检测抑芽丹的酶联免疫试剂盒及其应用
【专利摘要】本发明提供了一种检测抑芽丹的酶联免疫试剂盒，它包括：包被有抑芽丹偶联抗原的酶标板、抑芽丹单克隆抗体、酶标记抗抗体、抑芽丹标准品溶液、底物显色液、终止液、洗涤液、复溶液。本发明还公开了一种应用上述酶联免疫试剂盒检测抑芽丹残留量的方法，它包括：首先进行样品前处理，然后用试剂盒进行检测，最后分析检测结果。本发明提供的酶联免疫试剂盒可用于检测干烟叶、鲜烟叶及瓜果蔬菜中抑芽丹的残留量，其操作简便、费用低廉、灵敏度高、能够现场监控且适合大量样本的筛查。
【专利说明】
检测抑芽丹的酶联免疫试剂盒及其应用
技术领域
[0001] 本发明设及酶联免疫检测技术，具体设及一种用于检测抑芽丹的酶联免疫试剂 盒，其特别适于干烟叶、鲜烟叶及瓜果蔬菜中抑芽丹残留量的检测。
【背景技术】
[0002] 抑芽丹又称马来酷阱，化学名称为顺下締二酷阱(Maleic Hy化azide,MH)，是一种 植物生长调节剂和选择性除草剂。抑芽丹可阻碍植物细胞分裂和降低光合作用效率，因此 常被用于抑制蔬菜如马铃馨、洋葱和大蒜等胆藏期发芽，也用于烟草种植中控制烟叶蔽芽 的生长。有研究称抑芽丹是一种诱变致癌剂，一定剂量下会导致细胞染色体断裂，从而产生 细胞毒性，因此抑芽丹残留量日益受到关注。我国规定，大蒜、洋葱、葱中抑芽丹的最大残留 限量(MRL)为15 mg/kg，马铃馨中抑芽丹的ML为50 mg/kg;国际食品法典规定，大蒜、洋葱、 葱中抑芽丹的ML为15 mg/kg，马铃馨中抑芽丹的ML为50 mg/kg;欧盟规定大蒜中抑芽丹 的脈L为15 mg/kg;美国规定，洋葱、马铃馨、胡萝h中抑芽丹的MRL分别为15、50、30 mg/kg; 韩国规定，西瓜、苹果、葡萄、香蕉中抑芽丹的ML为40 mg/kg，胡萝K黄瓜、芹菜中抑芽丹的 Μ化为25 mg/kg;国际烟草科学研究合作中屯、(C0RESTA)规定烟草中抑芽丹的指导性残留限 量化化)为80 mg/kg。
[0003] 抑芽丹的残留分析方法有多种:蒸馈分光光度法(A0AC)、高效液相色谱-紫外检测 法(HPLC-UV)、高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS)、气相色谱法、毛细管电泳法、极谱法等，另 外也有流动注射法和脉冲伏安法等方法，其中最常用的是前巧巾分析方法。但是A0AC法对蒸 馈装置要求高，样品前处理复杂，操作繁琐，耗碱量大，仪器腐蚀严重;HPLC-UV法中抑芽丹 很难与样品中的干扰杂质分开，无法满足实际样品的检测要求;使用HPLC-MS法测定抑芽丹 的仪器成本则相对较高。因此，开发一种不受检测设备限制并且能够实现对大批量样品进 行快速检测的产品和方法成为迫切需要解决的问题。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的正是基于上述现有技术状况而提供一种结构简单、使用方便、价格 便宜、便于携带的用于抑芽丹残留量检测的酶联免疫试剂盒，并提供一种高效、准确、简便、 适于大批量样本筛选的定性、定量检测方法。
[0005] 本发明试剂盒，它包括:包被有抑芽丹偶联抗原的酶标板、抑芽丹单克隆抗体、酶 标记抗抗体、抑芽丹标准品溶液、底物显色液、终止液、洗涂液、复溶液;所述抑芽丹偶联抗 原是由抑芽丹半抗原与载体蛋白偶联得到，所述抑芽丹半抗原是由横酸基马来酸酢与硫酸 阱反应生成横酸基抑芽丹，再与3-径基丙酸反应得到，其分子结构式为：
[0006] 所述抑芽丹单克隆抗体是W抑芽丹偶联抗原作为免疫原制备获得。
[0007] 所述载体蛋白为甲状腺蛋白、牛血清白蛋白、兔血清蛋白、人血清蛋白、卵清蛋白 或血蓝蛋白， 所述酶标记抗抗体中的抗抗体为羊抗鼠抗抗体。
