含有抗CTLA-4抗体的稳定调配物的制作方法

含有抗ctla-4抗体的稳定调配物
1.对序列表的参考
2.本技术通过引用并入于2021年7月7日创建并含有9,333个字节的以计算机可读形式作为文件10813wo01-sequence.txt提交的序列表。
技术领域
3.本发明涉及治疗性抗体调配物的领域。更具体地，本发明涉及包含与人ctla-4特异性结合的人抗体的药物调配物的领域。


背景技术：

4.细胞毒性t淋巴细胞相关蛋白4(ctla-4；也称为cd152)是在常规和调节性t细胞上表达的i型跨膜t细胞抑制性检查点受体。ctla-4通过抑制刺激受体cd28与其天然配体b7-1(cd80)和b7-2(cd86)的结合而负调节t细胞活化。初始t细胞活化是通过刺激t细胞受体(tcr)实现的，所述受体识别抗原呈递细胞(apc)上由i类或ii类主要组织相容性复合物(mhci或mhcii)蛋白质呈递的特异性肽(goldrath等人，1999，nature 402：255-262)。活化的tcr反过来启动一系列信号传导事件，所述信号传导事件可以由转染的报告基因的表达监测，由调节各种转录因子(如活化蛋白1(ap-1)、活化的t细胞的核因子(nfat)或活化的b细胞的核因子κ-轻链增强子(nfκb))的表达的启动子驱动。然后，通过在t细胞上组成型地或可诱导地表达的共刺激或共抑制受体(如cd28、ctla-4(细胞毒性t淋巴细胞相关蛋白4)、pd-1(程序性细胞死亡蛋白1)、lag-3(淋巴细胞活化基因3)或其它分子)的接合来进一步细化t细胞应答(sharpe等人，2002，nat.rev.immunol.2：116-126)。
5.治疗性大分子(例如，抗体)必须以这样的方式配制，即不仅使分子适合施用于患者，而且在储存期间保持其稳定性。例如，除非适当配制溶液，否则治疗性抗体易于发生降解、聚集和/或不期望的化学修饰。抗体在调配物中的稳定性不仅取决于调配物中所用的赋形剂的种类，而且还取决于赋形剂相对于彼此的量和比例。因此，在配制治疗性抗体时，必须非常小心以得到保持稳定、含有足够浓度的抗体并具有使调配物能够方便地施用于患者的其他特性的调配物。
6.人ctla-4的抗体是需要适当配制的治疗相关大分子的一个实例。
7.尽管抗ctla-4抗体是本领域已知的(参见，例如，wo 2019/023482)，但仍然需要足够稳定且适合施用于患者的包含抗ctla-4抗体的药物调配物。


技术实现要素：

8.提供了包含抗ctla-4抗体和一种或多种赋形剂的稳定药物调配物，以及包含此类调配物的试剂盒及其用途。在一些情况下，药物调配物是液体调配物。在一些情况下，药物调配物是冻干调配物。在一些情况下，药物调配物是来自冻干药物产品的重构的调配物。
9.在一个方面，本公开提供了一种稳定液体药物调配物，其在水溶液中包含：(i)与人细胞毒性t淋巴细胞相关蛋白4(hctla-4)特异性结合的抗体；(ii)缓冲液；(iii)热稳定
剂；和(iv)有机助溶剂。在一些实施方案中，调配物是重构的调配物(即，由冻干药物产品重构)。在另一个方面，本公开提供了一种与人细胞毒性t淋巴细胞相关蛋白4(hctla-4)特异性结合的抗体的稳定冻干药物调配物，其通过冻干水溶液制备，所述水溶液包含：缓冲液；热稳定剂；和有机助溶剂。
10.在一些实施方案中，缓冲液是浓度为1mm至30mm的组氨酸。在一些实施方案中，热稳定剂是浓度为1％w/v至15％w/v的蔗糖。在一些实施方案中，有机助溶剂是浓度为0.01％w/v至0.3％w/v的表面活性剂。在一些情况下，表面活性剂是聚山梨醇酯20。
11.在一些实施方案中，抗体在水溶液中以1mg/ml至200mg/ml的浓度存在。在一些实施方案中，抗体以25mg/ml土2.5mg/ml至100mg/ml土10mg/ml的浓度存在。
12.在一些实施方案中，抗体包含有包含seq id no：1的氨基酸序列的重链可变区(hcvr)的互补决定区(hcdr1-hcdr2-hcdr3)和包含seq id no：2的氨基酸序列的轻链可变区(lcvr)的互补决定区(lcdr1-lcdr2-lcdr3)。在一些实施方案中，抗体包含有分别包含seq id no：3-4-5的氨基酸序列的hcdr 1-hcdr2-hcdr3结构域和分别包含seq id no：6-7-8的氨基酸序列的lcdr1-lcdr2-lcdr3结构域。在一些实施方案中，抗体包含有包含seq id no：1的氨基酸序列的重链可变区(hcvr)和包含seq id no：2的氨基酸序列的轻链可变区(lcvr)。
13.在一些实施方案中，抗体具有人igg重链恒定区。在一些情况下，重链恒定区属于同种型igg1。在一些情况下，重链恒定区属于同种型igg4。
14.在一些实施方案中，抗体包含有包含seq id no：9的残基1-445的氨基酸序列的重链和包含seq id no：10的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，抗体包含有包含seq id no：9的氨基酸序列的重链和包含seq id no：10的氨基酸序列的轻链。
15.在各种实施方案中的任一个实施方案中，水溶液包含：(i)约5mg/ml至约150mg/ml的与hctla-4特异性结合的抗体；(ii)约5mm至约25mm组氨酸；(iii)约3％w/v至约12％w/v蔗糖；和(iv)约0.05％w/v至约0.25％w/v聚山梨醇酯20。在一些实施方案中，水溶液具有约5.5至约6.5的ph。
16.在各种实施方案中的任一个实施方案中，水溶液包含：(i)约50mg/ml土5mg/ml的抗体；(ii)约10mm土1mm组氨酸；(iii)约5％w/v土0.5％w/v蔗糖；和(iv)约0.1％土0.01％w/v聚山梨醇酯20。在各种实施方案中的任一个实施方案中，水溶液包含：(i)约100mg/ml土10mg/ml的抗体；(ii)约20mm土2mm组氨酸；(iii)约10％w/v土1％w/v蔗糖；和(iv)约0.2％土0.02％w/v聚山梨醇酯20。在一些情况下，水溶液的ph是5.8至6.2。在一些情况下，水溶液的ph是约6.0。
17.在一个方面，本公开提供了一种稳定液体药物调配物，其在水溶液中包含：(i)浓度为5土0.5mg/ml至150土15mg/ml的与人细胞毒性t淋巴细胞相关蛋白4(hctla-4)特异性结合的人抗体，其中所述抗体包含hcvr，所述hcvr包含有分别包含seq id no：3、4和5的氨基酸序列的hcdr1、hcdr2和hcdr3结构域，以及分别包含seq id no：6、7和8的氨基酸序列的lcdr1、lcdr2和lcdr3结构域；(ii)5mm至25mm组氨酸；(iii)3％w/v至12％w/v蔗糖；和(iv)0.05％w/v至0.25％w/v聚山梨醇酯20，其中水溶液具有5.8至6.2的ph。在一些实施方案中，调配物是重构的调配物。
18.在一个方面，本公开提供了一种与人细胞毒性t淋巴细胞相关蛋白4(hctla-4)特
uplc所确定的。
26.在上文或本文所讨论的稳定药物调配物的各种实施方案中的任一个实施方案中，在环境温度下搅拌六十分钟后回收至少90％的抗体的天然形式，如通过se-uplc所确定的。在一些情况下，在环境温度下搅拌六十分钟后回收至少96％的抗体的天然形式，如通过se-uplc所确定的。
27.在上文或本文所讨论的稳定药物调配物的各种实施方案中的任一个实施方案中，在5℃下储存24个月后，调配物包含不超过2％的高分子量(hmw)物类，如通过se-uplc所确定的。
28.在上文或本文所讨论的稳定药物调配物的各种实施方案中的任一个实施方案中，在25℃和60％相对湿度下储存六个月后，调配物包含不超过2.5％的hmw物类，如通过se-uplc所确定的。
29.在上文或本文所讨论的稳定药物调配物的各种实施方案中的任一个实施方案中，在45℃下储存一个月后，调配物包含不超过2％的高分子量(hmw)物类，如通过se-uplc所确定的。
30.在上文或本文所讨论的稳定药物调配物的各种实施方案中的任一个实施方案中，在50℃下储存一个月后，调配物包含不超过3％的高分子量(hmw)物类，如通过se-uplc所确定的。
31.在上文或本文所讨论的稳定药物调配物的各种实施方案中的任一个实施方案中，在环境温度下搅拌六十分钟后，调配物包含不超过2％的高分子量(hmw)物类，如通过se-uplc所确定的。
32.在一些实施方案中，上文或本文所讨论的稳定药物调配物容纳在玻璃小瓶中。在一些实施方案中，上文或本文所讨论的稳定药物调配物容纳在注射器中。在一些情况下，注射器包括碳氟化合物涂覆的柱塞，或者注射器是低钨注射器。在一些情况下，注射器是预填充的注射器。在一些情况下，注射器是预填充的桩式针头注射器(prefilled staked needle syringe)。在一些实施方案中，上文或本文所讨论的稳定药物调配物容纳在大容量装置或团注注射器中。
33.在一个方面，本公开提供了一种笔或自动注射器式递送装置，其容纳如上文或本文所讨论的稳定药物调配物。在一些情况下，递送装置是一次性笔式递送装置。在一些情况下，递送装置是可重复使用的笔式递送装置。
34.在一个方面，本公开提供了一种容器，其容纳如上文或本文所讨论的稳定药物调配物。
35.在一个方面，本公开提供了一种试剂盒，其包括(i)容纳如上文或本文所讨论的稳定药物调配物的容器，和(ii)用于药物调配物的使用的标签。在一些实施方案中，标签列举药物调配物的皮下施用。在一些实施方案中，标签列举药物调配物的静脉内施用。
36.在一个方面，本公开提供了一种单位剂型，其包含如上文或本文所讨论的稳定药物调配物，其中抗ctla-4抗体以1mg至500mg的量存在。在一些情况下，调配物容纳在玻璃小瓶中。在一些情况下，调配物容纳在注射器中。在一些实施方案中，注射器是预填充的注射器。
37.在一个方面，本公开提供了一种安全系统递送装置，其容纳如上文或本文所讨论
