一种引起高糖产品胀罐的微生物分离及抑菌方法与流程

本发明涉及食品
技术领域：
，特别涉及高糖产品
技术领域：
，具体是指一种引起高糖产品胀罐的微生物分离及抑菌方法。
背景技术：
：高糖果汁是指产品中以糖、浓缩汁、原汁为主，添加或不添加食品用甜味剂、酸味剂、色素、香精、防腐剂制成的产品。长期生产该产品的工厂，嗜好高糖的微生物会被选择性的生存在环境中，微生物在环境中无处不在，如果不是无菌灌装生产线，容易导致这种嗜好高糖或耐高渗的微生物残存在产品中或二次污染产品，肉眼可观察到的胀罐属于胀罐微生物大量滋生引起的现象。所以如何利用现有的产品生产线，最大限度提高产品良率，减少公司损失是一个急需解决的问题。因此，在生产线设备与工艺不能修改的基础上，若要防止产品胀罐的发生，需找到引起胀罐的目标微生物，并采用有效的食品防腐剂，以防止胀罐的发生。技术实现要素：为了克服上述现有技术中的缺点，本发明的一个目的在于提供一种引起高糖产品胀罐的微生物分离及抑菌方法，其可快速筛选引起胀罐的目标微生物，并获得有效的食品防腐剂，以防止胀罐的发生，适于大规模推广应用。本发明的另一目的在于提供一种引起高糖产品胀罐的微生物分离及抑菌方法，其设计巧妙，操作简单方便，成本低，适于大规模推广应用。为达到以上目的，本发明提供一种引起高糖产品胀罐的微生物分离及抑菌方法，其特点是，包括以下步骤：(1)将微生物培养基的糖度调整为高糖度20brix～60brix，将所述微生物培养基的ph调整至4.0～6.0，获得改良的微生物培养基；(2)将高糖产品的胀罐样品与所述的改良的微生物培养基混合倒平板，或者将所述的高糖产品的胀罐样品划线在所述的改良的微生物培养基的平板上，进行微生物培养；(3)挑选不同形态的单菌落进行微生物菌种鉴定，获得微生物菌种鉴定结果，根据所述微生物菌种鉴定结果，找到引起胀罐的可疑微生物，将所述可疑微生物接入所述高糖产品的未胀罐样品中进行培养，观察所述的高糖产品的未胀罐样品是否会胀罐，若是，则所述可疑微生物为胀罐微生物；(4)在多份新鲜的所述的改良的微生物培养基中分别加入不同的防腐剂并接种所述胀罐微生物，培养并观察所述胀罐微生物有无生长，选择抑制所述胀罐微生物生长的所述防腐剂。较佳地，所述步骤(1)具体包括以下步骤：(11)取1重量份所述微生物培养基的固体组分混合物，加入7重量份～21重量份的水以及0重量份～0.2重量份的1mol/l的hcl溶液，溶解均匀，得到培养基液；(12)取1重量份果葡糖浆，加入另外的0.04重量份～0.4重量份的水，溶解均匀，得到糖液；(13)将所述培养基液和所述糖液分别放置在高压灭菌锅中115℃～121℃，15min～20min灭菌，放凉后1:15～34质量比例混合所述培养基液和所述糖液。较佳地，在所述步骤(1)中，所述微生物培养基是平板计数琼脂培养基或孟加拉红培养基。较佳地，所述步骤(2)具体包括以下步骤：(21)将所述的高糖产品的胀罐样品10倍梯度稀释获得稀释液；(22)取1ml所述稀释液与所述的改良的微生物培养基混合倒平板，或者将100微升～200微升所述稀释液划线在所述的改良的微生物培养基的平板上；(23)35℃培养1天～3天。较佳地，在所述步骤(4)中，该新鲜的所述的改良的微生物培养基的ph为4或者6。较佳地，在所述步骤(4)中，所述防腐剂的添加量为0.01重量份～0.1重量份。较佳地，在所述步骤(4)中，所述防腐剂选自聚赖氨盐酸盐、乳酸链球菌素、山梨酸钾和苯甲酸钠中的两种以上。