引物组合、试剂盒及其在卵巢癌早期筛查中的应用的制作方法

本发明涉及生物医学领域，具体涉及一种引物组合、试剂盒及其在卵巢癌早期筛查中的应用。

背景技术：

卵巢癌是一种恶性程度很高的妇科肿瘤，因为发现时往往已经是晚期，所以位列妇科癌症病死率之首，是名副其实的妇癌之王。我国癌症5年相对生存率数据显示，卵巢癌为38.9％，宫颈癌为45.4％，子宫癌为55.1％。

卵巢癌如果能够早期发现并及时治疗，能取得很好的治疗效果。例如早期卵巢癌(I期)治疗后的5年生存率可以达到80％-90％，但是一旦到了晚期(III期、IV期)则迅速降低到30％-40％甚至更低。以美国的卵巢癌数据为例，确诊时60％已发生远处转移，其5年相对生存率只有28.8％。

目前临床上卵巢癌的诊断主要通过妇科盆腔检查，血清CA125、人附睾蛋白4等标志物检测，超声、CT、MRI等影像学检查，以及这些手段的联合应用，但这些检测手段在卵巢癌的早期诊断及病情监测中存在一定的局限性。如临床最为常用的CA125，普遍被运用于卵巢癌的诊断、治疗，疗效的评估和复发的监测，但对早期卵巢癌的敏感性较低，对于I期卵巢癌仅有50％～60％的患者出现升高，并且在女性炎症性疾病，如卵巢巧克力囊肿、滤泡囊肿、妊娠和月经等情况下均可以升高，影响对卵巢癌的准确诊断，其特异性和敏感性仍较低。人附睾蛋白4(HE4)可在不同类型的卵巢癌中高表达，特别是上皮性卵巢癌中的浆液型和子宫内膜型。目前HE4被普遍用于上皮性卵巢癌的诊断。同时HE4是继CA125之后第一个获得FDA批准的可用于检测卵巢癌复发患者的生物标志物。尤其是联合应用HE4和CA125时，有助于从存在盆腔肿块的患者中将患有卵巢癌的患者鉴别出来。在诊断恶性卵巢癌时，血清HE4的灵敏度为82.35％，特异度为96.03％，病理诊断符合率为80.29％。但在健康人群中，当HE4血清水平为31.08pmol/L时，其灵敏度为81.91％，特异性为50.79％，可见其特异性较低，容易造成过度医疗干预，给患者带来损失，应用于大范围筛查的话还需进一步综合考量。

同时随着影像技术的发展，影像学检查在卵巢癌的诊断、临床分期，术后随访及复发与转移的诊断中，发挥着越来越重要的作用。各种影像学检查手段对卵巢癌的诊断、分期和术后随访各有优缺点。但受限于对专业人员及设备的依赖性、成本以及检测灵敏度的考虑，不适用于普通人群特别是中低风险人群的筛查。

技术实现要素：

本发明提供一种引物组合、试剂盒及其在卵巢癌早期筛查中的应用。

根据第一方面，在一实施例中，提供一种引物组合，所述引物组合中的各引物含有特异性序列，所述特异性序列含有如SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:278所示序列或其互补序列中的至少一种。

根据第二方面，在一实施例中，提供一种引物组合，含有用于第一轮PCR扩增的第一方面所述引物组合以及用于第二轮PCR扩增的引物组合。

根据第三方面，在一实施例中，提供一种试剂盒，含有第一方面或第二方面所述引物组合。

根据第四方面，在一实施例中，提供第一方面所述引物组合在多重巢式PCR扩增中的应用。

根据第五方面，在一实施例中，提供第一方面所述引物组合在单管PCR扩增中的应用。

根据第六方面，在一实施例中，提供第一方面或第二方面所述引物组合，或第三方面所述试剂盒在癌症早期筛查中的应用。

根据第七方面，在一实施例中，提供一种PCR扩增方法，包括：获取样本的DNA提取产物，采用第一方面所述引物组合对所述样本进行第一轮PCR扩增，然后进行第二轮PCR扩增，获得扩增产物。

依据上述实施例的引物组合，由于特异性序列可以靶向肿瘤驱动基因，实现对突变特点的扩增富集；所设计的特异性引物经过引物互作算法模拟及筛选测试，有效降低了引物互作引起的漏检及数据不均一的情况，并且实现了上述的第一轮扩增引物在1管扩增反应中完成，有效节省了时间、试剂使用量和样品使用量。

附图说明

图1显示为实施例1中的文库片段质控图；

图2显示为实施例1中的第一轮扩增引物结构示意图；

图3显示为实施例1中的质控结果图。

图4显示为实施例2中的Tao brush和plasma样本中阳性检出例数的统计图。

具体实施方式

下面通过具体实施方式结合附图对本发明作进一步详细说明。其中不同实施方式中类似元件采用了相关联的类似的元件标号。在以下的实施方式中，很多细节描述是为了使得本申请能被更好的理解。然而，本领域技术人员可以毫不费力的认识到，其中部分特征在不同情况下是可以省略的，或者可以由其他元件、材料、方法所替代。在某些情况下，本申请相关的一些操作并没有在说明书中显示或者描述，这是为了避免本申请的核心部分被过多的描述所淹没，而对于本领域技术人员而言，详细描述这些相关操作并不是必要的，他们根据说明书中的描述以及本领域的一般技术知识即可完整了解相关操作。

另外，说明书中所描述的特点、操作或者特征可以以任意适当的方式结合形成各种实施方式。同时，方法描述中的各步骤或者动作也可以按照本领域技术人员所能显而易见的方式进行顺序调换或调整。因此，说明书和附图中的各种顺序只是为了清楚描述某一个实施例，并不意味着是必须的顺序，除非另有说明其中某个顺序是必须遵循的。

