本发明涉及动物药材多肽提取分离技术领域，具体而言，涉及一种蹄甲多肽及其制备工艺。
背景技术：
猪科动物猪(SusscrofadomesticaBrisson)的蹄甲简称猪蹄甲，又名猪悬蹄、猪悬蹄甲和猪合子等。猪蹄甲是一种传统中药材，其味咸性平无毒，入阳明经，具有一定的药用价值。在《神农本草经》中已有蹄甲入药的记载，明《本草纲目》中有“悬蹄甲”，“味咸平无毒，主治五痔伏热在腹中，肠痈内蚀。用赤木烧烟熏，辟一切恶疮气”的记载。
现代中药药理学研究表明，猪蹄甲主要含角蛋白、肽类、氨基酸类、酯类、糖类、甾体化合物及无机盐等化学成分，其中多肽类成分具有明显的止血药理活性。研究表明，猪蹄甲和穿山甲的提取物中所含成分相似且含量接近，这为猪蹄甲代替穿山甲药用提供了依据，因此猪蹄甲在中医药领域有广泛的应用。
现有技术中蹄甲多肽的制备方法存在诸多问题，例如提取效率低，例如CN101709076A中采用常压碱水解，其收率仅有20-30％；或者是整个制备过程耗时长，生产成本高，例如CN102191305B中采用碱水解和酶水解相结合，水解耗时14.5小时以上，同时，其收率也仅有28％左右。
技术实现要素：
本发明提供了一种蹄甲多肽的制备工艺，旨在改善蹄甲多肽的制备过程中收率低的问题。
本发明还提供了一种蹄甲多肽，其总氮含量高，具有良好的应用前景。
本发明是这样实现的：
本发明提供一种蹄甲多肽的制备工艺，包括以下步骤：将蹄甲与碱性物质混合后在高压条件下进行水解，而后再利用酸性物质调节pH。
本发明的有益效果是：本申请通过该方案使得蹄甲多肽的收率得到大幅度提升，收率基本达到80％以上，同时，制备得到的蹄甲多肽中总氮的含量也较高，在13％以上。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本发明实施例提供一种蹄甲多肽及其制备工艺具体说明。
本发明实施例提供一种蹄甲多肽的制备工艺，包括以下步骤：
本发明实施例采用的蹄甲为猪蹄甲，但是也可采用其他动物的蹄甲制备该蹄甲多肽。
首先，对蹄甲进行预处理，预处理包括人工筛选、浸泡、干燥和粉碎。
人工筛选，去除杂物，并筛选出结构完整、无霉变等蹄甲，保证蹄甲多肽的质量。
浸泡包括利用质量百分数为3-6％的氯化钠溶液浸泡30-60分钟，而后利用清水洗净。利用3-6％的氯化钠溶液浸泡能够通过渗透压的作用，更好其去除蹄甲内的杂质，保证提取得到的蹄甲多肽的质量。
干燥包括将洗净后的蹄甲沥干在80-100℃的温度下干燥1-3小时，干燥更有利于后续蹄甲的提取，继而有利于提升蹄甲多肽的收率。
粉碎包括将干燥后的蹄甲粉碎为10-20目的粗颗粒。粉碎不仅仅能够增加蹄甲提取时的表面积，也更有利于水解物质与蹄甲内的活性成分接触，进一步提升了蹄甲多肽的收率。
而后进行水解，具体地，将蹄甲与碱性物质混合后在高压条件下进行水解。高压条件下，碱性物质能够更好地与蹄甲作用，继而保证蹄甲多肽有收率。
具体地，高压条件下进行水解的条件为：表压为0.05-0.2MPa，优选地，表压为0.1-0.15MPa，提取时间为1-6小时，采用上述条件能够保证碱性物质与蹄甲的水解效果，继而保证蹄甲多肽的提取收率，该压力为0.05-0.2MPa是指施加的压力高于大气压0.05-0.2MPa，也就是表压为0.05-0.2MPa。
进一步地，施加压力的过程中同时进行灭菌。提取过程中灭菌能够去除细菌，更有利于碱性物质与蹄甲作用，保证了蹄甲多肽的收率。
进一步地，碱性物质的添加量为所述蹄甲的质量的1-10％，控制碱性物质的添加量，能够有利于碱性物质对蹄甲内的物质进行水解，继而保证蹄甲的收率以及制备得到的蹄甲多肽中氮的含量。
进一步地，碱性物质为固态的强碱物质，更优选地，为氢氧化物，最优选地为氢氧化钠和氢氧化钾中的至少一种，采用上述碱性物质作为水解反应物，能够更有利于提升蹄甲多肽的收率。
进一步地，碱性物质为碱性溶液；
更优选地，碱性溶液以重量份计，每1-10份固态的强碱物质对应300-1000份溶剂。
需要说明的是，该碱性溶液可以是将固态的强碱物质直接与水混合得到的溶液，也可以是先将水和蹄甲混合后再与固态的强碱物质混合而成的碱性溶液。
采用该比例范围的碱性物质，能够进一步保证水解效果，继而保证蹄甲多肽的提取效果。
接着，水解完成后再利用酸性物质调节pH。
