一种用生物反应器罐流培养溶瘤腺病毒的工艺优化方法与流程

文档序号:22587034发布日期:2020-10-20 17:55阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用生物反应器罐流培养溶瘤腺病毒的工艺优化方法,其特征在于所述优化方法是将fibra-cel片状载体固定在生物反应器中,通过扩增hek293细胞从而建立培养扩增重组腺病毒的工艺流程。

2.根据权利要求1所述的用生物反应器罐流培养溶瘤腺病毒的工艺优化方法,其特征在于:所述优化方法是建立在对5型腺病毒复制扩增体系全面适应的条件下。

3.根据权利要求2所述的用生物反应器罐流培养溶瘤腺病毒的工艺优化方法,其特征在于:在细胞培养阶段用含10%血清的dmem培养基,采用罐流培养方式,将葡萄糖浓度控制在1-2g/l,培养细胞9-10天后换成含2%血清的dmem培养基,接种病毒,感染5-6小时,病毒接种时至48小时使用含2%血清的dmem培养基,采用罐流培养方式,将葡萄糖浓度控制在0.5-1.5g/l,收获病毒阶段使用无血清培养基,采用罐流培养方式,将葡萄糖浓度控制在0.5-1.5g/l,连续收获5-6天,使优化工艺达到较高的病毒比滴度。

4.根据权利要求1所述的用生物反应器罐流培养溶瘤腺病毒的工艺优化方法,其特征在于:所述生物反应器所用fibra-cel片状载体为200g。

5.根据权利要求2所述的用生物反应器罐流培养溶瘤腺病毒的工艺优化方法,其特征在于:所述的5型腺病毒为重组5型腺病毒载体携带基因il-24的溶瘤腺病毒,自行构建,或不携带外源基因或是携带任何其他目的基因的5型腺病毒,或其他型别腺病毒,接种moi在30-60之间。

6.根据权利要求1所述的用生物反应器罐流培养溶瘤腺病毒的工艺优化方法,其特征在于:所述生物反应器物理参数设定:ph7.0-7.4、温度37℃、溶氧20-60%。


技术总结
本发明涉及生物工程技术领域,是将Fibra‑Cel片状载体固定在生物反应器中,通过扩增HEK293细胞从而建立培养扩增重组腺病毒的一套工艺流程。本发明建立在对5型腺病毒复制扩增体系全面适应的条件下,在细胞培养阶段用含10%血清的DMEM培养基,采用罐流培养方式,将葡萄糖浓度控制在1‑2g/L,病毒接种时至48小时使用含2%血清的DMEM培养基,采用罐流培养方式,将葡萄糖浓度控制在0.5‑1.5g/L,收获病毒阶段使用无血清培养基,采用罐流培养方式,将葡萄糖浓度控制在0.5‑1.5g/L,连续收获5‑6天。该方法可减轻后期纯化难度,不会产生亚批次以适应生物制品的要求,且能达到较高的病毒滴度。

技术研发人员:赵婷;张晓珍;王如意;李成彬;朱哲;范清林;孔圆圆;吴婷婷;王文静;宋礼华
受保护的技术使用者:安徽安科生物工程(集团)股份有限公司
技术研发日:2020.07.14
技术公布日:2020.10.20
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