本发明属于医药技术领域，涉及用作免疫调节剂的吲哚啉类化合物及其立体异构体以及药学上可接受的盐，它们的制备方法以及含有所述化合物的药物组合物。本发明还涉及该类化合物及其立体异构体以及药学上可接受的盐在制备治疗与pd-1/pd-l1信号通路有关的疾病如癌症、感染性疾病、自身免疫性疾病的药物方面的用途。
背景技术：
免疫治疗是近年来肿瘤治疗的热点领域，于2013年被《science》评为十大科学突破之首。程序性死亡受体1(programmeddeath1，pd-1)是t细胞表面受体，当其与程序性死亡配体1(pd-l1)结合时产生负性免疫调节信号，从而抑制t细胞活化、增殖以及白细胞介素2(il-2)、干扰素γ(ifn-γ)等细胞因子的释放(eur.j.immunol.,2002,32(3),634-643.)。大量研究表明，机体内的肿瘤微环境会诱导浸润的t细胞中pd-1表达上调，同时肿瘤细胞高表达pd-l1，导致pd-1/pd-l1介导的信号通路持续激活，肿瘤特异性cd8+t细胞功能被抑制以至于不能识别或杀伤肿瘤细胞，即肿瘤细胞实现免疫逃逸。因此靶向阻断pd-1/pd-l1蛋白/蛋白相互作用，可以恢复t细胞功能，使其重新识别并杀伤肿瘤细胞。
基于pd-1/pd-l1的免疫疗法备受瞩目，目前已被批准上市的pd-1/pd-l1单抗包括默沙东的pembrolizumab、百时美施贵宝的nivolumab、默克的avelumab、阿斯利康的durvalumab、罗氏的atezolizumab等。上述单抗已在多种肿瘤类型的治疗中显示出明显疗效，被批准的适应症包括黑色素瘤、非小细胞肺癌、胃癌、尿路上皮癌等。随着临床研究的开展，单抗药物有望在更多的适应症中实现突破。
虽然单抗药物在临床治疗中显示出优势，但也存在明显的缺陷如制备和纯化困难、生产成本高昂；易被蛋白酶分解，半衰期短；不能口服，只能注射给药；单抗的免疫原性导致严重的毒副作用。相比于生物大分子药物，小分子化合物经化学修饰后药物代谢动力学性质可控，另外在生产工艺、给药方式等方面也具有更大的探索与优化空间。因此，开发靶向pd-1/pd-l1蛋白/蛋白相互作用的小分子抑制剂是实现免疫治疗的可行性选择。
目前小分子pd-1/pd-l1抑制剂研发处于早期阶段，curis的pd-l1抑制剂ac-170处于临床i期，百时美施贵宝、incyte的小分子抑制剂还在临床前研究阶段。因此，迫切需要开发具有新颖化学结构的小分子pd-1/pd-l1抑制剂。
本发明人设计并合成了一系列新的吲哚啉类化合物。活性研究结果表明，该类化合物可以显著抑制pd-1/pd-l1蛋白/蛋白相互作用。
技术实现要素：
本发明涉及通式ⅰ的吲哚啉类化合物及其立体异构体以及药学上可接受的盐，
其中，
cy选自6-10元芳基或5-12元杂芳基，或为
r1独立地选自氢、卤素、(c1-c4)烷基、(c1-c4)烷氧基、氰基、羟基、羧基、氨基；所述的(c1-c4)烷基、(c1-c4)烷氧基可任选被1-3个r2取代；
r2独立地选自氢、卤素、(c1-c4)烷基、羟基、氨基、羧基，或
ra、rb独立地选自氢、(c1-c4)烷基、(c3-c8)环烷基、羟基(c1-c4)烷基、氨基(c1-c4)烷基、氨基甲酰基(c1-c4)烷基、氨基磺酰基(c1-c4)烷基、甲磺酰胺基(c1-c4)烷基、羧基(c1-c4)烷基、(c1-c4)烷氧甲酰基(c1-c4)烷基、四氢吡喃-4-基；所述(c1-c4)烷基、(c3-c8)环烷基、羟基(c1-c4)烷基、氨基(c1-c4)烷基、氨基甲酰基(c1-c4)烷基、氨基磺酰基(c1-c4)烷基、甲磺酰胺基(c1-c4)烷基、羧基(c1-c4)烷基、(c1-c4)烷氧甲酰基(c1-c4)烷基、四氢吡喃-4-基可任选被1-3个r3取代；
或者ra、rb和与它们相连的氮原子一起形成一个3-7元的含氮杂环，优选为5-6元含氮杂环；所述的含氮杂环含有1-3个选自n、o或s的杂原子；所述的含氮杂环可任选被1-3个r4取代；
r3独立地选自氢、卤素、羟基、羧基、氨基、(c1-c4)烷基、羟基(c1-c4)烷基、(c1-c4)烷氧基(c1-c4)烷基、羧基(c1-c4)烷基、(c1-c4)烷氧甲酰基(c1-c4)烷基、(c1-c4)酰基；
r4独立地选自氢、羟基、羧基、氨基、氨甲酰基、(c1-c4)烷基、(c1-c4)烷氧基、(c1-c4)烷氧甲酰基、羟基(c1-c4)烷基、羧基(c1-c4)烷基、(c1-c4)烷氧甲酰基(c1-c4)烷基；
x选自n或ch；
y选自n或cr5；
r5选自氢、卤素、(c1-c4)烷基，或
z为cr6；
r6选自氢、(c1-c4)烷基，或
rc、rd独立地选自氢、(c1-c4)烷基、(c3-c8)环烷基、羟基(c1-c4)烷基、氨基(c1-c4)烷基、氨基甲酰基(c1-c4)烷基、氨基磺酰基(c1-c4)烷基、甲磺酰胺基(c1-c4)烷基、羧基(c1-c4)烷基、(c1-c4)烷氧甲酰基(c1-c4)烷基、四氢吡喃-4-基；所述(c1-c4)烷基、(c3-c8)环烷基、羟基(c1-c4)烷基、氨基(c1-c4)烷基、氨基甲酰基(c1-c4)烷基、氨基磺酰基(c1-c4)烷基、甲磺酰胺基(c1-c4)烷基、羧基(c1-c4)烷基、(c1-c4)烷氧甲酰基(c1-c4)烷基、四氢吡喃-4-基可任选被1-3个r7取代；
或者rc、rd和与它们相连的氮原子一起形成一个3-7元的含氮杂环，优选为5-6元含氮杂环；所述的含氮杂环含有1-3个选自n、o或s的杂原子；所述的含氮杂环可任选被1-3个r8取代，环上碳原子可被氧代；
r7独立地选自氢、卤素、羟基、羧基、氨基、(c1-c4)烷基、羟基(c1-c4)烷基、(c1-c4)烷氧基(c1-c4)烷基、羧基(c1-c4)烷基、(c1-c4)烷氧甲酰基(c1-c4)烷基、(c1-c4)酰基；
r8独立地选自氢、羟基、羧基、氨基、氨甲酰基、(c1-c4)烷基、(c1-c4)烷氧基、(c1-c4)烷氧甲酰基、羟基(c1-c4)烷基、羧基(c1-c4)烷基、(c1-c4)烷氧甲酰基(c1-c4)烷基；
q选自o、s或nr9；
r9选自氢或(c1-c4)烷基。
本发明优选涉及通式ⅰ的吲哚啉类化合物及其立体异构体以及药学上可接受的盐，其中，
cy选自：
r1独立地选自氢、卤素、(c1-c4)烷基、(c1-c4)烷氧基、氰基、羟基、羧基、氨基；所述的(c1-c4)烷基、(c1-c4)烷氧基可任选被1-3个r2取代；
r2独立地选自氢、卤素、(c1-c4)烷基、羟基、氨基、羧基，或
x选自n或ch；
y选自n或cr5；
r5选自氢、卤素、(c1-c4)烷基，或
z为cr6；
r6选自氢、(c1-c4)烷基，或
rc、rd独立地选自氢、(c1-c4)烷基、(c3-c8)环烷基、羟基(c1-c4)烷基、氨基(c1-c4)烷基、氨基甲酰基(c1-c4)烷基、氨基磺酰基(c1-c4)烷基、甲磺酰胺基(c1-c4)烷基、羧基(c1-c4)烷基、(c1-c4)烷氧甲酰基(c1-c4)烷基、四氢吡喃-4-基；所述(c1-c4)烷基、(c3-c8)环烷基、羟基(c1-c4)烷基、氨基(c1-c4)烷基、氨基甲酰基(c1-c4)烷基、氨基磺酰基(c1-c4)烷基、甲磺酰胺基(c1-c4)烷基、羧基(c1-c4)烷基、(c1-c4)烷氧甲酰基(c1-c4)烷基、四氢吡喃-4-基可任选被1-3个r7取代；
或者rc、rd和与它们相连的氮原子一起形成一个3-7元的含氮杂环，优选为5-6元含氮杂环；所述的含氮杂环含有1-3个选自n、o或s的杂原子；所述的含氮杂环可任选被1-3个r8取代，环上碳原子可被氧代；
