一种深层土中噬菌体的分离方法与流程

文档序号:22587033发布日期:2020-10-20 17:55阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种深层土中噬菌体的分离方法,其特征在于,包括如下步骤:

(1)将土壤样品与悬浮液混合,超声震荡处理,离心,取上清液,制得噬菌体初提液;

(2)将步骤(1)制得的噬菌体初提液经0.22μm的滤膜过滤,制得噬菌体提取液;

(3)将步骤(2)制得的噬菌体提取液经30kd的超滤膜离心过滤,去除滤出液,制得噬菌体浓缩液;

(4)将步骤(3)制得噬菌体浓缩液、宿主菌菌液和缓冲液混合后,35~38℃静置20~28小时,离心,取上清,经0.22μm的滤膜过滤,取滤液,制得噬菌体。

2.如权利要求1所述的分离方法,其特征在于,所述步骤(1)中,悬浮液为质量百分比浓度为1%的柠檬酸钾缓冲液;进一步优选的,所述所述柠檬酸钾缓冲液每升组份如下:

10g柠檬酸钾、1.44gna2po4、0.24gkhpo4,ph7.0,定溶至1升。

3.如权利要求1所述的分离方法,其特征在于,所述步骤(1)中,土壤样品与悬浮液的质量体积比为1:1,单位g/ml。

4.如权利要求1所述的分离方法,其特征在于,所述步骤(1)中,超声震荡为在0℃、100w、20khz的条件下处理3min,每超声处理1min翻转震荡30秒。

5.如权利要求1所述的分离方法,其特征在于,所述步骤(1)中,离心为在4℃、9000g离心15min。

6.如权利要求1所述的分离方法,其特征在于,所述步骤(3)中,离心为在4℃、5000g离心15min。

7.如权利要求1所述的分离方法,其特征在于,所述步骤(4)中,噬菌体浓缩液:宿主菌菌液:缓冲液的体积比为1:(8~12):(45~55)。

8.如权利要求1所述的分离方法,其特征在于,所述步骤(4)中,宿主菌菌液中宿主菌菌体浓度为od600=0.8。

9.如权利要求1所述的分离方法,其特征在于,所述步骤(4)中,缓冲液为成分如下:

tris–hcl50mm,nacl150mm,mgcl210mm,cacl22mm,ph=7.5。

10.如权利要求1所述的分离方法,其特征在于,所述步骤(4)中,离心为在4℃、9000g离心15min。


技术总结
本发明涉及一种深层土中噬菌体的分离方法,包括如下步骤:(1)将土壤样品与悬浮液混合,超声震荡处理,离心,取上清液,制得噬菌体初提液;(2)将噬菌体初提液经滤膜过滤,制得噬菌体提取液;(3)将噬菌体提取液经超滤膜离心过滤,去除滤出液,制得噬菌体浓缩液;(4)将噬菌体浓缩液、宿主菌菌液和缓冲液混合后,静置,离心,取上清,经滤膜过滤,取滤液,制得噬菌体。本发明不只是可有效分离深层土的噬菌体,还大大提高了噬菌体分离的效率,并且操作简单、可行性强、成本低,具有广阔的应用前景。

技术研发人员:樊祥宇;崔润博;吴丹辰;朱宸汐;赵云迎;刘玉如;林丛;郑凯旋;李梓群
受保护的技术使用者:济南大学
技术研发日:2020.08.25
技术公布日:2020.10.20
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