山羊的2'-FL增产的制作方法

本文公开的发明涉及乳制品生产领域；更具体地，涉及一种用于产生具有天然存在的2′-岩藻糖基乳糖的山羊乳的方法。

背景技术：

1、母乳被认为是新生儿和小婴儿的最佳食物，并且是至少两岁之前营养的重要组成部分(世卫组织和联合国儿童基金会建议纯母乳喂养至两岁)。母乳包含营养物质和生物活性组分的复杂混合物，从而提供婴儿需要的所有营养物质。据称，在生物活性组分中，人乳寡糖(hmos)通过其作为益生元以及在抑制病原体和病毒粘附于肠上皮受体方面的功能而具有重要作用。据描述，人乳中存在超过160种hmos结构，其在初乳中的浓度约为20-25g/l，在成熟乳中的浓度则降至5-20g/l左右。在hmos总量中，中性岩藻糖基化hmos含量占优，超过酸性唾液酸化hmos(分别为50-70％和10-25％)。在大多数人中，2′岩藻糖基乳糖(2′-fl)是泌乳母体中丰度最高的hmos之一，在一些情况下占所有hmos的近30％。据称，2′-fl通过起到病原体阱的作用而在免疫功能和保护婴儿免受肠道感染方面具有重要作用。与非2′-fl喂养的婴儿相比，母乳喂养的婴儿和喂养2′-fl补充配方制品的婴儿的tnf-α和ifn-γ浓度较低。

2、在人类中，半乳糖苷2-α-l-岩藻糖基转移酶2是由fut2基因的显性等位基因编码的酶，而隐性等位基因不产生功能性酶。半乳糖苷2-α-l-岩藻糖基转移酶2是合成2′-fl和其他岩藻糖基化hmos所必需的。

3、hmos岩藻糖基化的个体差异基于泌乳母体和lewis血型状态。分泌者(se)基因编码fut2酶，该酶是合成2′-fl和其他岩藻糖基化hmos所必需的，并在泌乳乳腺中表达。(se+)分泌型女性产生的乳汁含有丰富的α1-2-岩藻糖基化hmos，尤其是2′-fl。相比之下，非分泌型雌性缺乏fut2酶。这些女性的乳汁中仅显示极少量或无2′-fl及其他α1-2-岩藻糖基化hmos。大约80％的欧美女性显示为分泌型。

4、尽管世界卫生组织强调母乳喂养的重要性，但并非所有母亲都能够或愿意母乳喂养婴儿。当无法进行母乳喂养时，婴儿配方制品是最佳选择。婴儿配方制品制造商的目的是生产在组成和效能上尽可能接近人乳的婴儿配方制品。

5、大多数婴儿配方制品都是由牛乳或山羊乳制成，因为它们容易以大量获得。有趣的是，这些动物的乳汁显示含有类似于人乳的寡糖。然而，牛乳和山羊乳中存在的寡糖的多样性是有限的。已经识别超过160种hmos结构，相比之下，牛乳约有40种，山羊乳约有50种。

6、有益效果得益于总体hmos，但也得益于个体hmos结构。研究报道最多的个体hmos是2’-fl、3-fl、3’-sl、6’-sl、3’gl、6’-gl、lnfp ii、lnt、lnnt和dflnt。有趣的是，2′-fl是分泌型人乳中丰度最高的寡糖之一，其出现在山羊乳而不是牛乳中。

7、家养哺乳动物(例如牛和山羊)的乳汁中寡糖的浓度通常远低于人乳中所见的寡糖浓度，通常牛为0.03至0.06g/l，山羊为0.25至0.5g/l。同样，山羊乳中2′-fl的浓度远低于母乳中2′-fl的浓度。因此，尽管发现山羊乳中含有2′-fl，这使得它在无法获得人乳时成为牛乳的较佳替代，但山羊乳的总体寡糖浓度，特别是2′-fl的浓度远不及人乳中所见水平。

8、目前没有公司能够提供具有与母乳相似的寡糖多样性和浓度的常规婴儿配方制品。由于难以合成且价格高昂，合成寡糖的应用受限。此外，合成寡糖的应用在许多司法管辖区受到严格监管，导致其在常规配方制品(例如婴儿配方制品等)中的应用受限。应用中的合成寡糖通常用于特殊配方制品中。例如ep2934190公开了在调节或减少成人或老龄炎症中应用的营养组合物，其富含hmos例如乳-n-新四糖和2′-fl。wo2014100191公开了在提供神经保护作用中应用的营养组合物，其还包含寡糖，例如乳-n-新四糖和2′-fl。

9、在使用天然寡糖源的情况下，在分离过程中总寡糖的损失可能高达20％。

10、因此，在为无法以母乳喂养的新生儿和小婴儿寻找完全食品时，除人类以外的其它哺乳动物乳汁中低水平的总寡糖含量仍成问题。

11、本发明旨在提供更接近人类母乳组成和效能的山羊乳。

技术实现思路

1、为了满足前述需求的一个或多个，本发明在一个方面提供了一种产生具有天然存在的2′-岩藻糖基乳糖(2′-fl)的山羊乳的方法，其包括

2、a)确定山羊是否产生2′-fl；

3、b)选择多只产生2′-fl的山羊；和

4、c)使所选山羊产乳。

5、在第二方面中，本发明提供了一种用于确定山羊是否具有fut2基因区域中含缺失的一个拷贝和/或具有snp处有利等位基因的至少一个拷贝的方法，其中多态性的存在与否使用具有seq id no:1和seq id no:2和/或seq id no:3和seq id no:4和/或seq id no:5和seq id no:6的特异性引物至少之一通过dna测序来确定。

