硝基苯醚类化合物、其制备方法和药物组合物与用途与流程

本发明属于生物医药领域，具体涉及一类作为pd-1/pd-l1蛋白-蛋白相互作用抑制剂的硝基苯醚类化合物或其立体异构体、药学上可以接受的盐、结晶、溶剂化物或前药、它们的制备方法、含有这些化合物的药物组合物、以及这些化合物或组合物在治疗与pd-1/pd-l1介导的免疫抑制有关的疾病如癌症的用途。

背景技术：

免疫逃逸是恶性肿瘤的一种基本特征。在正常生理条件下，人体的免疫系统能够识别出异己分子并及时进行清除。但对于肿瘤患者而言，由于机体免疫能力低下和肿瘤细胞特殊的生物学特征，使得肿瘤细胞可以通过各种不同的机制逃避免疫系统的识别和杀灭，最终得以在体内生存与发展。肿瘤免疫逃逸是一个复杂的病理过程，其中由免疫检查点介导的逃逸机制深受人们关注。

免疫检查点是人体内免疫系统的调节器，由一系列共刺激分子和共抑制分子组成，在机体免疫系统中起重要的调控作用。免疫检查点的共刺激分子主要包括cd27、cd40、ox40、gitr、cd137、ox40和icos等，而共抑制分子则主要为ctla-4、pd-1、pd-l1、pd-l2、tim-3、vista和ido等。其中，共刺激分子可以增强机体的免疫应答，从而有利于免疫细胞清除异己分子，而共抑制分子则对免疫应答起着负性调节作用，从而维护机体的免疫稳态，避免过度免疫而造成宿主正常组织的损伤(natrevimmunol,2013,13(4):227-242)。然而，肿瘤细胞却能够利用免疫检查点而实现免疫逃避。其中，常见的逃避机制便是肿瘤细胞通过诱导自身、抗原呈递细胞(apc)和t淋巴细胞等表面过度表达共抑制分子，从而抑制t淋巴细胞的激活。其中，程序性死亡受体1(pd-1)及其配体pd-l1/2作为免疫检查点中重要的共抑制分子受到广泛关注，目前pd-1/pd-l1作为肿瘤免疫治疗的靶点已得到充分的确证。

pd-1除了表达在成熟的t细胞外，还可以低水平表达在胸腺内的cd4^-cd8^-t细胞、b细胞、树突状细胞(dc)和自然杀伤(nk)细胞。pd-1有两个配体，其中pd-l1主要表达在成熟的t细胞、b细胞以及一些非造血类型细胞，但pd-l1可以在炎症因子(如ifn-γ、tnf-α和vegf)的诱导下于多种细胞上表达。pd-l2表达范围相对较窄，主要是在巨噬细胞和dc细胞中表达。当pd-1与其配体结合后会引起胞质区itsm结构域中的酪氨酸发生磷酸化，从而通过招募tcr附近的shp-2磷酸酶，抑制tcr近端激酶的活化，导致tcr-cd3分子和lck介导的zap-70磷酸化水平减弱，进而激活其下游信号通路(febslett,2004,574(1-3):37-41)。pd-1/pd-l对免疫的负调控主要是通过抑制pi3k-akt和ras信号通路，阻断对t细胞激活、增殖、功能和生存等具有重要作用的转录因子的活化，如激活蛋白-1(ap-1)、活化t细胞的核因子(nfat)和nf-κb(natrevimmunol,2018,18(3):153-167)。另外，还可以通过上调转录因子batf的表达来抑制t细胞功能(natmed,2010,16(10):1147-1151)。

在正常生理条件下，pd-1/pd-l信号通路可以诱导并维持外周组织在免疫反应时的耐受性，以防止组织发生过度免疫应答。当机体处于病理状态下，pd-1/pd-l信号通路过度激活会抑制免疫刺激因子如ifn-γ、tnf-α和il-2的分泌与存活蛋白的表达。大量研究表明，pd-1/pd-l信号通路的异常与病毒感染、糖尿病、神经变性疾病、器官移植排斥和自身免疫性疾病等密切相关(cellimmunol,2014,290(1):169-177；jexpmed,2003,198(1):63-69；jviralhepat,2010,17(7):453-458；nature,2006,443(7109):350-354)。

此外，众多研究表明，pd-1/pd-l信号通路的异常与人类多种肿瘤的发生、发展和预后不良存在密切的关系(nengljmed,2016,375(18):1767-1778)。在肿瘤微环境中，当pd-1/pd-l信号通路被过度激活后，肿瘤细胞可以通过抗凋亡信号以及抑制抗原特异性t淋巴细胞的活性而获得生存(blood,2008,111(7):3635-3643)。另外，使用pd-1或pd-l1抗体阻断pd-1/pd-l信号通路则能够抑制肿瘤细胞的生长。其主要是通过逆转对t淋巴细胞信号转导的影响，重新激活t淋巴细胞，同时促进效应t淋巴细胞和记忆t淋巴细胞的生成以及抑制调节性t淋巴细胞的分化，最终增强肿瘤微环境内t淋巴细胞的免疫杀伤能力，从而达到治疗肿瘤的目的(nengljmed,2015,372(4):320-330)。目前全球已经有keytruda、opdivo、imfinzi、tecentriq和bavencio等多款pd-1/pd-l1单克隆抗体药物上市，广泛应用于临床治疗恶性黑色素瘤、非小细胞肺癌、胃癌、肝癌、肾癌、膀胱癌等多种实体肿瘤和血液癌症，临床治疗效果显著，并且目前适应症还在不断地增加。与此同时，pd-1/pd-l1单抗药物与其它药物联用治疗多种恶性肿瘤的临床试验也在积极的开展中。

然而，pd-1/pd-l1单抗药物也存在明显的不足，如易导致t细胞过度激活，引发免疫相关副作用，加上不能口服给药，依从性差，且制备和纯化难度大，造成价格昂贵等。因此研发pd-1/pd-l1小分子抑制剂具有重要应用价值。

技术实现要素：

发明目的：针对现有技术存在的问题，本发明提供一种新型的硝基苯醚类化合物。本发明的硝基苯醚类化合物对pd-1/pd-l1蛋白-蛋白相互作用具有显著的抑制活性，因此可以应用在制备具有抑制pd-1/pd-l1活性的抑制剂，并且可以作为免疫检查点抑制剂应用于肿瘤的免疫治疗。

本发明还提供所述硝基苯醚类化合物的制备方法、药物组合物及其用途。

技术方案：为了实现上述目的，本发明提供一种具有通式(i)结构特征的硝基苯醚类化合物、其立体异构体、代谢产物、代谢前体、前药、溶剂化物、结晶或其药学上可接受的盐：

其中：

r¹选自：甲基或溴；

r²选自：氢、c1-c4烷氧基或-o(ch2)nar；其中，n选自0-4的整数；ar选自芳基或芳杂环；所述的芳杂环可任选地包含一个或多个选自o、s或n杂原子；所述的芳基或芳杂环可任选地被一个或多个w基团取代；w选自：氢、卤素、氰基、羟基、巯基、羧基、c1-c6烷基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷氨基或c1-c6卤代烷基；

r³和r⁴各自独立地选自：氢、c1-c8烷基、c1-c8烷氧基、c3-c8环烷基或r³和r⁴跟它们连接的氮原子一起形成5-7元杂环；所述的烷基、烷氧基或环烷基可任选地被一个或多个x基团取代；x选自：氢、卤素、羟基、巯基、甲巯基、羧基、氨基、呋喃基、二甲胺基、羟基取代的异丙胺基、二乙胺基、四氢吡咯基、吗啉基、n-甲基哌嗪基或-nhcor⁵；其中r⁵选自c1-c8烷基；所述的杂环可被羧基或-conr⁶r⁷取代；

r⁶和r⁷各自独立地选自：氢、c1-c8烷基、c1-c8烷氧基、c3-c8环烷基或r⁶和r⁷跟它们连接的氮原子一起形成5-7元杂环；所述的烷基、烷氧基、环烷基或杂环可任选地被一个或多个y基团取代；y选自：氢、卤素、羟基、巯基、羧基、氨基或乙酰胺基；

其中所述的烷基代表直链烷基、支链烷基或环状烷基；

其中所述的烷氧基代表直链烷氧基、支链烷氧基或环状烷氧基；

其中所述的烷氨基代表直链烷氨基、支链烷氨基或环状烷氨基；

其中所述的芳基代表苯基、萘基、苊基或四氢萘基；

其中所述的芳杂环代表吡咯基、吡唑基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基或哒嗪基的单环杂环；或喹啉基、喹喔啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、2,3-二氢苯并[1,4]二氧杂环己烯基、或苯并[1,3]二氧杂环戊烯基的双环杂环；

其中所述的卤代烷基为直链或支链饱和烃基，或为环状饱和烃基，或为连接直链或支链饱和烃基的环状饱和烃基；其中一个或多个氢原子被一个或多个卤原子取代。

进一步地，具有通式(i)所示的化合物、其立体异构体、代谢产物、代谢前体、前药、溶剂化物、结晶或其药学上可接受的盐，其中：

r¹选自：甲基或溴；

r²选自：氢或-och2ar；其中，ar选自芳基或芳杂环；所述的芳杂环可任选地包含一个或多个选自o、s或n杂原子；所述的芳基或芳杂环可任选地被一个或多个w基团取代；w选自：氢、卤素、氰基、羟基、巯基、羧基、c1-c4烷基或c1-c4烷氧基；

r³和r⁴各自独立地选自：氢、c1-c8烷基、c1-c8烷氧基、c3-c8环烷基或r³和r⁴跟它们连接的氮原子一起形成5-7元杂环；所述的烷基、烷氧基或环烷基可任选地被一个或多个x基团取代；x选自：氢、卤素、羟基、巯基、甲巯基、羧基、氨基、呋喃基、二甲胺基、羟基取代的异丙胺基、二乙胺基、四氢吡咯基、吗啉基、n-甲基哌嗪基或-nhcor⁵；其中r⁵选自c1-c8烷基；所述的杂环可被羧基或-conr⁶r⁷取代；

其中r⁶和r⁷各自独立地选自：氢、c1-c6烷基、c1-c6烷氧基、c3-c8环烷基或r⁶和r⁷跟它们连接的氮原子一起形成5-7元杂环；其中所述的烷基、烷氧基、环烷基或杂环可任选地被一个或多个y基团取代；其中的y选自：氢、卤素、羟基、巯基、羧基、氨基或乙酰胺基；

更进一步地，具有通式(i)所示的化合物、其立体异构体、代谢产物、代谢前体、前药、溶剂化物、结晶或其药学上可接受的盐，其中：

r¹选自：甲基或溴；

r²选自：氢或-och2ar；其中，ar选自芳基或芳杂环；所述的芳杂环可任选地包含一个或多个n原子；所述的芳基或芳杂环可任选地被一个或多个w基团取代；w选自：氢或氰基；

r³和r⁴各自独立地选自：氢、c1-c8烷基、c1-c8烷氧基、c3-c8环烷基或r³和r⁴跟它们连接的氮原子一起形成5-6元杂环；所述的烷基或烷氧基可任选地被一个或多个x基团取代；x选自：氢、卤素、羟基、羧基、甲巯基、氨基、呋喃基、二甲胺基、羟基取代的异丙胺基或-nhcor⁵；其中r⁵选自c1-c4烷基；所述的杂环可被羧基或-conr⁶r⁷取代；