本发明的有益效果主要在于：1、本发明的引起高糖产品胀罐的微生物分离及抑菌方法包括(1)将微生物培养基的糖度调整为高糖度20brix～60brix，ph调整至4.0～6.0，获得改良的微生物培养基；(2)将高糖产品的胀罐样品与改良的微生物培养基混合倒平板，或者将高糖产品的胀罐样品划线在改良的微生物培养基的平板上，进行微生物培养；(3)挑选不同形态的单菌落进行微生物菌种鉴定，获得微生物菌种鉴定结果，根据微生物菌种鉴定结果，找到引起胀罐的可疑微生物，将可疑微生物接入高糖产品的未胀罐样品中进行培养，观察高糖产品的未胀罐样品是否会胀罐，若是，则可疑微生物为胀罐微生物；(4)在多份新鲜的改良的微生物培养基中分别加入不同的防腐剂并接种胀罐微生物，培养并观察胀罐微生物有无生长，选择抑制胀罐微生物生长的防腐剂，因此，其可快速筛选引起胀罐的目标微生物，并获得有效的食品防腐剂，以防止胀罐的发生，适于大规模推广应用。2、本发明的引起高糖产品胀罐的微生物分离及抑菌方法包括(1)将微生物培养基的糖度调整为高糖度20brix～60brix，ph调整至4.0～6.0，获得改良的微生物培养基；(2)将高糖产品的胀罐样品与改良的微生物培养基混合倒平板，或者将高糖产品的胀罐样品划线在改良的微生物培养基的平板上，进行微生物培养；(3)挑选不同形态的单菌落进行微生物菌种鉴定，获得微生物菌种鉴定结果，根据微生物菌种鉴定结果，找到引起胀罐的可疑微生物，将可疑微生物接入高糖产品的未胀罐样品中进行培养，观察高糖产品的未胀罐样品是否会胀罐，若是，则可疑微生物为胀罐微生物；(4)在多份新鲜的改良的微生物培养基中分别加入不同的防腐剂并接种胀罐微生物，培养并观察胀罐微生物有无生长，选择抑制胀罐微生物生长的防腐剂，因此，其设计巧妙，操作简单方便，成本低，适于大规模推广应用。本发明的这些和其它目的、特点和优势，通过下述的详细说明和权利要求得以充分体现，并可通过所附权利要求中特地指出的手段、装置和它们的组合得以实现。附图说明图1是采用混合倒平板法使用改良的微生物培养基和未改良的微生物培养基对胀罐微生物的分离结果。图2是采用平板划线法使用改良的微生物培养基和未改良的微生物培养基对胀罐微生物的分离结果。具体实施方式为解决产品胀罐的发生，本发明通过在微生物培养基基础上对其brix与ph进行调整，筛选得到引起胀罐的目标微生物，并通过不同防腐剂对目标微生物的不同抑制效果，挑选得到有效的防腐剂。具体地，本发明提供一种引起高糖产品胀罐的微生物分离及抑菌方法，包括以下步骤：(1)将微生物培养基的糖度调整为高糖度20brix～60brix，将所述微生物培养基的ph调整至4.0～6.0，获得改良的微生物培养基；(2)将所述高糖产品的胀罐样品与所述的改良的微生物培养基混合倒平板，或者将所述的高糖产品的胀罐样品划线在所述的改良的微生物培养基的平板上，进行微生物培养；(3)挑选不同形态的单菌落进行微生物菌种鉴定，获得微生物菌种鉴定结果，根据所述微生物菌种鉴定结果，找到引起胀罐的可疑微生物，将所述可疑微生物接入所述高糖产品的未胀罐样品中进行培养，观察所述的高糖产品的未胀罐样品是否会胀罐，若是，则所述可疑微生物为胀罐微生物；(4)在多份新鲜的所述的改良的微生物培养基中分别加入不同的防腐剂并接种所述胀罐微生物，培养并观察所述胀罐微生物有无生长，选择抑制所述胀罐微生物生长的所述防腐剂。