r7独立地选自氢、卤素、羟基、羧基、氨基、(c1-c4)烷基、羟基(c1-c4)烷基、(c1-c4)烷氧基(c1-c4)烷基、羧基(c1-c4)烷基、(c1-c4)烷氧甲酰基(c1-c4)烷基、(c1-c4)酰基；
r8独立地选自氢、羟基、羧基、氨基、氨甲酰基、(c1-c4)烷基、(c1-c4)烷氧基、(c1-c4)烷氧甲酰基、羟基(c1-c4)烷基、羧基(c1-c4)烷基、(c1-c4)烷氧甲酰基(c1-c4)烷基；
q选自o、s或nr9；
r9选自氢或(c1-c4)烷基。
本发明更加优选涉及通式ⅰ的吲哚啉类化合物及其立体异构体以及药学上可接受的盐，其中，
cy选自：
r1独立地选自氢、卤素、(c1-c4)烷基、(c1-c4)烷氧基、氰基、羟基、羧基、氨基；所述的(c1-c4)烷基、(c1-c4)烷氧基可任选被1-3个r2取代；
r2独立地选自氢、卤素、(c1-c4)烷基、羟基、氨基、羧基，或
x选自n或ch；
y选自n或cr5；
r5选自氢、(c1-c4)烷基；
z为cr6；
r6选自氢或
q为s。
本发明更加特别优选涉及通式ⅰ的吲哚啉类化合物及其立体异构体以及药学上可接受的盐，其中，
cy为
r1独立地选自氢、卤素、(c1-c4)烷基、(c1-c4)烷氧基、氰基、羟基、羧基、氨基；所述的(c1-c4)烷基、(c1-c4)烷氧基可任选被1-3个r2取代；
r2独立地选自氢、卤素、(c1-c4)烷基、羟基、氨基、羧基，或
x选自n或ch；
y选自n或cr5；
r5选自氢、(c1-c4)烷基；
z为cr6；
r6选自氢或
q为s。
同时地，本发明也更加特别优选涉及通式ⅰ的吲哚啉类化合物及其立体异构体以及药学上可接受的盐，其中，
cy选自：
r1独立地选自氢、卤素、(c1-c4)烷基、(c1-c4)烷氧基；所述的(c1-c4)烷基、(c1-c4)烷氧基可任选被1-3个r2取代；
r2独立地选自卤素或
x选自n或ch；
y选自n或ch；
z为cr6；
r6选自氢或
q为s。
本发明通式ⅰ的吲哚啉化合物及其立体异构体以及药学上可接受的盐优选自以下化合物，但这些化合物并不意味着对本发明的任何限制：
此外，本发明还包括本发明化合物的前药。本发明化合物的前药是通式ⅰ的衍生物，它们自身可能具有较弱的活性甚至没有活性，但是在给药后，在生理条件下(例如通过代谢、溶剂分解或另外的方式)被转化成相应的生物活性形式。
以上所述的通式ⅰ的吲哚啉类化合物及其立体异构体以及药学上可接受的盐，所述的药学上可接受的盐包括与无机酸、有机酸、碱金属离子形成的盐；所述的无机酸选自：盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、磷酸；所述的有机酸选自：琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸或对甲苯磺酸；所属的碱金属离子选自锂离子、钠离子或钾离子。
本发明中“卤素”是指氟、氯、溴或碘；“烷基”是指直链或支链的烷基；“杂芳基”是指含有碳原子和杂原子的单环或多环的环状体系，且环状体系具有芳香性，杂原子的种类和数目如权利要求所述；
本发明可以含有上式ⅰ的吲哚啉类化合物及其立体异构体以及药学上可接受的盐作为活性成分，与药学上可接受的载体或赋形剂混合制备成组合物。所述载体或赋形剂包括本领域公知的稀释剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂等。稀释剂包括但不限于淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、磷酸氢钙等；湿润剂包括水、乙醇、异丙醇等；粘合剂包括但不限于淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙二醇等；崩解剂包括但不限于干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助流剂包括但不限于滑石粉、二氧化硅、聚乙二醇等。
本发明的药用组合物可配制成若干种剂型，所述剂型包括但不限于注射剂、片剂、胶囊剂等。
本发明的吲哚啉类化合物及其立体异构体以及药学上可接受的盐可以与其他活性成分组合使用，从而达到更优的治疗效果。
本发明还提供了通式ⅰ的吲哚啉类化合物及其立体异构体以及药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗与pd-1/pd-l1信号通路有关疾病的药物中的应用。所述的与pd-1/pd-l1信号通路有关的疾病选自癌症、感染性疾病、自身免疫性疾病。所述的癌症选自肝癌、肺癌、皮肤癌、血液肿瘤、胶质瘤、消化系统肿瘤、乳腺癌、淋巴瘤、神经系统肿瘤、黑色素瘤；所述的感染性疾病选自细菌感染、病毒感染；所述的自身免疫性疾病选自器官特异性、系统性自身免疫病。其中，所述器官特异性自身免疫病包括慢性淋巴细胞性甲状腺炎、甲状腺功能亢进、胰岛素依赖型糖尿病、溃疡性结肠炎、急性特发性多神经炎，所述的系统性自身免疫病包括类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、系统性血管炎、自身免疫性溶血性贫血。
本发明的积极进步效果在于：本发明的吲哚啉类化合物具有新颖的化学结构，并在体外研究中对pd-1/pd-l1相互作用具有很高的抑制活性，可用于癌症等多种疾病的治疗和预防。
下文中提供的实施例和制备例进一步阐明和举例说明本发明化合物及其制备方法。应当理解，下述实例和制备例的范围并不以任何方式限制本发明的范围。
下面的合成路线概括并描述了本发明的式ⅰ衍生物的制备，所有的原料都是通过这些流程中描述的方式、通过有机化学领域普通技术人员熟知的方法制备的或者可商购。本发明的衍生物都是通过这些流程中描述的方法或通过与其类似的方法制备的，这些方法是有机化学领域普通技术人员熟知的。这些流程中应用的全部可变因数如权利要求中的定义。
路线一：
(a)以4-溴-1h-吲哚和苯、取代苯或杂芳环硼酸或硼酸酯为原料，通过suzuki-miyaura偶联反应制得中间体2；
(b)以中间体2为原料，在还原剂如氰基硼氢化钠作用下制得吲哚啉中间体3；
(c)以中间体3和含有甲酰基的杂环羧酸为原料，在缩合剂条件下经过酰胺化反应制得含有甲酰基的中间体4；
(d)以中间体4为原料，与胺类化合物缩合及氰基硼氢化钠或三乙酰氧基硼氢化钠作用下还原或进一步通过亲核取代反应或羰基化制得通式i的目标化合物。
路线二：
(e)以中间体3和含有卤素的杂环羧酸为原料，在缩合剂条件下经过酰胺化反应制得中间体5；
(f)以中间体5为原料，与乙烯基硼酸频哪醇酯或三丁基乙烯基锡通过偶联反应得到中间体6；
(g)以中间体6为原料，在锇试剂及氧化剂作用下制得含有甲酰基的中间体4；
(h)以中间体4为原料，与胺类化合物缩合及氰基硼氢化钠或三乙酰氧基硼氢化钠作用下还原制得通式i的目标化合物。
路线三：
(i)以4-溴-1h-吲哚为原料，在还原剂如氰基硼氢化钠作用下制得吲哚啉中间体7；
(j)以中间体7和苯、取代苯或杂芳环硼酸或硼酸酯为原料，通过suzuki-miyaura偶联反应制得中间体3；
(k)以中间体3和含有缩醛结构的杂环羧酸为原料，在缩合剂条件下经过酰胺化反应制得中间体8；
(l)以中间体8为原料，在酸性条件下脱保护制得含有甲酰基的中间体4；
(m)以中间体4为原料，与胺类化合物缩合及氰基硼氢化钠或三乙酰氧基硼氢化钠作用下还原或进一步通过亲核取代反应或羰基化制得通式i的目标化合物。
路线四：