其中r⁶和r⁷各自独立地选自：氢、c1-c6烷基、c1-c6烷氧基或r⁶和r⁷跟它们连接的氮原子一起形成5-6元杂环；其中所述的烷基、烷氧基或杂环可任选地被一个或多个y基团取代；其中的y选自：氢、卤素、羟基、羧基、氨基或乙酰胺基；

更优选地，具有通式(i)所示的化合物、其立体异构体、代谢产物、代谢前体、前药、溶剂化物、结晶或其药学上可接受的盐，其中：

r¹选自：甲基或溴；

r²选自：氢或-och2ar；其中，ar选自芳基或5-6元芳杂环；所述的芳杂环可任选地包含一个或多个n原子；所述的芳基或芳杂环可任选地被一个或多个w基团取代；w选自：氢或氰基；

r³和r⁴各自独立地选自：氢、c1-c8烷基或r³和r⁴跟它们连接的氮原子一起形成5-6元杂环；所述的烷基可任选地被一个或多个x基团取代；x选自：氢、卤素、羟基、羧基、甲基巯基、氨基、呋喃基、二甲胺基、羟基取代的二甲胺基或-nhcor⁵；其中r⁵选自c1-c4烷基；所述的杂环可被羧基或-conr⁶r⁷取代；

其中r⁶和r⁷各自独立地选自：氢、c1-c6烷基或r⁶和r⁷跟它们连接的氮原子一起形成5-6元杂环；其中所述的烷基或杂环可任选地被一个或多个y基团取代；其中的y选自：氢、卤素、羟基、羧基、氨基或乙酰胺基；

具体来说，通式(i)所示的化合物、其立体异构体、代谢产物、代谢前体、前药、溶剂化物、结晶或其药学上可接受的盐，所述化合物优选自：

本发明的另一目的在于提供通式(i)所示化合物的制备方法，包括以下步骤：

1)以a为原料，与取代苯甲醛b或c分别得到中间体i和ii；

2)i与胺类化合物hnr³r⁴经还原胺化制得通式(i)化合物，或再进一步经缩合反应和水解反应中的一种或几种组合的方法制得通式(i)化合物；

ii与溴代物经醚化反应制得中间体iii，iii与胺类化合物hnr³r⁴经还原胺化制得通式(i)化合物，或再进一步经缩合反应和水解反应中的一种或几种组合的方法制得通式(i)化合物；

其合成路线如下：

其中，r¹、r²、r³和r⁴的定义如权利要求1所述。

其中，所述“缩合反应和水解反应中的一种或几种组合的方法”，包括仅缩合反应或水解反应；或者先水解反应，再缩合反应；或者先水解反应，再缩合反应，再水解反应，等等。

所述通式(i)化合物的药学上可接受的盐可通过一般的化学方法合成。

一般情况下，盐的制备可以通过游离碱或酸与等化学当量或过量酸(无机酸或有机酸)或碱(无机碱或有机碱)在合适的溶剂或溶剂组合物中反应制得。

本发明还提供了一种药物组合物，其主要由在治疗上有效量的活性组分和药学上可接受的辅料组成；所述的活性组分包括通式(i)化合物或其药学上可接受的盐的一种或多种。所述药物组合物中，所述的辅料包括药学上可接受的载体、稀释剂和/或赋形剂。

根据治疗目的可将药物组合物制成各种类型的给药单位剂型，如片剂、丸剂、粉剂、液体、悬浮液、乳液、颗粒剂、胶囊、栓剂和针剂(溶液和悬浮液)等，优选片剂、胶囊、液体、悬浮液和针剂(溶液和悬浮液)。

为了使片剂、丸剂或栓剂形式的药物组合物成形，可使用本领域任何已知并广泛使用的赋形剂。

为了制备针剂形式的药物组合物，可将溶液或悬浮液消毒后(最好加入适量的氯化钠，葡萄糖或甘油)，制成与血液等渗压的针剂。在制备针剂时，也可以使用本领域内任何常用的载体。例如：水、乙醇、丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、聚乙氧基化的异硬脂醇和聚乙烯脱水山梨醇的脂肪酸酯等。此外，还可以加入通常溶解剂和缓冲剂等。

本发明所述的组合物在药物组合物中的含量无特殊限制，可在很宽的范围内进行选择，通常可为质量百分比的5～95％，优先为质量百分比的30～85％。

本发明所述的药物组合物的给药方法没有特殊限制。可根据患者年龄、性别和其它条件及症状，选择各种剂型的制剂给药。

本发明还提供了所述通式(i)化合物、其药学上可接受的盐或所述的药物组合物在制备pd-1/pd-l1抑制剂中的应用。所述的pd-1/pd-l1抑制剂用于治疗pd-1/pd-l1介导的免疫抑制的相关疾病患者，所述的相关疾病包括癌症。

本发明还提供了所述通式(i)化合物、其药学上可接受的盐或所述药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗患者的癌症。

所述的癌症包括但不限于：恶性黑色瘤、肺癌、乳腺癌、胃癌、结肠癌、膀胱癌、胰腺癌、淋巴癌、白血病、前列腺癌、睾丸癌、肾癌、脑癌、头颈癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌、间皮癌、甲状腺瘤、肝癌和食管癌中的一种或多种。

本发明还提供了所述通式(i)化合物、其药学上可接受的盐或所述药物组合物可以与一种或多种其他种类的治疗剂和/或治疗方法联合用于治疗由pd-l/pd-l1介导的相关疾病。

所述其他种类的治疗剂和/或治疗方法包括但不限于：化疗剂、靶向抗肿瘤药物、免疫检查点抑制剂、免疫检查点激动剂、抗肿瘤疫苗、抗病毒剂、抗病毒疫苗、细胞因子疗法、过继性细胞免疫治疗或放射治疗。

所述的化疗剂包括但不限于：烷化剂、微管蛋白抑制剂、拓扑酶抑制剂、铂类药物、抗代谢类药物或激素类抗肿瘤药物。

所述的靶向抗肿瘤药物包括但不限于：蛋白激酶抑制剂、蛋白酶体抑制剂、异柠檬酸脱氢酶抑制剂、基于表观遗传学的抗肿瘤药物或细胞周期信号通路抑制剂。

所述的免疫检查点抑制剂包括但不限于：ctla-4抑制剂、tim-3抑制剂、vista抑制剂、lag3抑制剂、tigit抑制剂、a2ar抑制剂或vtcn1抑制剂。

所述的免疫检查点激动剂包括但不限于：sting激动剂、4-1bb激动剂、ox40激动剂、rorγ激动剂或icos激动剂。

有益效果：本发明的硝基苯醚类化合物对pd-1/pd-l1相互作用具有显著的抑制活性，能够有效阻断pd-1/pd-l1介导的免疫抑制作用。体内药效学评价结果表明，本发明的化合物能够显著抑制小鼠移植瘤的生长，并且显著促进肿瘤组织中淋巴细胞的浸润，提高inf-γ的水平，降低pcna蛋白的表达，而对免疫系统缺陷的小鼠移植瘤的则无影响，说明本发明的化合物能够通过激活宿主免疫应答而起抗肿瘤作用。

附图说明

图1为本发明化合物呈剂量依赖性逆转pd-1/pd-l1抑制pbmc分泌inf-γ的作用。

图2为本发明化合物在不同浓度下对lewis肺癌细胞活力的影响。

图3为本发明化合物呈剂量依赖性抑制lewis肺癌小鼠移植瘤的生长。

图4为本发明化合物对小鼠移植瘤t淋巴细胞浸润的影响，其中：：a)cd45⁺细胞；b)cd45⁺cd3⁺细胞；c)cd4⁺cd45⁺cd3⁺细胞；d)cd8⁺cd45⁺cd3⁺细胞。

具体实施方式

为了进一步阐明本发明，下面给出一系列实施例，这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明具体描述，不应当理解为对本发明的限制。

实施例1

(3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)-l-丝氨酸(1)的合成

2-甲基-3-溴苯甲酸乙酯(1a)的合成

将2-甲基-3-溴苯甲酸(10.0g,46.5mmol)溶于乙醇(50ml)中，冰浴下缓慢滴入20mlsocl2，滴毕后放置油浴中加热70℃下搅拌2小时。冷却，加入200ml水，用乙酸乙酯萃取，合并有机层，饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，抽滤，减压浓缩，得1a，直接投入下一步反应。

[1,1'-联苯]-2-甲基-3-羧酸乙酯(1b)的合成

将1a(4.0g,16.5mmol)、苯硼酸(3.0g,24.7mmol)和醋酸钾(4.8g,49.4mmol)加入30mldmf和8ml水中，加入pd(dppf)cl2(1.2g,1.7mmol)，氮气保护下于90℃反应12h，抽滤，乙酸乙酯萃取，无水硫酸镁干燥，柱层析纯化[石油醚:乙酸乙酯＝20:1(v:v)]，得白色固体3.5g，收率88％。ms(ei)m/z239.1[m-h]^-；hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm)7.74-7.67(m,1h),7.50-7.38(m,3h),7.38-7.34(m,2h),7.33-7.28(m,2h),4.33-4.26(m,2h),2.29(s,3h),1.31(t,j＝7.5hz,3h).

([1,1'-联苯]-2-甲基-3-基)甲醇(1c)的合成

将1b(5.0g,20.8mmol)加入50ml无水thf中，冰浴冷却，缓慢加入氢化铝锂(1.6g,41.6mmol)，反应1h，撤去冰浴，室温反应4h，冰浴下缓慢滴加10ml水，析出大量固体，抽滤，浓缩滤液，得白色固体3.9g，收率94％。ms(ei)m/z197.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm)7.45-7.32(m,4h),7.3-7.15(m,3h),7.07(d,j＝7.5hz,1h),5.14(q,j＝4.8,4.1hz,1h),4.54(d,j＝5.3hz,2h),2.10(s,3h).

3-(溴甲基)-2-甲基-1,1'-联苯(1d)的合成

将1c(2.0g,10.1mmol)溶于30ml无水dcm中，冰浴冷却，缓慢滴入1ml三溴化磷(2.7g,10.1mmol)，反应1h，撤去冰浴，室温反应8h，旋除溶剂，冰浴冷却，缓慢滴入10ml水，乙酸乙酯萃取，依次使用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩，得白色固体2.3g，收率87％。ms(ei)m/z259.0[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm)7.45-7.39(m,3h),7.39-7.33(m,1h),7.29-7.25(m,2h),7.21(d,j＝7.6hz,1h),7.18-7.09(m,1h),4.77(s,2h),2.21(s,3h).

3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苯甲醛(1e)的合成

将3-硝基-4-羟基苯甲醛(1.2g,7.2mmol)和nahco3(1.5g,18.1mmol)加入20ml乙腈中，搅拌30min，加入1d(2.1g,7.9mmol)，回流反应12h，旋除溶剂，加15ml水，乙酸乙酯萃取，无水硫酸镁干燥，柱层析纯化[石油醚:乙酸乙酯＝4:1(v:v)]，得白色固体1.06g，收率65％。ms(ei)m/z346.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ10.15(d,j＝12.9hz,1h),8.34(s,1h),7.55(d,j＝7.1hz,1h),7.45(d,j＝6.9hz,2h),7.40(d,j＝6.6hz,1h),7.32(t,j＝7.0hz,3h),7.24(d,j＝7.5hz,1h),6.95(d,j＝7.8hz,1h),5.40(s,2h),2.21(s,3h).

