dmso-d6),δ(ppm):–61.6(s,3f)。
实施例5：n6-{5-[4-(三氟甲基)苯基]-6-(三氟甲基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰}-l-赖氨酸(化合物5)
与实施例1类似的方法，采用氨基及羧基保护的l-赖氨酸与5-[4-(三氟甲基)苯基]-6-(三氟甲基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物5(98mg,总收率42％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.30-1.37(m,2h),1.51-1.63(m,2h),1.75-1.82(m,2h),3.40(t,2h),3.52(t,1h),7.16-7.22(m,4h)；19fnmr(376mhz,dmso-d6),δ(ppm):–61.1(s,3f),–63.1(s,3f)。
实施例6：n6-{5-[4-(氰基)苯基]-6-(三氟甲基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰}-l-赖氨酸(化合物6)
与实施例1类似的方法，采用氨基及羧基保护的l-赖氨酸与5-[4-(氰基)苯基]-6-(三氟甲基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物6(120mg,总收率57％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.26-1.32(m,2h),1.45-1.51(m,2h),1.70-1.77(m,2h),3.32(t,2h),3.48(t,1h),7.86(dd,4h)；19fnmr(376mhz,dmso-d6),δ(ppm):–61.2(s,3f)。
实施例7：n6-{5-[4-(硝基)苯基]-6-(三氟甲基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰}-l-赖氨酸(化合物7)
与实施例1类似的方法，采用氨基及羧基保护的l-赖氨酸与5-[4-(硝基)苯基]-6-(三氟甲基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物7(89mg,总收率40％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.27-1.33(m,2h),1.47-1.52(m,2h),1.72-1.78(m,2h),3.37(t,2h),3.49(t,1h),7.97(d,2h),8.43(d,2h)；19fnmr(376mhz,dmso-d6),δ(ppm):–61.0(s,3f)。
实施例8：n6-{5-[2,4-(二硝基)苯基]-6-(三氟甲基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰}-l-赖氨酸(化合物8)
与实施例1类似的方法，采用氨基及羧基保护的l-赖氨酸与5-[2,4-(二硝基)苯基]-6-(三氟甲基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物8(89mg,总收率40％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.27-1.34(m,2h),1.46-1.51(m,2h),1.70-1.76(m,2h),3.38(t,2h),3.46(t,1h),8.30(d,1h),8.67(d,1h),8.94(s,1h)；19fnmr(376mhz,dmso-d6),δ(ppm):–59.6(s,3f)。
实施例9：n6-{5-[4-(三氟甲基)苯基]-6-(二氟甲基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰}-l-赖氨酸(化合物9)
与实施例1类似的方法，采用氨基及羧基保护的l-赖氨酸与5-[4-(三氟甲基)苯基]-6-(二氟甲基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物9(125mg,总收率56％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.26-1.33(m,2h),1.46-1.52(m,2h),1.71-1.76(m,2h),3.40(t,2h),3.48(t,1h),7.06(t,1h),7.16-7.22(m,4h)；19fnmr(376mhz,dmso-d6),δ(ppm):–63.2(s,3f)；–116.1(d,2f)。
实施例10：n6-{5-[4-(氰基)苯基]-6-(二氟甲基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰}-l-赖氨酸(化合物10)
与实施例1类似的方法，采用氨基及羧基保护的l-赖氨酸与5-[4-(氰基)苯基]-6-(二氟甲基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物10(101mg,总收率50％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.28-1.34(m,2h),1.45-1.50(m,2h),1.70-1.74(m,2h),3.41(t,2h),3.44(t,1h),7.09(t,1h),7.74-7.78(d,2h)；7.84-7.87(d,2h)；19fnmr(376mhz,dmso-d6),δ(ppm):–115.9(d,2f)。
实施例11：n6-{5-[4-(硝基)苯基]-6-(二氟甲基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰}-l-赖氨酸(化合物11)
与实施例1类似的方法，采用氨基及羧基保护的l-赖氨酸与5-[4-(硝基)苯基]-6-(二氟甲基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物11(94mg,总收率44％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.24-1.30(m,2h),1.42-1.47(m,2h),1.67-1.70(m,2h),3.38(t,2h),3.40(t,1h),7.11(t,1h),7.95(d,2h),8.42(d,2h)；19fnmr(376mhz,dmso-d6),δ(ppm):–116.3(d,2f)。