[000引所述酶标记抗抗体的标记酶为辣根过氧化物酶或细菌提取碱性憐酸醋酶，其中优 选辣根过氧化物酶;酶标记的抗抗体是采用戊二醒法或过舰酸钢法将标记酶与抗抗体进行 偶联得到的。
[0009] 所述抑芽丹标准品溶液6瓶，浓度分别为0 mg/L、0.4 mg/L、1.2 mg/L、3.6 mg/L、 10.8 mg/L、32.4 mg/L。
[0010] 当标记酶为辣根过氧化物酶时，所述底物显色液由底物液A液和底物液B液组成，A 液为过氧化氨或过氧化脈，B液为邻苯二胺或四甲基联苯胺，所述终止液为1~2 mol/L的硫 酸或盐酸缓冲液；当标记酶为细菌提取碱性憐酸醋酶时，所述底物显色液为对硝基憐酸盐 缓冲液，所述终止液为^2 mo 1 /L氨氧化钢溶液。
[0011] 所述洗涂液优选为pH值为7.4，含有0.05%吐溫-20、0.01%。硫柳隶防腐剂的0.02 mol/L憐酸盐缓冲液，其中的百分比为质量体积百分比，单位g/mL。
[0012] 所述复溶液优选为pH值为7.0、0.! mol/L的憐酸盐缓冲液。
[001引本发明中酶标板的制备过程为：用包被缓冲液将包被原稀释成20 yg/mL，每孔加 入100 yL，37°C避光解育2 h或4°C过夜，倾去孔中液体，用洗涂液洗涂2次，每次30 S，拍干， 然后在每孔中加入150~200化封闭液，37°C避光解育1~2 h，倾去孔内液体拍干，干燥后用 侣膜真空密封保存。
[0014] 其中，在酶标板制备过程中所用到的包被缓冲液为抑值为9.6的0.05 mol/L碳酸 盐缓冲液，封闭液为抑值为7.4，含有1%~3% (g/mU酪蛋白、0.1~0.3 mol/L的憐酸盐缓冲 液，所述百分比为质量体积百分比。
[0015] 本发明的检测原理为： 在酶标板微孔条上预包被抑芽丹偶联抗原，加入样本溶液或标准品溶液后，再加入抑 芽丹单克隆抗体溶液，样本中的抑芽丹与酶标板上包被的抑芽丹偶联抗原竞争抑芽丹单克 隆抗体，加入酶标记抗抗体进行放大作用，用显色液显色，样本吸光度值与抑芽丹的残留量 呈负相关，与标准曲线比较即可得到样本中抑芽丹的残留量；同时根据酶标板上颜色的深 浅，与系列浓度的标准品溶液颜色的比较可粗略判断样本中抑芽丹残留量的浓度范围。
[0016] 本发明还提供了一种应用上述酶联免疫试剂盒检测干烟叶、鲜烟叶及瓜果蔬菜中 抑芽丹残留量的方法，它包括步骤： (1) 样本前处理； (2) 用试剂盒进行检测； (3) 分析检测结果。
[0017] 本发明检测抑芽丹的酶联免疫试剂盒主要采用间接竞争化ISA方法定性或定量检 测样本中抑芽丹的残留量;对样本的前处理要求低，样本前处理过程简单，能同时快速检测 大批量样本;主要试剂W工作液的形式提供，检测方法简便易行，具有特异性高、灵敏度高、 精确度高、准确度高等特点。本发明的酶联免疫试剂盒，结构简单、使用方便、价格便宜、携 带便利、检测方法高效、准确、简便、适于大批量样本筛选的定性、定量检测。
【附图说明】
[0018] 图1:抑芽丹半抗原合成路线图。
[0019]图2:试剂盒标准曲线图。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合具体的实施例来进一步阐述本发明。应理解，运些实施例仅用于说明本 发明，而不用来限制本发明的范围。