(3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)-l-丝氨酸甲酯(1f)的合成

将1e(0.16g,0.46mmol)加入5mldmf中，依次加入l-丝氨酸甲酯盐酸盐(0.14g,0.92mmol)、tea(0.12g,1.38mmol)、冰醋酸(0.14g,2.3mmol)和氰基硼氢化钠(0.14g,2.3mmol)，室温反应24h，加10ml水，乙酸乙酯萃取，无水硫酸镁干燥，浓缩，直接投入下一步反应。

将1f溶于5ml甲醇，加入lioh(50mg)，反应5h，旋除溶剂，加入10ml饱和食盐水，冰浴冷却，滴加6m盐酸，将反应液ph值调至2，抽滤，干燥，得白色固体65mg，收率54％。ms(ei)m/z435.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ8.12(s,1h),7.81-7.76(m,1h),7.61(s,1h),7.47(s,3h),7.42-7.37(m,1h),7.31(s,3h),7.23(s,1h),5.39(s,2h),4.18(s,1h),3.85(d,j＝36.5hz,3h),2.21(s,3h).

实施例2

(3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)-l-苏氨酸(2)的合成

参照实施例1的方法，将实施例1中的l-丝氨酸甲酯盐酸盐替换成l-苏氨酸甲酯盐酸盐，制得白色固体，收率51％。ms(ei)m/z449.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ8.05(d,j＝2.0hz,1h),7.83-7.76(m,1h),7.62-7.54(m,1h),7.47(dd,j＝14.8,8.0hz,4h),7.39(d,j＝7.2hz,1h),7.32-7.26(m,3h),7.20(d,j＝7.8hz,1h),5.35(d,j＝7.9hz,2h),4.00-3.93(m,2h),3.16(d,j＝5.6hz,1h),2.20(s,3h),1.16(d,j＝6.3hz,2h).

实施例3

(3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)-l-脯氨酸(3)的合成

参照实施例1的方法，将实施例1中的l-丝氨酸甲酯盐酸盐替换成l-辅氨酸甲酯盐酸盐，制得白色固体，收率50％。ms(ei)m/z445.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ8.06(s,1h),7.82(d,j＝7.2hz,1h),7.62(d,j＝8.9hz,1h),7.48(dd,j＝16.4,7.8hz,3h),7.38(t,j＝7.2hz,1h),7.30(dd,j＝6.8,4.6hz,3h),7.22(d,j＝6.8hz,1h),5.37(s,2h),4.31(d,j＝13.3hz,1h),4.10(d,j＝12.7hz,1h),3.87(s,1h),3.27(s,2h),2.93(d,j＝8.6hz,1h),2.21(s,3h),1.93(s,2h),1.82(s,1h).

实施例4

(s)-1-(3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)哌啶-2-羧酸(4)的合成

参照实施例1的方法，将实施例1中的l-丝氨酸甲酯盐酸盐替换成l-哌啶甲酸甲酯盐酸盐，制得白色固体，收率50％。ms(ei)m/z459.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ7.84(d,j＝9.3hz,1h),7.68-7.56(m,2h),7.51-7.44(m,3h),7.40(d,j＝7.2hz,1h),7.31(d,j＝6.9hz,2h),7.24(d,j＝7.7hz,2h),5.35(s,2h),3.86(d,j＝14.6hz,2h),3.17(s,1h),2.39(s,1h),2.33(s,1h),2.20(s,3h),1.80(s,1h),1.75-1.67(m,1h),1.49(s,4h).

实施例5

2-甲基-1-((3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)氨基)丙烷-2-醇(5)的合成

参照实施例1的方法，将实施例1中的l-丝氨酸甲酯盐酸盐替换成1-氨基-2-甲基-2丙醇，制得白色固体，收率52％。ms(ei)m/z419.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ8.12(s,1h),7.93-7.81(m,1h),7.61(d,j＝8.7hz,1h),7.48(dd,j＝14.9,7.7hz,3h),7.40(d,j＝7.1hz,1h),7.30(dd,j＝6.9,5.0hz,3h),7.22(d,j＝6.3hz,1h),5.36(d,j＝9.3hz,2h),4.93(s,1h),4.05(s,2h),2.74-2.62(m,2h),2.21(s,3h),1.16(s,6h)。

实施例6

2-甲基-2-((3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)氨基)丙烷-1,3-二醇(6)的合成

参照实施例1的方法，将实施例1中的l-丝氨酸甲酯盐酸盐替换成1-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇，制得白色固体，收率55％。ms(ei)m/z435.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ8.09(s,1h),7.83(s,1h),7.62(s,1h),7.48(dd,j＝14.0,7.1hz,3h),7.40(d,j＝7.0hz,1h),7.31(d,j＝6.5hz,3h),7.22(d,j＝7.1hz,1h),5.39(s,2h),4.11(s,2h),3.53(s,4h),2.21(s,3h),1.18(s,3h).

实施例7

2,2'-((3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)氮杂二基)双(乙烷-1-醇)(7)的合成

参照实施例1的方法，将实施例1中的l-丝氨酸甲酯盐酸盐替换成乙二醇胺，制得白色固体，收率54％。ms(ei)m/z435.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ8.26(s,1h),7.99(s,1h),7.67(d,j＝7.9hz,1h),7.46(d,j＝7.4hz,3h),7.40(d,j＝7.2hz,1h),7.33-7.29(m,3h),7.23(d,j＝7.1hz,1h),5.37(d,j＝15.1hz,4h),4.50(d,j＝4.9hz,2h),3.82(s,4h),3.21(d,j＝21.2hz,4h),2.21(s,3h).

实施例8

2-((3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)氨基)丙烷-1,3-二醇(8)的合成

参照实施例1的方法，将实施例1中的l-丝氨酸甲酯盐酸盐替换成丝胺醇，制得白色固体，收率57％。ms(ei)m/z421.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ7.88(d,j＝1.9hz,1h),7.65(d,j＝8.6hz,1h),7.52-7.43(m,4h),7.39(d,j＝7.2hz,1h),7.30(dd,j＝10.9,4.3hz,3h),7.21(d,j＝6.5hz,1h),5.34(s,2h),4.50(s,1h),3.79(s,2h),3.52(dd,j＝11.4,5.0hz,2h),3.38(dd,j＝9.5,5.6hz,4h),2.83(t,j＝6.9hz,1h),2.20(s,3h).

实施例9

2-((3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)氨基)乙-1-醇(9)的合成

参照实施例1的方法，将实施例1中的l-丝氨酸甲酯盐酸盐替换成乙胺醇，制得白色固体，收率59％。ms(ei)m/z391.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ8.18(d,j＝1.9hz,1h),7.97-7.90(m,1h),7.64(d,j＝8.7hz,1h),7.51-7.44(m,3h),7.40(d,j＝7.2hz,1h),7.33-7.29(m,3h),7.22(d,j＝6.7hz,1h),5.39(s,2h),5.25(s,1h),4.16(s,2h),3.69(d,j＝5.2hz,2h),2.92(t,j＝5.2hz,2h),2.21(s,3h).

实施例10

n-(2-((3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)氨基)乙基)乙酰胺(10)的合成

参照实施例1的方法，将实施例1中的l-丝氨酸甲酯盐酸盐替换成n-乙酰基乙二胺，制得白色固体，收率53％。ms(ei)m/z432.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ8.36(t,j＝5.4hz,1h),8.19(d,j＝1.9hz,1h),7.95(dd,j＝8.8,1.8hz,1h),7.64(d,j＝8.8hz,1h),7.47(dd,j＝15.1,7.8hz,3h),7.37(t,j＝7.2hz,1h),7.29(dd,j＝7.1,3.7hz,3h),7.21(d,j＝7.0hz,1h),5.39(s,2h),4.18(s,2h),3.39(s,2h),2.96(t,j＝6.1hz,2h),2.20(s,3h),1.83(s,3h).

实施例11

n-甲基-n-(3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)甘氨酸(11)的合成

参照实施例1的方法，将实施例1中的l-丝氨酸甲酯盐酸盐替换成肌氨酸甲酯盐酸盐，制得白色固体，收率50％。ms(ei)m/z419.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ8.04(d,j＝2.0hz,1h),7.78(dd,j＝8.7,2.0hz,1h),7.62(d,j＝8.7hz,1h),7.48(dd,j＝16.0,7.6hz,3h),7.40(d,j＝7.2hz,1h),7.34-7.28(m,3h),7.22(d,j＝6.4hz,1h),5.38(s,2h),4.10(s,2h),3.70(s,2h),2.57(s,3h),2.21(s,3h).

实施例12

3-((3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)氨基)丙酸(12)的合成

参照实施例1的方法，将实施例1中的l-丝氨酸甲酯盐酸盐替换成丙氨酸甲酯盐酸盐，收率54％。ms(ei)m/z419.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ8.13(d,j＝2.1hz,1h),7.88(dd,j＝8.7,2.1hz,1h),7.63(d,j＝8.8hz,1h),7.53-7.43(m,3h),7.40(dd,j＝5.3,1.9hz,1h),7.34-7.27(m,3h),7.24-7.19(m,1h),5.39(s,2h),4.12(s,2h),3.03(t,j＝7.2hz,2h),2.68(t,j＝7.3hz,2h),2.20(s,3h).

实施例13

(3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基]-l-蛋氨酸(13)的合成

参照实施例1的方法，将实施例1中的l-丝氨酸甲酯盐酸盐替换成l-蛋氨酸甲酯盐酸盐，制得白色固体，收率47％。ms(ei)m/z479.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ7.93(s,1h),7.71-7.57(m,2h),7.56-7.43(m,4h),7.40(d,j＝7.0hz,1h),7.30(t,j＝7.3hz,2h),7.24-7.18(m,1h),5.35(s,2h),3.75(d,j＝13.8hz,2h),3.23(s,1h),2.55(d,j＝7.6hz,2h),2.38(s,1h),2.20(s,3h),2.02(s,3h),1.86(dd,j＝15.0,7.6hz,2h).

实施例14

1-(呋喃-3-基)-n-(3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)甲胺(14)的合成

参照实施例1的方法，将实施例1中的l-丝氨酸甲酯盐酸盐替换成糠胺，制得白色固体，收率45％。ms(ei)m/z427.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ7.93(d,j＝2.0hz,1h),7.68-7.62(m,2h),7.53(s,1h),7.50(s,1h),7.40(dd,j＝14.6,7.6hz,4h),7.31(t,j＝7.3hz,1h),7.25-7.19(m,3h),7.14(d,j＝6.3hz,1h),6.41(s,2h),5.30(s,2h),4.21(d,j＝5.8hz,1h),3.96(s,2h),3.94(s,2h),2.13(s,3h).

实施例15

n¹,n¹-二甲基-n²-(3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)乙烷-1,2-二胺(15)的合成

参照实施例1的方法，将实施例1中的l-丝氨酸甲酯盐酸盐替换成n,n-二甲基乙二胺，制得白色固体，收率57％。ms(ei)m/z418.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ8.18(d,j＝2.1hz,1h),7.94(dd,j＝8.7,2.1hz,1h),7.64(d,j＝8.8hz,1h),7.53-7.49(m,1h),7.47(d,j＝1.5hz,1h),7.45(s,1h),7.42-7.38(m,1h),7.33-7.28(m,3h),7.22(dd,j＝7.6,1.3hz,1h),5.40(s,2h),4.16(s,2h),3.31(d,j＝4.6hz,2h),3.27(d,j＝5.0hz,2h),2.70(d,j＝7.1hz,6h),2.21(s,3h).