调节pH是将反应液调至中性或弱碱性，优选地，将pH调至7.0-8.5。
且酸性物质为浓度为0.5-2mol/L的酸溶液，
优选地，酸性物质为硫酸、盐酸和醋酸中的任意一种。调节pH至上述范围，能够进一步保证蹄甲多肽的收率。
接着，调节pH后进行静置和过滤；
优选地，静置的时间为1-3h，过滤为筛分过滤。
静置是为了让调节pH后形成的微粒能够进一步聚集，形成大颗粒，继而便于去除这些大颗粒杂质，保证制备得到的蹄甲多肽的纯度。
过滤后对蹄甲多肽水解液进行除盐；调节pH后溶液中有盐类物质的存在，去除盐类物质，更有利于提升蹄甲多肽的质量。
优选地，除盐包括反渗透除盐；
更优选地，反渗透除盐的条件为：压力为10-25bar，温度为40-55℃，采用的反渗透膜为聚酰胺膜或醋酸纤维素膜；采用上述条件，能够保证除盐效果。
接着，除盐后对所述蹄甲多肽进行浓缩，浓缩包括进行真空浓缩；
更优选地，真空浓缩的条件为-0.08至-0.06MPa，温度为75-85℃；
更优选地，浓缩至相对密度为1.05-1.2。
浓缩更有利于蹄甲多肽的效果，保证其纯度。
进一步地，浓缩后进行干燥；
优选地，干燥包括在70-80℃的条件下进行真空干燥，干燥时间为4-8小时；
更优选地，干燥后水分控制在10％以下。干燥后更有利于蹄甲多肽的存放，保证其不易变质。
干燥后进行粉碎并过80-100目筛，获得成品。
上述蹄甲多肽的制备工艺收率为80-85％，远远大于现有技术的20-30％的收率。
本实施例还提供一种蹄甲多肽，其通过上述蹄甲多肽的制备工艺制备得到，所述蹄甲多肽中总氮含量为14.7-15.5％。
以下结合具体实施例对本发明提供的一种蹄甲多肽及其制备工艺进行具体说明。
实施例1
称取20kg猪蹄甲干燥品，人工去除杂物，用100L 5％氯化钠溶液浸泡清洗60min，并用纯化水冲洗干净，沥干后80℃干燥3小时后粉碎成10-20目粗粒。再次称重蹄甲粗粒为19.3kg，置于不锈钢桶中，加入5倍纯化水，再加入193g氢氧化钠，搅拌均匀后放置在高压灭菌柜中高压处理2小时，控制压力为0.1MPa。高压处理结束并放冷后用2mol/L至7.5，静置1小时用200目筛浆机筛分过滤除渣，收集滤液92L。打开多级膜过滤设备，安装聚酰胺反渗透膜，打开生水加热器，控制水温45℃，启动高压泵，控制进出口压差在0.01-0.03MPa。脱盐结束后将溶液转移至真空浓缩罐中，真空度控制在-0.08～-0.06MPa，温度控制在80℃，浓缩至相对密度约为1.2。收集浓缩浸膏，80℃条件下进行真空干燥，干燥6h，水分含量为6.8％，用万能粉碎机粉碎(80目筛网)，获成品。经测定和计算，蹄甲多肽成品氮含量为14.2％，总收率为80.2％。
实施例2
称取20kg猪蹄甲干燥品，人工去除杂物，用100L 5％氯化钠溶液浸泡清洗30min，并用纯化水冲洗干净，沥干后100℃干燥1小时后粉碎成10-20目粗粒。再次称重蹄甲粗粒为19.5kg，置于不锈钢桶中，加入10倍纯化水，再加入900g氢氧化钠，搅拌均匀后放置在高压灭菌柜中高压处理2小时，控制压力为0.1MPa。高压处理结束并放冷后用2mol/L盐酸调节pH至8.5，静置1小时用200目筛浆机过滤除渣，收集滤液210L。打开多级膜过滤设备，安装聚酰胺反渗透膜，打开生水加热器，控制水温50℃，启动高压泵，控制进出口压差在0.01-0.03MPa。脱盐结束后将溶液转移至真空浓缩罐中，真空度控制在-0.08～-0.06MPa，温度控制在80℃，浓缩至相对密度约为1.15。收集浓缩浸膏，80℃条件下进行真空干燥，干燥8h，水分含量为5.7％，用万能粉碎机粉碎(80目筛网)，获成品。经测定和计算，蹄甲多肽成品氮含量为15.4％，总收率为84.6％。
实施例3
称取20kg猪蹄甲干燥品，人工去除杂物，用100L 5％氯化钠溶液浸泡清洗30min，并用纯化水冲洗干净，沥干后80℃干燥3小时后粉碎成10-20目粗粒。再次称重蹄甲粗粒为19.7kg，置于不锈钢桶中，加入8倍纯化水，再加入1.97g氢氧化钠，搅拌均匀后放置在高压灭菌柜中高压处理2小时，控制压力为0.1MPa。高压处理结束并放冷后用2mol/L盐酸调节pH至8.0，静置1小时用200目筛浆机过滤除渣，收集滤液165L。打开多级膜过滤设备，安装聚酰胺反渗透膜，打开生水加热器，控制水温50℃，启动高压泵，控制进出口压差在0.01-0.03MPa。脱盐结束后将溶液转移至真空浓缩罐中，真空度控制在-0.08～-0.06MPa，温度控制在80℃，浓缩至相对密度约为1.1。收集浓缩浸膏，80℃条件下进行真空干燥，干燥4h，水分含量为8.5％，用万能粉碎机粉碎(80目筛网)，获成品。经测定和计算，蹄甲多肽成品氮含量为13.6％，总收率为88.2％。