[0021] 实施例1试剂盒组分的制备 1、抑芽丹半抗原的合成(合成路线见附图1)及鉴定 反应a:取横酸基马来酸酢1.0 g，加 N，N-二甲基甲酯胺(DM巧溶解，加硫酸阱0.33 g，加 K0H 0.2 g，70°C揽拌反应4 h。停止反应，加水，加稀盐酸调节抑值到6，1，2-二氯乙烧萃取， 分去水相，有机相水洗，浓缩，上硅胶柱，1:1氯仿-甲醇洗脱分离，得到横酸基抑芽丹0.96 g，收率89.7%。核磁鉴定lHNMR(无水Py，300MHz)δ:8.10(t，lH)，8.0(t，2H)，8.326(13， lH),2.02(t, 1H)； 反应b:取0.96 g横酸基抑芽丹，加化晚溶解，加草酷氯0.62 g，加 DMF 0.2 mL，60°C反 应2 h，加冰水，乙酸乙醋，萃取，无水硫酸钢干燥，旋蒸蒸干，加乙腊溶解，加3-径基丙酸 0.77 g，加 Ξ乙胺0.5 mL，室溫揽拌3 h。停止反应，蒸干有机溶剂，1:2正己烧-乙酸重结晶， 得到横酷化径基丙酸抑芽丹半抗原产物0.81 g，收率60.1%。核磁鉴定iH應R(CDCl3， 300ΜΗζ)δ:4.414(6， 2H, t, J=6.044),8.300(8， 1H)，2.943(9， 2H, t, J=6.044)。
[0022] 化学位移δ=2.9、4.4为间隔臂径基乙酸上亚甲基氨的共振吸收峰，两者的存在证 明间隔臂偶联成功，抑芽丹半抗原结构正确。
[0023] 2、抑芽丹偶联抗原的合成及鉴定 免疫原制备一一抑芽丹半抗原与牛血清白蛋白（BSA)偶联得到免疫原(也可选用其它 蛋白如人血清蛋白、兔血清蛋白）。
[0024] 取18 mg半抗原，溶解于1 mL DMF中；加碳化二亚胺(EDC)ll mg，室溫下揽拌2 h， 加 N-径基班巧酷亚胺(NHS)9 mg，继续反应4 h，得到反应液A;称取BSA 30 mg，使之充分溶 解在4 mL 0.1 mol/L憐酸盐缓冲液(ΡΒ,ρΗ 7.0)中，将反应液A逐滴缓慢滴加到蛋白溶液 中，并于室溫下揽拌24 h，用0.01 mol/L憐酸盐缓冲液(PBS)4°C透析3 d，每天换3次透析 液，W除去未反应的小分子物质，得到免疫原。
[0025] 包被原制备一一抑芽丹半抗原与卵清蛋白（OVA)偶联得到包被原(也可选用其它蛋白 如血蓝蛋白、纤维蛋白）。
[0026] 取12 mg半抗原，溶解于1血DMF中；力阳DC 7 mg，室溫下揽拌24 h，得到反应液A; 称取OVA 40 mg，使之充分溶解在6血0.1 mol/L PB(抑7.0)中，将反应液A逐滴缓慢滴加 到蛋白溶液中，并于室溫下揽拌24 h，用0.01 mol/L PBS 4°C透析3 d，每天换3次透析液， W除去未反应的小分子物质，得到包被原。
[0027] 按合成抑芽丹偶联抗原反应所用半抗原、载体蛋白与偶联产物的比例，进行紫外（200 ~400皿)扫描测定，通过比较Ξ者分别在260皿和280皿的吸光值计算其结合比。偶联物 抑芽丹半抗原-载体蛋白的最大吸收峰与抑芽丹半抗原、载体蛋白的最大吸收峰相比发生 了明显的变化，表明抑芽丹半抗原-载体蛋白的合成是成功的。经计算，半抗原与BSA的结合 比为15:1，与OVA的结合比为11:1。
[0028] 3、抑芽丹单克隆抗体的制备 (1)杂交瘤细胞的获得 1) 首次免疫:将抑芽丹半抗原-BSA偶联物(免疫原）与等量的弗氏完全佐剂充分乳化， 皮下注射6周龄的Ba化/c小鼠，每只0.2 ιΛ; 2) 加强免疫两次:从首次免疫开始，每两周加强免疫一次，用弗式不完全佐剂代替弗氏 完全佐剂，方法和剂量同首次免疫； 3) 最后一次加强免疫一周后眼底静脉采血测效价和抑制，有抑制且效价达到1:10000 W上时进行如下末次免疫:腹腔注射不加任何佐剂的免疫原溶液0.1 mL，S天后处死小鼠， 取其脾脏与骨髓瘤细胞融合； 4) 采用间接竞争酶联免疫分析方法测定细胞上清液，筛选阳性孔。利用有限稀释法对 阳性孔进行克隆化，得到并建立稳定分泌抑芽丹单克隆抗体的杂交瘤细胞株，取处于对数 生长期的杂交瘤细胞用冻存液制成细胞悬液，分装于冻存管，在液氮中长期保存。