实施例16

3-氯-n-(3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)丙-1-胺(16)的合成

参照实施例1的方法，将实施例1中的l-丝氨酸甲酯盐酸盐替换成3-氯丙胺，制得白色固体，收率54％。ms(ei)m/z423.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ8.24(d,j＝2.0hz,1h),8.01(dd,j＝8.8,1.9hz,1h),7.65(d,j＝8.8hz,1h),7.48(dd,j＝16.4,7.6hz,3h),7.40(d,j＝7.1hz,1h),7.34-7.27(m,3h),7.22(d,j＝7.5hz,1h),5.40(s,2h),4.18(s,2h),3.78(t,j＝6.4hz,2h),3.05-2.96(m,2h),2.21(s,5h).

实施例17

2-((3-((3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)氨基)丙基)氨基)丙烷-1,3-二醇(17)的合成

化合物16(0.2g,0.47mmol)溶于dmf(5ml)，加入丝胺醇(0.09g,0.47mmol)，90℃反应2h，冷却，反应液浓缩，倒入饱和食盐水，过滤沉淀物并干燥，可得白色固体，收率62％。ms(ei)m/z478.1[m-h]^-1；¹hnmr(300mhz,dmso)δ7.91(d,j＝1.7hz,1h),7.70(d,j＝8.6hz,1h),7.52(d,j＝3.1hz,1h),7.49(s,1h),7.47(s,1h),7.44(s,1h),7.40(d,j＝7.1hz,1h),7.32(d,j＝1.5hz,1h),7.30(s,2h),7.21(d,j＝7.6hz,1h),5.35(s,2h),5.30(s,1h),3.77(s,2h),3.54-3.39(m,5h),2.86(d,j＝5.5hz,2h),2.80-2.66(m,4h),2.62(d,j＝4.2hz,1h),2.20(s,3h),2.16(s,2h).

实施例18

2-(3-硝基-4-((2-溴-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)-l-苏氨酸(18)的合成

2-溴-3-甲基苯胺(18a)的合成

将3-甲基苯胺(10g,93.3mmol)溶于二氯甲烷(100ml)中，冰浴下滴加br2(14.9g,93.3mmol)，反应2小时,硅胶快速柱层析，得产品15.1g，收率87％。ms(ei)m/z184.0[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ7.06(d,j＝5.6hz,1h),6.45(s,1h),6.26(s,1h),5.06(s,2h),2.10(d,j＝4.2hz,3h).

2-溴-3-碘甲苯(18b)的合成

将化合物18a(10g,53.7mmol)溶于dmso(100ml)和30％h2so4(100ml)溶液中，50℃下反应2小时，冰浴冷却，分批加入nano2(5.56g,80.5mmol)，反应1小时，再分批加入nai(32.2g,214.8mmol)，反应1小时，倒入200ml饱和食盐水，加入亚硫酸氢钠除去过量的i2，乙酸乙酯萃取，浓缩，得18a，直接投入下一步反应。2-溴-3-甲基-1,1'-联苯(18c)的合成

将化合物18b(15.9g,53.7mmol)、苯硼酸(9.8g,80.4mmol)和醋酸钾(15.6g,106.7mmol)溶于100mldmf和10ml水中，加入pd(dppf)cl2(3.9g,5.5mmol)，氮气保护下于80℃反应12h，抽滤，乙酸乙酯萃取，无水硫酸镁干燥，柱层析纯化[石油醚:乙酸乙酯＝20:1(v:v)]，得黄色油状液体11.2g，收率85％。ms(ei)m/z245.0[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ7.69-7.62(m,4h),7.48(dd,j＝4.9,3.1hz,2h),7.45-7.42(m,1h),7.39(dd,j＝4.1,3.1hz,1h),2.42(s,3h).

2-溴-3-溴甲基-1,1'-联苯(18d)的合成

将18c(1.0g,4.0mmol)和nbs(1.1g,6.0mmol)溶入20mlccl4，回流下加入过氧化苯甲酰(0.1g,0.4mmol)，反应2h，冷却，加水淬灭反应，二氯甲烷萃取，依次使用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩，得18c，直接投入下一步反应。

3-硝基-4-((2-溴-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苯甲醛(18e)的合成

将3-硝基-4-羟基苯甲醛(0.6g,3.6mmol)和nahco3(0.8g,9.1mmol)加入20ml乙腈中，室温搅拌30min，加入18d(1.3g,4.0mmol)，回流反应12h，旋除溶剂，加15ml水，乙酸乙酯萃取，无水硫酸镁干燥，柱层析纯化[石油醚:乙酸乙酯＝4:1(v:v)]，得白色固体1.1g，收率69％。ms(ei)m/z410.0[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ9.98(s,1h),8.49(d,j＝2.0hz,1h),8.25(dd,j＝8.7,2.1hz,1h),8.02(d,j＝2.3hz,1h),7.80(d,j＝3.0hz,1h),7.77(d,j＝3.4hz,1h),7.73-7.64(m,3h),7.51(t,j＝7.4hz,2h),7.42(t,j＝4.9hz,1h),5.51(s,2h).

(3-硝基-4-((2-溴-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)-苄基)-l-苏氨酸甲酯(18f)的合成

将18e(0.24g,0.46mmol)溶于5mldmf中，依次加入l-苏氨酸甲酯盐酸盐(0.16g,0.92mmol)、tea(0.12g,1.38mmol)、冰醋酸(0.14g,2.3mmol)和氰基硼氢化钠(0.14g,2.3mmol)，室温反应24h，加10ml水，乙酸乙酯萃取，无水硫酸镁干燥，浓缩得18e，直接投入下一步反应。

将18f溶入5ml甲醇中，加入lioh(50mg)，反应5h，旋除溶剂，加入10ml饱和氯化钠溶液，冰浴下滴加6m盐酸将反应液ph值调至2，抽滤，干燥，得白色固体65mg，收率54％。ms(ei)m/z514.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ7.98(s,1h),7.72(t,j＝7.8hz,2h),7.66(d,j＝7.2hz,2h),7.61(d,j＝8.4hz,1h),7.51-7.45(m,3h),7.42-7.36(m,2h),5.34(s,2h),3.97(s,1h),3.92(s,1h),3.83-3.76(m,2h),2.91-2.87(m,1h),1.09(d,j＝6.0hz,3h).

实施例19

(s)-n-(1-羟基-2-(羟甲基)丁-2-基)-1-(3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)吡咯烷-2-羧酰胺(19)的合成

将化合物3(0.5mmol)溶于dmf(10ml)中，加入n,n-羰基二咪唑(0.5mmol)，80℃反应1小时，再将2-氨基-2-乙基-1,3-丙二醇(0.5mmol)加入反应液，硅胶快速柱层析，得产品103mg，收率47％。ms(ei)m/z546.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ7.88(d,j＝1.9hz,1h),7.72-7.65(m,2h),7.54-7.43(m,4h),7.40(d,j＝7.2hz,1h),7.34-7.27(m,3h),7.22(d,j＝6.6hz,1h),5.35(s,2h),4.99(dd,j＝13.0,5.5hz,2h),3.86(d,j＝12.9hz,1h),3.48-3.40(m,4h),3.38(s,1h),3.02(dd,j＝9.6,4.7hz,1h),2.91-2.84(m,1h),2.31(dd,j＝15.7,8.9hz,1h),2.21(s,3h),2.17-2.07(m,1h),1.67(ddd,j＝36.0,13.7,7.5hz,5h),1.07-1.00(m,1h),0.73(t,j＝7.4hz,3h).

实施例20

(s)-n-(2-羟基-2-甲基丙基)-1-(3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)吡咯烷-2-羧酰胺(20)的合成

参照实施例19的方法，将实施例19中的2-氨基-2-乙基-1,3-丙二醇替换成2-氨基-2-甲基丙醇，得白色固体0.11g，收率52％。ms(ei)m/z516.1[m-h]；¹hnmr(300mhz,dmso)δ7.90(d,j＝1.5hz,1h),7.76(t,j＝5.8hz,1h),7.70(d,j＝8.6hz,1h),7.54-7.43(m,4h),7.40(d,j＝7.1hz,1h),7.31(dd,j＝9.5,4.1hz,3h),7.22(d,j＝7.5hz,1h),5.35(s,2h),4.64(s,1h),3.84(d,j＝13.0hz,1h),3.50(d,j＝12.2hz,2h),3.11(dd,j＝13.2,5.5hz,2h),3.00(dd,j＝13.0,5.8hz,1h),2.88(d,j＝5.8hz,1h),2.31(d,j＝7.5hz,1h),2.21(s,3h),2.12(d,j＝8.3hz,1h),1.72(s,2h),1.04(d,j＝4.6hz,6h).

实施例21

(3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)-l-脯氨酰-l-丝氨酸(21)的合成

参照实施例19的方法，将实施例19中的2-氨基-2-乙基-1,3-丙二醇替换成l-丝氨酸甲酯盐酸盐，得(3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)-l-脯氨酰-l-丝氨酸甲酯，直接投下一步反应。

将(3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)-l-脯氨酰-l-丝氨酸甲酯溶于5ml甲醇中，加入lioh(50mg)，反应5h，旋除溶剂，加入10ml饱和氯化钠溶液，在冰浴下滴加6m盐酸将反应液ph值调至2，抽滤，干燥，得白色固体0.11g，产率34％。ms(ei)m/z532.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ7.97(d,j＝6.4hz,1h),7.77(t,j＝7.6hz,1h),7.57(d,j＝8.5hz,1h),7.48(dd,j＝15.0,7.8hz,3h),7.39(d,j＝7.1hz,1h),7.30(dd,j＝6.9,5.3hz,3h),7.21(d,j＝6.9hz,1h),5.37(s,2h),4.24(d,j＝7.9hz,1h),3.78(d,j＝10.3hz,1h),3.64(dd,j＝18.2,7.3hz,2h),3.09(s,1h),2.20(s,3h),1.82(s,2h).

实施例22

(s)-n-(2-羟乙基)-1-(3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)吡咯烷-2-羧酰胺(22)的合成

参照实施例19的方法，将实施例19中的2-氨基-2-乙基-1,3-丙二醇替换成乙醇胺，得白色固体0.11g，收率51％。ms(ei)m/z488.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ7.89(d,j＝1.7hz,1h),7.80(t,j＝5.7hz,1h),7.67(d,j＝8.6hz,1h),7.52-7.46(m,3h),7.45(s,1h),7.40(d,j＝7.0hz,1h),7.31(dd,j＝10.5,4.0hz,3h),7.22(d,j＝6.9hz,1h),5.35(s,2h),4.71(t,j＝5.2hz,1h),3.79(d,j＝13.1hz,1h),3.48(d,j＝13.1hz,1h),3.39(dd,j＝10.6,5.0hz,2h),3.18(dd,j＝12.9,6.4hz,1h),3.14-3.08(m,1h),3.06-3.00(m,1h),2.90(s,1h),2.35-2.25(m,1h),2.21(s,3h),2.09(d,j＝8.2hz,1h),1.70(s,3h).

实施例23

(s)-n-(1,3-二羟基-2-甲基丙烷-2-基)-1-(3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)吡咯烷-2-羧酰胺(23)的合成

参照实施例19的方法，将实施例19中的2-氨基-2-乙基-1,3-丙二醇替换成2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇，得白色固体0.11g，收率57％。ms(ei)m/z532.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ7.88(d,j＝1.8hz,1h),7.68(dd,j＝13.3,2.8hz,2h),7.55-7.43(m,4h),7.39(d,j＝7.1hz,1h),7.31(dd,j＝10.0,4.2hz,3h),7.21(d,j＝6.8hz,1h),7.02(s,1h),5.35(s,2h),5.01(s,2h),3.82(d,j＝12.8hz,1h),3.48(t,j＝12.1hz,3h),2.98(dd,j＝9.5,4.8hz,1h),2.90-2.84(m,1h),2.32(t,j＝9.0hz,1h),2.21(s,3h),2.16-2.05(m,1h),1.99(s,1h),1.69(d,j＝7.0hz,2h),1.15(s,3h).