实施例12：n6-{5-[2,4-(二硝基)苯基]-6-(二氟甲基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰}-l-赖氨酸(化合物12)
与实施例1类似的方法，采用氨基及羧基保护的l-赖氨酸与5-[2,4-(二硝基)苯基]-6-(二氟甲基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物12(96mg,总收率41％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.25-1.31(m,2h),1.43-1.49(m,2h),1.68-1.72(m,2h),3.43(t,2h),3.58(t,1h),7.08(t,1h),8.32(d,1h),8.68(d,1h),8.96(s,1h)；19fnmr(376mhz,dmso-d6),δ(ppm):–116.0(d,2f)。
实施例13：n6-{5-[4-(三氟甲基)苯基]-6-(苯砜二氟甲基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰}-l-赖氨酸(化合物13)
与实施例1类似的方法，采用氨基及羧基保护的l-赖氨酸与5-[4-(三氟甲基)苯基]-6-(苯砜二氟甲基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物13(188mg,总收率64％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.27-1.32(m,2h),1.46-1.50(m,2h),1.71-1.76(m,2h),3.49(t,2h),3.62(t,1h),7.16-7.22(m,4h),7.75(t,2h),7.85-7.95(m,3h)；19fnmr(376mhz,dmso-d6),δ(ppm):–63.1(s,3f)；–100.5(s,2f)。
实施例14：n6-{5-[4-(氰基)苯基]-6-(苯砜二氟甲基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰}-l-赖氨酸(化合物14)
与实施例1类似的方法，采用氨基及羧基保护的l-赖氨酸与5-[4-(氰基)苯基]-6-(苯砜二氟甲基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物14(139mg,总收率51％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.26-1.32(m,2h),1.45-1.49(m,2h),1.70-1.76(m,2h),3.47(t,2h),3.60(t,1h),7.14-7.20(m,4h),7.74(t,2h),7.87-7.96(m,3h)；19fnmr(376mhz,dmso-d6),δ(ppm):–100.1(s,2f)。
实施例15：n6-{5-[4-(硝基)苯基]-6-(苯砜二氟甲基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰}-l-赖氨酸(化合物15)
与实施例1类似的方法，采用氨基及羧基保护的l-赖氨酸与5-[4-(硝基)苯基]-6-(苯砜二氟甲基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物15(130mg,总收率46％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.25-1.31(m,2h),1.44-1.49(m,2h),1.68-1.73(m,2h),3.51(t,2h),3.61(t,1h),7.75-8.07(m,7h),8.34(d,2h)；19fnmr(376mhz,dmso-d6),δ(ppm):–100.6(s,2f)。
实施例16：n6-{5-[2,4-(二硝基)苯基]-6-(苯砜二氟甲基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰}-l-赖氨酸(化合物16)
与实施例1类似的方法，采用氨基及羧基保护的l-赖氨酸与5-[2,4-(二硝基)苯基]-6-(苯砜二氟甲基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物16(128mg,总收率42％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.22-1.30(m,2h),1.41-1.47(m,2h),1.65-1.70(m,2h),3.48(t,2h),3.58(t,1h),8.34(d,1h),8.69(d,1h),8.99(s,1h)；19fnmr(376mhz,dmso-d6),δ(ppm):–100.0(s,2f)。
实施例17：n6-[5-(三氟甲基)苯基-6-氰基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰]-l-赖氨酸(化合物17)
将5-(三氟甲基)苯基-6-氰基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸(147mg,0.5mmol)、n-琥珀酰亚胺(64mg,0.55mmol)、edc-hcl(115mg,0.6mmol)及dmf(8ml)加入25ml反应瓶中，混合物在室温搅拌3小时。然后向反应瓶中加入fmoc氨基保护的l-赖氨酸盐酸盐(223mg,0.55mmol)和dipea(193mg,1.5mmol)。反应混合物在室温搅拌反应24小时。减压脱除溶剂后，残渣溶解于30ml乙酸乙酯中，并用饱和食盐水15ml洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，经快速硅胶柱层析分离(洗脱剂meoh/dcm＝20/1～10/1)，得到232mg中间体。将此中间体溶解于8ml二氯甲烷中，加入二乙基胺(263mg,3.6mmol)，室温搅拌反应过夜(16小时)，薄层硅胶色谱(tlc)监测表明含有保护基的中间体完全消失。向反应混合物中加入乙醚(5ml)，得到浅灰色固体(108mg,总收率51％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.31-1.37(m,2h),1.54-1.64(m,2h),1.78-1.85(m,2h),3.44(t,2h),3.53(t,1h),7.18-7.25(m,4h)；19fnmr(376mhz,dmso-d6),δ(ppm):–63.2(s,3f)。