本文中为部件所编序号本身，例如“第一”、“第二”等，仅用于区分所描述的对象，不具有任何顺序或技术含义。

本文所用术语“引物”或“引物序列”指与靶标核酸序列(例如待扩增的DNA模板)杂交以引发核酸合成反应的短的线性寡核苷酸。引物可以是RNA寡核苷酸、DNA寡核苷酸或嵌合序列。引物可以含有天然的、合成的或修饰的核苷酸。引物长度的上限和下限均凭经验确定。引物长度的下限是在核酸扩增反应条件下与靶标核酸杂交时形成稳定双链体所需的最小长度。非常短的引物(通常少于3-4个核苷酸长度)在所述杂交条件下不能与靶标核酸形成热力学稳定的双链体。上限通常决定于在靶标核酸的非预定核酸序列的区域中形成双链体的概率。适合的引物长度范围通常为约4-40个核苷酸长度。

根据第一方面，在一实施例中，提供一种引物组合，所述引物组合中的各引物含有特异性序列，所述特异性序列含有如SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:278所示序列或其互补序列中的至少一种。

在一实施例中，所述引物组合实现对目标基因序列进行靶向富集，引物互作小，可靶向卵巢癌发生密切的高频驱动基因，可用于检测待测样本中的低频突变，实现卵巢癌的早期筛查。

在一实施例中，所述特异性引物经过引物互作算法模拟及筛选测试，有效降低了引物互作引起的漏检及数据不均一的情况，并且实现了139对引物在1管扩增反应中完成，有效简化操作流程，缩短检测时间，减少样本以及试剂使用量。

在一实施例中，所述引物组合是用于靶向扩增卵巢癌基因的引物组合。

在一实施例中，所述引物组合特异性靶向如下基因中的至少一种：PTEN、TP53、APC、PIK3CA、CTNNB1、KRAS、PIK3R1、NRAS、AKT1、FGFR2、POLE、PPP2R1A、CDKN2A、FBXW7、RNF43、BRAF、MAPK1、EGFR。

在一实施例中，所述引物组合是用于卵巢癌早期检测的引物组合。

在一实施例中，所述引物组合中的各引物还含有与所述特异性序列连接的桥联序列。

在一实施例中，所述桥联序列连接至所述特异性序列的5’端。

在一实施例中，所述桥联序列为通用桥联序列。

在一实施例中，所述引物组合中的引物为上游引物时，所述桥联序列为5’-CTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3’(SEQ ID NO:299)或其互补序列。

在一实施例中，所述引物组合中的引物为下游引物时，所述桥联序列为5’-CTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCT-3’(SEQ ID NO:300)或其互补序列。

在一实施例中，所述引物组合中的引物为上游引物或下游引物时，所述桥联序列与所述特异性序列之间连接有分子标签序列。可以是所有的上游引物均连接有分子标签序列，也可以是所有的下游引物均连接有分子标签序列，也可以是部分上游引物、部分下游引物连接有分子标签序列。

在一实施例中，所述分子标签序列含有6-16个随机碱基，包括但不限于6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个，优选为14个。随机碱基用于区分原始DNA突变与文库扩增及测序过程中引入的假突变，若碱基数目过少则随机性不强，过多则影响引物的扩增效率。

在一实施例中，所述特异性引物的3’端经过修饰。修饰后的引物特异性更强，不易被核酸酶降解，且具有相对均一的Tm值。

在一实施例中，修饰所述特异性引物的3’端的方法包括但不限于硫代修饰、磷酸化、LNA修饰等等中的至少一种。

LNA(Locked Nucleic Acid)是一种类寡核苷酸衍生物，结构中β-D-呋喃核糖的2'-O、4’-C位通过缩水作用形成刚性的结构。LNA核苷酸包括A、C、G、T、U、mC六种碱基，锁核酸(Locked nucleic acid，LNA)是一种经过修饰的RNA，LNA中一部分核糖上的2'与4'碳连结在一起。

在一实施例中，修饰位置是位于所述特异性引物的3’端的倒数第一和第二个核苷酸间的磷酸二酯键。

在一实施例中，所述引物组合中各引物的Tm值为55-65℃，包括但不限于55℃、56℃、57℃、58℃、59℃、60℃、61℃、62℃、63℃、64℃、65℃，优选为58℃。

Tm(解链温度)是指50％双链被解开成单链时的温度。

在一实施例中，所述引物组合为用于多重PCR扩增的引物组合。

根据第二方面，在一实施例中，提供一种引物组合，含有用于第一轮PCR扩增的第一方面所述引物组合以及用于第二轮PCR扩增的引物组合。

在一实施例中，所述用于第二轮PCR扩增的引物组合含有SEQ ID NO:279至SEQ ID NO:298所示序列或其互补序列中的至少一种。

在一实施例中，SEQ ID NO:1所示引物或其互补序列与SEQ ID NO:140所示序列或其互补序列组合为一对上下游引物，SEQ ID NO:2所示引物与SEQ ID NO:141所示序列组合为一对上下游引物，依此类推。SEQ ID NO:1或其互补序列所示引物可以为上游引物，也可以为下游引物，SEQ ID NO:140所示序列或其互补序列可以为上游引物，也可以为下游引物。