的稳定药物调配物。在一些实施方案中，安全系统递送装置包括被配置成通过手动操作延伸的安全套筒。在一些实施方案中，安全系统递送装置包括被配置成在稳定药物调配物的注射之后自动延伸的安全套筒。
38.在各个实施方案中，上文或本文所讨论的实施方案的特征或组分中的任何特征或组分可以组合，并且此类组合涵盖在本公开的范围内。上文或本文所讨论的任何特定值可以与上文或本文所讨论的另一个相关值组合以列举具有表示范围的上端和下端的值的范围，并且此类范围涵盖在本公开的范围内。上文或本文所讨论的值中的每一个都可以1％、5％、10％或20％的变化表示。例如，10mm的浓度可表示为10mm土0.1mm(1％变化)、10mm
±
0.5mm(5％变化)、10mm土1mm(10％变化)或10mm土2mm(20％变化)。
39.通过阅读具体实施方式，其他实施方案将变得显而易见。
附图说明
40.图1示出了根据本公开的实施方案用于生产抗ctla-4抗体(mab1)的冻干调配物的示例性药物产品冻干循环的冻干参数，包括搁架温度、产品温度和室压。
具体实施方式
41.在描述本发明之前，应当理解，本发明不限于所描述的特定方法和实验条件，因为此类方法和条件可以变化。还应理解，本文所使用的术语仅出于描述具体实施方案的目的，而不旨在是限制性的，因为本发明的范围仅受所附权利要求书限制。
42.除非另外定义，否则本文使用的所有技术术语和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的含义相同的含义。如本文所用，当用于提及具体所列举的数值或值的范围时，术语
″
约
″
意指所述值可以与所列举的值相差不超过1％。例如，如本文所使用的，表述
″
约100
″
包含99和101以及其之间的所有值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等)。
43.本说明书中提及的所有专利、申请和非专利出版物均通过引用整体并入本文。
44.药物调配物
45.如本文所用，表述
″
药物调配物
″
是指至少一种活性成分(例如，抗ctla-4抗体等，其能够在人或非人动物中发挥生物学作用)和至少一种非活性成分的组合，当与活性成分和/或一种或多种另外的非活性成分组合时，其适合于对人或非人动物进行治疗性施用。除非另外具体指出，否则如本文所用，术语
″
调配物
″
是指
″
药物调配物
″
。本发明提供包含至少一种治疗性多肽的药物调配物。根据本发明的某些实施方案，治疗性多肽是与人细胞毒性t淋巴细胞相关蛋白4(ctla-4)特异性结合的抗体或其抗原结合片段。更具体地，本发明包括药物调配物，其包含：(i)与ctla-4特异性结合的人抗体；(ii)缓冲液；(iii)热稳定剂；和(iv)表面活性剂(还有有机助溶剂或界面稳定剂)。可在本发明的调配物中包括另外的组分，如果此类组分不显著干扰调配物的稳定性的话。包括在本发明中的具体的示例性组分和调配物在下面详细描述。
46.在某些实施方案中，本发明的药物调配物可以是流体调配物。如本文所用，表述
″
流体调配物
″
是指在约2℃至约45℃下主要以流体状态存在的至少两种组分的混合物。流体调配物尤其包括液体调配物和重构冻干调配物。流体调配物可具有低粘度、中等粘度或高粘度，这取决于它们的具体成分。在某些实施方案中，本发明的药物调配物可以是冻干调配
物。术语
″
冻干(1yophilization)
″
、
″
冻干(1yophilized)
″
和
″
冷冻干燥(freeze-dried)
″
是指将待干燥的材料首先冷冻，然后通过在真空环境中升华除去冰或冷冻溶剂的过程。赋形剂可包括在预冻干调配物中以增强冻干产品在储存时的稳定性，或增强重构产品的稳定性。
″
重构
″
调配物或产品是通过将冻干调配物溶解在稀释剂中使得冻干调配物中存在的蛋白质(例如，抗体)分散在重构的调配物中使得重构的调配物适于肠胃外施用(例如，静脉内施用或皮下施用)而制备的调配物或产品。
″
重构时间
″
是用溶液将冻干调配物再水合为基本上不含颗粒的澄清溶液所需的时间。重构通常在约25℃的温度下进行以确保完全水合，尽管可根据需要采用其他温度。重构所需的时间将取决于例如稀释剂的类型、赋形剂的量和蛋白质。示例性稀释剂包括无菌水、注射用抑菌水(bwfi)、ph缓冲溶液(例如，磷酸盐缓冲盐水)、无菌盐水溶液、林格氏溶液或右旋糖溶液。
47.特异性结合人ctla-4的抗体
48.本发明的药物调配物可包含与hctla-4特异性结合的抗体(例如，人抗体)或其抗原结合片段。如本文所用，术语
″
hctla-4
″
是指人ctla-4蛋白。
49.如本文所用，术语
″
抗体
″
通常旨在指包含四条多肽链、通过二硫键相互连接的两条重(h)链和两条轻(l)链以及其多聚体(例如，igm)的免疫球蛋白分子；然而，仅由重链(即，缺乏轻链)组成的免疫球蛋白分子也包括在术语
″
抗体
″
的定义内。每条重链包括重链可变区(在本文中缩写为hcvr或vh)和重链恒定区。重链恒定区包括三个结构域ch1、ch2和ch3。每条轻链包括轻链可变区(在本文缩写为lcvr或vl)和轻链恒定区。轻链恒定区包括一个结构域(cl1)。可以将vh区和vl区进一步细分为称作互补决定区(cdr)的高变区，其散布着更保守的称作框架区(fr)的区域。每个vh和vl由从氨基端到羧基端按以下顺序排列的三个cdr和四个fr构成：fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3、fr4。
50.在本发明的某些实施方案中，本发明的抗ctla-4抗体是人抗体。如本文所用，术语
″
人抗体
″
旨在包括具有衍生自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。本发明的人抗体可包括并非由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)，例如在cdr中，特别是在cdr3中。然而，如本文所用，术语
″
人抗体
″
不旨在包括其中衍生自另外哺乳动物物种(如小鼠)的种系的cdr序列已经移植到人框架序列上的抗体。在各种实施方案中，抗ctla-4抗体是人igg抗体。在各种实施方案中，抗ctla-4抗体是同种型igg1、igg2、igg3或igg4或混合同种型的人抗体。在一些实施方案中，抗ctla-4抗体是人igg1抗体。在一些实施方案中，抗ctla-4抗体是人igg4抗体。在上文或本文讨论的任何实施方案中，抗ctla-4抗体可包含人κ轻链。在上文或本文讨论的任何实施方案中，抗ctla-4抗体可包含人λ轻链。
51.在一些实施方案中，本发明的抗体可以是重组人抗体。如本文所用，术语
″
重组人抗体
″
旨在包括通过重组方式制备、表达、产生或分离的所有人抗体，如使用转染到宿主细胞中的重组表达载体表达的抗体、从重组的组合人抗体库中分离的抗体、从人免疫球蛋白基因转基因的动物(例如，小鼠)中分离的抗体(参见例如，taylor等人，(1992)nucl.acids res.20：6287-6295)，或通过任何其它方式制备、表达、产生或分离的抗体，所述方式涉及将人免疫球蛋白基因序列剪接到其它dna序列上。此类重组人抗体具有衍生自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区。然而，在某些实施方案中，此类重组人抗体经历体外诱变(或，当使用转基因人ig序列的动物时，经历体内体细胞诱变)，并且因此重组抗体的vh区和v
l
区
的氨基酸序列是如下序列：虽然衍生自人种系vh序列和v
l
序列并与之相关，但可能并非天然存在于体内的人抗体种系库中。
52.如本文所用，术语抗体的
″
抗原结合部分
″
或
″
抗原结合片段
″
(或简单地
″
抗体部分
″
或
″
抗体片段
″
)是指保留与hctla-4特异性结合的能力的抗体的一个或多个片段。
53.如本文所用，
″
分离的抗体
″
旨在指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，特异性结合hctla-4的分离的抗体基本上不含特异性结合除hctla-4之外的抗原的抗体)。
54.术语
″
特异性结合
″
等是指抗体或其抗原结合片段与在生理条件下相对稳定的抗原形成复合物。特异性结合可以通过至少约1x10-6
m或更大的解离常数表征。用于确定两个分子是否特异性结合的方法是本领域公知的，并且包括，例如，平衡透析、表面等离子体共振等。然而，特异性结合hctla-4的分离的抗体可与其他抗原(如来自其他物种(直系同源物)的ctla-4分子)具有交叉反应性。在本发明的上下文中，结合hctla-4以及一种或多种另外抗原的多特异性(例如，双特异性)抗体被认为是
″
特异性结合
″
hctla-4。此外，分离的抗体可基本上不含其它细胞材料和/或化学物质。
55.可包括在本发明的药物调配物中的示例性抗hctla-4抗体阐述于wo2019/023482中，其公开内容通过引用整体并入。
56.根据本发明的某些实施方案，抗hctla-4抗体或其抗原结合片段包含分别包含seq id no：3-4-5的氨基酸序列的重链互补决定区hcdr1-hcdr2-hcdr3。根据本发明的某些实施方案，抗hctla-4抗体或其抗原结合片段包含分别包含seq id no：6-7-8的氨基酸序列的轻链互补决定区lcdr 1-lcdr2-lcdr3。