实施例18：n6-{5-[4-(氰基)苯基]-6-氰基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰}-l-赖氨酸(化合物18)
与实施例17类似的方法，采用fmoc氨基保护的l-赖氨酸盐酸盐与5-[4-(氰基)苯基]-6-氰基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物18(104mg,总收率55％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.24-1.30(m,2h),1.44-1.51(m,2h),1.71-1.79(m,2h),3.30(t,2h),3.46(t,1h),7.82(d,2h),7.85(d,2h)。
实施例19：n6-{5-[4-(硝基)苯基]-6-氰基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰}-l-赖氨酸(化合物19)
与实施例17类似的方法，采用fmoc氨基保护的l-赖氨酸盐酸盐与5-[4-(硝基)苯基]-6-氰基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物19(94mg,总收率47％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.28-1.33(m,2h),1.47-1.52(m,2h),1.75-1.80(m,2h),3.35(t,2h),3.49(t,1h),7.97(d,2h),8.43(d,2h)。
实施例20：n6-{5-[2,4-(二硝基)苯基]-6-氰基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰}-l-赖氨酸(化合物20)
与实施例17类似的方法，采用fmoc氨基保护的l-赖氨酸盐酸盐与5-[2,4-(二硝基)苯基]-6-氰基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物20(100mg,总收率45％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.26-1.31(m,2h),1.45-1.51(m,2h),1.72-1.79(m,2h),3.29(t,2h),3.45(t,1h),8.31(d,1h),8.65(d,1h),8.91(s,1h)。
实施例21：n6-{5-[4-(三氟甲基)苯基]-6-苯砜基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰}-l-赖氨酸(化合物21)
与实施例17类似的方法，采用fmoc氨基保护的l-赖氨酸盐酸盐与5-[4-(三氟甲基)苯基]-6-苯砜基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物21(164mg,总收率61％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.25-1.29(m,2h),1.42-1.48(m,2h),1.70-1.76(m,2h),3.29(t,2h),3.43(t,1h),7.60-7.75(m,6h),7.95(t,1h),8.08(d,2h)。
实施例22：n6-{5-[4-(氰基)苯基]-6-苯砜基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰}-l-赖氨酸(化合物22)
与实施例17类似的方法，采用fmoc氨基保护的l-赖氨酸盐酸盐与5-[4-(氰基)苯基]-6-苯砜基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物22(129mg,总收率52％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.27-1.32(m,2h),1.46-1.51(m,2h),1.72-1.77(m,2h),3.30(t,2h),3.48(t,1h),7.15-7.20(m,4h),7.76(t,2h),7.88-7.95(m,3h)。
实施例23：n6-{5-[4-(硝基)苯基]-6-苯砜基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰}-l-赖氨酸(化合物23)
与实施例17类似的方法，采用fmoc氨基保护的l-赖氨酸盐酸盐与5-[4-(硝基)苯基]-6-苯砜基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物23(108mg,总收率42％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.27-1.32(m,2h),1.46-1.51(m,2h),1.69-1.74(m,2h),3.55(t,2h),3.65(t,1h),7.70-8.10(m,7h),8.35(d,2h)。
实施例24：n6-{5-[2,4-(二硝基)苯基]-6-苯砜基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰}-l-赖氨酸(化合物24)
与实施例17类似的方法，采用fmoc氨基保护的l-赖氨酸盐酸盐与5-[2,4-(二硝基)苯基]-6-苯砜基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物24(109mg,总收率39％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.27-1.31(m,2h),1.45-1.50(m,2h),1.70-1.75(m,2h),3.56(t,2h),3.67(t,1h),7.75-8.07(m,5h),8.29(d,1h),8.66(d,1h),8.90(s,1h)。