根据第三方面，在一实施例中，提供一种试剂盒，含有第一方面或第二方面所述引物组合。

在一实施例中，所述试剂盒为用于卵巢癌早期筛查的试剂盒。

在一实施例中，卵巢癌早期患者是指无临床症状或不典型症状的卵巢癌患者，肿瘤一般为IA/B期。癌症分期标准可参考的国际妇产科联盟(FIGO)的手术病理分期。

在一实施例中，所述试剂盒还含有PCR扩增所需的其他试剂，包括但不限于PCR扩增酶、dNTP、去离子水、PCR buffer等等中的至少一种。

根据第四方面，在一实施例中，提供第一方面或第二方面所述引物组合，或第三方面所述试剂盒在多重巢式PCR扩增中的应用。

在一实施例中，所述第一方面所述引物组合用于第一轮PCR扩增。

根据第五方面，在一实施例中，提供第一方面所述引物组合在单管多重PCR扩增中的应用。单管PCR扩增可有效节约时间、试剂和样本，提高检测效率。

根据第六方面，在一实施例中，提供第一方面或第二方面所述引物组合，或第三方面所述试剂盒在癌症早期筛查中的应用。进行癌症早期筛查时，采用上述引物组合或试剂盒获得的是用于测序的扩增产物，并且，基于该扩增产物获得的结果仅仅是中间参考结果，单纯依据该测序结果并不能直接得出最终的疾病诊断结果，还需要结合现有的细胞学、影像学、血清学等检查方法，才能得到最终的诊断结果，因此，上述应用不属于疾病的诊断治疗方法。

在一实施例中，所述癌症包括卵巢癌。

根据第七方面，在一实施例中，提供一种PCR扩增方法，包括：获取样本的DNA提取产物，采用第一方面所述引物组合对所述样本进行第一轮PCR扩增，然后进行第二轮PCR扩增，获得扩增产物。所得扩增产物即可用于上机测序。

在一实施例中，第一轮PCR扩增时，第一轮PCR扩增所需的引物被加入同一反应容器中进行扩增反应。

在一实施例中，对第一轮PCR扩增产物进行第二轮通用引物扩增，使得不同样本带上用于区分样本的分子标签(index barcode)并加上测序引物，从而获得可供上机的测序引物。

在一实施例中，还包括在第一轮PCR扩增后，对扩增产物进行纯化，然后对纯化的扩增产物进行第二轮PCR扩增。纯化的作用是去除其中剩余的引物、dNTP、酶等杂质。

在一实施例中，采用磁珠对第一轮扩增产物进行纯化。磁珠可以从市场上购买得到。

在一实施例中，所述样本包括但不限于血浆样本、血清样本、肿瘤组织脱落细胞样本等等中的至少一种。

在一实施例中，所述样本的来源包括但不限于宫颈、卵巢、子宫内膜、输卵管、胸腹水等等中的至少一种。

在一实施例中，本发明的主要目的在于建立一种非侵入性的卵巢癌早期辅助筛查方法，可以结合现有的细胞学、影像学、血清学等检查方法，从而提高上述癌症的早期筛查覆盖度和检出率，做到早发现早诊断早治疗，以提高患者生存期及生活质量。

在一实施例中，提供一种基于高通量靶向测序技术检测卵巢癌早期筛查的多重PCR引物、试剂盒及其方法，建立了一种基于多重PCR扩增和高通量测序的血浆游离DNA低频突变检测方法。通过选取卵巢癌发生密切相关的高频突变基因，设计特异性扩增引物，同时在引物上游设计加入UMI(单分子标签)，从而有效消除背景噪音，降低因扩增、测序等因素带来的突变。通过上述建立的血浆低频突变检测技术对高危人群外周血中检测其中的肿瘤游离DNA中的突变信息，从而实现卵巢癌的早期筛查。

在一实施例中，本发明能够同时检测多个样本中的多个卵巢癌高频驱动基因，并且采用在特异性PCR引物外侧引入分子标签序列以消除因PCR及测序过程中引物的假阳性，提高了检测灵敏度和准确率。

在一实施例中，选取了卵巢癌发生密切相关的高频驱动基因，并设计特异性引物对突变热点进行扩增富集，通过对待测样本中含有的肿瘤低频突变进行检测以实现卵巢癌的早期筛查。

在一实施例中，所设计的特异性引物经过引物互作算法模拟及筛选测试，有效降低了引物互作引起的漏检及数据不均一的情况，并且实现了上述的139对引物在1管扩增反应中完成；

在一实施例中，所设计的特异性引物中加入了分子标签序列，能够有效降低因文库扩增及测序引入导致的假阳性，对低频突变的检测灵敏度下限可达0.05％，高于常见的肿瘤液体活检的0.1％。

在一实施例中，本发明的引物组合及其试剂盒适用于血浆游离DNA的检测，也适用于肿瘤组织或者卵巢/宫颈脱落细胞样本的检测，在同时对受检者的血浆游离DNA和卵巢脱落细胞样本同时进行检测并取并集的情况下，能显著提高对早期卵巢癌筛查的灵敏度和准确性。

实施例1

本实施例提供卵巢癌的筛查方法，包括：针对卵巢癌发生相关的肿瘤驱动基因进行筛选，选择PTEN、TP53、APC、PIK3CA、CTNNB1、KRAS、PIK3R1、NRAS、AKT1、FGFR2、POLE、PPP2R1A、CDKN2A、FBXW7、RNF43、BRAF、MAPK1、EGFR等18个基因所设计的139对特异性引物，进行第一轮PCR扩增，每对特异性引物的扩增目标区域大小为100-170bp；经过第二轮扩增加上index barcode及测序接头序列后，出库文库长度约300bp。如图1所示为文库片段质控图，横坐标是毛细管电泳时间，经电泳中引入的DNA ladder换算为片段长度，从横坐标可看出文库片段长度约为300bp；纵坐标为荧光信号强度，根据引入的DNA marker换算为文库浓度(ng/μL)，证明文库出库浓度达到测序要求。

如图2所示为第一轮扩增引物的结构示意图，第一轮PCR扩增时所用的引物序列结构从5’到3’端依次包含通用桥联序列、分子标签序列和特异性引物序列。不同捕获区间的引物序列在通用桥联序列部分是一致的，该序列与带有index barcode测序接头的牵连序列相同或者互补，用于第二轮PCR扩增时文库的扩增及延长。本实施例的分子标签序列为14个碱基，用于区分原始DNA突变与文库扩增及测序过程中引入的假突变。

