一种编码甲状旁腺素蛋白或其片段的核酸分子的制作方法

文档序号:21108258发布日期:2020-06-16 21:30阅读:328来源:国知局
技术特征:

1.一种核酸分子,其包含编码甲状旁腺素(pth)蛋白或其片段的核苷酸序列,以及,编码终止区;所述编码终止区的5’端连接于所述编码pth蛋白或其片段的核苷酸序列的3’端;其中,所述编码终止区包含或由至少两个终止密码子组成,并且所述编码终止区的前两个终止密码子为tgatag;

优选地,所述编码终止区的5’端直接连接于所述编码pth蛋白或其片段的核苷酸序列的3’端;或者,所述编码终止区的5’端通过核苷酸接头连接于所述编码pth蛋白或其片段的核苷酸序列的3’端,并且,所述核苷酸接头不改变所述编码终止区的开放阅读框。

2.权利要求1的核酸分子,其中,所述甲状旁腺素蛋白为人甲状旁腺素蛋白;

优选地,所述pth蛋白的片段包含或由pth蛋白的第1-34位氨基酸残基组成;

优选地,所述pth蛋白的氨基酸序列如seqidno:1所示;或,所述pth蛋白的片段的氨基酸序列如seqidno:2所示;

更优选地,所述编码pth蛋白或其片段的核苷酸序列根据宿主细胞的密码子偏好性进行了密码子优化或未进行优化;

优选地,所述编码pth蛋白的核苷酸序列如seqidno:5或6所示;或,所述编码pth蛋白的片段的核苷酸序列如seqidno:3或4所示。

3.权利要求1或2的核酸分子,其中,所述编码终止区包含2个、3个、4个、5个或更多个终止密码子;

优选地,所述编码终止区包含或者由下述序列组成:tgatagtga(seqidno:19)、tgatagtaa(seqidno:20)、tgatagtag(seqidno:21)或tgatagtgatag(seqidno:22)。

4.权利要求1-3任一项所述的核酸分子,其包含如seqidno:7-16所示的序列。

5.权利要求1-4任一项所述的核酸分子,其中,所述核酸分子还包含编码信号肽的核苷酸序列;

优选地,所述编码信号肽的核苷酸序列位于所述编码pth蛋白或其片段的核苷酸序列的5’端;

优选地,所述编码信号肽的核苷酸序列的3’端连接于所述编码pth蛋白或其片段的核苷酸序列的5’端;

优选地,所述编码信号肽的核苷酸序列的3’端直接连接于所述编码pth蛋白或其片段的核苷酸序列的5’端;或者,所述编码信号肽的核苷酸序列的3’端通过核苷酸接头连接于所述编码pth蛋白或其片段的核苷酸序列的5’端,并且,所述核苷酸接头不改变所述编码pth蛋白或其片段的核苷酸序列的开放阅读框;

优选地,所述信号肽选自pth蛋白的天然信号肽,人生长激素的信号肽和人肝细胞生长因子的信号肽;

优选地,所述信号肽为pth蛋白的天然信号肽;

优选地,所述信号肽具有如seqidno:24所示的氨基酸序列;

优选地,所述编码信号肽的核苷酸序列具有如seqidno:23所示的核苷酸序列;

优选地,所述的核酸分子具有如seqidno:25-34所示的序列。

6.一种载体,其包含权利要求1-5任一所述的核酸分子;优选地,所述载体可以具有选自下列的一个或多个特征:

(1)所述载体选自质粒;噬菌粒;柯斯质粒;人工染色体,例如酵母人工染色体(yac)、细菌人工染色体(bac)或p1来源的人工染色体(pac);噬菌体如λ噬菌体或m13噬菌体;以及,病毒载体,例如逆转录酶病毒载体(例如慢病毒载体)、腺病毒载体、腺相关病毒载体、疱疹病毒载体(如单纯疱疹病毒载体)、痘病毒载体、杆状病毒载体、乳头瘤病毒载体、乳头多瘤空泡病毒载体;

(2)所述载体用于表达(例如,在细胞中体外表达,或者在受试者(例如哺乳动物,例如人)体内表达)所述核酸分子编码的蛋白;

(3)所述载体是用于基因治疗的载体,例如质粒(例如裸质粒),腺病毒载体,腺相关病毒载体,和慢病毒载体。

7.一种宿主细胞,其包含权利要求1-5任一所述的核酸分子或权利要求6的载体;优选地,所述宿主细胞选自原核细胞例如大肠杆菌细胞,以及真核细胞例如酵母细胞,昆虫细胞,植物细胞和动物细胞(如哺乳动物细胞,例如小鼠细胞、人细胞等)。

8.一种药物组合物,其含有权利要求1-5任一所述的核酸分子或权利要求6所述的载体或权利要求7所述的宿主细胞,以及任选地,药学上可接受的载体和/或赋形剂;

优选地,所述药物组合物通过注射进行施用;

优选地,所述药物组合物为注射液或冻干粉剂;

优选地,所述核酸分子或载体或宿主细胞以治疗有效量(例如治疗骨质疏松疾病有效量)存在;

优选地,所述的药物组合物以单位剂量形式存在。

9.权利要求1-5任一所述的核酸分子或权利要求6所述的载体或权利要求7所述的宿主细胞在制备药物组合物中的用途,所述药物组合物用于治疗疾病,其中,所述疾病能够受益于pth蛋白或其片段的施用,例如骨质疏松症,甲状旁腺素功能低下,特发性甲状旁腺功能减退症,低镁血症性甲状旁腺功能减退症。

10.权利要求1-5任一所述的核酸分子或权利要求6所述的载体或权利要求7所述的宿主细胞用于表达或产生pth蛋白或其片段的用途。

11.一种表达或产生pth蛋白或其片段的方法,所述方法包括,在允许蛋白质表达的条件下,培养权利要求7的宿主细胞,以及任选地,回收或纯化所表达的pth蛋白或其片段;

优选地,所述宿主细胞为原核细胞,例如大肠杆菌。


技术总结
本发明涉及一种核酸分子,其包含编码甲状旁腺素(PTH)蛋白或其片段的核苷酸序列和编码终止区。本申请还涉及包含所述核酸分子的载体和宿主细胞。本申请还涉及含有所述核酸分子的药物组合物,以及所述药物组合物的用途。

技术研发人员:聂李亚;许松山;马素永;汤晓闯
受保护的技术使用者:北京诺思兰德生物技术股份有限公司
技术研发日:2020.03.11
技术公布日:2020.06.16
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