实施例24

(s)-n-((s)-1-羟基丙烷-2-基)-1-(3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基吡咯烷-2-羧酰胺(24)的合成

参照实施例19的方法，将实施例19中的2-氨基-2-乙基-1,3-丙二醇替换成2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇，得白色固体0.11g，收率50％。ms(ei)m/z502.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ7.87(s,1h),7.66(d,j＝8.7hz,1h),7.58-7.43(m,5h),7.39(d,j＝6.0hz,1h),7.31(d,j＝6.5hz,3h),7.21(d,j＝7.5hz,1h),5.34(s,2h),4.78(s,1h),4.07-3.98(m,1h),3.80(d,j＝14.2hz,1h),3.45(d,j＝12.6hz,1h),3.02(s,1h),2.88(s,1h),2.31(d,j＝7.4hz,1h),2.20(s,3h),2.07(s,1h),1.99(d,j＝2.9hz,2h),1.69(s,3h),1.05-0.99(m,3h).

实施例25

(3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)-l-脯氨酰基-l-苏氨酸(25)的合成

参照实施例20的方法，将实施例20中的l-丝氨酸甲酸甲酯替换成l-苏氨酸甲酸甲酯，得白色固体0.11g，收率53％。ms(ei)m/z446.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ9.82(s,1h),8.82(s,1h),8.12(s,1h),7.85(d,j＝8.5hz,1h),7.62(d,j＝8.5hz,1h),7.48(dd,j＝13.1,6.5hz,3h),7.40(d,j＝7.2hz,1h),7.33-7.28(m,3h),7.23(d,j＝6.7hz,1h),5.39-5.33(m,2h),5.11(s,1h),4.46(s,3h),4.12(s,1h),4.02(s,1h),3.63(s,1h),2.52(s,1h),2.50-2.46(m,1h),2.21(s,3h),2.09(s,1h),1.86(s,2h),0.82(s,3h).

实施例26

(s)-n-(2-乙酰氨基乙基)-1-(3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)吡咯烷-2-羧酰胺(26)的合成

参照实施例19的方法，将实施例19中的2-氨基-2-乙基-1,3-丙二醇替换成n-乙酰基乙二胺，得白色固体0.11g，收率42％。ms(ei)m/z529.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ7.93-7.85(m,3h),7.67(dd,j＝8.7,2.1hz,1h),7.50(s,1h),7.49-7.46(m,2h),7.44(s,1h),7.40(dt,j＝5.3,2.2hz,1h),7.33-7.27(m,3h),7.21(dd,j＝7.7,1.4hz,1h),5.34(s,2h),3.79(d,j＝13.1hz,1h),3.46(d,j＝13.1hz,1h),3.10(d,j＝2.8hz,3h),3.06-2.97(m,2h),2.89(s,1h),2.28(t,j＝7.9hz,1h),2.20(s,3h),2.11-2.01(m,1h),1.83-1.75(m,1h),1.75(s,3h),1.69(s,3h).

实施例27

(2s)-n-(2,3-二羟丙基)-n-甲基-1-(3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)吡咯烷-2-羧酰胺(27)的合成

参照实施例19的方法，将实施例19中的2-氨基-2-乙基-1,3-丙二醇替换成3-甲氨基-1,2-丙二醇，得白色固体0.11g，收率42％。ms(ei)m/z532.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ7.84(s,1h),7.63(d,j＝8.6hz,1h),7.48(dd,j＝14.1,7.2hz,4h),7.40(d,j＝7.2hz,1h),7.31(dd,j＝10.5,4.2hz,3h),7.21(d,j＝6.6hz,1h),5.34(s,2h),4.70(s,1h),4.03(q,j＝7.1hz,1h),3.82(d,j＝13.4hz,1h),3.67-3.51(m,2h),3.46(d,j＝10.5hz,1h),3.37(d,j＝4.8hz,3h),3.27(d,j＝5.3hz,2h),3.04(d,j＝5.1hz,1h),2.89(s,1h),2.80(d,j＝6.6hz,1h),2.36(dd,j＝12.5,4.9hz,1h),2.21(s,3h),1.99(s,1h),1.75(d,j＝7.1hz,3h).

实施例28

(s)-n-(2-羟基-2-甲基丙基)-1-(3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)哌啶-2-羧酰胺(28)的合成

将化合物4(0.5mmol)溶于dmf(40ml)中，加入n,n-羰基二咪唑(0.5mmol)，80℃反应1小时，再将1-氨基-2-甲基-2-丙醇(0.5mmol)加入到反应液中。硅胶快速柱层析，得产品103mg，收率47％。ms(ei)m/z530.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ7.80(s,1h),7.59(d,j＝5.5hz,2h),7.41(dd,j＝16.1,9.5hz,4h),7.33(d,j＝7.2hz,1h),7.24(d,j＝6.5hz,3h),7.15(d,j＝7.0hz,1h),5.27(s,2h),4.49(s,1h),3.96(dd,j＝14.1,7.0hz,1h),3.68(d,j＝13.3hz,1h),3.09(dd,j＝18.6,9.9hz,2h),3.02-2.92(m,1h),2.80-2.64(m,2h),2.14(s,3h),1.86(d,j＝12.0hz,1h),1.68(s,1h),1.64-1.31(m,4h),0.97(d,j＝3.9hz,6h).

实施例29

((s)-1-(3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)哌啶-2-羰基)-l-苏氨酸(29)的合成

参照实施例28的方法，将实施例28中的1-氨基-2-甲基-2-丙醇替换成l-苏氨酸甲酯盐酸盐，得((s)-1-(3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)哌啶-2-羰基)-l-苏氨酸甲酯，直接投下一步反应。

将((s)-1-(3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)哌啶-2-羰基)-l-苏氨酸甲酯溶于5ml甲醇中，加入lioh(50mg)，反应5h，旋除溶剂，加入10ml饱和食盐水，在冰浴下滴加6m盐酸将反应液ph值调至2，抽滤，干燥，得白色固体0.11g，产率34％。ms(ei)m/z560.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ7.97-7.85(m,1h),7.74-7.66(m,1h),7.53-7.43(m,4h),7.40(d,j＝6.4hz,1h),7.31(d,j＝6.9hz,3h),7.23(s,1h),5.37(s,2h),5.24-5.14(m,1h),4.25(s,2h),4.07-3.96(m,1h),2.74(s,1h),2.21(s,3h),1.62(s,4h),1.24(s,4h),1.12(s,3h).

实施例30

((s)-1-(3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)哌啶-2-羰基)丙氨酸(30)的合成

参照实施例29的方法，将实施例29中的l-苏氨酸甲酯盐酸盐替换成丙氨酸甲酯盐酸盐，得白色固体0.11g，收率48％。ms(ei)m/z530.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ12.22(s,1h),7.88(s,1h),7.65(s,1h),7.51-7.44(m,4h),7.40(d,j＝7.0hz,1h),7.31(d,j＝6.7hz,3h),7.22(d,j＝6.8hz,2h),5.35(s,2h),4.10(dd,j＝41.6,7.1hz,1h),3.24-3.09(m,2h),2.74(s,1h),2.42(s,2h),2.21(s,3h),2.11(s,1h),1.99(s,1h),1.92(s,1h),1.63(s,1h),1.53(s,2h),1.24(s,3h).

实施例31

((s)-1-(3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)哌啶-2-羰基)-l-脯氨酸(31)的合成

参照实施例29的方法，将实施例29中的l-苏氨酸甲酯盐酸盐替换成l-辅氨酸甲酯盐酸盐，得白色固体0.11g，收率42％。ms(ei)m/z556.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ7.78(s,1h),7.53(s,1h),7.46(d,j＝7.3hz,4h),7.40(d,j＝7.1hz,1h),7.31(d,j＝7.0hz,3h),7.23(s,1h),5.34(s,2h),4.31-4.26(m,1h),3.75(s,2h),3.19-3.09(m,1h),2.20(s,3h),2.09(s,1h),2.01-1.97(m,1h),1.92-1.88(m,1h),1.69(s,1h),1.64-1.60(m,2h),1.50-1.44(m,2h),1.24(s,6h).

实施例32

((s)-1-(3-硝基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)哌啶-2-羰基)-l-丝氨酸(32)的合成

参照实施例29的方法，将实施例29中的l-苏氨酸甲酯盐酸盐替换成l-丝氨酸甲酯盐酸盐，得白色固体0.11g，收率53％。ms(ei)m/z546.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ7.91(s,1h),7.71(s,1h),7.53-7.44(m,4h),7.40(d,j＝6.8hz,1h),7.35-7.25(m,4h),5.36(s,2h),4.33(s,1h),3.81(s,1h),3.71(s,2h),3.49(s,2h),2.82-2.66(m,1h),2.21(s,3h),1.62(s,3h),1.24(s,5h).

实施例33

(2-((3-氰基苄基)氧基)-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)-5-硝基苄基)-l-苏氨酸(33)的合成

2,4-羟基-3-硝基苯甲醛(33a)的合成

将2,4-羟基苯甲醛(10.0g,72.4mmol)溶于乙酸(20ml)，冰浴冷却，滴入浓硝酸(20ml)，室温反应2小时，将反应液倒入200ml饱和食盐水，抽滤，干燥，得淡黄色固体11.6g，收率88％。ms(ei)m/z182.0[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ11.83(s,2h),10.08(d,j＝4.5hz,1h),8.29(d,j＝4.6hz,1h),6.62(d,j＝4.3hz,1h).

2-羟基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)-5-硝基苯甲醛(33b)的合成

将2,4-羟基-3-硝基苯甲醛(1.3g,7.2mmol)、nahco3(1.5g,18.1mmol)和3-(溴甲基)-2-甲基-1,1'-联苯(2.1g,7.9mmol)溶于20ml乙腈，回流反应12h，旋除溶剂，加15ml水，乙酸乙酯萃取，无水硫酸镁干燥，柱层析纯化[石油醚:乙酸乙酯＝4:1(v:v)]，得白色固体0.8g，收率31％。ms(ei)m/z362.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ12.15-11.78(m,1h),10.02(d,j＝12.9hz,1h),8.21(s,1h),7.42(d,j＝7.1hz,1h),7.32(d,j＝6.9hz,2h),7.26(d,j＝6.6hz,1h),7.19(t,j＝7.0hz,3h),7.10(d,j＝7.5hz,1h),6.82(d,j＝7.8hz,1h),5.27(s,2h),2.08(s,3h).

3-((2-甲酰基-5-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)-4-硝基苯氧基)甲基)苄腈(33c)的合成

将33b(0.8g,2.2mmol)、间氰基苄溴(0.5g,2.4mmol)和k2co3(0.6g,4.4mmol)溶于10mldmf中，室温反应1小时，加50ml饱和食盐水，抽滤，干燥，得白色固体0.7g，收率67％。ms(ei)m/z477.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ10.21(s,1h),8.36(s,1h),8.00(s,1h),7.89(s,1h),7.87(d,j＝1.7hz,1h),7.68(t,j＝7.7hz,1h),7.57(d,j＝6.4hz,1h),7.47(s,1h),7.45(s,1h),7.42-7.38(m,1h),7.35(dd,j＝6.0,2.3hz,3h),7.32(d,j＝7.5hz,1h),7.28-7.23(m,1h),5.59(s,2h),5.51(s,2h),2.26(s,3h).