(n)以中间体7和含有缩醛结构的杂环羧酸为原料，在缩合剂条件下经过酰胺化反应制得中间体9；
(o)以中间体9为原料，在酸性条件下脱保护制得含有甲酰基的中间体10；
(p)以中间体10为原料，与胺类化合物缩合及氰基硼氢化钠或三乙酰氧基硼氢化钠作用下还原制得中间体11。
(q)以中间体11及苯、取代苯或杂芳环硼酸或硼酸酯为原料，通过suzuki-miyaura偶联反应或进一步通过亲核取代反应或羰基化制得通式i的目标化合物。
路线五：
(r)以中间体7和含有甲酰基的杂环羧酸为原料，在缩合剂条件下经过酰胺化反应制得含有甲酰基的中间体10；
(s)以中间体10及苯、取代苯或杂芳环硼酸或硼酸酯为原料，通过suzuki-miyaura偶联反应或进一步通过亲核取代反应制得中间体4；
(t)以中间体4为原料，与胺类化合物缩合及氰基硼氢化钠或三乙酰氧基硼氢化钠作用下还原制得通式i的目标化合物。
路线六：
(u)以中间体7和取代的杂环羧酸为原料，在缩合剂条件下经过酰胺化反应制得中间体11；
(v)以中间体11及苯、取代苯或杂芳环硼酸或硼酸酯为原料，通过suzuki-miyaura偶联反应或进一步通过亲核取代反应制得通式i的目标化合物。
路线七：
(w)以中间体9及苯、取代苯或杂芳环硼酸或硼酸酯为原料，通过suzuki-miyaura偶联反应或进一步通过亲核取代反应制得中间体8。
(x)以中间体8为原料，在酸性条件下脱保护制得含有甲酰基的中间体4；
(y)以中间体4为原料，与胺类化合物缩合及氰基硼氢化钠或三乙酰氧基硼氢化钠作用下还原或进一步通过羰基化制得通式i的目标化合物。
所述的cy、q、x、y、z的定义如权利要求所述。在中间体5中，a为氯、溴或碘。
本发明的具有通式ⅰ的吲哚啉类化合物均可按照上述反应路线描述的方法或类似的方法制备得到。
具体实施方式：
在以下的实施例中，描绘了制备部分所述化合物的方法。应了解，以下方法及所属领域的普通技术人员已知的其他方法均可适用于本发明所述的所有化合物的制备。实施例旨在阐述而不是限制本发明的范围。
实施例1：(2-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-5-基)(4-苯基吲哚啉-1-基)甲酰
步骤1：4-苯基-1h-吲哚
室温下，将4-溴-1h-吲哚(7g，35.9mmol)、苯硼酸(4.38g，35.9mmol)、四(三苯基膦)钯(1.24g，1.07mmol)、碳酸钾(14.89g，107.7mmol)溶于二氧六环和水(体积比4:1，200ml)的混合溶剂中。在氮气保护下，升温至60℃反应10小时。冷却至室温，垫硅藻土抽滤，滤液用二氯甲烷萃取，有机层用饱和食盐水洗涤，减压浓缩，柱层析分离得白色固体4.28g，收率61.7％。1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ11.27(s,1h),7.67(d,j＝7.3hz,2h),7.49(t,j＝7.7hz,2h),7.42(t,j＝5.9hz,2h),7.37(t,j＝7.4hz,1h),7.18(t,j＝7.6hz,1h),7.08(d,j＝7.1hz,1h),6.55(s,1h)。
步骤2：4-苯基吲哚啉
室温下，将4-苯基-1h-吲哚(3g，15.54mmol)溶于冰醋酸(20ml)中，缓慢加入氰基硼氢化钠(2.93g，46.61mmol)，室温反应3小时。冰浴下，用40％naoh溶液调节ph至9-10，乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤，减压浓缩，柱层析分离得白色固体2.09g，收率68.9％。1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ7.47-7.40(m,4h),7.36-7.29(m,1h),7.00(t,j＝7.7hz,1h),6.59(d,j＝7.1hz,1h),6.51(d,j＝7.7hz,1h),5.59(s,1h),3.39(t,j＝8.4hz,2h),2.97(t,j＝8.4hz,2h)。
步骤3：(2-溴噻唑-5-基)(4-苯基吲哚啉-1-基)甲酰
将4-苯基吲哚啉(1g，5.13mmol)、2-溴噻唑-5-羧酸(1.06g，5.13mmol)及2-(7-氧化苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐(hatu，2.93g，7.7mmol)加入干燥的dmf(20ml)中，室温搅拌均匀后，加入n,n-二异丙基乙胺(1.33g，10.26mmol)，室温反应3小时。将反应液倒入冰水中，于室温下搅拌半小时，抽滤，得灰白色固体1.51g，收率76.7％。1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ8.27(s,1h),8.08(s,1h),7.51-7.45(m,4h),7.42-7.37(m,1h),7.35(t,j＝7.9hz,1h),7.15(d,j＝7.6hz,1h),4.41(t,j＝8.1hz,2h),3.26(t,j＝8.1hz,2h)。
步骤4：(4-苯基吲哚啉-1-基)(2-乙烯基噻唑-5-基)甲酰
室温下，将(2-溴噻唑-5-基)(4-苯基吲哚啉-1-基)甲酰(0.5g，1.3mmol)、三丁基乙烯基锡(0.46g，1.43mmol)、四(三苯基膦)钯(0.15g，0.13mmol)及碳酸铯(0.76g，2.34mmol)溶于1,4-二氧六环/水(体积比3:1，15ml)的混合溶剂中，氮气保护下100℃反应3.5小时。将反应液冷却至室温，蒸除1,4-二氧六环。用乙酸乙酯萃取反应液，饱和食盐水洗涤有机层，蒸干有机层，柱层析分离得黄色固体0.2g，收率46.3％。1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ8.37(s,1h),8.09(s,1h),7.48(dd,j＝9.4,5.1hz,4h),7.41(dt,j＝12.6,6.8hz,1h),7.34(t,j＝7.8hz,1h),7.14(d,j＝7.4hz,1h),7.01(dd,j＝17.5,10.9hz,1h),6.23(d,j＝17.5hz,1h),5.73(d,j＝11.0hz,1h),4.42(s,2h),3.25(t,j＝8.1hz,2h)。
步骤5：5-(4-苯基吲哚啉-1-甲酰基)噻唑-2-甲醛
将(4-苯基吲哚啉-1-基)(2-乙烯基噻唑-5-基)甲酰(0.6g，1.8mmol)、二水合锇酸钾(0.13g，0.36mmol)溶于1,4-二氧六环/水(体积比5:1，12ml)的混合溶剂中，室温搅拌5分钟后加入高碘酸钠(1.54g，7.2mmol)，于室温下搅拌反应3小时。将反应液倒入水中，搅拌，抽滤得浅黄色固体0.52g，收率86.6％。1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ8.73(s,1h),7.52-7.46(m,5h),7.43-7.33(m,3h),7.18(d,j＝7.5hz,1h),4.40(t,j＝7.9hz,2h),3.26(t,j＝8.1hz,2h)。
步骤6：(2-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-5-基)(4-苯基吲哚啉-1-基)甲酰(实施例1)