分子标签进行突变信号识别及矫正的原理如下：在特异性引物捕获目标片段时，携带最原始突变的产物带有不同的分子标签序列，若突变对应的读序列上的分子标签序列是一致的，则这个突变极有可能是文库扩增过程中引入的假阴性。分子标签序列的技术原理大致是：先将分子标签添加到靶向富集的扩增产物DNA分子，然后进行二轮扩增延长文库并带上测序接头，然后经上机高深度测序。在测序分析过程中，通过分子标签序列对扩增子进行聚类分析，在高深度测序过程中，DNA聚合酶扩增产生的错误和测序过程中碱基误判往往是随机零散分布的，统计一致性序列后这些随机产生的错误序列会被过滤。只保留了带有多种分子标签的原始突变序列，如此便得到了矫正后的精确序列，可用于对整个样本中的突变频率进行“绝对定量。”

使用HD780和HD786两个标准品DNA(购自深圳菁良基因科技有限公司)，以40ng为起始投入量，并且对突变进行梯度稀释，稀释后的肿瘤突变频率分别为5％、1％、0.5％、0.2％、0.1％，然后进行分别建库及测序，以评估对阳性突变的检测下限及阳性一致性。

使用含有SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:278所示特异性引物的引物组合进行第一轮目标区域扩增富集，PCR反应体系为：特异性的上游引物与下游引物混合物2μL；DNA模板40ng；2xPCR MIX 12.5μL；无核酸酶水将体积补足到25μL。其中，2×PCR MIX购自北京全式金生物技术有限公司。

PCR扩增反应程序为：

72℃5min：1个循环。

利用纯化磁珠对各个样本的扩增产物进行纯化，去除其中剩余的引物、dNTP和酶等杂质；其中，磁珠为购自BECKMAN COULTER(美国贝克曼库尔特有限公司)的Agencourt AMPure XP磁珠。

使用第二轮扩增引物对纯化的第一轮扩增纯化产物进行第二轮扩增，延长文库长度并加上测序接头序列。

第二轮PCR反应体系为：2×PCR MIX 12.5μL，第一轮扩增纯化产物5μL，通用第二轮扩增引物混合液2μL，剩余体积用无核酸酶水补足至25μL。其中每个样本所使用的第二轮扩增引物含有不同index barcode序列，以在上机过程中对样本进行区分。

第二轮扩增的扩增程序为：

72℃5min：1个循环。

获得上述10个样本的二次扩增产物后，每个样本取5μL进行混合，然后使用1.2X磁珠进行纯化，纯化产物使用Qubit 3.0进行浓度质控，并使用Agilent 2100进行片段质控，质控结果如图3。

图3的橫坐标为样本编号，代表不同样本文库，纵坐标为片段长度(bp)。图3的结果表明，大部分文库均能成功且文库片段单一，无非特异扩增。

质控合格后，采用Illumina测序平台上机测序，测序策略为PE150，每个样本10G数据。

分析比对不同突变频率下，本实施例的方法在标准品DNA中检测的灵敏度和特异性，如表3所示。

灵敏度为在特定数据量情况下实施例中标准品经本发明所述方法测序所检出的突变数目与标准品本身所具有的突变数据的比值(或百分比)。

特异性为100％减去本发明所述方法测序检出的在标准品中本不存在的突变位点数目与总检出位点数目的百分比。

灵敏度、特异性可以表征为百分比，也可以表征为小数。

表3中，“整体”是指不同标准品及其技术重复的综合统计结果。

表3中，样本属性所在列中的数值分别是突变频率和平均测序深度，突变频率是标准品DNA经梯度稀释后的模拟突变频率样本。

表3

从表3可以看出，本实施例的方法用于检测不同突变频率的样本时，均具有较高的灵敏度和特异性。

实施例2

选取134例受试者，根据临床诊断结果，其中有83例卵巢癌阳性受试者，有51例卵巢癌阴性受试者，对各个受试者分别进行血浆游离DNA和Tao Brush子宫内膜取样器采集的脱落细胞突变检测，检测方法参照实施例1进行，分别使用单一的血浆游离DNA所含突变、卵巢脱落细胞所含突变进行评估。

图4所示为Tao brush和plasma样本中阳性检出例数的统计图，其中，Tao Brush表示Tao Brush子宫内膜取样器采集的脱落细胞样品，Plasma表示血浆样品。图4中，25是单独在脱落细胞样本中检测到的阳性突变的样本例数，13是同一受试者在其脱落细胞和血浆中均检测到阳性的样本例数；23是只在受试者血浆中检测到肿瘤突变的样本例数。

检测出的阳性样本中，出现两例假阳性结果，均来自血浆样本，可能是扩增或测序环节引入了假突变。

以血浆游离DNA样本类型为例，83例卵巢癌阳性受试者中，共有36例患者的血浆样本中检测出肿瘤突变，单独使用血浆样本进行阳性判读的阳性患者36例除以总共临床确诊的83例阳性受试者，得到血浆样本的阳性一致性为36÷83≈43％。脱落细胞样本检测结果一致性的计算方式与此相同，为38÷83≈46％。

从图4可知，血浆样本的一致性约为43％，脱落细胞样本的一致性约为46％；综合血浆游离DNA和Tao Brush采集的脱落细胞的突变结果进行判读，进行卵巢癌辅助诊断，该方法的检测灵敏度约为73.5％，特异性(也称特异度)约为98.5％。

灵敏度73.5％是所有卵巢癌阳性受试者(包括血浆游离DNA和脱落细胞样本)的的检测结果中，同时在两种样本类型以及其中一个样本类型中检测出肿瘤突变的病例数除以总阳性受试者例数所得的百分比，即(25+13+23)÷83≈73.5％；特异性为1减去检出的2例假阳性病例数除以总受试者例数所得的百分比，即1-(2÷134)*100％≈98.5％。