(3-硝基-4-((2-甲基-[1,1’-联苯]-3-基)甲氧基)苄基)-l-苏氨酸甲酯(33d)的合成

将33c(0.22g,0.46mmol)溶于5mldmf中，依次加入l-苏氨酸甲酯盐酸盐(0.14g,0.92mmol)、tea(0.12g,1.38mmol)、冰醋酸(0.14g,2.3mmol)和氰基硼氢化钠(0.14g,2.3mmol)，室温反应24h，加10ml水，乙酸乙酯萃取，无水硫酸镁干燥，得33d，直接投入下一步反应。

将33d溶于5ml甲醇中，加入lioh(50mg)，反应5h，旋除溶剂，加入10ml饱和氯化钠溶液，冰浴下滴加6m盐酸将反应液ph值调至2，抽滤，干燥，得白色固体65mg，收率54％。ms(ei)m/z566.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ8.12(s,1h),8.02(s,1h),7.86(d,j＝18.7hz,2h),7.63(s,2h),7.46(s,3h),7.40(s,1h),7.30(d,j＝6.5hz,3h),7.19(d,j＝16.3hz,2h),5.42(s,2h),5.37(s,2h),3.92(s,2h),3.63(s,2h),3.15(s,2h),2.21(s,3h).

实施例34

(2-((3-氰基苄基)氧基)-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)-5-硝基苄基)-l-丝氨酸(34)的合成

参照实施例33的方法，将实施例33中的l-苏氨酸甲酯盐酸盐替换成l-丝氨酸甲酯盐酸盐，得白色固体0.11g，收率58％。ms(ei)m/z580.1[m-h]^-；¹hnmr(400mhz,dmso)δ8.14(s,1h),8.03(s,1h),7.90(d,j＝7.8hz,1h),7.86(d,j＝7.7hz,1h),7.64(t,j＝7.8hz,1h),7.53(d,j＝7.3hz,1h),7.47(t,j＝7.4hz,2h),7.39(t,j＝7.3hz,1h),7.30(dd,j＝11.1,7.4hz,3h),7.22(d,j＝7.3hz,1h),7.18(s,1h),5.43(s,2h),5.39(s,2h),3.92(d,j＝11.0hz,1h),3.87(dd,j＝10.4,4.3hz,2h),3.83(s,1h),3.00(d,j＝4.8hz,1h),2.23(s,3h),1.14(d,j＝6.3hz,3h).

实施例35

(2-((3-氰基苄基)氧基)-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)-5-硝基苄基)-l-脯氨酸(35)的合成

参照实施例33的方法，将实施例33中的l-苏氨酸甲酯盐酸盐替换成l-苏氨酸甲酯盐酸盐，得白色固体0.11g，收率62％。ms(ei)m/z576.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ8.24(s,1h),8.08(s,1h),7.94(d,j＝7.1hz,1h),7.87(d,j＝7.8hz,1h),7.65(t,j＝7.7hz,1h),7.54(d,j＝7.5hz,1h),7.51-7.44(m,2h),7.40(d,j＝6.8hz,1h),7.34-7.27(m,4h),7.23(d,j＝7.2hz,1h),5.52(s,2h),5.44(s,2h),4.45-4.27(m,2h),4.17-3.99(m,2h),3.06(s,2h),2.24(s,3h),1.99(s,2h),1.88-1.81(m,1h),1.18(t,j＝7.1hz,1h),0.85(d,j＝6.8hz,1h).

实施例36

(s)-1-(2-(3-氰基苄基)氧基)-4-(((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)-5-硝基苄基)哌啶-2-羧酸(36)的合成

参照实施例33的方法，将实施例33中的l-苏氨酸甲酯盐酸盐替换成l-哌啶甲酸甲酯盐酸盐，得白色固体0.11g，收率62％。ms(ei)m/z590.1[m-h]^-；¹hnmr(400mhz,dmso)δ8.09(s,1h),7.97(d,j＝7.1hz,1h),7.80(q,j＝7.6hz,2h),7.65-7.60(m,1h),7.58(d,j＝7.3hz,1h),7.47(t,j＝7.5hz,2h),7.39(t,j＝7.3hz,1h),7.35-7.29(m,3h),7.27(s,1h),7.23(d,j＝6.8hz,1h),5.51(d,j＝6.4hz,2h),5.44(s,2h),3.16(d,j＝4.6hz,1h),2.86(s,1h),2.25(s,3h),2.24-2.20(m,1h),1.92(s,1h),1.75(d,j＝17.3hz,2h),1.50-1.35(m,4h).

实施例37

n-(2-(2-((3-氰基苄基)氧基)-4-(((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)-5-硝基苄基)氨基)乙基)乙酰胺(37)的合成

参照实施例33的方法，将实施例33中的l-苏氨酸甲酯盐酸盐替换成n-乙酰基乙二胺，得白色固体0.11g，收率58％。ms(ei)m/z563.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ8.02(s,1h),7.99(s,1h),7.85(dd,j＝11.6,4.6hz,3h),7.66(t,j＝7.9hz,1h),7.55-7.49(m,1h),7.47(d,j＝1.5hz,1h),7.45(s,1h),7.42-7.37(m,1h),7.31(dd,j＝8.2,1.4hz,3h),7.24(dd,j＝10.2,8.8hz,2h),7.16(s,1h),5.42(s,2h),5.37(s,2h),3.70(s,2h),3.13(dd,j＝12.1,6.2hz,2h),2.56(t,j＝6.5hz,2h),2.23(s,3h),1.78(s,3h).

实施例38

3-((2-((1,3-二羟基丙烷-2-基)氨基)甲基)-5-(((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)-4-硝基苯氧基)甲基)苄腈(38)的合成

参照实施例33的方法，将实施例33中的l-苏氨酸甲酯盐酸盐替换成丝胺醇，得白色固体0.11g，收率55％。ms(ei)m/z552.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ8.19(s,1h),7.89(d,j＝7.0hz,2h),7.78(d,j＝7.6hz,1h),7.71(t,j＝7.6hz,1h),7.55(t,j＝7.0hz,1h),7.49(d,j＝6.8hz,1h),7.44-7.36(m,2h),7.33(d,j＝7.2hz,1h),7.27-7.22(m,3h),7.18(dd,j＝13.9,6.1hz,2h),5.49(d,j＝6.6hz,2h),5.41(s,2h),5.07(s,2h),4.13(s,2h),3.50(s,4h),2.95(s,1h),2.17(s,3h).

实施例39

3-((2-((2-羟乙基)氨基)甲基)-5-(((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)-4-硝基苯氧基)甲基)苄腈(39)的合成

参照实施例33的方法，将实施例33中的l-苏氨酸甲酯盐酸盐替换成乙胺醇，得白色固体0.11g，收率42％。ms(ei)m/z522.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ8.21(s,1h),7.97(d,j＝7.3hz,1h),7.87(d,j＝7.3hz,1h),7.79(t,j＝7.0hz,1h),7.62(t,j＝7.7hz,1h),7.57(d,j＝6.7hz,1h),7.47(t,j＝7.2hz,2h),7.40(d,j＝7.2hz,1h),7.37-7.28(m,5h),7.23(d,j＝6.7hz,1h),5.57(s,2h),5.47(s,2h),4.97(s,1h),3.99(s,2h),3.56(s,2h),2.79(t,j＝5.3hz,2h),2.25(s,3h).

实施例40

n-(2-((3-氰基苄基)氧基)-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)-5-硝基苄基)-n-甲基甘氨酸(40)的合成

参照实施例33的方法，将实施例33中的l-苏氨酸甲酯盐酸盐替换成肌氨酸甲酯盐酸盐，得白色固体0.11g，收率53％。ms(ei)m/z550.1[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso)δ8.06(s,1h),7.96(d,j＝7.0hz,1h),7.80(d,j＝6.8hz,2h),7.63(d,j＝6.3hz,1h),7.57(d,j＝7.5hz,1h),7.46(d,j＝7.5hz,2h),7.40(d,j＝6.7hz,1h),7.33(d,j＝7.3hz,3h),7.28-7.21(m,2h),5.52(s,2h),5.44(s,2h),3.69(s,2h),3.21(s,2h),2.29(s,3h),2.25(s,3h).

实施例41

(s)-1-(2-((3-氰基苄基)氧基)-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)-5-硝基苄基)-n-(2-羟基-2-甲基丙基)哌啶-2-羧酰胺(41)的合成

将化合物实施36(0.5mmol)溶于dmf(40ml)中，加入n,n-羰基二咪唑(0.5mmol)，80℃反应1小时，再将1-氨基-2-甲基-2-丙醇(0.5mmol)加入到反应液中。硅胶快速柱层析，得粗产品103mg，收率47％。ms(ei)m/z661.1[m-h]^-；¹hnmr(400mhz,dmso)δ8.07(s,1h),7.96(d,j＝7.6hz,1h),7.79(d,j＝4.1hz,2h),7.62(dd,j＝8.1,4.8hz,1h),7.58(dd,j＝11.4,5.3hz,2h),7.47(t,j＝7.3hz,2h),7.39(t,j＝7.4hz,1h),7.34(d,j＝1.3hz,1h),7.32-7.29(m,2h),7.26-7.21(m,2h),5.52(s,2h),5.43(s,2h),4.50(s,1h),3.54(d,j＝14.7hz,1h),2.99(d,j＝6.0hz,2h),2.84(dd,j＝16.2,12.7hz,2h),2.24(s,3h),2.01-1.94(m,1h),1.72(s,1h),1.62(d,j＝8.6hz,2h),1.50(s,2h),1.41(s,2h),0.96(s,3h),0.94(s,3h).

实施例42

((s)-1-(2-((3-氰基苄基)氧基)-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)-5-硝基苄基)哌啶-2-羰基)-l-脯氨酸(42)的合成

参照实施例41的方法，将实施例41中的1-氨基-2-甲基-2-丙醇替换成l-辅氨酸甲酯盐酸盐，得((s)-1-(2-((3-氰基苄基)氧基)-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)-5-硝基苄基)哌啶-2-羰基)-l-脯氨酸甲酯，直接投入下一步反应。

将((s)-1-(2-((3-氰基苄基)氧基)-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)-5-硝基苄基)哌啶-2-羰基)-l-脯氨酸甲酯溶于5ml甲醇中，加入lioh(50mg)，反应5h，旋除溶剂，加入10ml饱和氯化钠溶液，冰浴下滴加6m盐酸将反应液ph值调至2，抽滤，干燥，得白色固体0.11g，产率44％。ms(ei)m/z687.1[m-h]^-；¹hnmr(400mhz,dmso)δ12.83-12.65(m,1h),8.09(s,1h),8.02(d,j＝7.5hz,1h),7.90-7.81(m,2h),7.67(t,j＝7.6hz,1h),7.59(d,j＝7.0hz,1h),7.48(t,j＝7.3hz,2h),7.43-7.38(m,2h),7.33(d,j＝6.8hz,3h),7.26(d,j＝7.1hz,1h),5.59(s,2h),5.53(s,2h),4.44(s,1h),4.35(s,1h),4.26-4.13(m,2h),3.64(s,1h),3.50(s,1h),2.95(s,1h),2.45(s,1h),2.27(s,3h),2.23-2.17(m,1h),1.96-1.90(m,2h),1.70(s,4h),1.52(d,j＝10.8hz,2h),1.24(s,1h).