室温下，将5-(4-苯基吲哚啉-1-甲酰基)噻唑-2-甲醛(0.2g，0.6mmol)、乙醇胺(0.18g，3mmol)、冰醋酸(0.054g，0.9mmol)加入至二氯甲烷/甲醇(体积比1：1，7ml)的混合溶剂中，室温反应3小时，加入氰基硼氢化钠(0.19g，3mmol)，于室温下继续反应10小时。向反应液中加水，蒸除有机溶剂，加入二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗涤有机层，蒸除溶剂，柱层析分离得白色固体0.062g，收率27.2％。
esi-msm/z:380.1[m+h]+；1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ8.26(s,1h),7.51-7.45(m,5h),7.39(ddd,j＝8.4,5.9,2.4hz,1h),7.33(t,j＝7.9hz,1h),7.13(d,j＝7.5hz,1h),4.56(t,j＝5.3hz,1h),4.38(t,j＝8.2hz,2h),4.04(s,2h),3.50(q,j＝5.5hz,2h),3.24(t,j＝8.1hz,2h),2.69(t,j＝5.7hz,2h)。
根据实施例1的合成方法，以5-(4-苯基吲哚啉-1-甲酰基)噻唑-2-甲醛为原料，通过与n-(2-氨基乙基)乙酰胺反应，再经氰基硼氢化钠还原制备得到实施例2的化合物。
实施例2：n-(2-(((5-(4-苯基吲哚啉-1-甲酰基)噻唑-2-基)甲基)氨基)乙基)乙酰胺
esi-msm/z:421.2[m+h]+；1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ8.26(s,1h),7.83(s,1h),7.48(dd,j＝9.0,5.2hz,4h),7.39(ddd,j＝8.2,5.9,2.3hz,1h),7.33(t,j＝7.8hz,1h),7.13(d,j＝7.6hz,1h),4.39(t,j＝8.2hz,2h),4.01(s,2h),3.24(t,j＝8.1hz,2h),3.16(q,j＝6.2hz,2h),2.66(t,j＝6.4hz,2h),1.80(s,3h)。
实施例3：(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻吩-2-基)(4-苯基吲哚啉-1-基)甲酰
步骤1：5-(4-苯基吲哚啉-1-甲酰基)噻吩-2-甲醛
将4-苯基吲哚啉(2g，10.25mmol)、5-甲酰基噻吩-2-羧酸(2.08g，13.33mmol)、hatu(5.85g，15.38mmol)溶于dmf(30ml)中，室温搅拌20min，将入n,n-二异丙基乙胺(6.62g，51.26mmol)，于室温反应3小时。将反应液倒入水中，搅拌10分钟，抽滤，得棕黄色固体2.51g，收率73.4％。esi-msm/z:334.1[m+h]+。
步骤2：(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻吩-2-基)(4-苯基吲哚啉-1-基)甲酰(实施例3)
室温下，将5-(4-苯基吲哚啉-1-甲酰基)噻吩-2-甲醛(0.1g，0.3mmol)、乙醇胺(0.092g，1.5mmol)、冰醋酸(0.027g，0.45mmol)加入至二氯甲烷/甲醇(体积比1：1，5ml)的混合溶剂中，室温反应5小时，加入氰基硼氢化钠(0.095g，1.5mmol)，于室温下继续反应10小时。向反应液中加水，蒸除有机溶剂，加入二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗涤有机层，蒸除溶剂，柱层析分离得白色固体0.035g，收率30.7％。
esi-msm/z:379.1[m+h]+；1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ8.05(d,j＝7.7hz,1h),7.60(d,j＝3.6hz,1h),7.53-7.45(m,4h),7.43-7.37(m,1h),7.32(t,j＝7.8hz,1h),7.11(d,j＝7.5hz,1h),7.05(d,j＝3.3hz,1h),4.54(s,1h),4.40(t,j＝8.1hz,2h),3.95(s,2h),3.49(d,j＝4.0hz,2h),3.24(t,j＝8.0hz,2h),2.64(t,j＝5.7hz,2h)。
根据实施例3的合成方法，以5-(4-苯基吲哚啉-1-甲酰基)噻吩-2-甲醛为原料，通过与不同的胺类化合物反应，再经氰基硼氢化钠还原制备得到实施例4-7的化合物。
实施例4：n-(2-(((5-(4-苯基吲哚啉-1-甲酰基)噻吩-2-基)甲基)氨基)乙基)乙酰胺
esi-msm/z:420.2[m+h]+；1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ8.04(d,j＝7.8hz,1h),7.80(s,1h),7.59(d,j＝3.7hz,1h),7.51-7.45(m,4h),7.41-7.36(m,1h),7.32(t,j＝7.8hz,1h),7.10(d,j＝7.6hz,1h),7.03(d,j＝3.5hz,1h),4.39(t,j＝8.1hz,2h),3.91(s,2h),3.23(t,j＝8.0hz,2h),3.13(dd,j＝12.2,6.2hz,2h),2.59(t,j＝6.4hz,2h),1.79(s,3h)。
实施例5：n-(2-(((5-(4-苯基吲哚啉-1-甲酰基)噻吩-2-基)甲基)氨基)乙基)甲磺酰胺
esi-msm/z:456.1[m+h]+。
实施例6：((5-(4-苯基吲哚啉-1-甲酰基)噻吩-2-基)甲基)-d-丝氨酸
esi-msm/z:423.1[m+h]+。
实施例7：((5-(4-苯基吲哚啉-1-甲酰基)噻吩-2-基)甲基)-d-丙氨酸
esi-msm/z:407.1[m+h]+。
实施例8：(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-2-基)(4-苯基吲哚啉-1-基)甲酰
步骤1：5-甲酰基噻唑-2-羧酸乙酯
室温下，将硫代草氨酸乙酯(5g，37.59mmol)及2-溴丙二醛(5.64g，37.59mmol)加入至乙二醇二甲醚(120ml)中，继续搅拌反应10小时。向反应液中加入水，二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗涤有机层，水洗有机层，蒸干溶剂，得棕黄色固体3.94g，收率56.6％。1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ10.15(s,1h),8.87(s,1h),4.42(q,j＝7.1hz,2h),1.35(t,j＝7.1hz,3h)。
步骤2：5-甲酰基噻唑-2-羧酸
室温下，将5-甲酰基噻唑-2-羧酸乙酯(1g，5.41mmol)加入四氢呋喃/水(体积比4：1，5ml)的混合溶剂中，加入氢氧化锂(0.26g，10.81mmol)，搅拌反应1小时。蒸除四氢呋喃，用二氯甲烷萃取，水层用稀盐酸调节ph至5-6，蒸干水层，得淡黄色固体0.57g，收率67.3％。esi-msm/z:158.0[m+h]+。
步骤3：2-(4-苯基吲哚啉-1-甲酰基)噻唑-5-甲醛