57.在某些实施方案中，抗hctla-4抗体或其抗原结合片段包含有包含seq id no：1的氨基酸序列的重链可变区(hcvr)。在某些实施方案中，抗hctla-4抗体或其抗原结合片段包含有包含seq id no：2的氨基酸序列的轻链可变区(lcvr)。在某些实施方案中，抗hctla-4抗体或其抗原结合片段包含有包含seq id no：1/2的氨基酸序列的hcvr/lcvr氨基酸序列对。在一些实施方案中，抗ctla-4抗体包含有分别包含seq id no：1/2的氨基酸序列的hcvr/lcvr，以及人iggl重链恒定区。在一些实施方案中，抗ctla-4抗体包含有分别包含seq id no：1/2的氨基酸序列的hcvr/lcvr，以及人igg4重链恒定区。在一些实施方案中，抗ctla-4抗体包含有分别包含seq id no：1/2的氨基酸序列的hcvr/lcvr，以及人igg重链恒定区。在一些实施方案中，抗ctla-4抗体包含有分别包含seq id no：1/2的氨基酸序列的hcvr/lcvr，以及人igg1或igg4重链恒定区。在一些实施方案中，抗ctla-4抗体包含有包含seq id no：9的氨基酸序列的重链和包含seq id no：10的氨基酸序列的轻链。具有包含seq id no：1的氨基酸序列的hcvr和包含seq id no：2的氨基酸序列的lcvr的抗ctla-4抗体在本文称为mab 1。该抗体具有包含seq id no：9的氨基酸序列的重链和包含seq id no：10的氨基酸序列的轻链。
58.本发明的药物调配物内含有的抗体或其抗原结合片段的量可根据调配物的具体期望特性以及旨在使用调配物的具体情况和目的而变化。在某些实施方案中，药物调配物可含有约1mg/ml至约500mg/ml的抗体；约5mg/ml至约400mg/ml的抗体；约5mg/ml至约200mg/ml的抗体；约15mg/ml至约150mg/ml；约25mg/ml至约180mg/ml的抗体；约25mg/ml至约150mg/ml的抗体；约50mg/ml至约100mg/ml；约25mg/ml至约75mg/ml；或约75mg/ml至约
125mg/ml的抗体。例如，本发明的调配物可以是包含约1mg/ml；约2mg/ml；约5mg/ml；约10mg/ml；约15mg/ml；约20mg/ml；约25mg/ml；约30mg/ml；约35mg/ml；约40mg/ml；约45mg/ml；约50mg/ml；约55mg/ml；约60mg/ml；约65mg/ml；约70mg/ml；约75mg/ml；约80mg/ml；约85mg/ml；约90mg/ml；约95mg/ml；约100mg/ml；约105mg/ml；约110mg/ml；约115mg/ml；约120mg/ml；约125mg/ml；约130mg/ml；约131mg/ml；约132mg/ml；约133mg/ml；约134mg/ml；约135mg/ml；约140mg/ml；约145mg/ml；约150mg/ml；约155mg/ml；约160mg/ml；约165mg/ml；约170mg/ml；约175mg/ml；约180mg/ml；约185mg/ml；约190mg/ml；约195mg/ml；或约200mg/ml的与hctla-4特异性结合的抗体或其抗原结合片段的调配物。在某些实施方案中，药物调配物是可含有5土0.75mg/ml至150
±
22.5mg/ml的抗体；7.5
±
1.125mg/ml至140
±
21mg/ml的抗体；10
±
1.5mg/ml至130
±
19.5mg/ml的抗体；12.5土1.875mg/ml至120土18mg/ml的抗体；15土2.25mg/ml至110
±
16.5mg/ml的抗体；17.5
±
2.625mg/ml至100土15mg/ml的抗体；20
±
3mg/ml至90
±
13.5mg/ml的抗体；22.5土3.375mg/ml至80土12mg/ml的抗体；25土3.75mg/ml至70土10.5mg/ml的抗体；27.5土4.125mg/ml至60土9mg/ml的抗体；30土4.5mg/ml至50土7.5mg/ml的抗体；25土3.75mg/ml的抗体、50
±
7.5mg/ml的抗体，或100
±
15mg/ml的调配物。在一些实施方案中，药物调配物含有15
±
0.15mg/ml至150
±
1.5mg/ml的抗ctla-4抗体。在一些情况下，药物调配物含有50mg/ml+2.5mg/ml的抗ctla-4抗体。在一些情况下，药物调配物含有100mg/ml
±
5mg/ml的抗ctla-4抗体。
59.生物等效物
60.本发明涵盖具有不同于本文公开的示例性分子的那些的氨基酸序列但保留结合hctla-4的能力的抗体。当与亲本序列比较时，此类变体分子可包括氨基酸的一个或多个添加、缺失或取代，但表现出与本文所讨论的抗体的生物活性基本上等效的生物活性。
61.本发明包括与本文所列出的任何示例性抗体生物等效的抗原结合分子。如果，例如，两种抗体是在相似的实验条件下以相同的摩尔剂量施用(单次剂量或多次剂量)时吸收速率和程度不显示出显著差异的药物等效物或药物替代物，则认为所述两种抗体是生物等效的。如果一些抗体在其吸收程度上等效但在其吸收速率上不等效，则将认为所述抗体是等效物或药物替代物，并且可认为所述抗体是生物等效的，因为有意的并且反映在标签上的此类吸收速率的差异在例如长期使用时对于达到有效的身体药物浓度并不是必需的，并且对于所研究的特定药物产品而言被认为是医学上无关紧要的。
62.在一个实施方案中，如果两种抗体在安全性、纯度和效力上没有临床上有意义的差异，则所述两种抗体是生物等效的。
63.在一个实施方案中，如果患者可以在参考产品与生物产品之间转换一次或多次，与没有这种转换的持续治疗相比，没有预期的副作用风险增加，包括免疫原性的临床显著变化或有效性降低，则两种抗体是生物等效的。
64.生物等效性可以通过体内和体外方法来证明。生物等效性测量包括，例如，(a)在人或其他哺乳动物中的体内试验，其中测量血液、血浆、血清或其他生物流体中抗体或其代谢物的浓度作为时间的函数；(b)与人体内生物利用度数据相关并能合理预测人体内生物利用度数据的体外试验；(c)在人或其他哺乳动物中进行的体内试验，其中抗体(或其靶标)的适当急性药理学效果作为时间函数进行测量；和(d)在建立抗原结合蛋白的安全性、疗效或生物利用度或生物等效性的良好控制的临床试验中。
65.调配物赋形剂和ph
66.本发明的药物调配物包括一种或多种赋形剂。如本文所用，术语
″
赋形剂
″
意指添加到调配物中以提供期望的稠度、粘度或稳定作用的任何非治疗剂。
67.在某些实施方案中，本发明的药物调配物可包含一种或多种碳水化合物，例如一种或多种糖。糖可以是还原糖或非还原糖。
″
还原糖
″
包括，例如，具有酮或醛基团并含有反应性半缩醛基团的糖，其允许糖充当还原剂。还原糖的具体实例包括果糖、葡萄糖、甘油醛、乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、木糖、核糖、鼠李糖、半乳糖和麦芽糖。非还原糖可以包含异头碳(anomeric carbon)，该异头碳为缩醛并且基本上不与氨基酸或多肽反应而引发美拉德反应(maillard reaction)。非还原糖的具体实例包括蔗糖、海藻糖、山梨糖、三氯蔗糖、松三糖和棉子糖。糖酸包括，例如，葡萄糖二酸(saccharic acid)、葡糖酸盐以及其他多羟基糖及其盐。在一些实施方案中，糖是蔗糖。在一些情况下，糖(例如，蔗糖)充当抗ctla-4抗体的热稳定剂。
68.本发明的药物调配物内含有的糖(例如，蔗糖)的量将根据使用调配物的具体情况和预期目的而变化。在某些实施方案中，调配物可含有约0.1％至约20％的糖；约0.5％至约20％的糖；约1％至约20％的糖；约2％至约15％的糖；约3％至约10％的糖；约3％至约7％的糖；约4％至约6％的糖、约3％至约12％的糖或约4％至约11％的糖。例如，本发明的药物调配物可包含约0.5％；约1.0％；约1.5％；约2.0％；约2.5％；约3.0％；约3.5％；约4.0％；约4.5％；约5.0％；约5.5％；约6.0％；约6.5％；约7.0％；约7.5％；约8.0％；约8.5％；约9.0％；约9.5％；约10.0％；约15％；或约20％的糖(例如，蔗糖)。在一些实施方案中，调配物含有约5％的糖(例如，蔗糖)。在一些实施方案中，调配物含有约10％的糖(例如，蔗糖)。
69.本发明的药物调配物还可包含一种或多种有机助溶剂(或界面稳定剂)，其以在粗暴处理或搅拌(例如，轨道振荡)的条件下稳定抗ctla-4抗体的类型和量存在。在一些实施方案中，有机助溶剂是表面活性剂。如本文所用，术语
″
表面活性剂
″
是指降低其所溶解于其中的流体的表面张力和/或降低油与水之间的界面张力的物质。表面活性剂可以是离子或非离子的。可以包含在本发明的调配物中的示例性非离子表面活性剂包括，例如，烷基聚(环氧乙烷)、烷基聚葡糖苷(例如，辛基葡糖苷和癸基麦芽糖苷)、脂肪醇如鲸蜡醇和油醇、椰油酰胺mea、椰油酰胺dea和椰油酰胺tea。可以包含在本发明的调配物中的具体非离子表面活性剂包括，例如，聚山梨醇酯，如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯28、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯81和聚山梨醇酯85；泊洛沙姆，如泊洛沙姆188(也称为普朗尼克(pluronic)f68)、泊洛沙姆407；聚乙烯-聚丙烯二醇；或聚乙二醇(peg)。聚山梨醇酯20也称为吐温20、脱水山梨糖醇单月桂酸酯以及聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯。在一些实施方案中，表面活性剂是聚山梨醇酯20。
70.本发明的药物调配物内含有的表面活性剂的量可根据调配物的特定期望特性以及旨在使用调配物的具体情况和目的而变化。在某些实施方案中，调配物可含有约0.01％至约0.5％的表面活性剂；约0.05％至约0.3％的表面活性剂；约0.04％至约0.25％；约0.05％至约0.24％的表面活性剂；约0.06％至约0.23％的表面活性剂；或约0.07％至约0.22％的表面活性剂。例如，本发明的调配物可包含约0.05％；约0.06％；约0.07％；约0.08％；约0.09％；约0.10％；约0.11％；约0.12％；约0.13％；约0.14％；约0.15％；约0.16％；约0.17％；约0.18％；约0.19％；约0.20％约0.21％；约0.22％；约0.23％；约