实施例43

((s)-1-(2-(3-氰基苄基)氧基)-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)-5-硝基苄基)哌啶-2-羰基)-l-丝氨酸(43)的合成

参照实施例42的方法，将实施例42中的l-辅氨酸甲酯盐酸盐替换成l-丝氨酸甲酯盐酸盐，得白色固体0.11g，产率37％。ms(ei)m/z677.1[m-h]^-；¹hnmr(400mhz,dmso)δ12.86-12.51(m,1h),9.85(s,1h),8.13(s,1h),7.98(d,j＝6.4hz,1h),7.81(s,3h),7.63(s,1h),7.57(d,j＝7.1hz,1h),7.48(t,j＝7.3hz,2h),7.40(t,j＝7.3hz,1h),7.32(t,j＝7.2hz,3h),7.24(d,j＝7.5hz,1h),5.52(s,2h),5.45(s,2h),5.21-5.04(m,1h),4.26(s,2h),3.76(s,1h),3.73-3.61(m,2h),2.80(s,1h),2.53(s,1h),2.41(d,j＝22.9hz,1h),2.25(s,3h),1.96(d,j＝25.5hz,1h),1.65(s,4h),1.43-1.33(m,1h).

实施例44

(4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)-5-硝基-2-(吡啶-3-基甲氧基)苄基)-l-丝氨酸(44)的合成

4-((((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)-5-硝基-2-)吡啶-3-基甲氧基)苯甲醛(44a)的合成

将2-羟基-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)-5-硝基苯甲醛(33b)(0.8g,2.2mmol)、3-(溴甲基)吡啶(0.4g,2.4mmol)和k2co3(0.6g,4.4mmol)溶于10mldmf中，室温反应1小时，加50ml饱和食盐水，抽滤，干燥，得白色固体0.7g，收率67％。ms(ei)m/z453.1[m-h]^-。

(4-(((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)甲基)-5-硝基-2-[吡啶-3-基甲氧基]苄基)-l-丝氨酸酯(44b)的合成

将44a(0.22g,0.46mmol)溶于5mldmf中，依次加入l-丝氨酸甲酯盐酸盐(0.14g,0.92mmol)、tea(0.12g,1.38mmol)、冰醋酸(0.14g,2.3mmol)和氰基硼氢化钠(0.14g,2.3mmol)，室温反应24h，加10ml水，乙酸乙酯萃取，无水硫酸镁干燥，得44b，直接投入下一步反应。

(4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)-5-硝基-2-(吡啶-3-基甲氧基)苄基)-l-丝氨酸(实例44)的合成

将44b溶于5ml甲醇中，加入lioh(50mg)，反应5h，旋除溶剂，加入10ml饱和氯化钠溶液，冰浴下滴加6m盐酸将反应液ph值调至2，抽滤，干燥，得白色固体65mg，收率54％。ms(ei)m/z542.1[m-h]^-。¹hnmr(300mhz,dmso)δ8.13(s,1h),8.03(s,1h),7.87(d,j＝18.7hz,2h),7.64(s,2h),7.51(s,1h),7.47(s,1h),7.41(s,1h),7.31(d,j＝6.5hz,3h),7.23(s,1h),7.18(s,1h),5.43(s,2h),5.38(s,2h),3.93(s,2h),3.64(s,2h),3.16(s,2h),2.22(s,3h).

实施例45

(4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)-5-硝基-2-(吡啶-3-基甲氧基)苄基)-l-苏氨酸(45)的合成

参照实施例44的方法，将实施例44中的l-丝氨酸甲酯盐酸盐替换成l-苏氨酸甲酯盐酸盐，得白色固体0.11g，收率57％。ms(ei)m/z556.1[m-h]^-。¹hnmr(400mhz,dmso)δ8.14(s,1h),8.03(s,1h),7.90(d,j＝7.8hz,1h),7.86(d,j＝7.7hz,1h),7.64(t,j＝7.8hz,1h),7.53(d,j＝7.3hz,1h),7.47(t,j＝7.4hz,2h),7.39(t,j＝7.3hz,1h),7.32(d,j＝7.0hz,2h),7.29(d,j＝7.8hz,1h),7.22(d,j＝7.3hz,1h),7.18(s,1h),5.43(s,2h),5.39(s,2h),3.92(d,j＝11.0hz,1h),3.87(dd,j＝10.4,4.3hz,2h),3.82(d,j＝14.4hz,1h),3.00(d,j＝4.8hz,1h),2.23(s,3h),1.14(d,j＝6.3hz,3h).

实施例46

(s)-1-(2-((2-氰基吡啶-4-基)甲氧基)-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)-5-硝基苄基)哌啶-2-羧酸(46)的合成

参照实施例44的方法，将实施例44中的l-丝氨酸甲酯盐酸盐替换成l-哌啶甲酸，得白色固体0.11g，收率55％。ms(ei)m/z566.1[m-h]^-。¹hnmr(400mhz,dmso)δ8.10(s,1h),7.98(d,j＝7.1hz,1h),7.81(q,j＝7.6hz,2h),7.66-7.61(m,1h),7.59(d,j＝7.3hz,1h),7.48(t,j＝7.5hz,2h),7.40(t,j＝7.3hz,1h),7.36-7.30(m,3h),7.28(s,1h),7.24(d,j＝6.8hz,1h),5.52(d,j＝6.4hz,2h),5.45(s,2h),3.59(d,j＝12.6hz,2h),3.17(d,j＝4.6hz,1h),2.87(s,1h),2.26(s,3h),2.25-2.21(m,1h),1.76(d,j＝13.3hz,2h),1.51-1.36(m,4h).

实施例47

(2-((2-氰基吡啶-4-基)甲氧基)-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)-5-硝基苄基)-l-丝氨酸(47)的合成

4-((2-甲酰基-5-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)-4-硝基苯氧基)甲基)吡啶啉(47a)的合成

将33b(0.8g,2.2mmol)、4-(溴甲基)吡啶啉(0.5g,2.4mmol)和k2co3(0.6g,4.4mmol)溶于10mldmf中，室温反应1小时，加50ml饱和食盐水，抽滤，干燥得白色固体0.7g，收率67％。ms(ei)m/z478.1[m-h]^-。

(2-((2-氰基吡啶-4-基)甲氧基)-4-((2-甲基-[[1,1'-联苯]-3-基]甲氧基)-5-硝基苄基)-l-丝氨酸甲酯(47b)的合成

将47a(0.22g,0.46mmol)溶于5mldmf中，依次加入l-丝氨酸甲酯盐酸盐(0.14g,0.92mmol)、tea(0.12g,1.38mmol)冰醋酸(0.14g,2.3mmol)和氰基硼氢化钠(0.14g,2.3mmol)，室温反应24h，加10ml水，乙酸乙酯萃取，无水硫酸镁干燥，得47b，直接投入下一步反应。

(2-((2-氰基吡啶-4-基)甲氧基)-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)-5-硝基苄基)-l-丝氨酸(实例47)的合成

将47b溶于5ml甲醇中，加入lioh(50mg)，反应5h，旋除溶剂，加入10ml饱和氯化钠溶液，冰浴下滴加6m盐酸将反应液ph值调至2，抽滤，干燥，得白色固体65mg，收率54％。ms(ei)m/z567.1[m-h]^-。¹hnmr(300mhz,dmso)δ8.68(d,j＝4.8hz,1h),8.20(s,3h),7.71(s,2h),7.47(s,2h),7.44(s,1h),7.40(d,j＝7.2hz,1h),7.35(d,j＝6.7hz,2h),7.26(d,j＝7.6hz,1h),7.22(d,j＝6.1hz,2h),5.61(s,2h),5.37(s,2h),3.96-3.81(m,2h),3.63(s,2h),3.18(s,1h),2.23(s,3h).

实施例48

(2-((2-氰基吡啶-4-基)甲氧基)-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)-5-硝基苄基)-l-苏氨酸(48)的合成

参照实施例47的方法，将实施例47中的l-丝氨酸甲酯盐酸盐替换成l-苏氨酸甲酯盐酸盐，得白色固体0.11g，收率47％。ms(ei)m/z581.1[m-h]^-。¹hnmr(300mhz,dmso)δ8.03(s,1h),7.97(s,1h),7.94(s,1h),7.85(s,1h),7.82(d,j＝1.5hz,1h),7.67-7.60(m,1h),7.46(s,1h),7.43(s,1h),7.38(d,j＝7.3hz,1h),7.29(dd,j＝12.6,4.7hz,3h),7.20(d,j＝6.4hz,1h),7.13(s,1h),5.40(s,2h),5.36(s,2h),4.71(d,j＝5.3hz,1h),3.79(d,j＝14.6hz,2h),3.69(s,1h),3.61(d,j＝14.5hz,1h),3.53(s,3h),3.09(d,j＝4.6hz,1h),2.88(s,3h),2.72(s,3h),2.21(s,3h),1.10(d,j＝6.3hz,3h).

实施例49

(s)-1-(2-((2-氰基吡啶-4-基)甲氧基)-4-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)甲氧基)-5-硝基苄基)哌啶-2-羧酸(49)的合成

参照实施例47的方法，将实施例47中的l-丝氨酸甲酯盐酸盐替换成l-哌啶甲酸，得白色固体0.11g，收率52％。ms(ei)m/z591.1[m-h]^-。¹hnmr(400mhz,dmso)δ8.06(s,1h),7.94(d,j＝7.1hz,1h),7.77(q,j＝7.6hz,2h),7.62-7.57(m,1h),7.55(d,j＝7.3hz,1h),7.44(t,j＝7.5hz,2h),7.36(t,j＝7.3hz,1h),7.31(s,1h),7.29(s,1h),7.24(s,1h),7.20(d,j＝6.8hz,1h),5.48(d,j＝6.4hz,2h),5.41(s,2h),3.55(d,j＝14.6hz,2h),3.13(d,j＝4.6hz,1h),2.83(s,1h),2.22(s,3h),2.21-2.17(m,1h),1.72(d,j＝17.3hz,2h),1.47-1.32(m,4h).