室温下，将4-苯基吲哚啉(1.5g，7.69mmol)、5-甲酰基噻唑-2-羧酸(1.45g，9.23mmol)、hatu(4.39g，11.53mmol)溶于dmf(30ml)中，搅拌20min，将入n,n-二异丙基乙胺(4.96g，38.44mmol)，于室温反应2.5小时。将反应液倒入水中，搅拌10分钟，抽滤，得棕黄色固体2.12g，收率82.7％。1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ10.15(s,1h),8.87(s,1h),8.25(d,j＝8.0hz,1h),7.52-7.47(m,4h),7.40(dd,j＝12.9,7.2hz,2h),7.21(d,j＝7.5hz,1h),4.70(t,j＝8.1hz,2h),3.29(t,j＝8.1hz,2h)。
步骤4：(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-2-基)(4-苯基吲哚啉-1-基)甲酰(实施例8)
室温下，将2-(4-苯基吲哚啉-1-甲酰基)噻唑-5-甲醛(0.1g，0.3mmol)、乙醇胺(0.092g，1.5mmol)、冰醋酸(0.027g，0.45mmol)加入至二氯甲烷/甲醇(体积比1：1，5ml)的混合溶剂中，室温反应7小时，加入氰基硼氢化钠(0.095g，1.5mmol)，于室温下继续反应12小时。向反应液中加水，蒸除有机溶剂，加入二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗涤有机层，蒸除溶剂，柱层析分离得白色固体0.022g，收率19.3％。
esi-msm/z:380.1[m+h]+；1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ8.23(s,1h),7.91(s,1h),7.80(s,1h),7.49(q,j＝7.8hz,4h),7.38(dt,j＝15.3,7.2hz,2h),7.16(d,j＝7.6hz,1h),4.68(t,j＝7.9hz,2h),3.98(s,2h),3.26(t,j＝8.1hz,2h),3.13(dd,j＝11.8,5.8hz,2h),2.58(t,j＝6.3hz,2h),1.79(s,3h)。
根据实施例8的合成方法，以2-(4-苯基吲哚啉-1-甲酰基)噻唑-5-甲醛为原料，通过与不同的胺类化合物反应，再经氰基硼氢化钠还原制备得到实施例9-21的化合物。
实施例9：(5-(((2-羟基乙基)(甲基)氨基)甲基)噻唑-2-基)(4-苯基吲哚啉-1-基)甲酰
esi-msm/z:394.2[m+h]+。
实施例10：n-(2-(((2-(4-苯基吲哚啉-1-甲酰基)噻唑-5-基)甲基)氨基)乙基)乙酰胺
esi-msm/z:421.2[m+h]+；1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ8.23(s,1h),7.91(s,1h),7.80(s,1h),7.49(q,j＝7.8hz,4h),7.38(dt,j＝15.3,7.2hz,2h),7.16(d,j＝7.6hz,1h),4.68(t,j＝7.6hz,2h),3.98(s,2h),3.26(t,j＝8.1hz,2h),3.13(dd,j＝11.8,5.8hz,2h),2.58(t,j＝6.3hz,2h),1.79(s,3h)。
实施例11：2-(((2-(4-苯基吲哚啉-1-甲酰基)噻唑-5-基)甲基)氨基)乙烷-1-磺酰胺
esi-msm/z:443.1[m+h]+。
实施例12：n-(2-(((2-(4-苯基吲哚啉-1-甲酰基)噻唑-5-基)甲基)氨基)乙基)甲磺酰胺
esi-msm/z:457.1[m+h]+。
实施例13：((2-(4-苯基吲哚啉-1-甲酰基)噻唑-5-基)甲基)-d-丝氨酸
esi-msm/z:424.1[m+h]+。
实施例14：((2-(4-苯基吲哚啉-1-甲酰基)噻唑-5-基)甲基)-d-苏氨酸
esi-msm/z:438.1[m+h]+。
实施例15：((2-(4-苯基吲哚啉-1-甲酰基)噻唑-5-基)甲基)-d-丙氨酸
esi-msm/z:408.1[m+h]+。
实施例16：((2-(4-苯基吲哚啉-1-甲酰基)噻唑-5-基)甲基)-l-丙氨酸
esi-msm/z:408.1[m+h]+。
实施例17：(s)-3-羟基-4-(((2-(4-苯基吲哚啉-1-甲酰基)噻唑-5-基)甲基)氨基)丁酸
esi-msm/z:438.2[m+h]+。
实施例18：(s)-(5-((2-(羟基甲基)吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)(4-苯基吲哚啉-1-基)甲酰
esi-msm/z:420.2[m+h]+。
实施例19：((2-(4-苯基吲哚啉-1-甲酰基)噻唑-5-基)甲基)-l-脯氨酸
esi-msm/z:434.2[m+h]+。
实施例20：(s)-1-((2-(4-苯基吲哚啉-1-甲酰基)噻唑-5-基)甲基)哌啶-2-羧酸
esi-msm/z:448.2[m+h]+。
实施例21：(4-苯基吲哚啉-1-基)(5-(((四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)甲基)噻唑-2-基)甲酰
esi-msm/z:420.2[m+h]+。
实施例22：3-((2-(4-苯基吲哚啉-1-甲酰基)噻唑-5-基)甲基)噁唑烷-2-酮
室温下，将(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-2-基)(4-苯基吲哚啉-1-基)甲酰(实施例8，0.1g，0.26mmol)溶于无水乙醇(8ml)中，缓慢滴加乙醇钠(1m，0.53ml，0.53mmol)和碳酸二乙酯(0.31g，2.64mmol)的混合溶液，升温至回流反应7小时。向体系中加入醋酸，蒸除溶剂，加入二氯甲烷，水洗，蒸除有机相，柱层析分离得白色固体0.046g，收率42.6％。
esi-msm/z:406.1[m+h]+。
中间体：5-溴-1,3,4-噻二唑-2-羧酸
冰浴下，将5-溴-1,3,4-噻二唑-2-羧酸乙酯(1g，4.24mmol)、naoh(1g，25mmol)加入至甲醇/水(体积比4：1，15ml)的混合溶剂中。反应液于室温下继续搅拌反应2小时。向体系中加入稀盐酸调节ph至6，蒸除溶剂得白色固体0.79g，收率89.7％，可直接用于下一步。
类似实施例1的合成方法，以4-苯基吲哚啉为原料，通过与5-溴-1,3,4-噻二唑-2-羧酸酰胺化、三丁基乙烯基锡偶联、高碘酸钠氧化、与胺类化合物经氰基硼氢化钠还原胺化制备得到实施例23-27的化合物。
实施例23：(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)-1,3,4-噻二唑-2-基)(4-苯基吲哚啉-1-基)甲酰
esi-msm/z:381.1[m+h]+。
实施例24：n-(2-(((5-(4-苯基吲哚啉-1-甲酰基)-1,3,4-噻二唑-2-基)甲基)氨基)乙基)乙酰胺
esi-msm/z:422.2[m+h]+。
实施例25：n-(2-(((5-(4-苯基吲哚啉-1-甲酰基)-1,3,4-噻二唑-2-基)甲基)氨基)乙基)甲磺酰胺
esi-msm/z:458.1[m+h]+。
实施例26：((5-(4-苯基吲哚啉-1-甲酰基)-1,3,4-噻二唑-2-基)甲基)-d-丝氨酸
esi-msm/z:425.1[m+h]+。