[0029] (2)单克隆抗体的制备 1) 细胞复苏:取出抑芽丹单克隆抗体杂交瘤细胞株冻存管，立即放入37°c水浴中速融， 离屯、去除冻存液后，移入培养瓶内培养； 2) 制备腹水与抗体纯化:采用体内诱生法，将Ba化/c小鼠（8周龄)腹腔注入灭菌石蜡油 0.5 mL/只，7天后腹腔注射杂交瘤细胞5 X 105个/只，7天后采集腹水。用辛酸-饱和硫酸锭 法进行纯化，得到抑芽丹单克隆抗体溶液(-20°C保存）。
[0030] (3)单克隆抗体效价的测定 用间接竞争ELISA法测定抗体的效价为1: (200000~500000)。
[0031 ]间接竞争化ISA方法:用抑芽丹半抗原-OVA偶联物包被酶标板，加入抑芽丹标准品 溶液、抑芽丹单克隆抗体溶液和辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗抗体溶液，25Γ反应30 min，倒出孔内液体，用洗涂液洗涂3~5次，用吸水纸拍干;加入底物显色液，25°C反应15 min 后，加入终止液终止反应;设定酶标仪于波长450 nm处测定每孔吸光度值。
[0032] 4、羊抗鼠抗抗体的制备 W羊为免疫动物，W鼠源抗体为免疫原免疫无病原体羊，得到羊抗鼠抗抗体。
[0033] 5、酶标记抗抗体的制备 将羊抗鼠抗抗体与辣根过氧化物酶(皿P)采用改良后的过舰酸钢法进行偶联。传统的 过舰酸钢法要求反应体系中酶与抗体的摩尔浓度比为4:1，由于辣根过氧化物酶在强氧化 作用下产生许多与抗体结合的位点，运样活化的辣根过氧化物酶分子充当了连接各分子的 桥梁，降低了酶标记物的酶活性，使制备的偶联物中混有许多聚合体。为了解决运个问题， 我们将传统的方法进行了改良，即： (1) 省去了氨基的封闭过程，因为能产生自身氨基连接的氨基实际很少； (2) 降低辣根过氧化物酶与抗体的摩尔浓度比率至2:1，改良后的方法比传统的方法简 便，对酶活性的损失减少。
[0034] 6、酶标板的制备 用包被缓冲液将包被原(抑芽丹半抗原-OVA偶联物)稀释成20 yg/mL，每孔加入100 μ L，37°C避光解育2 h，倾去孔中液体，用洗涂液洗涂2次，每次30 S，拍干，然后在每孔中加入 200化封闭液，37°C避光解育2 h，倾去孔内液体拍干，干燥后用侣膜真空密封保存。
[0035] 实施例2检测抑芽丹的酶联免疫试剂盒的组建 组建检测抑芽丹的酶联免疫试剂盒，使其包含下述组分： (1) 包被抑芽丹偶联抗原的酶标板； (2) 抑芽丹标准品溶液，浓度分别为0 mg/L、0.4 mg/L、1.2 mg/L、3.6 mg/L、10.8 mg/ L、32.4 mg/X; (3) 抑芽丹单克隆抗体工作液； (4 )用辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗抗体； 巧)底物显色液由A液和B液组成，底物显色液A液为过氧化脈，底物显色液B液为四甲基 联苯胺； (6) 终止液为2 mol/L的硫酸缓冲液； (7) 洗涂液为抑值为7.4，含有0.05%吐溫-20、0.01%。硫柳隶防腐剂的0.02 mol/L憐酸 盐缓冲液，所述百分比为重量体积百分比； (8) 复溶液为pH值为7.0、0.1 mol/L的憐酸盐缓冲液。
[0036] 实施例3干烟叶、鲜烟叶及瓜果蔬菜样本中抑芽丹残留量的检测 1、样本前处理 检测前将烟叶、瓜果蔬菜样本进行捣碎后用于检测。
[0037] (1)烟叶样本 称取1.0±0.05 g样本至10血聚苯乙締离屯、管中，加入4血乙醇，用满旋混合仪满动2 min,混匀；3000 gW上，室溫（20~25 °C)离屯、5 min,取50化上层清液至2血聚苯乙締离屯、 管中，加入950化复溶液，满动20 S，取50化用于分析。
