一种结球红菊苣多糖的纯化方法与流程

本发明涉及一种多糖纯化方法，特别是涉及一种结球红菊苣多糖的纯化方法。

背景技术：

近年来，通过对菊苣的天然提取物及化学成分和临床药理药效研究的不断深入，发现菊苣的天然提取物中不仅含有大量菊苣多糖、菊苣酸、倍半萜苷等物质，而且它们具有许多的生理活性。其中，菊苣多糖(cichoriipolysaccharide，又称菊粉，系多聚果糖)作为菊苣中重要的有效成分之一，目前的药理药效研究表明其具有显著的降血糖、降血脂、抗氧化、抗肿瘤和提高免疫力的作用。因而开展菊苣多糖的提取、结构分析、药理作用、资源开发等方面的研究具有极其重要的理论和现实意义。

目前提取菊苣中多糖常用微波法、回流法、冷热水浸提法。所报道的提取的多糖均为粗制品，且涉及方法多有不足，多糖损失较多。如尔西丁·买买提等人采用温水浸提菊苣粗粉经savag方法和醇沉提取多糖，最终多糖的提取率为0.38%。本发明采用复合酶解微波辅助提取、savge法除蛋白、ab-8大孔树脂脱色、deae-52纤维素柱层析，粗多糖提取率为32.7%，最后可得提取得率3.1%，纯度大于99.5%的菊苣多糖。此方法反应条件温和,提高了多糖提取率和纯度。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种结球红菊苣多糖的纯化方法，以酶解法和微波法提取粗多糖溶液，利用sevag法除蛋白，ab-8大孔吸附树脂除色素，deae-52纤维素进行层析分离等方法，优化菊苣多糖的提取纯化。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种结球红菊苣多糖的纯化方法，所述方法包括以下制备过程：

步骤一：将结球红菊苣于60℃烘干，粉碎，过40目筛,称取菊苣粉末。

步骤二：采用60%乙醇酶解体系，料液比1∶20（w∶v），每克菊苣粉末加入2mg纤维素酶和0.5mg果胶酶，55℃水解40min。

步骤三：80℃灭酶，过滤，滤渣加水微波提取2次（料液比1∶30（w∶v），70℃，20min），过滤，醇体系和水体系滤液分别旋蒸，合并浓缩液。

步骤四：醇沉，高速离心，醇洗离心1次，沉淀水溶。

步骤五：sevag法除蛋白几次至相界面无絮状物。

步骤六：树脂脱色素。

步骤七：冷冻干燥后以水溶解，用deae-52纤维素进行柱层析分离，上样前用低浓度乙醇冲洗柱子1h,上样后用水洗4bv（柱体积），0.1m、0.2m、0.3m、0.4mnacl各洗4bv，5ml收集一管，收集洗脱峰后用小分子量透析袋透析，浓缩、冷冻干燥，得到多糖。

所述的一种结球红菊苣多糖的纯化方法，所述脱色方法，树脂要求用ab-8型号。

所述的一种结球红菊苣多糖的纯化方法，所述沉淀方法，醇沉淀需用5倍体积。

本发明的优点与效果是：

本发明采用复合酶解微波辅助提取、savge法除蛋白、ab-8大孔树脂脱色、deae-52纤维素柱层析，粗多糖提取率为32.7%，最后可得提取得率3.1%，纯度大于99.5%的菊苣多糖。此方法反应条件温和,提高了多糖提取率和纯度。

附图说明

图1为本发明原料洗脱液的色谱图；

图2为本发明实验流程图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明进行详细说明。

本发明一种关于结球红菊苣多糖经水解微波沉淀等纯化的方法，属于天然产物分离中纯化技术。

本发明取结球红菊苣粉末，采用60%乙醇酶解体系，料液比1∶20（w∶v），菊苣粉末加入纤维素酶和果胶酶，55℃水解40min。再80℃灭酶，过滤，滤渣加水微波提取1次（料液比1∶30（w∶v）70℃、20min），过滤，滤液分批旋蒸浓缩，混合。5倍醇沉，高速离心，醇洗离心1次，沉淀干燥水溶。sevag法除蛋白几次至相界面无絮状物，加入ab-8树脂脱色素，冷冻干燥后以水溶解。用deae-52纤维素进行柱层析分离，上样前用冲洗柱子1h,上样后用水洗4bv（柱体积），0.1m、0.2m、0.3m、0.4mnacl各洗4bv，5ml收集一管，收集洗脱峰后用小分子量透析袋透析，浓缩、冷冻干燥，得多糖组分。多糖提取率为3.1%。