实施例4
称取20kg猪蹄甲干燥品，人工去除杂物，用120L 5％氯化钠溶液浸泡清洗30min，并用纯化水冲洗干净，沥干后100℃干燥1小时后粉碎成10-20目粗粒。再次称重蹄甲粗粒为19.7kg，置于不锈钢桶中，加入6倍纯化水，再加入900g氢氧化钠，搅拌均匀后放置在高压灭菌柜中高压处理4小时，控制压力为0.1MPa。高压处理结束并放冷后用2mol/L盐酸调节pH至8.5，静置1小时用200目筛浆机过滤除渣，收集滤液185L。打开多级膜过滤设备，安装聚酰胺反渗透膜，打开生水加热器，控制水温50℃，启动高压泵，控制进出口压差在0.01-0.03MPa。脱盐结束后将溶液转移至真空浓缩罐中，真空度控制在-0.08～-0.06MPa，温度控制在80℃，浓缩至相对密度约为1.2。收集浓缩浸膏，80℃条件下进行真空干燥，干燥8h，水分含量为5.3％，用万能粉碎机粉碎(80目筛网)，获成品。经测定和计算，蹄甲多肽成品氮含量为15.5％，总收率为85.0％。
实施例5
称取20kg猪蹄甲干燥品，人工去除杂物，用100L 5％氯化钠溶液浸泡清洗60min，并用纯化水冲洗干净，沥干后80℃干燥3小时后粉碎成10-20目粗粒。再次称重蹄甲粗粒为19.4kg，置于不锈钢桶中，加入3倍纯化水，再加入400g氢氧化钠，搅拌均匀后放置在高压灭菌柜中高压处理3小时，控制压力为0.1MPa。高压处理结束并放冷后用2mol/L盐酸调节pH至7.0，静置1小时用200目筛浆机过滤除渣，收集滤液72L。打开多级膜过滤设备，安装聚酰胺反渗透膜，打开生水加热器，控制水温45℃，启动高压泵，控制进出口压差在0.01-0.03MPa。脱盐结束后将溶液转移至真空浓缩罐中，真空度控制在-0.08～-0.06MPa，温度控制在80℃，浓缩至相对密度约为1.2。收集浓缩浸膏，80℃条件下进行真空干燥，干燥4h，水分含量为9.2％，用万能粉碎机粉碎(80目筛网)，获成品。经测定和计算，蹄甲多肽成品氮含量为15.1％，总收率为82.5％。
实施例6
按照实施例5提供的制备方法制备蹄甲多肽，区别在于具体的操作条件发生变化。
浸泡采用的为3％的氯化钠溶液，浸泡时间为45分钟，干燥的温度为90℃，干燥时间为2小时，高压的压力为0.2MPa，高压处理时间为1小时。调节pH所用的酸性物质为0.5mol/L的醋酸，静置时间为2小时，反渗透除盐的温度为40℃，浓缩时温度为75℃，浓缩至相对密度为1.05的浸膏，干燥的温度为70℃，干燥时间为4小时，经测定和计算，蹄甲多肽成品氮含量为14.9％，总收率为85％。
对比例1：
本发明涉及的蹄甲多肽制备工艺是在高压下进行，如在常压(表压为0)下进行热处理，蹄甲多肽的提取收率和含氮量则会明显降低。具体过程如下：
称取500g猪蹄甲干燥品，人工去除杂物，用2.5L 3％氯化钠溶液浸泡清洗60min，并用纯化水冲洗干净，沥干后80℃干燥3小时后粉碎成10-20目粗粒。置于不锈钢容器中，加入8倍纯化水，再加入25g氢氧化钠，搅拌均匀后放置在电炉上加热煮沸12小时，蒸煮过程中补充纯化水。结束并放冷后用1mol/L盐酸调节pH至7.0，静置1小时用200目中药标准筛过滤除渣，收集滤液2.8L。装填离子交换树脂进行脱盐处理，收率流出液，进行减压浓缩，真空度为-0.09MPa，温度为70℃，浓缩至相对密度约为1.2。收集浓缩浸膏，80℃条件下进行真空干燥，干燥2h，水分含量为8.6％，用中药粉碎机粉碎，过80目标准筛，获成品。经测定和计算，蹄甲多肽成品氮含量为12.3％，总收率为65.7％。
综上所述，本申请通过该方案使得蹄甲多肽的收率得到大幅度提升，收率基本达到80％以上，同时，制备得到的蹄甲多肽中总氮的含量也较高，在13％以上。
以上所述仅为本发明的优选实施方式而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。