id no：2的氨基酸序列的lcvr的人抗体，其中抗体具有同种型igg4的重链恒定区；(ii)浓度为约5mm至约25mm的缓冲液(例如，组氨酸)；(iii)浓度为约5％w/v至约15％w/v的热稳定剂(例如，蔗糖)；和(iv)浓度为约0.05％w/v至约0.25％w/v的有机助溶剂(例如，聚山梨醇酯20)。
79.在一些情况下，稳定药物调配物在水溶液中包含(i)浓度为约25mg/ml至约100mg/ml的与hctla-4特异性结合并且包含有包含seq id no：9的氨基酸序列的重链和包含seq id no：10的氨基酸序列的轻链的人抗体；(ii)浓度为约5mm至约25mm的缓冲液(例如，组氨酸)；(iii)浓度为约5％w/v至约15％w/v的热稳定剂(例如，蔗糖)；和(iv)浓度为约0.05％w/v至约0.25％w/v的有机助溶剂(例如，聚山梨醇酯20)。
80.在一些情况下，稳定药物调配物在水溶液中包含(i)浓度为约25mg/ml至约100mg/ml的与hctla-4特异性结合并且包含有包含seq id no：1的氨基酸序列的hcvr和包含seq id no：2的氨基酸序列的lcvr的人抗体；(ii)浓度为约8mm至约12mm的组氨酸；(iii)浓度为约3％w/v至约7％w/v的蔗糖；和(iv)浓度为约0.08％w/v至约0.12％w/v的聚山梨醇酯20。
81.在一些情况下，稳定药物调配物在水溶液中包含(i)浓度为约25mg/ml至约100mg/ml的与hctla-4特异性结合并且包含有包含seq id no：1的氨基酸序列的hcvr和包含seq id no：2的氨基酸序列的lcvr的人抗体，其中抗体具有同种型igg1的重链恒定区；(ii)浓度为约8mm至约12mm的组氨酸；(iii)浓度为约3％w/v至约7％w/v的蔗糖；和(iv)浓度为约0.08％w/v至约0.12％w/v的聚山梨醇酯20。
82.在一些情况下，稳定药物调配物在水溶液中包含(i)浓度为约25mg/ml至约100mg/ml的与hctla-4特异性结合并且包含有包含seq id no：1的氨基酸序列的hcvr和包含seq id no：2的氨基酸序列的lcvr的人抗体，其中抗体具有同种型igg4的重链恒定区；(ii)浓度为约8mm至约12mm的组氨酸；(iii)浓度为约3％w/v至约7％w/v的蔗糖；和(iv)浓度为约0.08％w/v至约0.12％w/v的聚山梨醇酯20。
83.在一些情况下，稳定药物调配物在水溶液中包含(i)浓度为约25mg/ml至约100mg/ml的与hctla-4特异性结合并且包含有包含seq id no：9的氨基酸序列的重链和包含seq id no：10的氨基酸序列的轻链的人抗体；(ii)浓度为约8mm至约12mm的组氨酸；(iii)浓度为约3％w/v至约7％w/v的蔗糖；和(iv)浓度为约0.08％w/v至约0.12％w/v的聚山梨醇酯20。
84.在一些情况下，稳定药物调配物在水溶液中包含(i)浓度为约25mg/ml至约100mg/ml的与hctla-4特异性结合并且包含有包含seq id no：1的氨基酸序列的hcvr和包含seq id no：2的氨基酸序列的lcvr的人抗体；(ii)浓度为约18mm至约22mm的组氨酸；(iii)浓度为约8％w/v至约12％w/v的蔗糖；和(iv)浓度为约0.18％w/v至约0.22％w/v的聚山梨醇酯20。
85.在一些情况下，稳定药物调配物在水溶液中包含(i)浓度为约25mg/ml至约100mg/ml的与hctla-4特异性结合并且包含有包含seq id no：1的氨基酸序列的hcvr和包含seq id no：2的氨基酸序列的lcvr的人抗体，其中抗体具有同种型igg1的重链恒定区；(ii)浓度为约18mm至约22mm的组氨酸；(iii)浓度为约8％w/v至约12％w/v的蔗糖；和(iv)浓度为约0.18％w/v至约0.22％w/v的聚山梨醇酯20。
86.在一些情况下，稳定药物调配物在水溶液中包含(i)浓度为约25mg/ml至约100mg/
ml的与hctla-4特异性结合并且包含有包含seq id no：1的氨基酸序列的hcvr和包含seq id no：2的氨基酸序列的lcvr的人抗体，其中抗体具有同种型igg4的重链恒定区；(ii)浓度为约18mm至约22mm的组氨酸；(iii)浓度为约8％w/v至约12％w/v的蔗糖；和(iv)浓度为约0.18％w/v至约0.22％w/v的聚山梨醇酯20。
87.在一些情况下，稳定药物调配物在水溶液中包含(i)浓度为约25mg/ml至约100mg/ml的与hctla-4特异性结合并且包含有包含seq id no：9的氨基酸序列的重链和包含seq id no：10的氨基酸序列的轻链的人抗体；(ii)浓度为约18mm至约22mm的组氨酸；(iii)浓度为约8％w/v至约12％w/v的蔗糖；和(iv)浓度为约0.18％w/v至约0.22％w/v的聚山梨醇酯20。
88.在一些情况下，稳定药物调配物在水溶液中包含(i)浓度为约25mg/ml至约100mg/ml的与hctla-4特异性结合并且包含有包含seq id no：1的氨基酸序列的hcvr和包含seq id no：2的氨基酸序列的lcvr的人抗体；(ii)约10mm土1mm组氨酸；(iii)约5％w/v土0.5％w/v蔗糖；和(iv)约0.1％土0.01％w/v聚山梨醇酯20。
89.在一些情况下，稳定药物调配物在水溶液中包含(i)浓度为约25mg/ml至约100mg/ml的与hctla-4特异性结合并且包含有包含seq id no：1的氨基酸序列的hcvr和包含seq id no：2的氨基酸序列的lcvr的人抗体，其中抗体具有同种型iggl的重链恒定区；(ii)约10mm
±
1mm组氨酸；(iii)约5％w/v土0.5％w/v蔗糖；和(iv)约0.1％土0.01％w/v聚山梨醇酯20。
90.在一些情况下，稳定药物调配物在水溶液中包含(i)浓度为约25mg/ml至约100mg/ml的与hctla-4特异性结合并且包含有包含seq id no：1的氨基酸序列的hcvr和包含seq id no：2的氨基酸序列的lcvr的人抗体，其中抗体具有同种型igg4的重链恒定区；(ii)约10mm土1mm组氨酸；(iii)约5％w/v土0.5％w/v蔗糖；和(iv)约0.1％土0.01％w/v聚山梨醇酯20。
91.在一些情况下，稳定药物调配物在水溶液中包含(i)浓度为约25mg/ml至约100mg/ml的与hctla-4特异性结合并且包含有包含seq id no：9的氨基酸序列的重链和包含seq id no：10的氨基酸序列的轻链的人抗体；(ii)约10mm土1mm组氨酸；(iii)约5％w/v土0.5％w/v蔗糖；和(iv)约0.1％土0.01％w/v聚山梨醇酯20。
92.在一些情况下，稳定药物调配物在水溶液中包含(i)浓度为约25mg/ml至约100mg/ml的与hctla-4特异性结合并且包含有包含seq id no：1的氨基酸序列的hcvr和包含seq id no：2的氨基酸序列的lcvr的人抗体；(ii)浓度为约20mm土2mm的组氨酸；(iii)浓度为约10％w/v土1％w/v的蔗糖；和(iv)浓度为约0.2％w/v土0.02％w/v的聚山梨醇酯20。
93.在一些情况下，稳定药物调配物在水溶液中包含(i)浓度为约25mg/ml至约100mg/ml的与hctla-4特异性结合并且包含有包含seq id no：1的氨基酸序列的hcvr和包含seq id no：2的氨基酸序列的lcvr的人抗体，其中抗体具有同种型igg1的重链恒定区；(ii)浓度为约20mm土2mm的组氨酸；(iii)浓度为约10％w/v土1％w/v的蔗糖；和(iv)浓度为约0.2％w/v土0.02％w/v的聚山梨醇酯20。
94.在一些情况下，稳定药物调配物在水溶液中包含(i)浓度为约25mg/ml至约100mg/ml的与hctla-4特异性结合并且包含有包含seq id no：1的氨基酸序列的hcvr和包含seq id no：2的氨基酸序列的lcvr的人抗体，其中抗体具有同种型igg4的重链恒定区；(ii)浓度
为约20mm土2mm的组氨酸；(iii)浓度为约10％w/v土1％w/v的蔗糖；和(iv)浓度为约0.2％w/v土0.02％w/v的聚山梨醇酯20。
95.在一些情况下，稳定药物调配物在水溶液中包含(i)浓度为约25mg/ml至约100mg/ml的与hctla-4特异性结合并且包含有包含seq id no：9的氨基酸序列的重链和包含seq id no：10的氨基酸序列的轻链的人抗体；(ii)浓度为约20mm土2mm的组氨酸；(iii)浓度为约10％w/v土1％w/v的蔗糖；和(iv)浓度为约0.2％w/v土0.02％w/v的聚山梨醇酯20。
96.在一些情况下，稳定药物调配物在水溶液中包含(i)浓度为约25mg/ml至约100mg/ml的与hctla-4特异性结合并且包含有包含seq id no：1的氨基酸序列的hcvr和包含seq id no：2的氨基酸序列的lcvr的人抗体；(ii)约10mm土1mm组氨酸；(iii)约5％w/v土0.5％w/v蔗糖；和(iv)约0.1％土0.01％w/v聚山梨醇酯20，其中调配物具有6.0土0.1的ph。
97.在一些情况下，稳定药物调配物在水溶液中包含(i)浓度为约25mg/ml至约100mg/ml的与hctla-4特异性结合并且包含有包含seq id no：1的氨基酸序列的hcvr和包含seq id no：2的氨基酸序列的lcvr的人抗体；(ii)约20mm土2mm组氨酸；(iii)约10％w/v土1％w/v蔗糖；和(iv)约0.2％土0.02％w/v聚山梨醇酯20，其中调配物具有6.0土0.1的ph。