本实施例的方法为基于高通量测序平台的目标区域捕获测序技术，通过标准品及批量样本检测评估，本实施例所开发的方法的建库成功率大于99.5％，捕获效率大于40％，在特异性大于90％的情况下，其检测灵敏度低至1‰。

建库成功率是统计所有标准品及实施例样本中，所有成功建库并获得合格的测序数据的样本例数除以用于建库的样本总例数。

捕获效率是数据分析环节中，比对到待测基因区间的数据量比上总的测序数据量，即有效数据。

以上应用了具体个例对本发明进行阐述，只是用于帮助理解本发明，并不用以限制本发明。对于本发明所属技术领域的技术人员，依据本发明的思想，还可以做出若干简单推演、变形或替换。

SEQUENCE LISTING

<110> 深圳乐土生物科技有限公司

<120> 引物组合、试剂盒及其在卵巢癌早期筛查中的应用

<130> 20I30317

<160> 300

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

acacccccag gattcttaca g 21

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

gatgtggctc gccaattaac 20

<210> 3

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

agccacaggc tcccagac 18

<210> 4

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

gctgcatatt tcagatattt ctttcc 26

<210> 5

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

ggatttcctg cagaaagact tg 22

<210> 6

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

aatagttgtt ttagaagata tttgcaagc 29

<210> 7

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 7

aagattcagg caatgtttgt tagtatt 27

<210> 8

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 8

cagtaagata cagtctatcg ggtttaagt 29

<210> 9

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 9

tttcttattc tgaggttatc tttttacca 29

<210> 10

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 10

ccataaccca ccacagctag a 21

<210> 11

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 11

gcaattcact gtaaagctgg aaa 23

<210> 12

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 12

aaacccaaaa tctgttttcc aa 22

<210> 13

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 13

tcaatttggc ttctcttttt tttc 24

<210> 14

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 14

gcgctatgtg tattattata gctacctg 28

<210> 15

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 15

gctacctgtt aaagaatcat ctgga 25

<210> 16

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 16

aggcatttcc tgtgaaataa tactg 25

<210> 17

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 17

tgtggtctgc cagctaaagg 20

<210> 18

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 18

ttgagttccc tcagccgtta 20

<210> 19

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 19

tttttttttt aggacaaaat gtttcac 27

<210> 20

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 20

tctatgtgat caagaaatcg atagca 26

<210> 21

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 21

tttaacaaaa aatgatcttg acaaagc 27

<210> 22

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 22

tgggttttca ttttaaattt tctttc 26

<210> 23

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 23

tagaggagcc gtcaaatcca 20

<210> 24

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 24

ggtccatttt cagtttattc aagttta 27

<210> 25

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 25

gcagccagaa atgttttggt a 21

<210> 26

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 26

gcagagtatt tgggcgaatg 20

<210> 27

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 27

gctgggcatc actgtaaacc 20

<210> 28

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 28

ggaaataaat gtgatttgcc ttct 24

<210> 29

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 29

ttctcccttc tcaggattcc tac 23

<210> 30

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 30

tttacctcta ttgttggatc atattcg 27

<210> 31

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 31

gtctgtgtgg tgcccagttt 20

<210> 32

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 32

cccatcccag gagcttactt 20

<210> 33

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 33

tccttgtagc caatgaaggt g 21

<210> 34

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 34

gccacctgaa gtccaaaaag 20

<210> 35

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 35

atgtcatctc tcctccctgc t 21

<210> 36

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 36

gttccgagag ctgaatgagg 20

<210> 37

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 37

ccctggctcc ttcccag 17

<210> 38

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 38

aagaagaaaa cggcattttg ag 22

<210> 39

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 39

ttttatcacc tttccttgcc tct 23

<210> 40

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 40

cgtgtttgtg cctgtcctg 19

<210> 41

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 41

tgcctcttgc ttctcttttc c 21

<210> 42

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 42

tggctctgac tgtaccacca tc 22

<210> 43

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 43

tgtgatgatg gtgaggatgg 20

<210> 44

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 44

gtggaaggaa atttgcgtgt 20

<210> 45

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 45

gtccccaggc ctctgatt 18

<210> 46

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 46

gccatggcca tctacaagc 19

<210> 47

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 47

ctccgtcatg tgctgtgact 20

<210> 48

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 48

gccctgactt tcaactctgt ct 22

<210> 49

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 49

gcattgaagt ctcatggaag c 21

<210> 50

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 50

ctgcaccagc agctcctac 19

<210> 51

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 51

agctcccaga atgccagag 19

<210> 52

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 52

gcaatggatg atttgatgct g 21

<210> 53

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 53

tgactgctct tttcacccat c 21

<210> 54

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 54

agccccctag cagagacct 19

<210> 55

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 55

ccttccaatg gatccactca c 21

<210> 56

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 56

cgacacccac agaggaaaag 20

<210> 57

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 57

aatgccagtg atgacgacaa 20

<210> 58

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 58

acatggggat gatctcactc tt 22

<210> 59

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 59

ttcccttctg agagtgtcag tgt 23

<210> 60

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 60

acattcaacc cacacaagag g 21

<210> 61

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 61

gccatggaac cagacagaaa 20

<210> 62

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 62

ccccctccat caacttcttc 20

<210> 63

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 63

ttattccaga cgcatttcca c 21

<210> 64

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 64

caatgaatta agggaaaatg acaaa 25

<210> 65

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 65

gcatgccaat ctcttcataa atc 23

<210> 66

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 66

tttgatgaca ttgcatacat tcg 23

<210> 67

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 67

ttgagacagg ccagtgttta cat 23

<210> 68

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 68

ttgtttttct gtttctccct ctg 23

<210> 69

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 69

gaagtcccaa ccatgacaag a 21

<210> 70

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 70

aaaccttaag atgagcattg ttttg 25

<210> 71

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 71

tcagggaaga agtgaatgaa aaa 23

<210> 72

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 72

gggttttggg ctgatattaa aac 23

<210> 73

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 73

tgtttccatg tcagctattt tgtt 24

<210> 74

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 74

tctaggatca agttgtcaaa gaaga 25

<210> 75

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 75

agataatatt gaagctgtag ggaaaaaa 28

<210> 76

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 76