实施例25：n6-{6-(二甲氧)膦酰基-5-[4-(硝基)苯基]-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰}-l-赖氨酸(化合物25)
与实施例17类似的方法，采用fmoc氨基保护的l-赖氨酸盐酸盐与6-(二甲氧)膦酰基-5-[4-(硝基)苯基]-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物25(130mg,总收率54％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.26-1.31(m,2h),1.40-1.46(m,2h),1.68-1.72(m,2h),3.33(t,2h),3.47(t,1h),3.80(s,6h),7.97(d,2h),8.45(d,2h)。
实施例26：n6-{6-(二乙氧)膦酰基-5-[4-(硝基)苯基]-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰}-l-赖氨酸(化合物26)
与实施例17类似的方法，采用fmoc氨基保护的l-赖氨酸盐酸盐与6-(二乙氧)膦酰基-5-[4-(硝基)苯基]-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物26(140mg,总收率55％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.19(t,6h),1.25-1.30(m,2h),1.40-1.45(m,2h),1.67-1.71(m,2h),3.34(t,2h),3.45(t,1h),4.57(q,4h),7.95(d,2h),8.46(d,2h)。
实施例27：n6-{6-甲氧砜基-5-[4-(硝基)苯基]-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰}-l-赖氨酸(化合物27)
与实施例17类似的方法，采用fmoc氨基保护的l-赖氨酸盐酸盐与6-甲氧砜基-5-[4-(硝基)苯基]-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物27(140mg,总收率60％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.23-1.28(m,2h),1.50-1.55(m,2h),1.70-1.76(m,2h),3.11(t,2h),3.44(t,1h),3.86(s,3h),7.92(d,2h),8.40(d,2h)。
实施例28：n6-{6-乙氧砜基-5-[4-(硝基)苯基]-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰}-l-赖氨酸(化合物28)
与实施例17类似的方法，采用fmoc氨基保护的l-赖氨酸盐酸盐与6-乙氧砜基-5-[4-(硝基)苯基]-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物28(133mg,总收率55％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.26-1.38(m,5h),1.50-1.55(m,2h),1.70-1.76(m,2h),3.16(t,2h),3.44(t,1h),3.60(q,2h),7.95(d,2h),8.52(d,2h)。
实施例29：n6-{5-[4-(硝基)苯基]-6-甲氧羰基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰}-l-赖氨酸(化合物29)
与实施例17类似的方法，采用fmoc氨基保护的l-赖氨酸盐酸盐与5-[4-(硝基)苯基]-6-甲氧羰基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物29(151mg,总收率70％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.26-1.30(m,2h),1.38-1.42(m,2h),1.71-1.76(m,2h),3.24(t,2h),3.40(t,1h),4.17(s,3h),7.80(d,2h),8.52(d,2h)。
实施例30：n6-{5-[4-(硝基)苯基]-6-乙氧羰基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰}-l-赖氨酸(化合物30)
与实施例17类似的方法，采用fmoc氨基保护的l-赖氨酸盐酸盐与5-[4-(硝基)苯基]-6-乙氧羰基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物30(120mg,总收率54％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.25-1.30(m,5h),1.39-1.44(m,2h),1.70-1.76(m,2h),3.25(t,2h),3.42(t,1h),4.26(q,2h),7.83(d,2h),8.55(d,2h)。
实施例31：n6-{5-[4-(硝基)苯基]-6-二甲胺羰基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰}-l-赖氨酸(化合物31)
与实施例17类似的方法，采用fmoc氨基保护的l-赖氨酸盐酸盐与5-[4-(硝基)苯基]-6-二甲胺羰基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物31(127mg,总收率57％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.25-1.30(m,2h),1.38-1.42(m,2h),1.71-1.76(m,2h),2.95(s,6h),3.22(t,2h),3.47(t,1h),7.80(d,2h),8.51(d,2h)。