所述步骤(1)具体可以包括任何合适的步骤，较佳地，所述步骤(1)具体包括以下步骤：(11)取1重量份所述微生物培养基的固体组分混合物，加入7重量份～21重量份的水以及0重量份～0.2重量份的1mol/l的hcl溶液，溶解均匀，得到培养基液；(12)取1重量份果葡糖浆，加入另外的0.04重量份～0.4重量份的水，溶解均匀，得到糖液；(13)将所述培养基液和所述糖液分别放置在高压灭菌锅中115℃～121℃，15min～20min灭菌，放凉后1:15～34质量比例混合所述培养基液和所述糖液。在所述步骤(1)中，所述微生物培养基可以是任何合适的微生物培养基，较佳地，在所述步骤(1)中，所述微生物培养基是平板计数琼脂培养基或孟加拉红培养基。所述步骤(2)具体可以包括任何合适的步骤，较佳地，所述步骤(2)具体包括以下步骤：(21)将所述的高糖产品的胀罐样品10倍梯度稀释获得稀释液；(22)取1ml所述稀释液与所述的改良的微生物培养基混合倒平板，或者将100微升～200微升所述稀释液划线在所述的改良的微生物培养基的平板上；(23)35℃培养1天～3天。在所述步骤(4)中，该新鲜的所述的改良的微生物培养基的ph可以根据需要确定，较佳地，在所述步骤(4)中，该新鲜的所述的改良的微生物培养基的ph为4或者6。所述防腐剂的添加量可以根据需要确定，较佳地，在所述步骤(4)中，所述防腐剂的添加量为0.01重量份～0.1重量份。所述防腐剂可以是任何合适的防腐剂，较佳地，在所述步骤(4)中，所述防腐剂选自聚赖氨盐酸盐、乳酸链球菌素、山梨酸钾和苯甲酸钠中的两种以上。为了能够更清楚地理解本发明的技术内容，特举以下实施例详细说明。本发明中，所涉及的组分或原料均为常规市售产品，或可通过本领域的常规技术手段获得。实施例1改良培养基筛选胀罐微生物与有效防腐剂筛选(1)配制改良固体培养基：取1重量份pca(平板计数琼脂培养基)(青岛海博生物，250g/瓶)培养基，加入21重量份的水，加入0.2重量份1mol/l的hcl溶液，溶解均匀后加入锥形瓶，得到培养基液；取1重量份果葡糖浆(f55果糖，嘉吉，罐车包装，30吨/车)，加入0.4重量份水，溶解均匀后加入锥形瓶得到糖液；两种液体分别放置在高压灭菌锅杀菌，121℃，15min，灭菌放凉后，1:15混合，待用；最终培养基brix22-25，ph4.0-4.2。(2)样品稀释与菌种分离：将咖啡水晶(咖啡风味饮料含凝胶颗粒1.0kg/瓶(鲜活果汁有限公司)；brix39-41)的胀罐样品10倍梯度稀释，取不同稀释度的样品1ml与冷却后的培养基混合倒平板，同时取100微升不同梯度的样品划线培养基制成的平板；平板置于35℃培养箱培养3天。(3)菌种保存与鉴定：将不同形态单菌落分离，送外检机构鉴定，获得微生物菌种鉴定结果。根据微生物菌种鉴定结果，找到引起胀罐的可疑微生物，将该可疑微生物接入咖啡水晶的未胀罐样品中进行培养，观察咖啡水晶的未胀罐样品是否会胀罐，若是，则可疑微生物为胀罐微生物。(4)有效防腐剂筛选：在改良培养基基础上，将培养基ph调整分别至6.0，4.0；brix调整至22～25，添加0.01重量份～0.1重量份的不同种类防腐剂，并接种胀罐微生物，经35℃培养箱培养3天，观察防腐剂的抑菌效果，结果见表1。表1防腐剂分别在ph6.0与ph4.0下验证结果防腐剂ph4.0ph6.00.01份ε-聚赖氨盐酸盐—/+/-—/+/-0.02份ε-聚赖氨盐酸盐—/+/-—/+/-0.04份ε-聚赖氨盐酸盐——0.06份ε-聚赖氨盐酸盐——0.08份ε-聚赖氨盐酸盐——0.02份乳酸链球菌素++++0.05份山梨酸钾++0.1份苯甲酸钠—+空白++++注：“+”表示明显生长；“++”生长非常明显；“—”无生长；“+/-”生长不明显。