98.在一些情况下，稳定药物调配物在水溶液中包含(i)浓度为约50mg/ml土5mg/ml的与hctla-4特异性结合并且包含有包含seq id no：1的氨基酸序列的hcvr和包含seq id no：2的氨基酸序列的lcvr的人抗体；(ii)约10mm土1mm组氨酸；(iii)约5％w/v土0.5％w/v蔗糖；和(iv)约0.1％土0.01％w/v聚山梨醇酯20，其中调配物具有6.0土0.1的ph。
99.在一些情况下，稳定药物调配物在水溶液中包含(i)浓度为约100mg/ml土10mg/ml的与hctla-4特异性结合并且包含有包含seq id no：1的氨基酸序列的hcvr和包含seq id no：2的氨基酸序列的lcvr的人抗体；(ii)约20mm土2mm组氨酸；(iii)约10％w/v土1％w/v蔗糖；和(iv)约0.2％土0.02％w/v聚山梨醇酯20，其中调配物具有6.0土0.1的ph。
100.在一些情况下，稳定药物调配物在水溶液中包含(i)浓度为约50mg/ml土5mg/ml的与hctla-4特异性结合并且包含有包含seq id no：1的氨基酸序列的hcvr、包含seq id no：2的氨基酸序列的lcvr和人igg1重链恒定区的人抗体；(ii)约10mm土1mm组氨酸；(iii)约5％w/v土0.5％w/v蔗糖；和(iv)约0.1％土0.01％w/v聚山梨醇酯20，其中调配物具有6.0土0.1的ph。
101.在一些情况下，稳定药物调配物在水溶液中包含(i)浓度为约100mg/ml土10mg/ml的与hctla-4特异性结合并且包含有包含seq id no：1的氨基酸序列的hcvr、包含seq id no：2的氨基酸序列的lcvr和人igg1重链恒定区的人抗体；(ii)约20mm土2mm组氨酸；(iii)约10％w/v土1％w/v蔗糖；和(iv)约0.02％土0.02％w/v聚山梨醇酯20，其中调配物具有6.0土0.1的ph。
102.在一些情况下，稳定药物调配物在水溶液中包含(i)浓度为约50mg/ml土5mg/ml的与hctla-4特异性结合并且包含有包含seq id no：9的氨基酸序列的重链和包含seq id no：10的氨基酸序列的轻链的人抗体；(ii)约10mm
±
1mm组氨酸；(iii)约5％w/v土0.5％w/v蔗糖；和(iv)约0.1％土0.01％w/v聚山梨醇酯20，其中调配物具有6.0土0.1的ph。
103.在一些情况下，稳定药物调配物在水溶液中包含(i)浓度为约100mg/ml土10mg/ml的与hctla-4特异性结合并且包含有包含seq id no：9的氨基酸序列的重链和包含seq id no：10的氨基酸序列的轻链的人抗体；(ii)约20mm土2mm组氨酸；(iii)约10％w/v土1％w/v
蔗糖；和(iv)约0.02％土0.02％w/v聚山梨醇酯20，其中调配物具有6.0土0.1的ph。
104.本发明所涵盖的药物调配物的另外的非限制性实例在本文其他地方阐述，包括下文给出的工作实施例。
105.药物调配物的稳定性
106.本发明的药物调配物表现出高水平的稳定性。如本文关于药物调配物所用的术语
″
稳定
″
是指药物调配物内的抗体在储存限定量的时间后保持可接受程度的结构和/或功能和/或生物活性。即使其中含有的抗体在储存限定量的时间后不维持100％的其结构和/或功能和/或生物活性，调配物也可以是稳定的。在某些情况下，在储存限定量的时间后，约90％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％的抗体的结构和/或功能和/或生物活性的维持可被视为
″
稳定的
″
。
107.稳定性尤其可以通过确定在给定温度下储存限定量的时间后保留在调配物中的天然抗体的百分比来测量。天然抗体的百分比尤其可以通过尺寸排阻色谱(例如，尺寸排阻高效液相色谱[se-hplc])确定。
″
可接受程度的稳定性
″
，当所述短语在本文使用时，是指在给定温度下储存限定量的时间后可以在调配物中检测到至少90％的抗体的天然形式。在某些实施方案中，在给定温度下储存限定量的时间后可以在调配物中检测到至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的抗体的天然形式。在其之后测量稳定性的限定量的时间可为至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少12个月、至少18个月、至少24个月、至少30个月、至少36个月或更长时间。在评估稳定性时，可储存药物调配物的温度可为约-80℃至约50℃的任何温度，例如，储存在约-80℃、约-30℃、约-20℃、约0℃、约4-8℃、约5℃、约25℃、约35℃、约37℃、约45℃或约50℃下。例如，如果在5℃下储存3个月后，通过se-hplc检测到大于约90％、95％、96％或97％的天然抗体，则药物调配物可被认为是稳定的。如果在5℃下储存6个月后，通过se-hplc检测到大于约90％、95％、96％或97％的天然抗体，则药物调配物也可被认为是稳定的。如果在5℃下储存9个月后，通过se-hplc检测到大于约90％、95％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％、98.5％、99％或99.5％的天然抗体，则药物调配物也可被认为是稳定的。如果在5℃下储存24个月后，通过se-hplc检测到大于约90％、95％、96％、96.5％或97％的天然抗体，则药物调配物也可被认为是稳定的。如果在25℃下储存3个月后，通过se-hplc检测到大于约90％、95％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％、98.5％、99％或99.5％的天然抗体，则药物调配物也可被认为是稳定的。如果在25℃下储存6个月后，通过se-hplc检测到大于约90％、95％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％、98.5％、99％或99.5％的天然抗体，则药物调配物也可被认为是稳定的。如果在25℃下储存9个月后，通过se-hplc检测到大于约90％、95％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％、98.5％、99％或99.5％的天然抗体，则药物调配物也可被认为是稳定的。在某些实施方案中，在25℃和60％相对湿度下储存六个月后，本发明的
″
稳定
″
药物组合物或药物调配物包含至少95％、至少96％或至少97％的抗体的天然形式，如通过尺寸排阻超高效液相色谱(se-uplc)所测量的。
[0108]
可使用其他方法评估本发明的调配物的稳定性，例如，使用差示扫描量热法(dsc)确定热稳定性，使用受控搅拌确定机械稳定性，以及使用在约350nm或约405nm处的吸光度确定溶液浊度。例如，如果在约5℃至约25℃下储存6个月或更长时间后，与t＝0时调配物的
od
405
相比，调配物的od
405
的变化小于约0.05(例如，0.04、0.03、0.02、0.01或更少)，则本发明的调配物可被视为稳定的。
[0109]
测量抗体与其靶标的结合亲和力也可用于评估稳定性。例如，如果在例如-80℃、-30℃、-20℃、5℃、25℃、37℃、45℃等储存限定量的时间(例如，14天至9个月)后，调配物内含有的抗ctla-4抗体与hctla-4结合的亲和力为所述储存之前抗体的结合亲和力的至少80％、85％、90％、95％或更多，则本发明的调配物可被认为是稳定的。结合亲和力可通过任何方法确定，例如，elisa或等离子体共振。生物活性可通过ctla-4活性测定来确定，如通过使表达ctla-4的细胞与包含抗ctla-4抗体的调配物接触。抗体与这种细胞的结合可直接测量，如通过facs分析。替代地，可在抗体的存在下测量ctla-4系统的下游活性，并将其与不存在抗体情况下的ctla-4系统活性相比较。
[0110]
稳定性尤其可以通过确定在限定温度下储存限定量的时间后在调配物内形成聚集体的抗体的百分比来测量，其中稳定性与所形成的聚集体百分比成反比。聚集抗体的百分比尤其可以通过尺寸排阻色谱(例如，尺寸排阻高效液相色谱[se-hplc]或尺寸排阻超高效液相色谱[se-uplc])确定。
″
可接受程度的稳定性
″
，当所述短语在本文使用时，是指在给定温度下储存限定量的时间后在调配物中检测到至多6％的抗体呈聚集形式。在某些实施方案中，可接受程度的稳定性是指在给定温度下储存限定量的时间后在调配物中可以检测到至多约6％、5.5％、5％、4.5％、4％、3.5％、3％、2.5％、2％、1.5％、1％、0.5％或0.1％的抗体呈聚集体的形式。在其之后测量稳定性的限定量的时间可为至少2周、至少28天、至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少12个月、至少18个月、至少24个月、至少30个月、至少36个月或更长时间。在评估稳定性时，可储存药物调配物的温度可为约-80℃至约50℃的任何温度，例如，储存在约-80℃、约-30℃、约-20℃、约0℃、约4-8℃、约5℃、约25℃、约35℃、约37℃、约45℃或约50℃下。例如，如果在5℃下储存九个月后，检测到少于约2％、1.75％、1.5％、1.25％、1％、0.75％、0.5％、0.25％或0.1％的抗体呈聚集形式，则药物调配物可被认为是稳定的。如果在25℃下储存六个月后，检测到少于约2.5％、2％、1.75％、1.5％、1.25％、1％、0.75％、0.5％、0.25％或0.1％的抗体呈聚集形式，则药物调配物也可被认为是稳定的。如果在45℃下储存28天后，检测到少于约4％、3.5％、3％、2.5％、2％、1.5％、1％、0.5％或0.1％的抗体呈聚集形式，则药物调配物也可被认为是稳定的。如果在-20℃、-30℃或-80℃下储存三个月后，检测到少于约2％、1.9％、1.8％、1.7％、1.6％、1.5％、1％、0.5％或0.1％的抗体呈聚集形式，则药物调配物也可被认为是稳定的。
[0111]
稳定性尤其可以通过确定在离子交换期间在比抗体的主要级分(