tgcagtaaga gattgttcta tgaaagg 27

<210> 77

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 77

ccaaatgaaa aggacagcta ttg 23

<210> 78

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 78

tttgaagaac agtgccagac c 21

<210> 79

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 79

tttcttttgc ctgcaggatt 20

<210> 80

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 80

ttgacagtag aagaagattg gaagaa 26

<210> 81

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 81

cctgaattgt agcaatcacc aa 22

<210> 82

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 82

gatgaagatt tgccccatca 20

<210> 83

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 83

cccaaggcat ctcatcgtag 20

<210> 84

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 84

tgattatgtt tttgacacca atcg 24

<210> 85

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 85

caacatgact gtcctttcac ca 22

<210> 86

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 86

tgttacccag ctcctcttca tc 22

<210> 87

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 87

gagaacgcgg aattggtcta 20

<210> 88

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 88

ggcaactacc atccagcaac 20

<210> 89

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 89

gccaaagtca tggaagaagt g 21

<210> 90

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 90

gtattctaat ttggcataag gcataga 27

<210> 91

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 91

aagtcggaaa attcaaatag gaca 24

<210> 92

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 92

gttctatgcc ttatgccaaa ttaga 25

<210> 93

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 93

tgatggttat ggtaaaagag gtca 24

<210> 94

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 94

aagatgatga aagtaagttt tgcagtt 27

<210> 95

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 95

agccgaccta gcccataaaa 20

<210> 96

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 96

ggatgataat gatggagaac tagataca 28

<210> 97

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 97

agatgagcag ttgaactctg gaa 23

<210> 98

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 98

atgtggttgg aacttgaggt g 21

<210> 99

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 99

tcgatttgtt tctgaaccat tg 22

<210> 100

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 100

attttggaca gcaggaatgt g 21

<210> 101

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 101

ccaatggttc agaaacaaat cg 22

<210> 102

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 102

tttgttggtc tctcttcttc ttcat 25

<210> 103

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 103

tcaataggct gatccacatg ac 22

<210> 104

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 104

aagaagagag accaacaaat tatagca 27

<210> 105

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 105

cggttttact gctttgtcca g 21

<210> 106

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 106

ttccttcatc acagaaacag tca 23

<210> 107

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 107

ccgaacatat gtcttcaagc ag 22

<210> 108

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 108

gaaaaacata ttggagtatc ttctacaca 29

<210> 109

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 109

cttgcaaagt ttcttctatt aaccaag 27

<210> 110

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 110

gatgtagttc attatcatct ttgtcatca 29

<210> 111

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 111

gtgctgtgac actgctggaa 20

<210> 112

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 112

ggtcagctga agatcctgtg a 21

<210> 113

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 113

agaatcagcc aggcacaaag 20

<210> 114

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 114

ggtgctcaga cacccaaaag 20

<210> 115

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 115

caggagaccc cactcatgtt 20

<210> 116

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 116

gctccgttca gagtgaacca t 21

<210> 117

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 117

catgccacca agcagaagta 20

<210> 118

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 118

ctcaaacagc tcaaaccaag c 21

<210> 119

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 119

agcactcagg ctggatgaac 20

<210> 120

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 120

tttgccacgg aaagtactcc 20

<210> 121

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 121

gagcctcgat gagccattt 19

<210> 122

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 122

gggaatgaaa cagaatcaga gc 22

<210> 123

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 123

aaaaccaaga gaaagaggca gaa 23

<210> 124

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 124

aggacctatt agatgattca gatgatg 27

<210> 125

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 125

caacctgttt tgtgatggta gaag 24

<210> 126

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 126

tgtgccaggg accttacct 19

<210> 127

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 127

ctggatccca gaaggtgaga 20

<210> 128

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 128

cgatctgcac acaccagttg 20

<210> 129

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 129

tccctggtgt caggaaaatg 20

<210> 130

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 130

tgttttcctt tacttactac acctcaga 28

<210> 131

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 131

tgtgccacac atctttgacc 20

<210> 132

<211> 16

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 132

aggagctggg ccatcg 16

<210> 133

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 133

cttcctggac acgctggt 18

<210> 134

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 134

gaccccgcca ctctcac 17

<210> 135

<211> 16

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 135

ccgagtggcg gagctg 16

<210> 136

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 136

tggctctgac cattctgttc t 21

<210> 137

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 137

gggtcgggta gaggaggtg 19

<210> 138

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 138

agccttcggc tgactgg 17

<210> 139

<211> 16

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 139

ggggagagca ggcagc 16

<210> 140

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 140

cgcctgtcct catgtattgg 20

<210> 141

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 141

gattgtcagt gcgcttttcc 20

<210> 142

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 142

tgacagaaag gtaaagagga gca 23

<210> 143

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 143

catcatcaat attgttcctg tatacgc 27

<210> 144

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 144

tcttttctaa atgaaaacac aacatga 27

<210> 145

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 145

ttaatggtgg ctttttgttt gtt 23

<210> 146

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 146

gcaattaaat ttggcggtgt 20

<210> 147

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 147

ttttaaactt ttcttttagt tgtgctga 28

<210> 148

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 148

catgattgtc atcttcactt agcc 24

<210> 149

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 149

gcacatatca ttacaccagt tcgtc 25

<210> 150

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 150

tggtccttac ttccccatag aa 22

<210> 151

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 151

aggcacaaga ggccctagat 20

<210> 152

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 152

cactggtcta taatccagat gattctt 27

<210> 153

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 153

cgccactgaa cattggaata g 21

<210> 154

