1.一种天然游离态虾青素的制备及纯化方法,其特征在于,所述制备及纯化方法包括如下步骤:
(1)原料及预处理:以雨生红球藻油为原料,向其中加入无水乙醇,充分搅拌混合均匀,得到雨生红球藻油预处理液;
(2)构建雨生红球藻酶解体系:将脂肪酶和抗氧化剂分散于去离子水和/或缓冲液中,然后将含脂肪酶和抗氧化剂的去离子水和/或缓冲液体系加入到步骤(1)得到的雨生红球藻预处理液中,得到雨生红球藻油酶解体系;
(3)一次酶解:将步骤(2)得到的雨生红球藻油酶解体系进行酶解处理,酶解结束后得到雨生红球藻油一次酶解处理液;
(4)一次富集:①将尿素溶于乙醇溶液中,配制尿素乙醇溶液;
②将步骤(3)得到的雨生红球藻油一次酶解处理液与尿素乙醇溶液迅速混合,然后静置;
③静置结束后,将体系迅速过滤和/或离心,收集清液,向清液中加入1~10倍的去离子水,并调节体系ph至6.0~7.0;
(5)二次酶解:向上述步骤③所得富集溶液中加入脂肪酶、抗氧化剂,充分搅拌溶解后进行酶解处理,酶解结束后得到雨生红球藻油二次酶解处理液;
(6)二次富集:将步骤(5)酶解后的雨生红球藻油二次酶解处理液中加入二氯甲烷溶液,充分混合后分层,收集有机相水洗,减压蒸馏得到浓缩物,向所述浓缩物中加入正己烷,充分搅拌溶解后静置,收集沉淀物,干燥,即得到天然游离态虾青素。
2.如权利要求1所述的制备及纯化方法,其特征在于,所述步骤(1)无水乙醇的添加量为雨生红球藻油质量的0%~30%。
3.如权利要求1所述的制备及纯化方法,其特征在于,所述步骤(2)脂肪酶为脂肪酶粉,所述脂肪酶粉直接使用或进行固定化后再使用;所述抗氧化剂为茶多酚、抗坏血酸、乙二胺四乙酸钠、异抗坏血酸及其盐、植酸中的一种或几种。
4.如权利要求1所述的制备及纯化方法,其特征在于,所述步骤(2)脂肪酶的添加量占总酶解体系的质量分数为1%~5%,抗氧化剂的添加量占总酶解体系的质量分数为0.005%~1%,去离子水和/或磷酸盐缓冲液用量占总酶解体系的30%~80%。
5.如权利要求1所述的制备及纯化方法,其特征在于,所述步骤(3)的酶解条件为于35~55℃水浴下进行酶解处理,酶解时间为1~8h,过程进行连续的剪切乳化,剪切乳化的转速为3000~20000rpm,同时过程中不间断的通入氮气。
6.如权利要求1所述的制备及纯化方法,其特征在于,所述步骤(4)包括:
①将尿素溶于乙醇溶液中,经加热回流处理,使其充分溶解;尿素占乙醇溶液的质量体积分数为7%~14%;其中乙醇溶液为质量体积分数不低于90%的乙醇水溶液;
②将步骤(3)得到的雨生红球藻油一次酶解处理液与上述步骤①得到的尿素乙醇溶液迅速混合,使总体系中雨生红球藻油与尿素的比例为1:0.5~10,充分搅拌混匀,然后置于-15~25℃环境中静置2~12h;
③静置结束后,将体系迅速过滤和/或离心,收集清液,向清液中加入1~10倍的去离子水,并调节体系ph至6.0~7.0。
7.如权利要求1所述的制备及纯化方法,其特征在于,所述步骤(5)的酶解条件为于35~55℃水浴下进行酶解处理,酶解时间为1~8h,过程进行连续剪切乳化,剪切乳化的转速为3000~20000rpm,同时过程中不间断的通入氮气。
8.如权利要求1所述的制备及纯化方法,其特征在于,所述步骤(5)脂肪酶为脂肪酶粉,所述脂肪酶粉直接使用或进行固定化后再使用;所述抗氧化剂为茶多酚、抗坏血酸、乙二胺四乙酸钠、异抗坏血酸及其盐、植酸中的一种或几种。
9.如权利要求1所述的制备及纯化方法,其特征在于,所述步骤(5)脂肪酶的添加量占总酶解体系的质量分数为0.1%~3%,抗氧化剂的添加量占总酶解体系的质量分数为0.005%~1%。
10.如权利要求1所述的制备及纯化方法,其特征在于,所述步骤(6)包括:
将步骤(5)酶解后的雨生红球藻油二次酶解处理液中加入0.5~1倍体积的二氯甲烷溶液,充分混合后分层,收集有机相,然后用去离子水洗涤有机相1~3次,再将有机相进行减压蒸馏至无馏分,得到浓缩物,向得到的浓缩物中加入0.5~5倍体积的正己烷,在30~50℃条件下充分搅拌溶解,然后置于-5~10℃环境下静置1~12h,收集沉淀物,干燥,即得到天然游离态虾青素。