一种2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙酮还原酶重组菌株及构建方法和应用与流程

文档序号:24062573发布日期:2021-02-28 23:24阅读:来源:国知局
技术特征:

1.一种2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙酮还原酶重组菌株,其特征在于:所述重组菌株以pET-30a质粒为载体,表达2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙酮还原酶基因;所述2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙酮还原酶基因的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.根据权利要求1所述的2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙酮还原酶重组菌株,其特征在于:所述2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙酮还原酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

3.根据权利要求1所述的2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙酮还原酶重组菌株,其特征在于:所述2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙酮还原酶基因连接到pET-30a质粒的BamH I和XhoI位点,然后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。

4.权利要求1-3任一所述的2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙酮还原酶重组菌株的构建方法,其特征在于:设计2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙酮还原酶基因的上下游引物P1、P2,如SEQ ID NO:3-4所示;将pET-30a质粒BamH I和XhoI双酶切处理后,电泳检验回收;将目的基因与载体pET-30a连接,连接体系:目的基因4μL,载体pET-30a 2μL,Buffer 2μL,连接酶1μL,16℃过夜连接;将构建好的载体通过转化技术导入E.coli BL21(DE3)中,涂布在含卡那霉素的LB平板中,放入37℃培养箱中过夜,将长出来的单菌落进行质粒提取和测序,最终获得含2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙酮还原酶基因的重组工程菌。

5.采用权利要求1-3任一所述的2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙酮还原酶重组菌株发酵生产2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙酮还原酶。

6.根据权利要求5所述的生产2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙酮还原酶的方法,其特征在于:将2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙酮还原酶重组菌株种子液按照2%的接种量转接于LB培养基中,37℃培养至OD600=0.6时,加入50μl 0.5mol/L的IPTG,18℃诱导14h,即得2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙酮还原酶发酵液。

7.根据权利要求5或6所述的生产方法获得的2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙酮还原酶在催化2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙酮生成(S)-2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙醇中的应用。

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