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 154

ggaaggatga gaatttcaag cac 23

<210> 155

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 155

tgaacttgtc ttcccgtcgt 20

<210> 156

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 156

gttctgtttg tggaagaact ctacttt 27

<210> 157

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 157

tttggatatt tctcccaatg aaag 24

<210> 158

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 158

tgcacgctct atactgcaaa tg 22

<210> 159

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 159

aagtatcggt tggctttgtc ttt 23

<210> 160

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 160

acaagtcaac aacccccaca 20

<210> 161

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 161

aggttcattg tcactaacat ctggt 25

<210> 162

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 162

ctgatcttca tcaaaaggtt cattc 25

<210> 163

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 163

ctgacaccac tgactctgat cc 22

<210> 164

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 164

actgccatcg acttacattg g 21

<210> 165

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 165

tctggtgtca gagatggaga tg 22

<210> 166

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 166

tcttccctct ctccaccaga 20

<210> 167

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 167

tttcagtgtt acttacctgt cttgtctt 28

<210> 168

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 168

tgtactggtc cctcattgca c 21

<210> 169

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 169

tgactgaata taaacttgtg gtagttgg 28

<210> 170

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 170

gactgcccac aggaaggtaa 20

<210> 171

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 171

tggcatttga cattgagacg 20

<210> 172

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 172

agggtctgac gggtagagtg t 21

<210> 173

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 173

gaggctgtca gtggggaac 19

<210> 174

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 174

agtctgagtc aggcccttct g 21

<210> 175

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 175

taggaaggca ggggagtagg 20

<210> 176

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 176

cttctccccc tcctctgttg 20

<210> 177

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 177

ccagccaaag aagaaaccac 20

<210> 178

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 178

caagacttag tacctgaagg gtgaa 25

<210> 179

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 179

gcttcttgtc ctgcttgctt 20

<210> 180

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 180

gcggagattc tcttcctctg t 21

<210> 181

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 181

gtggcaagtg gctcctga 18

<210> 182

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 182

tcatcttggg cctgtgttat c 21

<210> 183

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 183

cttaacccct cctcccagag 20

<210> 184

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 184

cgaaaagtgt ttctgtcatc ca 22

<210> 185

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 185

accagccctg tcgtctctc 19

<210> 186

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 186

caacaagatg ttttgccaac tg 22

<210> 187

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 187

gggggtgtgg aatcaacc 18

<210> 188

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 188

cccttcccag aaaacctacc 20

<210> 189

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 189

cagaatgcaa gaagcccaga 20

<210> 190

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 190

tgggaaggga cagaagatga 20

<210> 191

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 191

cggtgtagga gctgctgg 18

<210> 192

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 192

tcatctggac ctgggtcttc 20

<210> 193

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 193

cagcccaacc cttgtcctt 19

<210> 194

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 194

actgccttcc gggtcact 18

<210> 195

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 195

ggaccaagga tatgccacac 20

<210> 196

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 196

tgtgtagggc gaagtgtgag 20

<210> 197

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 197

tacttccgga acctgtgctc 20

<210> 198

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 198

tggtgatgcc cactctgc 18

<210> 199

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 199

atctatgtcc ctgaagcagc a 21

<210> 200

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 200

cctcaggatt gcctttacca 20

<210> 201

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 201

gaaaaagccg aaggtcacaa 20

<210> 202

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 202

acattcacgt aggttgcaca aa 22

<210> 203

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 203

ctccatttta gcacttacct gtgac 25

<210> 204

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 204

tccaaagcct cttgctcagt 20

<210> 205

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 205

gatccaatcc atttttgttg tccag 25

<210> 206

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 206

cagtctctgg atcccacacc 20

<210> 207

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 207

ctgcaacatg acccatcaaa 20

<210> 208

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 208

cggacactca aagtgtggaa 20

<210> 209

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 209

cattttagta gacgcatctc gtacc 25

<210> 210

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 210

cagctatatt ccctggctta cct 23

<210> 211

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 211

ccatatttcc catctcgatg aa 22

<210> 212

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 212

tgtaattttt tccctacagc ttcaa 25

<210> 213

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 213

ctgggatgtg cgggtatatt 20

<210> 214

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 214

aaaactcacc tgggatgtgc 20

<210> 215

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 215

gggtctggca ctgttcttca 20

<210> 216

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 216

ttctttctca ttgccttcac g 21

<210> 217

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 217

agcacaagaa caagggaaac a 21

<210> 218

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 218

tactcagctg cctgcttctt c 21

<210> 219

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 219

tggtctctcg tctttctcag c 21

<210> 220

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 220

acgtatgaac agcattaaac caga 24

<210> 221

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 221

tctcccggac aagaaaagtg 20

<210> 222

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 222

aggacagtca tgttgccagt att 23

<210> 223

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 223

gaagaggagc tgggtaacac tg 22

<210> 224

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 224

tagaccaatt ccgcgttctc 20

<210> 225

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 225

aagttcctgg attttctgtt gct 23

<210> 226

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 226

ccatgacttt ggcaatctgg 20

<210> 227

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 227

cttctgtctt cctgagaggt atgaa 25

<210> 228

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 228

gtgtatgggc agcagagctt 20

<210> 229

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 229

tgtgtgacag atgagagaaa tgc 23

<210> 230

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 230

tgacctcttt taccataacc atca 24

<210> 231

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 231

ggattcaatc gagggtttca 20

<210> 232

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 232