实施例32：n6-{5-[4-(硝基)苯基]-6-二乙胺羰基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰}-l-赖氨酸(化合物32)
与实施例17类似的方法，采用fmoc氨基保护的l-赖氨酸盐酸盐与5-[4-(硝基)苯基]-6-二乙胺羰基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物32(142mg,总收率60％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.16-1.28(m,8h),1.40-1.45(m,2h),1.74-1.79(m,2h),3.06(q,4h),3.28(t,2h),3.49(t,1h),7.85(d,2h),8.60(d,2h)。
实施例33：o-{2-[6-三氟甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰氨基]乙基}-l-丝氨酸(化合物33)
将6-三氟甲基-5-(4-三氟甲基)苯基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸(85mg,0.25mmol)和dmf(5ml)加入15ml反应瓶中。在室温下，向反应瓶中加入o-[2-(氨基)乙基]-n-[(苄氧)羰基]-l-丝氨酸苄酯盐酸盐(102mg,0.25mmol)、hatu(115mg,0.3mmol)和dipea(97mg,0.75mmol)。混合物加热升温至60℃，在此温度搅拌反应5小时。减压脱除溶剂后，残渣溶解于20ml乙酸乙酯中，并用饱和食盐水10ml洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，经快速硅胶柱层析分离，得到112mg中间体。将此中间体溶解于15ml甲醇中，加入pd/c(12mg,10％)，连接氢气球，室温反应4小时，薄层硅胶色谱(tlc)监测表明含有保护基的中间体完全消失。经硅藻土过滤后，薄膜旋蒸脱除溶剂，得到浅灰色固体(72mg,总收率62％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):3.05(t,2h),3.34(dd,1h),3.56-3.70(m,4h),7.18-7.25(m,4h)；19fnmr(376mhz,dmso-d6),δ(ppm):–61.2(s,3f),–63.5(s,3f)。
实施例34：o-{2-[5-(4-氰基苯基)-6-三氟甲基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰氨基]乙基}-l-丝氨酸(化合物34)
与实施例33类似的方法，采用o-[2-(氨基)乙基]-n-[(苄氧)羰基]-l-丝氨酸苄酯盐酸盐与5-(4-氰基)苯基-6-三氟甲基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物34(61mg,总收率57％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):3.04(t,2h),3.36(dd,1h),3.58-3.70(m,4h),7.74(d,2h),7.88(d,2h)；19fnmr(376mhz,dmso-d6),δ(ppm):–61.5(s,3f)。
实施例35：o-{2-[5-(4-硝基苯基)-6-三氟甲基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰氨基]乙基}-l-丝氨酸(化合物35)
与实施例33类似的方法，采用o-[2-(氨基)乙基]-n-[(苄氧)羰基]-l-丝氨酸苄酯盐酸盐与5-(4-硝基)苯基-6-三氟甲基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物35(56mg,总收率50％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):3.02(t,2h),3.34(dd,1h),3.55-3.67(m,4h),7.86(d,2h),8.62(d,2h)；19fnmr(376mhz,dmso-d6),δ(ppm):–61.4(s,3f)。
实施例36：o-{2-[5-(2,4-二硝基苯基)-6-三氟甲基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰氨基]乙基}-l-丝氨酸(化合物36)
与实施例33类似的方法，采用o-[2-(氨基)乙基]-n-[(苄氧)羰基]-l-丝氨酸苄酯盐酸盐与5-(2,4-二硝基)苯基-6-三氟甲基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物36(61mg,总收率50％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):3.05(t,2h),3.37(dd,1h),3.57-3.68(m,4h),8.31(d,1h),8.68(d,1h),8.92(s,1h)；19fnmr(376mhz,dmso-d6),δ(ppm):–61.0(s,3f)。
实施例37：o-{2-[6-氰基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰氨基]乙基}-l-丝氨酸(化合物37)
与实施例33类似的方法，采用o-[2-(氨基)乙基]-n-[(苄氧)羰基]-l-丝氨酸苄酯盐酸盐与6-氰基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物37(63mg,总收率59％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):3.06(t,2h),3.37(dd,1h),3.57-3.70(m,4h),7.20-7.29(m,4h)；19fnmr(376mhz,dmso-d6),δ(ppm):–63.8(s,3f)。
实施例38：o-{2-[5-(4-氰基苯基)-6-氰基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰氨基]乙基}-l-丝氨酸(化合物38)