实施例27：((5-(4-苯基吲哚啉-1-甲酰基)-1,3,4-噻二唑-2-基)甲基)-d-丙氨酸
esi-msm/z:409.2[m+h]+。
实施例28：(4-(苯并[d]噁唑-5-基)吲哚啉-1-基)(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-2-基)甲酰
步骤1：5-(1,3-二氧戊环-2-基)噻唑-2-羧酸乙酯
室温下，将5-甲酰基噻唑-2-羧酸乙酯(3g，16.22mmol)、乙二醇(3.5g，56.42mmol)、对甲苯磺酸一水合物(0.25g，1.32mmol)溶于甲苯(20ml)，升温至110℃反应3小时。蒸除甲苯，将残余物用二氯甲烷溶解，分别用饱和碳酸氢钠溶液及饱和食盐水洗涤有机层，蒸除溶剂得棕黄色固体2.17g，收率58.4％。1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ8.17(s,1h),6.24(s,1h),4.38(q,j＝7.1hz,2h),4.09-4.03(m,2h),4.02-3.96(m,2h),1.34(dt,j＝11.7,4.5hz,3h)。
步骤2：5-(1,3-二氧戊环-2-基)噻唑-2-羧酸
室温下，将5-(1,3-二氧戊环-2-基)噻唑-2-羧酸乙酯(2.17g，9.47mmol)溶于四氢呋喃/水(体积比4：1，20ml)的混合溶剂中，加入氢氧化锂(0.68g，28.42mmol)，继续搅拌反应6小时。蒸除四氢呋喃，用二氯甲烷萃取水层，水层用稀盐酸调节ph至6，正丁醇萃取，合并有机层，蒸除溶剂得橙褐色固体0.75g，收率39.4％。esi-msm/z:202.0[m+h]+。
步骤3：(5-(1,3-二氧戊环-2-基)噻唑-2-基)(4-溴吲哚啉-1-基)甲酰
室温下，将4-溴吲哚啉(0.57g，2.89mmol)、5-(1,3-二氧戊环-2-基)噻唑-2-羧酸(0.7g，3.47mmol)、hatu(1.65g，4.34mmol)溶于dmf(20ml)中，搅拌20min，将入n,n-二异丙基乙胺(1.87g，14.48mmol)，于室温反应3小时。将反应液倒入水中，搅拌10分钟，抽滤，得橙褐色固体1.01g，收率91.8％。1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ8.22-8.14(m,2h),7.34(d,j＝8.0hz,1h),7.22(t,j＝8.0hz,1h),6.23(s,1h),4.73(t,j＝8.1hz,2h),4.09-4.03(m,2h),4.03-3.98(m,2h),3.19(t,j＝8.3hz,2h)。
步骤4：2-(4-溴吲哚啉-1-甲酰基)噻唑-5-甲醛
室温下，将(5-(1,3-二氧戊环-2-基)噻唑-2-基)(4-溴吲哚啉-1-基)甲酰(1.01g，2.66mmol)、对甲苯磺酸(0.91g，5.29mmol)溶于丙酮/水(体积比3：2，10ml)的混合溶剂中，于70℃反应2.5小时。将反应液倒入冰水中搅拌10分钟，抽滤，干燥，得淡黄色固体0.84g，收率94.1％。esi-msm/z:337.0[m+h]+。
步骤5：(4-溴吲哚啉-1-基)(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-2-基)甲酰
室温下，将2-(4-溴吲哚啉-1-甲酰基)噻唑-5-甲醛(0.84g，2.5mmol)、乙醇胺(0.76g，12.5mmol)和冰醋酸(0.23g，3.75mmol)加入至二氯甲烷/水(体积比1：1，10ml)的混合溶剂中，继续搅拌5小时。向体系中加入氰基硼氢化钠(0.79g，12.5mmol)，于室温下继续反应12小时。向反应液中加水，蒸除有机溶剂，加入二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗涤有机层，蒸除溶剂，柱层析分离得淡黄色固体0.52g，收率54.6％。1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ8.18(d,j＝8.1hz,1h),7.92(s,1h),7.32(d,j＝8.0hz,1h),7.21(t,j＝8.1hz,1h),4.73(t,j＝8.2hz,2h),4.51(t,j＝5.4hz,1h),4.00(s,2h),3.46(q,j＝5.7hz,2h),3.18(t,j＝8.4hz,2h),2.60(t,j＝5.7hz,2h)。
步骤6：(4-(苯并[d]噁唑-5-基)吲哚啉-1-基)(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-2-基)甲酰(实施例28)
室温下，将(4-溴吲哚啉-1-基)(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-2-基)甲酰(0.5g，1.31mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯并[d]噁唑(0.48g，1.97mmol)、[1，1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.067g，0.092mmol)和碳酸钠(0.28g，2.62mmol)加入至二氧六环/水(体积比3：1，15ml)的混合溶剂中，在氮气保护下于80℃反应4小时。过滤，蒸除溶剂，柱层析分离得白色固体0.15g，收率27.2％。
esi-msm/z:421.1[m+h]+；1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ8.82(s,1h),8.25(d,j＝7.0hz,1h),7.94-7.90(m,2h),7.87(d,j＝8.4hz,1h),7.56(dd,j＝8.4,1.5hz,1h),7.38(t,j＝7.8hz,1h),7.22(d,j＝7.4hz,1h),4.69(t,j＝7.8hz,2h),4.52(t,j＝5.3hz,1h),4.00(s,2h),3.47(q,j＝5.6hz,2h),3.29(t,j＝8.2hz,2h),2.61(t,j＝5.7hz,2h)。
类似实施例28的合成方法，以(4-溴吲哚啉-1-基)(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-2-基)甲酰及苯、取代苯或杂芳环硼酸或硼酸酯为原料，通过suzuki-miyaura偶联反应制备得到实施例29-43的化合物。
实施例29：(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-2-基)(4-(1-甲基-1h-吲唑-4-基)吲哚啉-1-基)甲酰
esi-msm/z:434.2[m+h]+。
实施例30：(4-(1h-吲哚-4-基)吲哚啉-1-基)(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-2-基)甲酰
esi-msm/z:419.2[m+h]+。
实施例31：(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-2-基)(4-(6-甲氧基吡啶-2-基)吲哚啉-1-基)甲酰
esi-msm/z:411.1[m+h]+。
