复性后具有舍雷肽酶活性的多肽包涵体及其复性生产舍雷肽酶的方法与流程

文档序号:20116017发布日期:2020-03-17 19:54阅读:来源:国知局

技术特征:

1.复性后具有舍雷肽酶活性的多肽包涵体,其特征在于,编码多肽包涵体的基因序列如seqidno:3所示,或者编码多肽包涵体的基因序列为seqidno:3所示的序列经消除、添加、取代一个或多个碱基后能够编码复性后具有舍雷肽酶活性的多肽包涵体的基因序列。

2.如权利要求1所述的复性后具有舍雷肽酶活性的多肽包涵体,其特征在于,所述多肽包涵体的氨基酸序列如seqidno:4所示,或者氨基酸序列为seqidno:4所示序列经消除、添加、取代一个或多个氨基酸后能够形成复性后具有舍雷肽酶活性的多肽包涵体的衍生氨基酸序列。

3.如权利要求1所述的复性后具有舍雷肽酶活性的多肽包涵体,其特征在于,合成如seqidno:3所示基因序列的正向引物为spce28-f,序列如seqidno:1所示,反向引物为spce22-r,序列如seqidno:2所示。

4.如权利要求1所述的复性后具有舍雷肽酶活性的多肽包涵体,其特征在于,所述编码多肽包涵体的基因序列的模板序列来源于沙雷氏菌。

5.包含如权利要求1所述编码多肽包涵体的基因序列的重组载体。

6.权利要求1至4任一项所述的复性后具有舍雷肽酶活性的多肽包涵体的制备方法,其特征在于,采用来源于沙雷氏菌的舍雷肽酶基因,构建包含所述舍雷肽酶基因的重组载体,将所述重组载体转化至宿主细胞即大肠杆菌bl21进行表达,然后筛选出高效表达转化子,挑阳性克隆单菌落接种于lb培养基上摇床培养,至达到设定要求菌浓时,经乳糖、异丙基硫代半乳糖苷或其他乳糖类似物诱导宿主细胞产生复性后具有舍雷肽酶活性的多肽包涵体。

7.如权利要求6所述的复性后具有舍雷肽酶活性的多肽包涵体的制备方法,其特征在于,摇床培养的条件为28℃-40℃,150-250r/min,培养至菌浓达到要求时,采用乳糖、异丙基硫代半乳糖苷或其他乳糖类似物诱导表达。

8.如权利要求6所述的复性后具有舍雷肽酶活性的多肽包涵体的制备方法,其特征在于,构建所述重组载体的载体为pet表达载体系列。

9.如权利要求6至8任一项所述的制备方法得到的复性后具有舍雷肽酶活性的多肽包涵体的复性方法,其特征在于,收集产生复性后具有舍雷肽酶活性的多肽包涵体的宿主细胞然后破碎,通过镍柱纯化多肽包涵体;纯化后的多肽包涵体通过氯化钠复性。

10.如权利要求9所述的复性方法,其特征在于,纯化后的多肽包涵体通过氯化钠复性过程为将镍柱纯化后含有多肽包涵体的洗脱液与复性液混合,冰上复性过夜;其中洗脱液与复性液的体积比为1:8~10,复性液为浓度100~500mm的氯化钠溶液。

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