[003引（2)瓜果蔬菜 称取1.0±0.05 g样本至10血聚苯乙締离屯、管中，加入2.5 mL乙醇，用满旋混合仪满 动2 min,混匀；3000 gW上，室溫(20~25 °C)离屯、5 min,取50化上层清液至2 mL聚苯乙締 离屯、管中，加入950化复溶液，满动20 S，取50化用于分析。
[0039] 2、用试剂盒检测 向包被有抑芽丹偶联抗原的酶标板微孔中加入抑芽丹标准品溶液或经前处理的样本 溶液50 μL孔，然后加入抑芽丹单克隆抗体工作液50 μL孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板 后置25°C避光环境中反应30 min;倒出孔内液体，每孔加入250化洗涂液充分洗涂4~5次， 每次间隔10 S，用吸水纸拍干;再加入辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗抗体100 μL孔，轻 轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25°C避光环境中反应30 min，取出重复洗板步骤;每孔加入 底物显色液A液过氧化脈50 yL，底物显色液B液四甲基联苯胺50 yL，轻轻振荡混匀，用盖板 膜盖板后置25°C避光环境中显色15 min,每孔加入终止液2 mol/L硫酸50化，轻轻振荡混 匀，用酶标仪波长设定在450 nm处，参比波长620 nm，测定每孔吸光度值(0D值）。
[0040] 3、检测结果分析 用所获得的每个浓度的标准品溶液的吸光度平均值(B)除W第一个标准品溶液(0标 准)的吸光度值(Bo)再乘W100%，得到百分吸光度值。W抑芽丹标准品浓度(mg/L)的对数值 为X轴，百分吸光度值为Y轴，绘制标准曲线，如图2所示。用同样的办法计算样本溶液的百分 吸光度值，相对应每一个样本提取液中抑芽丹残留量则可从标准曲线上读出，乘W其对应 的稀释倍数即为样本中抑芽丹的实际浓度。
[0041 ]实施例4抑芽丹酶联免疫试剂盒技术参数的确定试验 1、试剂盒灵敏度和检测限 按照常规方法测定试剂盒灵敏度，试剂盒标准曲线最低点为0.4 mg/L，标准曲线的范 围为0.4~32.4 mg/L，1C加巧0%抑制浓度)浮动范围为0.8~3.0 mg/l;对空白干烟叶、鲜烟叶、 瓜果蔬菜样本各20份进行检测，从标准曲线上查出对应于各百分吸光度值的浓度，W20份 样本浓度的平均值加上3倍标准差表示检测限，结果得该方法对干烟叶、鲜烟叶样本的检测 限为32 mg/kg，对瓜果蔬菜样本的检测限为20 mg/kg。
[0042] 2、样本精密度和准确度试验 W回收率作为准确度评价指标，W重复测定某一浓度样本的检测结果相对标准偏差 (RSD%)作为精密度评价指标。计算公式为：回收率(％)=实际测定值/理论值X 100%，其中 理论值为样本的添加浓度;相对标准偏差RSD% = SD/XX 100%，其中SD为标准偏差，X为测 定数据的平均值。
[0043] 按32、64、128 mg/kgS个浓度抑芽丹对空白干烟叶、鲜烟叶样本进行添加回收测 定，按20、40、80 mg/kgS个浓度对空白西瓜、苹果、油菜样本进行添加回收测定，每个样本 做4个平行，用Ξ批不同试剂盒进行测定，计算样本的平均回收率及精密度，结果见下表。
[0044] 表1精密度及准确度试验