″
主要电荷形式
″
)更具酸性的级分(
″
酸性形式
″
)中迁移的抗体的百分比来测量，其中稳定性与呈酸性形式的抗体的比例成反比。不受理论的束缚，抗体的脱酰胺作用可能导致抗体变得带更多负电荷并因此相对于非脱酰胺抗体更具酸性(参见，例如，robinson，n.，protein deamidation，pnas，2002年4月16日，99(8)：5283-5288)。
″
酸化
″
抗体的百分比可以通过离子交换色谱(例如，阳离子交换高效液相色谱[cex-hplc]或阳离子交换超高效液相色谱[cex-uplc])确定。
″
可接受程度的稳定性
″
，当所述短语在本文使用时，是指在限定温度下储存限定量的时间后在调配物中检测到至多60％的抗体呈更具酸性的形式。在某些实施方案中，可接受程度的稳定性是指在给定温度下储存限定量的时间后在调配物中检测到至多
约55％、50％、45％、40％、35％、30％、29％、28％、27％、26％、25％、20％、15％、10％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％的抗体呈更具酸性的形式。在其之后测量稳定性的限定量的时间可为至少2周、至少28天、至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少12个月、至少18个月、至少24个月、至少30个月、至少36个月或更长时间。在评估稳定性时，可储存药物调配物的温度可为约-80℃至约50℃的任何温度，例如，储存在约-80℃、约-30℃、约-20℃、约0℃、约4-8℃、约5℃、约25℃、约45℃或约50℃下。例如，如果在-80℃、-30℃或-20℃下储存三个月后，少于约29％、28％、27％、26％、25％、24％、23％、22％、21％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％的抗体呈更具酸性的形式，则药物调配物可被视为稳定的。如果在5℃下储存九个月后，少于约50％、45％、40％、35％、30％、25％、24％、23％、22％、21％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％的抗体呈更具酸性的形式，则药物调配物也可被视为稳定的。如果在25℃下储存28天后，少于约30％、29％、28％、27％、26％、25％、24％、23％、22％、21％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％的抗体呈更具酸性的形式，则药物调配物也可被视为稳定的。如果在37℃下储存28天后，少于约37％、36％、35％、34％、33％、32％、31％、30％、29％、28％、27％、26％、25％、24％、23％、22％、21％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％的抗体呈更具酸性的形式，则药物调配物也可被视为稳定的。如果在50℃下储存一个月后，可以检测到少于约50％、49％、48％、47％、46％、45％、44％、43％、42％、41％、40％、39％、38％、37％、36％、35％、34％、33％、32％、31％、30％、29％、28％、27％、26％、25％、24％、23％、22％、21％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％的抗体呈更具酸性的形式，则药物调配物也可被视为稳定的。
[0112]
″
稳定
″
调配物(包括液体调配物、冻干调配物或重构的调配物)是其中蛋白质在储存一段时间后基本上保持其物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物活性的调配物。
″
稳定
″
冻干调配物是在冷藏温度(例如，2-8℃)下没有观察到显著变化的冻干调配物。在某些实施方案中，在5℃下储存一、三、六、九、十二、18或24个月后，本发明的
″
稳定
″
药物组合物或药物调配物包含不超过2％、不超过1.9％、不超过1.8％、不超过1.7％、不超过1.6％或不超过1.5％的hmw物类，如通过尺寸排阻超高效液相色谱(se-uplc)所测量的。在某些实施方案中，在45℃下储存一个月后，本发明的
″
稳定
″
药物组合物或药物调配物包含不超过2％、不超过1.9％、不超过1.8％的hmw物类，如通过se-uplc所测量的。在某些实施方案中，在50℃下储存一个月后，本发明的
″
稳定
″
药物组合物或药物调配物包含不超过3％的hmw物类，如通过se-uplc所测量的。在某些实施方案中，在25℃和60％相对湿度下储存一、三或六个月后，本发明的
″
稳定
″
药物组合物或药物调配物包含不超过2.5％、不超过2.4％、不超过2.3％、不超过2.2％、不超过2.1％、不超过2％、不超过1.9％、不超过1.8％、不超过1.7％、不超过1.6％、不超过1.5％或不超过1.4％的hmw物类，如通过se-uplc所测量的。在某些实施方案中，在环境温度(例如，25℃)下搅拌30或60分钟后，本发明的
″
稳定
″
药物组合物或药物调配物包含不超过2％、不超过1.9％、不超过1.8％、不超过1.7％、不超过1.6％或不超过
1.5％的hmw物类，如通过se-uplc所测量的。
[0113]
对药物调配物在指定时间段
″
之后
″
的稳定性的提及旨在表示稳定性参数(例如，％天然形式、％hmw物类或％酸性形式)的测量是在或大约指定时间段结束时进行的，并且不旨在表示药物调配物必须在此后针对所测量的参数维持相同程度的稳定性。例如，提及9个月后的特定稳定性是指在研究开始后9个月或研究开始后大约9个月进行稳定性的测量。用于评估调配物中的抗体稳定性的另外方法在下文给出的实施例中展示。
[0114]
如下文实施例所示，本发明部分基于以下发现：要求保护的赋形剂与抗ctla-4抗体的组合产生稳定和/或具有可接受的重构时间(例如，小于10分钟、小于5分钟、小于4分钟、小于3分钟等)的调配物。
[0115]
容器和施用方法
[0116]
本发明的药物调配物可容纳在适于储存药物和其它治疗性组合物的任何容器内。例如，药物调配物可容纳在具有限定体积的密封且灭菌的塑料或玻璃容器内，如小瓶、安瓿、注射器、药筒、瓶或iv袋。可以使用不同类型的小瓶容纳本发明的调配物，包括例如透明和不透明(例如，琥珀色)的玻璃或塑料小瓶。同样，可以使用任何类型的注射器来容纳和/或施用本发明的药物调配物。在一些实施方案中，药物调配物容纳在玻璃小瓶中。在一些实施方案中，药物调配物容纳在预填充的注射器中。在一些实施方案中，药物调配物容纳在预填充的桩式针头注射器中。
[0117]
本发明的药物调配物可以容纳在
″
正常钨
″
注射器或
″
低钨
″
注射器内。如本领域普通技术人员将理解的，制造玻璃注射器的过程通常涉及使用热钨棒，所述热钨棒用于刺穿玻璃，从而形成孔，从中可以抽出液体，并且将其从注射器中排出。此过程导致微量的钨沉积在注射器的内表面上。随后的洗涤和其它处理步骤可以用于减少注射器中的钨含量。如本文所用，术语
″
正常钨
″
意指注射器含有大于十亿分之500(ppb)的钨。术语
″
低钨
″
意指注射器含有少于500ppb的钨。例如，根据本发明，低钨注射器可以含有少于约490、480、470、460、450、440、430、420、410、390、350、300、250、200、150、100、90、80、70、60、50、40、30、20、10ppb或更少的钨。
[0118]
可以对注射器中使用的橡胶柱塞和用于封闭小瓶开口的橡胶塞进行涂覆，以防止污染注射器或小瓶的药物成分和/或以保持其稳定性。因此，根据某些实施方案，本发明的药物调配物可容纳在包括经涂覆柱塞的注射器内，或容纳在用经涂覆的橡胶塞密封的小瓶内。例如，柱塞或塞子可涂覆有碳氟化合物膜。适于与容纳本发明的药物调配物的小瓶和注射器一起使用的经涂覆的塞子或柱塞的实例在例如美国专利第4,997,423号；第5,908,686号；第6,286,699号；第6,645,635号；和第7,226,554号中提及，所述专利的内容通过引用整体并入本文。可以在本发明的上下文中使用的特定示例性经涂覆的橡胶塞和柱塞可以商品名称商购获得，可从西部制药服务有限公司(west pharmaceutical services，inc.)(lionville，pa)获得。根据本发明的某些实施方案，药物调配物可容纳在包括碳氟化合物涂覆的柱塞的低钨注射器内。在一些实施方案中，容器是注射器，如ompi ez-fill
tm
注射器或bd neopak
tm
注射器。在一些情况下，注射器是具有1ml iwest活塞、27g薄壁针头和fm30针头护罩或bd260针头护罩的1ml长玻璃注射器。在一些情况下，注射器是具有west novapure
tm
1-3ml活塞、27g薄壁针头和fm30针头护罩或bd260针头护罩的2.25ml玻璃注射器。在各种实施方案中，注射器是0.5ml、0.6ml、0.7ml、0.8ml、0.9ml、1.0ml、
1.1ml、1.2ml、1.3ml、1.4ml、1.5ml、1.6ml、1.7ml、1.8ml、1.9ml、2.0ml、2.1ml、2.2ml、2.3ml、2.4ml、2.5ml、2.6ml、2.7ml、2.8ml、2.9ml、3.0ml、3.5ml、4.0ml、4.5ml、5.0ml、5.5ml、6.0ml、6.5ml、7.0ml、7.5ml、8.0ml、8.5ml、9.0ml、9.5ml或10ml注射器(例如，玻璃注射器)。
[0119]
可以通过肠胃外途径，如注射(例如皮下注射、静脉内注射、肌肉内注射、腹膜内注射等)或经皮、粘膜、鼻、肺和/或口服施用，向患者施用药物调配物。多种可重复使用的笔和/或自动注射器式递送装置可以用于皮下递送本发明的药物调配物。实例包含但不限于autopen
tm
