1.一种深层土中噬菌体的分离方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)将土壤样品与悬浮液混合,超声震荡处理,离心,取上清液,制得噬菌体初提液;
(2)将步骤(1)制得的噬菌体初提液经0.22μm的滤膜过滤,制得噬菌体提取液;
(3)将步骤(2)制得的噬菌体提取液经30kd的超滤膜离心过滤,去除滤出液,制得噬菌体浓缩液;
(4)将步骤(3)制得噬菌体浓缩液、宿主菌菌液和缓冲液混合后,35~38℃静置20~28小时,离心,取上清,经0.22μm的滤膜过滤,取滤液,制得噬菌体。
2.如权利要求1所述的分离方法,其特征在于,所述步骤(1)中,悬浮液为质量百分比浓度为1%的柠檬酸钾缓冲液;进一步优选的,所述所述柠檬酸钾缓冲液每升组份如下:
10g柠檬酸钾、1.44gna2po4、0.24gkhpo4,ph7.0,定溶至1升。
3.如权利要求1所述的分离方法,其特征在于,所述步骤(1)中,土壤样品与悬浮液的质量体积比为1:1,单位g/ml。
4.如权利要求1所述的分离方法,其特征在于,所述步骤(1)中,超声震荡为在0℃、100w、20khz的条件下处理3min,每超声处理1min翻转震荡30秒。
5.如权利要求1所述的分离方法,其特征在于,所述步骤(1)中,离心为在4℃、9000g离心15min。
6.如权利要求1所述的分离方法,其特征在于,所述步骤(3)中,离心为在4℃、5000g离心15min。
7.如权利要求1所述的分离方法,其特征在于,所述步骤(4)中,噬菌体浓缩液:宿主菌菌液:缓冲液的体积比为1:(8~12):(45~55)。
8.如权利要求1所述的分离方法,其特征在于,所述步骤(4)中,宿主菌菌液中宿主菌菌体浓度为od600=0.8。
9.如权利要求1所述的分离方法,其特征在于,所述步骤(4)中,缓冲液为成分如下:
tris–hcl50mm,nacl150mm,mgcl210mm,cacl22mm,ph=7.5。
10.如权利要求1所述的分离方法,其特征在于,所述步骤(4)中,离心为在4℃、9000g离心15min。