实施例32：(4-(1h-吡咯[2,3-b]吡啶-5-基)吲哚啉-1-基)(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-2-基)甲酰
esi-msm/z:420.1[m+h]+。
实施例33：(4-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧芑-6-基)吲哚啉-1-基)(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-2-基)甲酰
esi-msm/z:438.1[m+h]+。
实施例34：(4-(苯并[d]噻唑-5-基)吲哚啉-1-基)(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-2-基)甲酰
esi-msm/z:437.1[m+h]+。
实施例35：(4-(苯并[d]噁唑-6-基)吲哚啉-1-基)(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-2-基)甲酰
esi-msm/z:421.1[m+h]+。
实施例36：(4-(苯并[d]噻唑-6-基)吲哚啉-1-基)(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-2-基)甲酰
esi-msm/z:437.1[m+h]+。
实施例37：(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-2-基)(4-(喹喔啉-6-基)吲哚啉-1-基)甲酰
esi-msm/z:432.1[m+h]+。
实施例38：(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-2-基)(4-(喹啉-3-基)吲哚啉-1-基)甲酰
esi-msm/z:431.2[m+h]+。
实施例39：(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-2-基)(4-(噻吩-2-基)吲哚啉-1-基)甲酰
esi-msm/z:386.1[m+h]+。
实施例40：(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-2-基)(4-(4-(三氟甲氧基)苯基)吲哚啉-1-基)甲酰
esi-msm/z:464.1[m+h]+。
实施例41：(4-(2-氟-3-甲氧基苯基)吲哚啉-1-基)(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-2-基)甲酰
esi-msm/z:428.1[m+h]+。
实施例42：(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-2-基)(4-(3-甲氧基-2-甲基苯基)吲哚啉-1-基)甲酰
esi-msm/z:424.2[m+h]+。
实施例43：(4-(3,4-二甲氧基苯基)吲哚啉-1-基)(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-2-基)甲酰
esi-msm/z:440.2[m+h]+。
实施例44：n-(2-(((2-(4-(苯并[d]噁唑-5-基)吲哚啉-1-甲酰基)噻唑-5-基)甲基)氨基)乙基)乙酰胺
步骤1：4-溴吲哚啉
室温下，将4-溴-1h-吲哚(17g，87.19mmol)溶于冰醋酸(15ml)中，搅拌10分钟。将氰基硼氢化钠(16.32g，258.92mmol)缓慢加入至反应液。加毕，继续室温搅拌反应1小时。向体系中加入氢氧化钠溶液至ph为8-9，二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗涤有机层，蒸除有机层，柱层析得黄色油状物9.88g，收率57.5％。esi-msm/z:198.0[m+h]+。
步骤2：5-(吲哚啉-4-基)苯并[d]噁唑
室温下，将4-溴吲哚啉(1g，5.08mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯并[d]噁唑(1.87g，7.61mmol)、[1，1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.26g，0.36mmol)和碳酸钠(1.08g，10.15mmol)加入至二氧六环/水(体积比3：1，15ml)的混合溶剂中，在氮气保护下于80℃反应5小时。过滤，蒸除溶剂，柱层析分离得白色固体0.71g，收率59.1％。esi-msm/z:237.1[m+h]+。
步骤3：(5-(1,3-二氧戊环-2-基)噻唑-2-基)(4-(苯并[d]噁唑-5-基)吲哚啉-1-基)甲酰
室温下，将5-(吲哚啉-4-基)苯并[d]噁唑(0.7g，2.96mmol)、5-(1,3-二氧戊环-2-基)噻唑-2-羧酸(0.72g，3.56mmol)、hatu(1.69g，4.45mmol)溶于dmf(20ml)中，搅拌20min，将入n,n-二异丙基乙胺(1.92g，14.82mmol)，于室温反应2.5小时。将反应液倒入水中，搅拌10分钟，抽滤，得淡黄色固体1.06g，收率85.7％。esi-msm/z:420.1[m+h]+。
步骤4：2-(4-(苯并[d]噁唑-5-基)吲哚啉-1-甲酰基)噻唑-5-甲醛
室温下，将(5-(1,3-二氧戊环-2-基)噻唑-2-基)(4-(苯并[d]噁唑-5-基)吲哚啉-1-基)甲酰(1g，2.39mmol)、对甲苯磺酸(0.82g，4.77mmol)溶于丙酮/水(体积比3：2，10ml)的混合溶剂中，于70℃反应3小时。将反应液倒入冰水中搅拌10分钟，抽滤，干燥，得淡黄色固体0.8g，收率89.7％。esi-msm/z:376.1[m+h]+。
步骤5：n-(2-(((2-(4-(苯并[d]噁唑-5-基)吲哚啉-1-甲酰基)噻唑-5-基)甲基)氨基)乙基)乙酰胺(实施例44)
室温下，将2-(4-(苯并[d]噁唑-5-基)吲哚啉-1-甲酰基)噻唑-5-甲醛(0.1g，0.27mmol)、n-(2-氨基乙基)乙酰胺(0.14g，1.33mmol)、冰醋酸(0.024g，0.4mmol)加入至二氯甲烷/甲醇(体积比1：1，5ml)的混合溶剂中，室温反应5小时，加入氰基硼氢化钠(0.084g，1.33mmol)，于室温下继续反应13小时。向反应液中加水，蒸除有机溶剂，加入二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗涤有机层，蒸除溶剂，柱层析分离得白色固体0.04g，收率32.7％。
esi-msm/z:462.2[m+h]+。
根据实施例44的合成方法，以2-(4-(苯并[d]噁唑-5-基)吲哚啉-1-甲酰基)噻唑-5-甲醛为原料，通过与不同的胺类化合物反应，再经氰基硼氢化钠还原制备得到实施例45-50的化合物。
实施例45：2-(((2-(4-(苯并[d]噁唑-5-基)吲哚啉-1-甲酰基)噻唑-5-基)甲基)氨基)乙烷-1-磺酰胺
esi-msm/z:484.1[m+h]+。
实施例46：n-(2-(((2-(4-(苯并[d]噁唑-5-基)吲哚啉-1-甲酰基)噻唑-5-基)甲基)氨基)乙基)甲磺酰胺
esi-msm/z:498.1[m+h]+。
实施例47：((2-(4-(苯并[d]噁唑-5-基)吲哚啉-1-甲酰基)噻唑-5-基)甲基)-d-丝氨酸
esi-msm/z:465.1[m+h]+。