与实施例33类似的方法，采用o-[2-(氨基)乙基]-n-[(苄氧)羰基]-l-丝氨酸苄酯盐酸盐与5-(4-氰基)苯基-6-氰基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物38(57mg,总收率60％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):3.02(t,2h),3.31(dd,1h),3.58-3.72(m,4h),7.75(d,2h),7.89(d,2h)。
实施例39：o-{2-[6-氰基-5-(4-硝基苯基)-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰氨基]乙基}-l-丝氨酸(化合物39)
与实施例33类似的方法，采用o-[2-(氨基)乙基]-n-[(苄氧)羰基]-l-丝氨酸苄酯盐酸盐与6-氰基-5-(4-硝基)苯基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物39(55mg,总收率55％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):3.07(t,2h),3.39(dd,1h),3.58-3.68(m,4h),7.89(d,2h),8.67(d,2h)。
实施例40：o-{2-[5-(2,4-二硝基苯基)-6-氰基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰氨基]乙基}-l-丝氨酸(化合物40)
与实施例33类似的方法，采用o-[2-(氨基)乙基]-n-[(苄氧)羰基]-l-丝氨酸苄酯盐酸盐与5-(2,4-二硝基)苯基-6-氰基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物40(53mg,总收率47％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):3.04(t,2h),3.36(dd,1h),3.57-3.67(m,4h),8.32(d,1h),8.69(d,1h),8.95(s,1h)。
实施例41：s-{2-[6-三氟甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰氨基]乙基}-l-半胱氨酸(化合物41)
将6-三氟甲基-5-(三氟甲基)苯基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸(85mg,0.25mmol)、n-琥珀酰亚胺(32mg,0.28mmol)、edc-hcl(58mg,0.3mmol)及dmf(5ml)加入15ml反应瓶中，混合物在室温搅拌4小时。然后向反应瓶中加入n-[(9-芴甲氧)羰基]-s-[2-(氨基)乙基]-l-半胱氨酸苄酯盐酸盐(144mg,0.28mmol)和dipea(97mg,0.75mmol)。反应混合物在室温搅拌反应18小时。减压脱除溶剂后，残渣溶解于20ml乙酸乙酯中，并用饱和食盐水10ml洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，经快速硅胶柱层析分离(洗脱剂meoh/dcm＝20/1～10/1)，得到143mg中间体。将此中间体溶解于8ml二氯甲烷中，加入二乙基胺(292mg,4mmol)，室温搅拌反应过夜(12小时)，薄层硅胶色谱(tlc)监测表明含有保护基的中间体完全消失。向反应混合物中加入乙醚(4ml)，得到浅灰色固体(59mg,总收率49％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):2.70-2.80(m,3h),3.06(dd,1h),3.35(t,2h),3.81(dd,1h),7.60(d,2h),7.66(d,2h)；19fnmr(376mhz,dmso-d6),δ(ppm):–61.1(s,3f),–63.7(s,3f)。
实施例42：s-{2-[5-[4-(氰基)苯基]-6-三氟甲基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰氨基]乙基}-l-半胱氨酸(化合物42)
与实施例41类似的方法，采用n-[(9-芴甲氧)羰基]-s-[2-(氨基)乙基]-l-半胱氨酸苄酯盐酸盐与5-(4-氰基)苯基-6-三氟甲基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物42(52mg,总收率47％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):2.72-2.80(m,3h),3.07(dd,1h),3.36(t,2h),3.83(dd,1h),7.75(d,2h),7.87(d,2h)；19fnmr(376mhz,dmso-d6),δ(ppm):–61.4(s,3f)。
实施例43：s-{2-[5-[4-(硝基)苯基]-6-三氟甲基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰氨基]乙基}-l-半胱氨酸(化合物43)
与实施例41类似的方法，采用n-[(9-芴甲氧)羰基]-s-[2-(氨基)乙基]-l-半胱氨酸苄酯盐酸盐与5-(4-硝基)苯基-6-三氟甲基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物43(59mg,总收率51％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):2.72-2.79(m,3h),3.04(dd,1h),3.37(t,2h),3.82(dd,1h),7.85(d,2h),8.64(d,2h)；19fnmr(376mhz,dmso-d6),δ(ppm):–61.3(s,3f)。
实施例44：s-{2-[5-[2,4-(二硝基)苯基]-6-三氟甲基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰氨基]乙基}-l-半胱氨酸(化合物44)