药理活性评价

1.本发明化合物对pd-1/pd-l1相互作用的抑制活性

1.1主要实验材料

购买的试剂盒(cisbio公司pd-1/pd-l1bindingassaykit)中含有pd-1、pd-l1、anti-tag1-eu、anti-tag2-xl665、dilutebuffer和detectionbuffer等实验所需的试剂；阳性药bms-1018；m1000多功能酶标仪；echo520超声波微量液体转移系统(labcyte)。

1.2实验方法

1)将化合物用100％dmso配置成所设置的浓度，然后将化合物的dmso溶液加入到稀释缓冲液中，混合均匀后加入2μl到384孔白色酶标板中；

2)将pd-1蛋白和pd-l1蛋白用稀释缓冲液稀释，分别加入4μl到上述384孔板中，常温条件下孵育15分钟；

3)将10μl的anti-tag1-eu和anti-tag2-xl665混合液加入到检测缓冲溶液中，混合均匀后加入到上述384孔板中，然后在室温条件下孵育1到24个小时；

4)用m1000多功能酶标仪检测665nm和620nm处的荧光信号，根据荧光比值计算化合物对蛋白结合的抑制率。

1.3实验结果

实施例化合物对pd-1/pd-l1蛋白-蛋白相互作用的抑制活性如表1所示。结果表明，本发明化合物能显著抑制pd-1/pd-l1的相互作用。

表1本发明化合物对pd-1/pd-l1相互作用的抑制活性

*对照组：bms-1018是专利wo2015160641a2中的第1018号化合物。

2.本发明化合物对细胞因子inf-γ释放的影响

细胞因子是一类具有效应及调节双重作用的独特蛋白，在淋巴细胞应答中有重要的免疫调节作用。活化的人外周血单个核细胞(pbmc)可以释放ifn-γ、il-2和tnf-α等细胞因子，而当pbmc膜上表达的pd-1与其配体pd-l1结合后将会抑制细胞因子的释放。本实验的目的是检测本发明化合物逆转pd-1/pd-l1抑制pbmc分泌inf-γ的能力。

2.1实验方法

使用人淋巴细胞分离液提取人外周血单个核细胞，接种到24孔板，加入终浓度1μg/ml的anti-cd3/anti-cd28，终浓度为2μg/ml配体蛋白和不同剂量的化合物，48h后离心取上清100μl，使用达科为的inf-γ酶联免疫吸附试剂盒检测上清中inf-γ的表达量。

2.2实验结果

实验结果(图1)表明，与模型组相比，当加入anti-cd3/anti-cd28时能明显促进inf-γ的释放，而加入pd-l1后则显著降低inf-γ的水平，表明pd-1/pd-l1明显抑制inf-γ的释放。当加入不同浓度的实施例化合物33后便能够显著提高inf-γ的水平，并且呈现剂量依赖性。此外，本发明中的其他化合物如3、8、9、13、27、28、30、32、33、36、37、39、40、41、43、46、47、48和49等在10nm和100nm浓度下均可显著提高inf-γ的水平，这说明本发明化合物能够阻断pd-1/pd-l1对pbmc的抑制作用，从而促进inf-γ的分泌。

3.本发明化合物对细胞的毒性实验

采用mtt法检测本发明化合物对lewis肺癌细胞活性的影响，目的是为了考察本发明化合物是否存在细胞毒性。

3.1实验方法

于96孔板中每孔加入20μl4mg/mlmtt溶液，放入细胞培养箱孵育4小时，将96孔板进行离心，小心吸去孔内液体，每孔加入200μl二甲基亚砜，放置在摇床上300r振荡10min，使紫色结晶物质充分溶解。最后在酶标仪570nm处检测吸光值。根据吸光度用bliss法计算抑制率。

3.2实验结果

实验结果(图2)表明，与模型组相比，实施例化合物33在各种检测浓度下对lewis肺癌细胞的活力均没有明显的影响，说明本发明化合物33无明显的细胞毒性。

4.本发明化合物的体内药效学评价

增殖细胞核抗原(pcna)则是真核细胞dna合成所必需的一种核蛋白，检测pcna可以客观评价肿瘤细胞的增殖状态。为此，在开展体内药效学评价过程中，利用免疫组化和tunel分析检测肿瘤组织中的t淋巴细胞的浸润以及ifn-γ和pcna水平。

4.1实验方法：

小鼠的培养：选择7～8周的雌鼠，在spf级动物饲养室饲养一周，每只小鼠体重大约在18～20g。

肿瘤细胞的处理：采集处于对数生长期的肿瘤细胞，180g离心5min(4℃)，使用预冷的pbs洗2次，吹打均匀，终细胞浓度为1×10⁷/ml，冰浴备用。

肿瘤细胞的移植：将肿瘤细胞悬浮液接种至小鼠右侧腋窝皮下，接种的肿瘤细胞数为1×10⁶/只。每两天使用游标卡尺测量小鼠肿瘤大小一次，称小鼠体重一次。当肿瘤体积均值达到40mm³左右时，开始给药。

当肿瘤体积达到一定大小后，结束动物实验。称量小鼠体重，对其进行眼球取血，并对小鼠实施安乐死，剥取肿瘤组织，对肿瘤组织进行称重并拍照。同时，将部分组织置于10％中性固定液中，送样进行石蜡包埋组织、制作石蜡组织切片，并开展h&e染色、tunel和免疫组化分析。实验操作参考检测试剂盒说明书。

(1)lewis肺癌小鼠移植瘤模型

移植lewis肺癌的balb/c雌鼠分为4组，每组6只。模型组(溶剂：pbs+2％的吐温20+2％dmso，灌胃给药，每天一次)，阳性对照组(bms-1018，灌胃给药，每天一次，剂量：5mg/kg)，药物处理组1(化合物33，灌胃给药，每天一次，剂量：2mg/kg)，药物处理组2(化合物33，灌胃给药，每天一次，剂量：5mg/kg)。

(2)b16f1黑色素瘤小鼠移植瘤模型

移植b16f1黑色素瘤的c57bl/6雌鼠分为4组，每组6只。模型组(溶剂：pbs+2％的吐温20+2％dmso，灌胃给药，每天一次)，阳性对照组(bms-1018，灌胃给药，每天一次，剂量：5mg/kg)，药物处理组1(化合物33，灌胃给药，每天一次，剂量：2mg/kg)，药物处理组2(化合物33，灌胃给药，每天一次，剂量：5mg/kg)。

(3)ct26结直肠癌balb/c小鼠移植瘤模型

移植ct26结直肠肿瘤的balb/c雌鼠分为5组，每组6只。模型组(溶剂：pbs+2％的吐温20+2％dmso，灌胃给药，每天一次)，阳性对照组-1(5-fu，剂量：25mg/kg，腹腔注射，每两天一次)，阳性对照组-2(bms-1018，灌胃给药，每天一次，剂量：5mg/kg)，药物处理组(化合物33，灌胃给药，每天一次，剂量：5mg/kg)，联合给药组(5-fu，剂量：25mg/kg，腹腔注射，每两天一次；化合物33，灌胃给药，每天一次，剂量：5mg/kg)。

(4)ct26结直肠癌裸鼠移植瘤模型

为了验证本发明化合物是否是通过免疫系统发挥抗肿瘤作用，在免疫系统缺陷的小鼠上构建了ct26结肠癌移植瘤模型。

移植ct26结直肠肿瘤的balb/c(nu/nu)裸鼠分为4组，每组6只。模型组(溶剂：pbs+2％的吐温20+2％dmso，灌胃给药，每天一次)，阳性对照组-1(5-fu，剂量：25mg/kg，腹腔注射，每两天一次)，阳性对照组-2(bms-1018，灌胃给药，每天一次，剂量：5mg/kg)，药物处理组(化合物33，灌胃给药，每天一次，剂量：5mg/kg)。

(5)pan02胰腺癌小鼠移植瘤模型

移植pan02胰腺癌的c57bl/6雌鼠分为3组，每组8只。模型组(溶剂：pbs+2％的吐温20+2％dmso，灌胃给药，每天一次)，阳性对照组(bms-1018，灌胃给药，每天一次，剂量：5mg/kg)，药物处理组(化合物33，灌胃给药，每天一次，剂量：5mg/kg)。

4.2实验结果

(1)lewis肺癌小鼠移植瘤模型

实验结果(图3)表明，与模型组相比，实施例化合物33在2mg/kg和5mg/kg给药剂量下都可以显著抑制lewis肺癌小鼠移植瘤的生长，呈现剂量依赖性，并且不影响小鼠的体重。此外，在相同给药剂量下(5mg/kg)，实施化合物33对移植瘤的抑制活性(抑瘤率为47.8％)明显优于对照组bms-1018(抑瘤率为19.6％)。

免疫组化和tunel实验结果表明，与vehicle组相比，实施例化合物33在2mg/kg和5mg/kg剂量下都能够显著促进肿瘤组织中t淋巴细胞的浸润，并且提高ifn-γ的水平，降低pcna蛋白的表达，而且在5mg/kg剂量下，化合物33逆转pd-1/pd-l1介导的免疫抑制作用强于bms-1018对照组。

(2)b16f1黑色素瘤小鼠移植瘤模型

实验结果表明，与模型组相比，实施例化合物33在2mg/kg和5mg/kg剂量下呈现剂量依赖性抑制b16f1黑色素瘤小鼠移植瘤的生长，对小鼠的体重无影响，而且在相同剂量下(5mg/kg)，化合物33对移植瘤的抑制活性优于bms-1018对照组。免疫组化和tunel实验结果表明，实施例化合物33给药组也能够显著促进肿瘤组织中t淋巴细胞的浸润，提高ifn-γ的水平，降低pcna蛋白的表达，并且在相同剂量下效果强于bms-1018。

(3)ct26结直肠癌balb/c小鼠移植瘤模型

实验结果表明，与模型组相比，实施例化合物33能够抑制ct26结直肠癌balb/c小鼠移植瘤的生长，而且与5-fu联合用药后能提高后者的抑瘤率。

(4)ct26结直肠癌裸鼠移植瘤模型

实验结果表明，与模型组相比，化合物33给药组的肿瘤体积和肿瘤质量均无变化，表明实施例化合物对免疫系统缺陷的裸鼠移植瘤不产生抑制作用。相反，5-fu却能够明显抑制裸鼠移植瘤的生长，结合上例实验表明，本发明化合物是通过免疫系统发挥抗肿瘤作用。

(5)pan02胰腺癌小鼠移植瘤模型

实验结果表明，相比于模型组，实施例化合物33在5mg/kg剂量下能有效抑制pan02胰腺癌小鼠移植瘤的生长。免疫组化和tunel实验表明，化合物33能够阻断pd-1/pd-l1介导的免疫抑制作用。

5.本发明化合物对肿瘤微环境t淋巴细胞浸润的影响

t淋巴细胞是人体免疫系统的核心执行者，在肿瘤免疫应答中起重要作用。肿瘤浸润淋巴细胞(til)是指那些离开血流进入到肿瘤中的白细胞。当肿瘤微环境中存在大量的肿瘤浸润淋巴细胞时，表明机体启动了对抗肿瘤的免疫反应。pd-1/pd-l1信号通路的激活会抑制抗肿瘤免疫微环境，导致淋巴细胞的浸润减少。本实验的目的分析本发明化合物对肿瘤微环境中t淋巴细胞浸润的影响。

5.1实验方法

取部分实验4中剥取的肿瘤组织，剪碎转入15ml离心管中，加入胶原酶iv(0.5mg/ml)、dna酶i(0.5mg/ml)，37℃消化30min，过滤掉剩余组织碎片，离心重悬细胞后使用不同通道的cd45、cd3、cd4、cd8流式抗体避光染色30min，流式细胞仪检测。

5.2实验结果

实验结果(图4)表明，与模型组相比，实施例化合物33在2mg/kg和5mg/kg剂量下能够显著促进cd45⁺白细胞、cd45⁺cd3⁺t淋巴细胞、cd8⁺cd45⁺cd3⁺细胞毒性t细胞的浸润，并且呈现剂量依赖性，而对cd4⁺cd45⁺cd3⁺调节性t淋巴细胞的影响很弱。此外，在相同剂量(5mg/kg)下，实施例化合物33促进淋巴细胞浸润的能力强于bms-1018，特别是对cd45⁺cd3⁺cd8⁺细胞毒性t淋巴细胞的浸润增加更为突出。这些实验说明本发明的化合物能够有效地逆转pd-1/pd-l1介导的免疫抑制作用，重塑抗肿瘤免疫微环境。

需要指出的是，本发明中的其他化合物在多种肿瘤类型如ct26、emt6、b16f1、pan02、llc等小鼠移植瘤模型中表现出显著的抗肿瘤作用。例如，实施例化合物3、8、28、30、33、34、36、39、41、43、47和48等在低剂量下(2mg/kg～15mg/kg)便可显著抑制小鼠移植瘤的生长，而且这些化合物能够促进淋巴细胞对肿瘤微环境的浸润，提高肿瘤组织中ifn-γ的分泌，降低pcna蛋白的表达。这些实验说明本发明化合物能够阻断pd-1/pd-l1介导的免疫抑制作用，激活免疫应答起抗肿瘤作用。