对比例1未改良培养基筛选胀罐微生物(1)配制固体培养基：取1重量份pca(平板计数琼脂培养基)(青岛海博生物，250g/瓶)培养基，加入21重量份的水，加入0.2重量份1mol/l的hcl溶液，溶解均匀后加入锥形瓶，得到培养基液；放置在高压灭菌锅杀菌，121℃，15min，待用；取15重量份无菌水与1重量份上述培养基混合，最终培养基brix2-3，ph4.0-4.2。(2)样品稀释与菌种分离：将咖啡水晶(咖啡风味饮料含凝胶颗粒1.0kg/瓶(鲜活果汁有限公司)brix39-41)的胀罐样品10倍梯度稀释，取不同稀释度的样品1ml与冷却后的培养基混合倒平板，同时取100微升不同梯度的样品划线培养基制成的平板；平板置于35℃培养箱培养3天。对比例1与实施例1的区别在于：没有调整培养基brix至22～25。对改良与未改良培养基进行效果验证：请参见图1和图2所示，改良培养基可大量筛选到引起胀罐的微生物，而非改良培养基筛选未见微生物生长，说明对培养基的改良即brix调整是胀罐微生物分离的关键所在。从图1-图2及表1可知，本发明的实施例1制得的培养基可明显分离出引起产品胀罐的微生物；而对比例1未见微生物明显生长。在改良培养基基础上，实验不同ph条件下的防腐剂效果可知，ph在酸性与中性条件下0.01重量份聚赖氨盐酸盐具有明显的抑菌效果，苯甲酸钠在酸性条件下可发挥抑制胀罐微生物的效果，山梨酸钾与乳酸链球菌素对胀罐微生物无效。为了检验实际的抑制胀罐的效果，将2.0×105cfu/ml胀罐微生物接入到ph4.0的咖啡水晶中，添加或不添加0.1份苯甲酸钠，35℃恒温箱培养1个月，结果见表2，胀罐微生物100％引起不添加防腐剂苯甲酸钠的咖啡水晶胀罐，而添加苯甲酸钠的咖啡水晶未见胀罐。表2咖啡水晶中添加苯甲酸钠与否对胀罐的影响项目接入菌种活菌数/cfu/ml胀罐数量/个0.1重量份苯甲酸钠2.0×1050/50不添加苯甲酸钠2.0×10550/50实施例2将改良培养基brix调整至60(1)配制改良液体培养基：取1重量份pca(平板计数培养基)(青岛海博生物，250g/瓶)培养基，加入7重量份的水，加入0.2重量份1mol/l的naoh溶液，溶解均匀后加入锥形瓶，得到培养基液；取1重量份果葡糖浆(f55果糖，嘉吉，罐车包装，30吨/车)，加入0.04重量份水，溶解均匀后加入锥形瓶得到糖液；两种液体分别放置在高压灭菌锅杀菌，115℃，20min，灭菌放凉后，1:34混合，待用；最终培养基brix60，ph6.0。(2)样品稀释与菌种分离：将巧克力糖浆(brix60)(巧克力糖浆风味饮料，2l/瓶(鲜活果汁有限公司)，brix59-61)的胀罐样品10倍梯度稀释，取不同稀释度的样品1ml与冷却后的培养基混合倒平板，同时取200微升不同梯度的样品划线培养基制成的平板；平板置于35℃培养箱培养3天。(3)菌种保存与鉴定：将不同形态单菌落分离，送外检机构鉴定，获得微生物菌种鉴定结果。根据微生物菌种鉴定结果，找到引起胀罐的可疑微生物，将该可疑微生物接入巧克力糖浆的未胀罐样品中进行培养，观察巧克力糖浆的未胀罐样品是否会胀罐，若是，则可疑微生物为胀罐微生物。