与实施例41类似的方法，采用n-[(9-芴甲氧)羰基]-s-[2-(氨基)乙基]-l-半胱氨酸苄酯盐酸盐与5-(2,4-二硝基)苯基-6-三氟甲基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物44(58mg,总收率46％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):2.71-2.78(m,3h),3.06(dd,1h),3.39(t,2h),3.86(dd,1h),8.30(d,1h),8.69(d,1h),8.95(s,1h)；19fnmr(376mhz,dmso-d6),δ(ppm):–61.1(s,3f)。
实施例45：s-{2-[6-氰基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰氨基]乙基}-l-半胱氨酸(化合物45)
与实施例41类似的方法，采用n-[(9-芴甲氧)羰基]-s-[2-(氨基)乙基]-l-半胱氨酸苄酯盐酸盐与6-氰基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物45(57mg,总收率52％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):2.70-2.77(m,3h),3.09(dd,1h),3.42(t,2h),3.89(dd,1h),7.21-7.29(m,4h)；19fnmr(376mhz,dmso-d6),δ(ppm):–63.6(s,3f)。
实施例46：s-{2-[6-氰基-5-[4-(氰基)苯基]-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰氨基]乙基}-l-半胱氨酸(化合物46)
与实施例41类似的方法，采用n-[(9-芴甲氧)羰基]-s-[2-(氨基)乙基]-l-半胱氨酸苄酯盐酸盐与6-氰基-5-(4-氰基)苯基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物46(54mg,总收率54％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):2.72-2.79(m,3h),3.04(dd,1h),3.39(t,2h),3.85(dd,1h),7.74(d,2h),7.86(d,2h)。
实施例47：s-{2-[6-氰基-5-[4-(硝基)苯基]-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰氨基]乙基}-l-半胱氨酸(化合物47)
与实施例41类似的方法，采用n-[(9-芴甲氧)羰基]-s-[2-(氨基)乙基]-l-半胱氨酸苄酯盐酸盐与6-氰基-5-(4-硝基)苯基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物47(52mg,总收率50％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):2.71-2.79(m,3h),3.06(dd,1h),3.41(t,2h),3.87(dd,1h),7.91(d,2h),8.70(d,2h)。
实施例48：s-{2-[6-氰基-5-[2,4-(二硝基)苯基]-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰氨基]乙基}-l-半胱氨酸(化合物48)
与实施例41类似的方法，采用n-[(9-芴甲氧)羰基]-s-[2-(氨基)乙基]-l-半胱氨酸苄酯盐酸盐与6-氰基-5-(2,4-二硝基)苯基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酸反应，得到化合物48(53mg,总收率46％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):2.72-2.80(m,3h),3.10(dd,1h),3.49(t,2h),3.91(dd,1h),8.33(d,1h),8.72(d,1h),8.99(s,1h)。
实施例49：se-{2-[6-氰基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰氨基]乙基}-l-硒代半胱氨酸(化合物49)
在氮气保护下，将boc氨基保护的l-硒代半胱氨酸二聚体(134mg,0.25mmol)和无水乙醇(3ml)加入反应瓶中，冷却降温至0℃。在此温度下将硼氢化钠(109mg,2.89mmol)加入反应瓶，并搅拌反应半小时。然后将含有n-(2-溴乙基)-6-氰基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1,2,3-三氮嗪-3-甲酰胺(280mg,0.70mmol)和二异丙基乙基胺(324mg,2.5mmol)的四氢呋喃(3ml)溶液慢慢滴加入反应瓶，滴加过程保持温度在0℃。30分钟滴加完毕，逐渐升至室温并同时搅拌反应18小时。反应完毕，加入1nhcl调控混合液ph值<5。并转移至分液漏斗，用30ml乙酸乙酯分三次萃取，合并有机相，用水和饱和食盐水各洗涤一次，加入无水硫酸钠干燥，脱除溶剂得到粗产物，经快速硅胶柱层析分离，得到125毫克无水粘稠中间体。将该中间体溶解于5ml二氯甲烷中，加入et3sih(58mg,0.5mmol)和1ml三氟乙酸(tfa)，室温搅拌1小时，薄膜旋蒸脱除溶剂，残渣悬浮在meoh/et2o中，得到浅白色固体为化合物49三氟乙酸盐(78mg,收率52％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.61(t,2h),1.72(dd,1h),1.89(dd,1h),3.02(t,2h),3.51(dd,1h),7.44(d,2h),7.56(d,2h)。
实施例50：se-{2-[6-氰基-5-[4-(氰基)苯基]-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰氨基]乙基}-l-硒代半胱氨酸(化合物50)