实施例48：((2-(4-(苯并[d]噁唑-5-基)吲哚啉-1-甲酰基)噻唑-5-基)甲基)-d-丙氨酸
esi-msm/z:449.1[m+h]+。
实施例49：((2-(4-(苯并[d]噁唑-5-基)吲哚啉-1-甲酰基)噻唑-5-基)甲基)-l-丙氨酸
esi-msm/z:449.1[m+h]+。
实施例50：(4-(苯并[d]噁唑-5-基)吲哚啉-1-基)(5-(((四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)甲基)噻唑-2-基)甲酰
esi-msm/z:461.2[m+h]+。
类似实施例22的制备方法，以(4-(苯并[d]噁唑-5-基)吲哚啉-1-基)(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-2-基)甲酰(实施例28)为原料，制备得到实施例51的化合物。
实施例51：3-((2-(4-(苯并[d]噁唑-5-基)吲哚啉-1-甲酰基)噻唑-5-基)甲基)噁唑烷-2-酮
esi-msm/z:447.1[m+h]+。
实施例52：(r)-(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-2-基)(4-(3-(3-(3-羟基吡咯烷-1-基)丙氧基)-2-甲基苯基)吲哚啉-1-基)甲酰
步骤1：1-溴-3-(3-溴丙氧基)-2-甲基苯
室温下，将1,3-二溴丙烷(75.24g，376.4mmol)、3-溴-2-甲基苯酚(7g，37.64mmol)和碳酸钾(14.02g，101.63mmol)加入至丙酮中(300ml)，室温搅拌反应7天。过滤，减压蒸除滤液，柱层析得无色液体10.28g，收率89.3％。esi-msm/z:307.0[m+h]+。
步骤2：2-(3-(3-溴丙氧基)-2-甲基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷
室温下，将1-溴-3-(3-溴丙氧基)-2-甲基苯(5g，16.34mmol)、联硼酸频那醇酯(6.23g，24.52mmol)、[1，1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.84g，1.14mmol)和醋酸钾(4.81g，49.03mmol)加入至1,4-二氧六环(60ml)中。在氮气保护下，于80℃反应20小时。过滤，蒸除溶剂，柱层析分离得白色固体3.91g，收率67.6％。esi-msm/z:355.1[m+h]+。
步骤3：(4-(3-(3-溴丙氧基)-2-甲基苯基)吲哚啉-1-基)(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-2-基)甲酰
室温下，将(4-溴吲哚啉-1-基)(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-2-基)甲酰(0.5g，1.31mmol)、2-(3-(3-溴丙氧基)-2-甲基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(0.7g，1.97mmol)、[1，1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.067g，0.092mmol)和碳酸钠(0.28g，2.62mmol)加入至二氧六环/水(体积比3：1，15ml)的混合溶剂中，在氮气保护下于80℃反应7小时。过滤，蒸除溶剂，柱层析分离得白色固体0.22g，收率31.3％。esi-msm/z:530.1[m+h]+。
步骤4：(r)-(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-2-基)(4-(3-(3-(3-羟基吡咯烷-1-基)丙氧基)-2-甲基苯基)吲哚啉-1-基)甲酰(实施例52)
室温下，将(4-(3-(3-溴丙氧基)-2-甲基苯基)吲哚啉-1-基)(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-2-基)甲酰(0.1g，0.19mmol)、(r)-3-羟基吡咯烷盐酸盐(0.34g，2.74mmol)、n,n-二异丙基乙胺(0.44g，3.4mmol)溶于甲醇中(7ml)，反应液加热至70℃反应15小时。蒸除溶剂，向体系中加入二氯甲烷，饱和食盐水洗涤，蒸除有机层，柱层析得淡黄色固体0.027g，收率26.7％。
esi-msm/z:537.3[m+h]+。
根据实施例52的合成方法，以(4-(3-(3-溴丙氧基)-2-甲基苯基)吲哚啉-1-基)(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-2-基)甲酰为原料，通过与不同的胺类化合物经过亲核取代反应制备得到实施例53和实施例54的化合物。
实施例53：2-(3-羟基-1-(3-(3-(1-(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-2-甲酰基)吲哚啉-4-基)-2-甲基苯氧基)丙基)吡咯烷-3-基)乙酸
esi-msm/z:595.3[m+h]+。
实施例54：(3-(3-(1-(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)噻唑-2-甲酰基)吲哚啉-4-基)-2-甲基苯氧基)丙基)-d-丝氨酸
esi-msm/z:555.2[m+h]+。
本发明化合物生物学活性研究
采用均相时间分辨荧光(homogenousetime-resolvedfluorescence，htrf)试验来检测本发明化合物抑制pd-1/pd-l1相互作用的能力。检测试剂盒购买于cisbio公司，其中包含anti-tag1-cyptate、anti-tag2-xl665/d2、tag1-pd-l1、tag2-pd-1、dilutionbuffer、detectionbuffer等实验所需试剂。
实验步骤：pd-1重组蛋白和pd-l1重组蛋白分别用dilutionbuffer稀释至500nm和50nm。用dilutionbuffer稀释4mm用dmso溶解的小分子化合物20倍至200um。用含5％dmso的dilutionbuffer四倍梯度稀释。同时用dilutionbuffer稀释600um用dmso溶解的pd-1/pd-l1抑制剂20倍至30um，用含5％dmso的dilutionbuffer四倍梯度稀释。依次向384孔中加入2ul稀释好的待测化合物、4ul稀释好的pd-1和4ul稀释好的pdl-1。充分混匀，室温放置15min。用detectionbuffer稀释anti-tag1-eu3+(1:25)和anti-tag2-xl665(1:100)。然后等体积混合稀释好的检测试剂，每反应孔加入10μl抗体混合液。封膜室温孵育2h。用envision(perkinelmer)仪器检测荧光信号(320nm刺激,665nm，615nm发射)。每个化合物检测8-12个浓度。
化合物抑制pd-1/pd-l1相互作用的活性结果见表1。
表1本发明化合物抑制pd-1/pd-l1相互作用的活性范围或ic50值。范围如下：a＝1nm-100nm；b＝100.01nm-1μm；c＝1.01μm-20μm。
htrf测试结果表明，实施例化合物在分子水平可显著抑制pd-1/pd-l1相互作用。