W32、64、128 mg/kg^个浓度的抑芽丹对空白干烟叶、鲜烟叶样本进行添加，平均回收 率在92.4%~115.1%之间；W20、40、80 mg/kgS个浓度的抑芽丹对空白瓜果蔬菜样本进行添 加，平均回收率在85.7%~115.3%之间;批内、批间相对标准偏差均小于10%。
[0045] 3、试剂盒稳定性试验 试剂盒保存条件为2~8°C，经过12个月的测定，试剂盒的最大吸光度值(零标准）、50%抑 制浓度、抑芽丹添加实际测定值均在正常范围之内。考虑在运输和使用过程中，会有非正常 保存条件出现，将试剂盒在37°C保存条件下放置7天，进行加速老化实验，结果表明该试剂 盒各项指标完全符合要求。考虑到试剂盒冷冻情况发生，将试剂盒放入-20°C冰箱冷冻7天， 测定结果也表明试剂盒各项指标完全正常。从W上结果可得出试剂盒可W在2~8°C至少保 存12个月W上。
【主权项】
1. 一种检测抑芽丹的酶联免疫试剂盒，其特征在于:包括包被有抑芽丹偶联抗原的酶 标板、抑芽丹单克隆抗体、酶标记抗抗体、抑芽丹标准品溶液、底物显色液、终止液、洗涤液、 复溶液;所述抑芽丹偶联抗原是由抑芽丹半抗原与载体蛋白偶联得到，所述抑芽丹半抗原 是由磺酸基马来酸酐与硫酸肼反应生成磺酸基抑芽丹，再与3-羟基丙酸反应得到，其分子 结构式为：2. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于:所述抑芽丹单克隆抗体是以抑芽丹偶联抗 原作为免疫原制备获得。3. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于:所述载体蛋白为甲状腺蛋白、牛血清白蛋 白、兔血清蛋白、人血清蛋白、卵清蛋白或血蓝蛋白。4. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于:所述酶标记抗抗体中的抗抗体为羊抗鼠抗 抗体。5. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于:所述酶标记抗抗体的标记酶为辣根过氧化 物酶或细菌提取碱性磷酸酯酶，当标记酶为辣根过氧化物酶时，底物显色液由底物液A液和 底物液B液组成，A液为过氧化氢或过氧化脲，B液为邻苯二胺或四甲基联苯胺，终止液为1~ 2 mol/L的硫酸或盐酸缓冲液;当标记酶为细菌提取碱性磷酸酯酶时，底物显色液为对硝基 磷酸盐缓冲液，终止液为1~2 mol/L氢氧化钠溶液。6. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于:所述洗涤液为pH值为7.4，含有0.05%吐温-20、0·01%。硫柳汞防腐剂的0·02 mol/L磷酸盐缓冲液;所述复溶液为pH值为7·0、0· 1 mol/L 的磷酸盐缓冲液，所述洗涤液中的百分比为重量体积百分比，单位g/mL。7. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述抑芽丹标准品溶液的浓度分别为0 mg/L、0.4 mg/L、1.2 mg/L、3.6 mg/L、10.8 mg/L、32.4 mg/L〇8. -种利用权利要求1所述试剂盒检测干烟叶、鲜烟叶及瓜果蔬菜中抑芽丹残留量的 方法，其特征在于:包括以下步骤： (1) 样品前处理； (2) 用试剂盒进行检测； (3) 分析检测结果。
【文档编号】G01N33/543GK105823872SQ201610145332
【公开日】2016年8月3日
【申请日】2016年3月15日
【发明人】陈黎, 范子彦, 罗晓琴, 鲁亚辉, 潘立宁, 胡斌, 唐纲岭, 刘惠民, 朱亮, 崔华鹏, 蔡君兰
【申请人】中国烟草总公司郑州烟草研究院, 国家烟草质量监督检验中心, 北京勤邦生物技术有限公司