(4)有效防腐剂筛选：在改良培养基基础上，将上述培养基ph调整分别至6.0，4.0；brix调整至60，添加0.01重量份～0.1重量份的不同种类防腐剂，并接种胀罐微生物，经35℃培养箱培养3天，观察防腐剂的抑菌效果，结果见表3。表3防腐剂分别在ph6.0与ph4.0下验证结果防腐剂ph4.0ph6.00.01份ε-聚赖氨盐酸盐——0.02份ε-聚赖氨盐酸盐——0.04份ε-聚赖氨盐酸盐——0.06份ε-聚赖氨盐酸盐——0.08份ε-聚赖氨盐酸盐——0.02份乳酸链球菌素++0.05份山梨酸钾—+0.1份苯甲酸钠—+空白++++注：“+”表示明显生长；“++”生长非常明显；“—”无生长。对比例2未改良培养基筛选胀罐微生物(1)配制液体培养基：取1重量份pca(平板计数培养基)(青岛海博生物，250g/瓶)，加入7重量份的水，加入0.2重量份1mol/l的naoh溶液，溶解均匀后加入锥形瓶，得到培养基液；放置在高压灭菌锅杀菌，115℃，20min，待用；取34重量份无菌水与1重量份上述培养基混合，最终培养基brix2-3，ph6.0。(2)样品稀释与菌种分离：将巧克力糖浆(brix60)(巧克力糖浆风味饮料，2l/瓶(鲜活果汁有限公司)，brix59-61)的胀罐样品10倍梯度稀释，取不同稀释度的样品1ml与冷却后的培养基混合倒平板，同时取200微升不同梯度的样品划线培养基制成的平板；平板置于35℃培养箱培养3天。对比例2与实施例2的区别在于：没有将培养基brix调整至60。对改良与未改良培养基进行效果验证：结果类似图1和图2所示，改良培养基可大量筛选到引起胀罐的微生物，而非改良培养基筛选未见微生物生长，说明对培养基的改良即brix调整是胀罐微生物分离的关键所在。从参考图1-图2及表3可知，本发明的实施例2制得的培养基brix调整至60，渗透压提高，该胀罐微生物仍能生长，且可筛选到在ph4.0和ph6.0下具有抑菌效果的防腐剂；而对比例2未见微生物明显生长。在改良培养基基础上，培养基brix调整至60，ph在酸性与中性条件下0.01重量份聚赖氨盐酸盐具有明显的抑菌效果，苯甲酸钠和山梨酸钾在酸性条件下可发挥抑制胀罐微生物的效果。为了检验实际的抑制胀罐的效果，将2.0×105cfu/ml胀罐微生物接入到ph6.0的巧克力糖浆产品中，添加或不添加0.1份苯甲酸钠，35℃恒温箱培养1个月，结果见表4，胀罐微生物100％引起不添加防腐剂苯甲酸钠的巧克力糖浆胀罐，而添加苯甲酸钠的巧克力糖浆未见胀罐。表4巧克力糖浆中添加苯甲酸钠与否对胀罐的影响项目接入菌种活菌数/cfu/ml胀罐数量/个0.1重量份苯甲酸钠2.0×1050/50不添加苯甲酸钠2.0×10550/50因此，本发明属于高糖高倍数饮料生产
技术领域：
，通过在常规微生物培养基基础上进行brix与ph调整，胀罐微生物可得到明显分离。通过调整液体培养基ph与brix，模仿产品理化环境，接入一定数量胀罐微生物观察其生长与否，可高效指导高糖产品防腐剂的选择。本发明可快速筛选目标微生物，并可快速根据产品特点选择最适防腐剂。综上，本发明的引起高糖产品胀罐的微生物分离及抑菌方法可快速筛选引起胀罐的目标微生物，并获得有效的食品防腐剂，以防止胀罐的发生，设计巧妙，操作简单方便，成本低，适于大规模推广应用。由此可见，本发明的目的已经完整并有效的予以实现。本发明的功能及结构原理已在实施例中予以展示和说明，在不背离所述原理下，实施方式可作任意修改。所以，本发明包括了基于权利要求精神及权利要求范围的所有变形实施方式。当前第1页12