6、在第三方面，本发明提供了山羊乳，其可通过产生具有天然存在的2’-岩藻糖基乳糖的山羊乳的方法获得。

7、在第四方面，本发明提供了从乳汁中获得的组分，其中所述组分是乳清、乳清蛋白分离物、乳清蛋白浓缩物、脱矿物质乳清、酪蛋白、胶束酪蛋白浓缩物、寡糖和/或2′-fl。

8、在第五方面，本发明提供了包含山羊乳的食品，其中所述食品是早产儿配方制品、婴儿配方制品、较大婴儿配方制品、成人配方制品、妈妈配方制品、医用配方制品、运动配方制品或奶油、酸奶、黄油、奶酪或冰淇淋。

9、在第六方面，本发明提供了与2′-fl生产性状相关的snp标志物，其特征在于所述snp标志物位于fut2基因中，且在碱基对604处具有碱基突变cc-ct和/或在碱基对931处具有碱基突变cg-gt或tt。

技术特征：

1.一种产生具有天然存在的2’-岩藻糖基乳糖(2’-fl)的山羊乳的方法，其包括

2.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括以散装乳形式收集所选山羊的乳汁用于进一步加工，所述散装乳优选为至少150l。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述散装乳为至少1000l，优选至少5000l，最优选至少10000l。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其中所述山羊乳是成熟乳。

5.根据权利要求2或3所述的方法，其中所述山羊乳是初乳。

6.根据权利要求2或3所述的方法，其中所述山羊乳是成熟乳和初乳的组合。

7.根据权利要求4所述的方法，其中在收集的成熟乳中，天然存在的2'-fl的浓度为至少13mg/l，优选至少15mg/l，更优选至少30mg/l。

8.根据权利要求5所述的方法，其中在收集的初乳中，天然存在的2'-fl的浓度为至少100mg/l，优选至少125mg/l，更优选至少175mg/l。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括确定产生2'-fl的山羊是否具有致使产生更高浓度的2'-fl的fut2基因区域中的缺失和/或具有致使产生更高浓度的2'-fl的snp处的等位基因的至少一个拷贝；选择具有该fut2基因区域中的缺失和/或该snp处的等位基因的至少一个拷贝的山羊，并使所选山羊产乳。

10.根据权利要求9所述的方法，其中在snp处的至少一个等位基因位于碱基对604和931中的任一者或其任意组合处。

11.根据权利要求10所述的方法，其中碱基对604处的多态性的碱基对变体是cc至ct，并且碱基对931处的多态性的碱基对变体是gg至gt或tt。

12.根据权利要求9-11所述的方法，其中，分别地，

13.一种用于确定山羊是否具有fut2基因区域中的缺失和/或具有snp处的至少一个等位基因的方法，其中多态性的存在与否使用具有seq id no:1和seq idno:2和/或seq idno:3和seq id no:4和/或seq id no:5和seq id no:6的特异性引物至少之一通过dna测序来确定。

14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于包括以下步骤：

15.根据权利要求1-12所述的方法能够获得的山羊乳，所述山羊乳具有至少13、30、60、70或80 5mg/l天然存在的2'-fl。

16.从根据权利要求15所述的乳汁中获得的组分，其中所述组分是乳清、乳清蛋白分离物、乳清蛋白浓缩物、脱矿物质乳清、酪蛋白、胶束酪蛋白浓缩物、寡糖和/或2'-fl。

17.包含根据权利要求15所述的山羊乳的食品，其中所述食品是营养制剂，例如早产婴儿配方制品、婴儿配方制品、较大婴儿配方制品、成人配方制品、妈妈配方制品、成人配方制品、老龄配方制品、医用配方制品、运动配方制品或奶油、酸奶、黄油、奶酪或冰淇淋制品。

18.一种与2'-fl生产性状相关联的snp标志物，其特征在于所述snp标志物位于fut2基因中，且在碱基对604处具有碱基突变cc-ct和/或在碱基对931处具有碱基突变cg-gt或tt，所述snp标志物优选与山羊乳中的2'-fl浓度显著相关。

技术总结
公开了一种产生具有天然存在的2’‑岩藻糖基乳糖(2’‑FL)的山羊乳的方法。该方法包括确定山羊是否产生2'‑FL，选择多只产生2'‑FL的山羊；并使所选山羊产乳。还公开了确定产生2’‑FL的山羊是否具有FUT2基因区域中的缺失和/或具有SNP处有利等位基因的至少一个拷贝。

技术研发人员：A·J·汉德里克曼,R·P·海比,E·P·M·佩利斯,F·本杰明,L·戴克胡伊岑,A·C·查齐奥安努,S·S·范列文
受保护的技术使用者：澳优有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/1