tgcactatgt attttatggg ctaggt 26

<210> 233

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 233

tggtgtatct agttctccat cattatca 28

<210> 234

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 234

tgaaggactt tgccttccag 20

<210> 235

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 235

gtttgggtct tgcccatct 19

<210> 236

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 236

ccttgattgt ctttgctcac ttt 23

<210> 237

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 237

gacccaaaca cataatagaa gatgaa 26

<210> 238

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 238

cctgtttata ctgagagcac tgatga 26

<210> 239

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 239

ttcttgacac aaagactggc ttac 24

<210> 240

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 240

tcttcagagt aacgttcact ataattgg 28

<210> 241

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 241

tcaaaatgta agccagtctt tgtg 24

<210> 242

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 242

tgataagcct accaattata gtgaacg 27

<210> 243

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 243

aaaatgactg tttctgtgat gaagg 25

<210> 244

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 244

cgtcatgtgg atcagcctat t 21

<210> 245

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 245

tgattctgcc tcttggcatt a 21

<210> 246

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 246

agccttttga ggctgaccac 20

<210> 247

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 247

ccatccaagt tctgcacaga gt 22

<210> 248

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 248

tgattacatc ctatttcatc ttcagc 26

<210> 249

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 249

gctgacctag ttccaatctt ttctt 25

<210> 250

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 250

cagacgacac aggaagcaga 20

<210> 251

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 251

tcgctcctga agaaaattca a 21

<210> 252

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 252

aacatgagtg gggtctcctg 20

<210> 253

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 253

ctggcaatcg aacgactctc 20

<210> 254

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 254

atgccactta ccattccact g 21

<210> 255

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 255

aggaggtggt ggaggtgttt 20

<210> 256

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 256

gcagcttgct taggtccact c 21

<210> 257

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 257

agcatctgga agaacctgga 20

<210> 258

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 258

ggacctaagc aagctgcagt aa 22

<210> 259

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 259

cccattgtca ttttcctgaa ctg 23

<210> 260

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 260

tggttttcat ttgattcttt aggc 24

<210> 261

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 261

tcaatatcat catcatctga atcatcta 28

<210> 262

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 262

ttggcatggc agaaataata ca 22

<210> 263

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 263

ggtggaggta attttgaagc ag 22

<210> 264

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 264

ccatgccaac aaagtcatca 20

<210> 265

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 265

ggagaagctc ccaaccaag 19

<210> 266

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 266

cccacacagc aaagcagaa 19

<210> 267

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 267

gcatctgcct cacctccac 19

<210> 268

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 268

gcagcatgtc aagatcacag at 22

<210> 269

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 269

aactgttcaa actgatggga cc 22

<210> 270

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 270

ctgtaggacc ttcggtgact g 21

<210> 271

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 271

acaaattctc agatcatcag tcctc 25

<210> 272

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 272

gcaggtaccg tgcgacat 18

<210> 273

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 273

gctcctcagc caggtcca 18

<210> 274

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 274

caccagcgtg tccaggaag 19

<210> 275

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 275

gggtcgggtg agagtgg 17

<210> 276

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 276

ctcccgctgc agaccct 17

<210> 277

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 277

ggcctccgac cgtaactatt 20

<210> 278

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 278

cacctcctct acccgaccc 19

<210> 279

<211> 53

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 279

caagcagaag acggcatacg agattgcatg acgtgactgg agttcagacg tgt 53

<210> 280

<211> 53

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 280

caagcagaag acggcatacg agattgctat cggtgactgg agttcagacg tgt 53

<210> 281

<211> 53

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 281

caagcagaag acggcatacg agatcacaag cagtgactgg agttcagacg tgt 53

<210> 282

<211> 53

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 282

caagcagaag acggcatacg agattcgctg atgtgactgg agttcagacg tgt 53

<210> 283

<211> 53

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 283

caagcagaag acggcatacg agatcgcttt gtgtgactgg agttcagacg tgt 53

<210> 284

<211> 53

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 284

caagcagaag acggcatacg agatccgatg aagtgactgg agttcagacg tgt 53

<210> 285

<211> 53

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 285

caagcagaag acggcatacg agattgacca cagtgactgg agttcagacg tgt 53

<210> 286

<211> 53

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 286

caagcagaag acggcatacg agatgaagcc atgtgactgg agttcagacg tgt 53

<210> 287

<211> 53

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 287

caagcagaag acggcatacg agatttctgg tggtgactgg agttcagacg tgt 53

<210> 288

<211> 53

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 288

caagcagaag acggcatacg agatccgaaa acgtgactgg agttcagacg tgt 53

<210> 289

<211> 53

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 289

caagcagaag acggcatacg agatcgaaaa gggtgactgg agttcagacg tgt 53

<210> 290

<211> 53

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 290

caagcagaag acggcatacg agataaccag ctgtgactgg agttcagacg tgt 53

<210> 291

<211> 57

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 291

aatgatacgg cgaccaccga gatctacact atagcctaca ctctttccct acacgac 57

<210> 292

<211> 57

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 292

aatgatacgg cgaccaccga gatctacaca tagaggcaca ctctttccct acacgac 57

<210> 293

<211> 57

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 293

aatgatacgg cgaccaccga gatctacacc ctatcctaca ctctttccct acacgac 57

<210> 294

<211> 57

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 294

aatgatacgg cgaccaccga gatctacacg gctctgaaca ctctttccct acacgac 57

<210> 295

<211> 57

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 295

aatgatacgg cgaccaccga gatctacaca ggcgaagaca ctctttccct acacgac 57

<210> 296

<211> 57

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 296

aatgatacgg cgaccaccga gatctacact aatcttaaca ctctttccct acacgac 57

<210> 297

<211> 57

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 297

aatgatacgg cgaccaccga gatctacacc aggacgtaca ctctttccct acacgac 57

<210> 298

<211> 57

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 298

aatgatacgg cgaccaccga gatctacacg tactgacaca ctctttccct acacgac 57

<210> 299

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 299

ctctttccct acacgacgct cttccgatct 30

<210> 300

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 300

ctggagttca gacgtgtgct cttccgatct 30