与实施例49类似的方法，采用boc氨基保护的l-硒代半胱氨酸二聚体与n-(2-溴乙基)-6-氰基-5-[4-(氰基)苯基]-1,2,3-三氮嗪-3-甲酰胺反应，得到化合物50的三氟乙酸盐(77mg,总收率55％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.60(t,2h),1.71(dd,1h),1.87(dd,1h),3.03(t,2h),3.50(dd,1h),7.75(d,2h),7.87(d,2h)。
实施例51：se-{2-[6-氰基-5-[4-(硝基)苯基]-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰氨基]乙基}-l-硒代半胱氨酸(化合物51)
与实施例49类似的方法，采用boc氨基保护的l-硒代半胱氨酸二聚体与n-(2-溴乙基)-6-氰基-5-[4-(硝基)苯基]-1,2,3-三氮嗪-3-甲酰胺反应，得到化合物51的三氟乙酸盐(69mg,总收率48％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.62(t,2h),1.75(dd,1h),1.89(dd,1h),3.10(t,2h),3.57(dd,1h),7.95(d,2h),8.74(d,2h)。
实施例52：se-{2-[6-氰基-5-[2,4-(二硝基)苯基]-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰氨基]乙基}-l-硒代半胱氨酸(化合物52)
与实施例49类似的方法，采用boc氨基保护的l-硒代半胱氨酸二聚体与n-(2-溴乙基)-6-氰基-5-[2,4-(二硝基)苯基]-1,2,3-三氮嗪-3-甲酰胺反应，得到化合物52的三氟乙酸盐(69mg,总收率44％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.65(t,2h),1.77(dd,1h),1.91(dd,1h),3.09(t,2h),3.58(dd,1h),8.32(d,1h),8.73(d,1h),8.97(s,1h)。
实施例53：se-{2-[6-三氟甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰氨基]乙基}-l-硒代半胱氨酸(化合物53)
与实施例49类似的方法，采用boc氨基保护的l-硒代半胱氨酸二聚体与n-(2-溴乙基)-6-三氟甲基-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1,2,3-三氮嗪-3-甲酰胺反应，得到化合物53的三氟乙酸盐(97mg,总收率60％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.62(t,2h),1.74(dd,1h),1.89(dd,1h),3.07(t,2h),3.55(dd,1h),7.42(d,2h),7.53(d,2h)。
实施例54：se-{2-[5-[4-(氰基)苯基]-6-三氟甲基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰氨基]乙基}-l-硒代半胱氨酸(化合物54)
与实施例49类似的方法，采用boc氨基保护的l-硒代半胱氨酸二聚体与n-(2-溴乙基)-5-[4-(氰基)苯基]-6-三氟甲基-1,2,3-三氮嗪-3-甲酰胺反应，得到化合物54的三氟乙酸盐(81mg,总收率54％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.63(t,2h),1.78(dd,1h),1.89(dd,1h),3.07(t,2h),3.52(dd,1h),7.74(d,2h),7.88(d,2h)。
实施例55：se-{2-[5-[4-(硝基)苯基]-6-三氟甲基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰氨基]乙基}-l-硒代半胱氨酸(化合物55)
与实施例49类似的方法，采用boc氨基保护的l-硒代半胱氨酸二聚体与n-(2-溴乙基)-5-[4-(硝基)苯基]-6-三氟甲基-1,2,3-三氮嗪-3-甲酰胺反应，得到化合物55的三氟乙酸盐(92mg,总收率59％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.67(t,2h),1.79(dd,1h),1.91(dd,1h),3.11(t,2h),3.59(dd,1h),7.96(d,2h),8.79(d,2h)。
实施例56：se-{2-[5-[2,4-(二硝基)苯基]-6-三氟甲基-1,2,4-三氮嗪-3-甲酰氨基]乙基}-l-硒代半胱氨酸(化合物56)
与实施例49类似的方法，采用boc氨基保护的l-硒代半胱氨酸二聚体与n-(2-溴乙基)-5-[2,4-(二硝基)苯基]-6-三氟甲基-1,2,3-三氮嗪-3-甲酰胺反应，得到化合物56的三氟乙酸盐(75mg,总收率45％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):1.64(t,2h),1.76(dd,1h),1.88(dd,1h),3.07(t,2h),3.53(dd,1h),8.33(d,1h),8.75(d,1h),8.91(s,1h)。
实施例化合物制备所用试剂及溶剂，详见下表：
生物正交连接化学试验
含有三氮嗪杂环长链非天然手性氨基酸与反式-环辛烯类化合物s-tco的加成-氧化反应二级动力学速率常数均用紫外(uv)-停留光谱仪(stopped-flowdevice)测定，将含有三氮嗪杂环长链非天然手性氨基酸化合物在乙腈/水(1/1)中配制为四个浓度：0.05mm,0.065mm,0.075mmor0.1mm,实验中s-tco与三氮嗪杂环长链非天然手性氨基酸的摩尔比为20/1，每组实验测定3次取平均值，测定二级动力学速率常数k2(m-1·s-1)如下：
以上表中数据说明，含有三氮嗪杂环长链非天然手性氨基酸与反式-环辛烯类化合物s-tco可快速发生反电子需求狄尔斯-阿尔德环加成反应(inverseelectron-demanddiels-aldercycloaddition，ied-da)，证明这类化合物可用于生物正交连接化学试验，在化学生物学和生物成像方面有非常大的潜在应用价值。
本发明并不局限于实施例中所描述的技术，它的描述是说明性的，并非限制性的，本发明的权限由权利要求所限定，基于本技术领域人员依据本发明所能够变化、重组等方法得到的与本发明相关的技术，都在本发明的保护范围之内。