实施例1

10g结球红菊苣粉末。采用60%乙醇酶解体系，料液比1∶20（w∶v），每克菊苣粉末加入2mg纤维素酶和0.5mg果胶酶，55℃水解40min，再80℃灭酶，过滤，滤渣加水微波提取2次（料液比1∶30（w∶v），70℃，20min），过滤，醇体系和水体系滤液分别旋蒸，合并浓缩液至40ml，5倍醇沉，高速离心，醇洗离心1次，沉淀水溶至40ml，sevag法除蛋白几次至相界面无絮状物，30g的ab-8树脂脱色素，冷冻干燥后以20ml水溶解，用deae-52纤维素进行柱层析分离，上样前用低浓度乙醇冲洗柱子1h,上样后用水洗4bv（柱体积），0.1m、0.2m、0.3m、0.4mnacl各洗4bv，5ml收集一管，收集洗脱峰后用小分子量透析袋透析，浓缩、冷冻干燥，得纯度为99.5%，水洗组分ⅰ18.12mg，水洗组分ⅱ106.2mg,水洗组分ⅲ134.6mg。盐洗组分ⅰ9.4mg,盐洗组分ⅱ34.6mg。多糖提取率为3.02%。

实例2

24g结球红菊苣粉末。采用60%乙醇酶解体系，料液比1∶20（w∶v），每克菊苣粉末加入2mg纤维素酶和0.5mg果胶酶，55℃水解40min。80℃灭酶，过滤，滤渣加水微波提取2次（料液比1∶30（w∶v），55℃，20min），过滤，醇体系和水体系滤液分别旋蒸，合并浓缩液至96ml。5倍醇沉，高速离心，醇洗离心1次，沉淀水溶至96ml。sevag法除蛋白几次至相界面无絮状物，72g的ab-8树脂脱色素。冷冻干燥后以48ml水溶解，用deae-52纤维素进行柱层析分离，上样前用低浓度乙醇冲洗柱子1h,上样后用水洗4bv（柱体积），0.1m、0.2m、0.3m、0.4mnacl各洗4bv，5ml收集一管，收集洗脱峰后用小分子量透析袋透析，浓缩、冷冻干燥，得纯度为98.9%。水洗组分ⅰ40.7mg，水洗组分ⅱ269.0mg,水洗组分ⅲ370.3mg。盐洗组分ⅰ10.4mg,盐洗组分ⅱ53.8mg。多糖提取率为3.04%。

技术特征：

技术总结
一种结球红菊苣多糖的纯化方法，涉及一种多糖纯化方法，此方法采用乙醇酶解体系并以微波提取法为辅助手段。溶剂为60%乙醇溶液，溶质分别为40目菊苣粉末、纤维素酶和果胶酶，来使得菊苣细胞壁水解,有利于多糖与溶剂更好的结合，通过灭酶、过滤得到第一次多糖提取液。采用微波水提法使得菊苣细胞破裂，得到第二次多糖提取液。利用旋蒸、醇沉、离心干燥等一系列操作得到粗多糖溶液。为进一步纯化多糖，采取Swage法除蛋白和利用AB‑8大孔吸附树脂脱色素，最后利用DEAE‑52纤维素进行柱层析分离，收集洗脱峰后用小分子量透析袋透析，浓缩、冷冻干燥，得多糖组分。多糖提取率为3.1%，纯度为98.9%。

技术研发人员：朱建星;赵艺;陈璐璐;祖琳
受保护的技术使用者：沈阳化工大学
技术研发日：2019.04.03
技术公布日：2019.08.23