(owen mumford公司(owen mumford，inc.)，伍德斯托克，uk)、disetronic
tm
笔(disetronic medical systems，波道夫，瑞士)、humalog mix 75/25
tm
笔、humalog
tm
笔、humalin 70/30
tm
笔(礼来公司(eli lilly and co.，)，印第安纳波利斯，印第安纳州)、novopen
tm i、ii和iii(诺和诺德(novo nordisk)，哥本哈根，丹麦)、novopen junior
tm
(诺和诺德，哥本哈根，丹麦)、bd
tm
笔(贝迪医疗(becton dickinson)，富兰克林湖，新泽西州)、optipen
tm
、optipen pro
tm
、optipen starlet
tm
以及opticlik
tm
(赛诺菲(sanofi-aventis)，法兰克福市，德国)，仅举几例。应用于皮下递送本发明的药物组合物的一次性笔和/或自动注射器式递送装置的实例包括但不限于solostar
tm
笔(赛诺菲)、flexpen
tm
(诺和诺德)以及kwikpen
tm
(礼来)、sureclick
tm
自动注射器(安进(amgen)，千橡市，加利福尼亚州)、penlet
tm
(haselmeier，斯图加特，德国)、epipen(dey公司(dey，l.p.))以及humira
tm
笔(雅培实验室(abbott labs)，雅培科技园il)，仅举几例。在一些情况下，药物调配物容纳在特别适合与自动注射器一起使用的注射器中。可使用20-30号针头或25-30号针头施用皮下注射。在一些情况下，可使用25号针头施用皮下注射。在一些情况下，可使用27号针头施用皮下注射。在一些情况下，可使用29号针头施用皮下注射。
[0120]
另一类型的递送装置可以包括安全系统。此类装置可以相对便宜，并且在注射完成后立即操作以手动或自动地在针头上延伸安全套筒。安全系统的实例可以包括西部制药(west pharmaceutical)的eris装置或bd公司(becton dickinson)的ultrasafe装置。此外，本文还设想使用大容量装置(
″
lvd
″
)或团注注射器来递送本发明的药物调配物。在一些情况下，lvd或团注注射器可被配置成将药物注射到患者体内。例如，lvd或团注注射器可被配置成递送
″
大
″
体积的药物(通常约2ml至约10m1)。
[0121]
本发明的药物调配物也可容纳在单位剂型中。如本文所用，术语
″
单位剂型
″
是指适合作为单位剂量用于待治疗患者的物理离散单位，每个单位含有经计算产生期望治疗效果的预先确定量的活性化合物以及所需的药物载剂、稀释剂或赋形剂。在各种实施方案中，单位剂型容纳在如本文所讨论的容器内。本发明的调配物中活性成分(例如，抗ctla-4抗体)的实际剂量水平可以变化，以便获得针对特定患者、组合物和施用方式有效实现期望的治疗反应而对患者没有不利影响的量的活性成分。所选剂量水平将取决于多种药代动力学因素，包括所采用的本发明特定组合物的活性、施用途径、施用时间、所采用的特定化合物的排泄速率、治疗持续时间、与所采用的特定组合物组合使用的其他药物、化合物和/或材料、所治疗的患者的年龄、性别、体重、状况、一般健康状况和既往病史，以及医学领域众所周知的类似因素。如本文所用，术语
″
稀释剂
″
是指适于改变或实现如本文所述的一种或多种示例性或适当浓度的溶液。
[0122]
在各种实施方案中，单位剂型含有旨在单次使用的量的活性成分(例如，抗ctla-4
抗体)。在各种实施方案中，单位剂型中活性成分的量为约0.1mg至约5000mg、约10mg至约1000mg，以及约10mg至约500mg、约10mg至约400mg、约10mg至约200mg、约50mg至约150mg、约250mg至约350mg、约125mg至约175mg、约275mg至约325mg，或其范围或间隔。在上述量中间的范围，例如，约135mg至约165mg或285mg至315mg，也旨在为本发明的一部分。例如，旨在包括使用任何以上列举的值(或包含在以上列举的范围内的值)的组合作为上限和/或下限的值范围。在一个特定实施方案中，调配物通常以呈单位剂型的液体形式提供。在一些实施方案中，根据本发明的单位剂型适于对患者皮下施用。在一些实施方案中，根据本发明的单位剂型适于对患者静脉内施用。
[0123]
本发明还包括制备单位剂型的方法。在一个示例性实施方案中，一种用于制备药物单位剂型的方法包括在合适的容器(例如，本文讨论的那些容器)中组合任何前述实施方案的调配物。
[0124]
药物调配物的治疗用途
[0125]
本发明的药物调配物尤其可用于治疗、预防和/或改善与ctla-4活性相关的任何疾病或病症。具体地，本发明的药物调配物尤其可用于治疗、预防和/或改善与ctla-4表达、信号传导或活性相关或由其介导，或通过阻断ctla-4与ctla-4配体(例如st2)之间的相互作用，或以其他方式抑制ctla-4活性和/或信号传导可治疗的任何疾病或病症。
[0126]
本发明的治疗方法包括向受试者施用如本文所公开的包含抗hctla-4抗体的任何调配物。被施用药物调配物的受试者可以是，例如，需要这种治疗、预防和/或改善，或将以其他方式受益于ctla-4和/或ctla-4介导的活性的抑制或减弱的任何人或非人动物。例如，受试者可以是被诊断患有任何上述疾病或病症或被认为有此风险的个体。本发明还包括本文公开的任何药物调配物在制造用于治疗、预防和/或改善与ctla-4活性相关的任何疾病或病症的药物中的用途，所述疾病或病症包括上文提及的任何示例性疾病、病症和病状。
[0127]
在一些实施方案中，本发明提供了试剂盒，其包括如本文所讨论的药物调配物(例如，具有调配物或单位剂型的容器)，以及具有使用药物调配物治疗如上文所讨论的疾病或病症的说明书的包装或标签(例如，包装插页)。在一些情况下，说明书提供如本文所讨论的单位剂型用于治疗疾病或病症的用途。
[0128]
示例性序列
[0129]
本文讨论和随附序列表中示出的序列对应于mab 1，一种具有igg1重链恒定区的完全人抗体，其在所有以下实施例中使用。序列识别号(identities)在下文示出。此抗体也称为regn4659。
[0130]
序列表格(seq id no)
[0131]
seq id no：描述1hcvr2lcvr3hcdr14hcdr25hcdr36lcdr17lcdr2
8lcdr39全长重链10全长轻链
[0132]
实施例
[0133]
提出以下实例，以向本领域普通技术人员提供关于如何制备和使用本发明的方法和组合物的完整公开和描述，并且不旨在限制发明人认为是其发明的范围。已经做出努力以确保关于所使用的数字(例如，量、温度等)的准确性，但是应当考虑一些实验误差和偏差。除非另外指明，否则份数是重量份，分子量是平均分子量，温度是摄氏度，并且压力是或接近大气压。
[0134]
实施例1：缓冲液和ph对抗ctla-4抗体稳定性的影响
[0135]
通过将25mg/ml mab 1在45℃下在一系列不同ph范围的缓冲液系统中孵育28天来检查缓冲液和ph对mab 1液体调配物的热稳定性的影响。研究了以下ph和缓冲液系统：10mm乙酸盐(ph 4.5至5.5)、10mm组氨酸(ph 5.5至6.5)和10mm磷酸盐(ph 6.0至7.0)。基于se-uplc和cex-uplc分析的结果，当在ph 5.5与ph 6.5之间将mab 1配制于组氨酸缓冲液中时，观察到最大蛋白质稳定性。这些分析还表明，低分子量(lmw)物类、高分子量(hmw)物类和电荷变体的形成是主要降解途径。选择ph 6.0的10mm组氨酸缓冲液作为药物产品(dp)的调配物缓冲液，因为其提供最佳的总体稳定水平。结果在表1中示出。
[0136]
表1：缓冲液和ph对在45℃下孵育28天的25mg/ml_mab1的稳定性的影响
[0137][0138][0139]
a报告为相对于起始材料的纯度变化。在所有调配物中，起始材料(未孵育)含有≥95.6％的天然峰(通过se-uplc获得)和≥47.1％的主峰(通过cex-uplc获得)。
[0140]
cex，阳离子交换；hmw，高分子量；lmw，低分子量；od，光密度；rp，反相；se，尺寸排阻；uplc，超高效液相色谱
[0141]
实施例2：热稳定剂对抗ctla-4抗体稳定性的影响
[0142]
可以向抗体调配物中添加稳定剂如蔗糖，以使蛋白质稳定于冻/融应力并增加液体和冻干调配物中蛋白质的热稳定性。通过在含有和不含10％蔗糖的情况下将25mg/ml mab1暴露于八个冻/融循环来检查蔗糖对mab1液体调配物的冻/融稳定性的影响。如表2中所示，对于不含蔗糖的调配物，通过se-uplc观察到hmw物类增加1.0％，而对于含有蔗糖的调配物，通过se-uplc未观察到hmw的明显增加。通过将在含有和不含10％蔗糖的情况下配
制的25mg/ml mab1在45℃下孵育28天来检查蔗糖对mab1液体调配物的热稳定性的影响。如表3中所示，无论蔗糖是否存在，通过se-uplc未观察到hmw的明显增加。
[0143]
表2：在八次冻融循环后蔗糖对25mg/ml mab1的稳定性的影响
[0144][0145][0146]
a报告为相对于起始材料的纯度变化。在所有调配物中，起始材料(未孵育)含有≥97.1％的天然峰(通过se-uplc获得)和≥47.9％的主峰(通过cex-uplc获得)。
[0147]
cex，阳离子交换；hmw，高分子量；lmw，低分子量；od，光密度；rp，反相；se，尺寸排阻；uplc，超高效液相色谱
[0148]
表3：蔗糖对在45℃下孵育28天的25mg/ml mab 1的稳定性的影响
[0149][0150]
a报告为相对于起始材料的纯度变化。在所有调配物中，起始材料(未孵育)含有≥97.1％的天然峰(通过se-uplc获得)和≥47.9％的主峰(通过cex-uplc获得)cex，阳离子交换；hmw，高分子量；lmw，低分子量；od，光密度；rp，反相；se，尺寸排阻；uplc，超高效液相色谱
[0151]
选择5％蔗糖作为配制的药物物质(fds)中的冻干保护剂，因为其显示在冻干的dp
中提供足够的mab1稳定性(参见下表4)。在铅调配物中，在fds(冻干前)和重构的dp(冻干后)之间没有观察到差异。此外，重构至100mg/ml mab1(含有10％蔗糖)的dp产生几乎等渗的调配物。
[0152]
表4：蔗糖浓度对在50℃下孵育28天的冻干mab1药物产品的稳定性的影响
[0153][0154]
a报告为相对于起始材料的纯度变化。在所有四种调配物中，起始材料(未孵育)含有≥98.5％的天然峰(通过se-uplc获得)和≥54.6％的主峰(通过cex-uplc获得)。
[0155]
cex，阳离子交换；hmw，高分子量；lmw，低分子量；od，光密度；rp，反相；se，尺寸排阻；uplc，超高效液相色谱
[0156]
实施例3：表面活性剂对抗ctla-4抗体稳定性的影响
[0157]
可以向抗体调配物中添加稳定剂如表面活性剂以保护蛋白质免受表面诱导的降解。在液体调配物中检查表面活性剂对25mg/ml mab1的热稳定性的影响。评估以下表面活性剂：0.1％聚山梨醇酯20和0.1％聚山梨醇酯80。热稳定性研究的结果汇总于表5中。当在45℃下孵育时，相对于不含任何表面活性剂的对照调配物，聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80的添加对mab1的热稳定性具有负面影响。观察到浊度、lmw物类、hmw物类和电荷变体的增加。与含有表面活性剂的其他调配物相比，含有0.1％聚山梨醇酯20的调配物形成最少量的聚集体和电荷变体物类。
[0158]
通过在含有和不含聚山梨醇酯20的情况下将50mg/ml mab1涡旋120分钟来检查聚山梨醇酯20对mab1的搅拌稳定性的影响。如表6中所示，对于不含聚山梨醇酯20的调配物，通过se-uplc观察到hmw物类增加2.5％，而对于含有聚山梨醇酯20的调配物，通过se-uplc未观察到hmw的明显增加。
[0159]
表5：有机助溶剂和表面活性剂对在45℃下孵育28天的25mg/mlmab1的稳定性的影响
[0160][0161]
a报告为相对于起始材料的纯度变化。在所有调配物中，起始材料(未孵育)含有≥97.1％的天然峰(通过se-uplc获得)和≥47.9％的主峰(通过cex-uplc获得)。
[0162]
cex，阳离子交换；hmw，高分子量；lmw，低分子量；od，光密度；rp，反相；se，尺寸排阻；uplc，超高效液相色谱
[0163]
表6：聚山梨醇酯20对搅拌后(涡旋120分钟)的50mg/ml mab1的稳定性的影响
[0164][0165][0166]
a报告为相对于起始材料的纯度变化。在所有调配物中，起始材料(未孵育)含有≥
96.7％的天然峰(通过se-uplc获得)和≥47.8％的主峰(通过cex-uplc获得)。
[0167]
cex，阳离子交换；hmw，高分子量；lmw，低分子量；od，光密度；rp，反相；se，尺寸排阻；uplc，超高效液相色谱
[0168]
实施例4：抗ctla-4抗体药物产品的液体、冻干和重构的调配物的稳定性
[0169]
进行对评估mab1药物产品的液体、冻干和重构的调配物的储存、加速稳定性和应力稳定性(搅拌)的研究。用于储存和稳定性研究的冻干的dp是通过根据实施例5中讨论的冻干循环在20ml 1型玻璃小瓶中冻干5.3ml的fds来制造的。重构的调配物是通过将冻干的dp(20ml 1型玻璃小瓶中的5.3ml fds)用4.9ml注射用水(wfi)重构为50mg/ml mab1和用2.3ml wfi(用于静脉内或皮下施用)重构为100mg/ml mab1来制备的。
[0170]
使用以下测定评估mab 1dp调配物的稳定性：
[0171]
●
对于冻干的dp样品
[0172]
○
通过冻干的dp的目视检查获得的结块外观
[0173]
○
通过vapor水分分析仪获得的冻干的dp的水分含量
[0174]
○
冻干的dp的重构时间
[0175]
●
对于液体样品，包括重构的dp样品
[0176]
○
通过目视检查获得的颜色和外观
[0177]
○
ph
[0178]
○
通过在405nm处光密度(od)的增加测量的浊度
[0179]
○
通过微流成像(mfi)进行的亚可见颗粒分析
[0180]
○
通过反相超高效液相色谱(rp-uplc)回收的蛋白质
[0181]
○
通过以下测定获得的纯度：
[0182]
■
还原和非还原的微芯片毛细管电泳(mce)；
[0183]
■
尺寸排阻超高效液相色谱(se-uplc)
[0184]
○
通过以下测定进行的电荷变体分析：
[0185]
■
阳离子交换(cex)uplc
[0186]
■
成像毛细管等电聚焦(icief)
[0187]
○
％相对效力：
[0188]
■
每个样品的相对效力是使用生物测定来确定的并定义为：(ic
50
参考样品/ic
50
样品)
×
100％。储存稳定性样品的测量效力必须在参考标准的测量效力的50％至150％内。
[0189]
储存和稳定性研究的结果显示在下表7至表13中。
[0190]
表7：研究在5℃下储存的50mg/ml mab1液体药物产品的稳定性-1.5ml填充在2ml玻璃小瓶中
[0191][0192][0193]
cex，阳离子交换；ds，药物物质，hmw，高分子量；icief，成像毛细管等电聚焦；lmw，低分子量；mce，微芯片毛细管电泳；mfi，微流成像；nr，不按方案要求；nd：未确定；od，光密度；rp，反相；se，尺寸排阻；uplc，超高效液相色谱
[0194]
表8：研究50mg/ml mab1液体药物产品的稳定性-1.5ml填充在2ml玻璃小瓶中-加速条件的影响
[0195][0196][0197]
cex，阳离子交换；ds，药物物质，hmw，高分子量；icief，成像毛细管等电聚焦；lmw，低分子量；mce，微芯片毛细管电泳；mfi，微流成像；nr，不按方案要求；od，光密度；rp，反相；se，尺寸排阻；uplc，超高效液相色谱
[0198]
表9：研究50mg/ml mab1液体药物产品的稳定性-1.5ml填充在2ml玻璃小瓶中-应力条件的影响
[0199][0200][0201]
cex，阳离子交换；ds，药物物质，hmw，高分子量；icief，成像毛细管等电聚焦；lmw，低分子量；mce，微芯片毛细管电泳；mfi，微流成像；nr，不按方案要求；od，光密度；rp，反相；se，尺寸排阻；uplc，超高效液相色谱
[0202]
表10：研究在5℃下储存的mabl冻干药物产品的稳定性
[0203]
[0204][0205]
a用无菌wfi将样品重构为100mg/ml mab1。
[0206]
cex，阳离子交换；ds，药物物质，hmw，高分子量；icief，成像毛细管等电聚焦；lmw，低分子量；mce，微芯片毛细管电泳；mfi，微流成像；nr，不按方案要求；nd：未确定；od，光密度；rp，反相；se，尺寸排阻；uplc，超高效液相色谱
[0207]
表11：研究在加速条件下储存的mab1冻干药物产品的稳定性
[0208][0209][0210]
a用无菌wfi将样品重构为100mg/ml mab1。
[0211]
cex，阳离子交换；ds，药物物质，hmw，高分子量；icief，成像毛细管等电聚焦；lmw，低分子量；mce，微芯片毛细管电泳；mfi，微流成像；nr，不按方案要求；od，光密度；rp，反相；se，尺寸排阻；uplc，超高效液相色谱
[0212]
表12：研究mab1重构药物产品的稳定性
[0213]
[0214][0215]
cex，阳离子交换；ds，药物物质，hmw，高分子量；icief，成像毛细管等电聚焦；lmw，低分子量；mce，微芯片毛细管电泳；mfi，微流成像；nr，不按方案要求；od，光密度；rp，反相；se，尺寸排阻；uplc，超高效液相色谱
[0216]
表13：研究mab1重构药物产品的稳定性
[0217]
[0218][0219]
cex，阳离子交换；ds，药物物质，hmw，高分子量；icief，成像毛细管等电聚焦lmw，低分子量；mce，微芯片毛细管电泳；mfi，微流成像；nr，不按方案要求；od，光密度；rp，反相；se，尺寸排阻；uplc，超高效液相色谱
[0220]
dp储存和稳定性研究的结果表明mab 1当以25mg/ml至100mg/ml的浓度与10mm至20mm组氨酸(ph 6)、5％w/v至10％w/v蔗糖和0.1％w/v至0.2％w/v聚山梨醇酯20配制时是稳定的。mab1调配物可经受暴露于室温而不损害物理或化学稳定性。当在示例性调配物中重构至50mg/ml至100mg/ml的浓度时，mab1蛋白也是稳定的。将重构的mab1 dp暴露于25℃达24小时不会损害蛋白质的完整性，也不会搅拌重构的dp。如通过生物测定分析所确定的，即使在加速条件下孵育后，mab1调配物仍保持效力。
[0221]
实施例5：冻干循环开发
[0222]
为临床生产开发的冻干工艺由以下组成：冷冻、初级干燥和次级干燥。使用fts lyostar
tm
iii冻干机基于-15.7℃的部分结块塌陷温度(tc)开发冻干工艺，使用冷冻干燥显微镜确定冷冻配制的药物物质(fds)。在初级干燥期间，产品温度必须不超过部分结块tc以在冻干循环期间保持结块完整性。开发次级干燥工艺以确保dp具有低残留水分含量。
[0223]
冻干循环花费大约43小时以在填充有5.3ml的50mg/ml mab1 fds的20ml的1型玻璃小瓶中产生冻干的mab1 dp。冻干循环(图1)含有下表14中所示的步骤。
[0224]
表14：mab1药物产品的冻干循环
[0225][0226]
na，不适用
[0227]
本发明不限于本文所描述的具体实施例的范围。事实上，除了本文所描述的那些之外，本发明的各种修改对于本领域技术人员来说将从前面的描述中变得显而易见。此类修改旨在落入所附权利要求书的范围内。