针对白介素-22的抗体的制作方法

本发明涉及抗il22抗体。本文提供的此类抗体可用于治疗皮肤炎症，特别是特应性皮炎。

背景技术：

1、特应性皮炎(ad)，也被称为异位性湿疹，是一种炎性病状，其引起表皮功能障碍和增厚、湿疹病变和瘙痒症。该病状在所有年龄和种族的人群中流行并且具有经伤残调整生命年(disability-adjusted life years)测量的所有皮肤病中的最大疾病负担(laughter等人,br.j.dermatol.2020；刊载之前的电子版)。ad是一种复杂的病状并且其病理生理学受许多因素影响，例如遗传、环境和免疫因素。尽管2型免疫机制在特应性皮炎的病理学中具有重要地位，但越来越多的证据支持若干免疫通路的作用。

2、用于ad的治疗包括全身性免疫抑制剂，例如环孢素、甲氨蝶呤、霉酚酸吗啉乙酯(mycophenolate mofetil)和硫唑嘌呤(azathioprine)。抗抑郁剂和纳曲酮可用于控制瘙痒症。在2016年，克立硼罗(crisaborole)，一种局部磷酸二酯酶-4抑制剂，被批准用于轻度至中度湿疹，并且在2017年，度匹鲁单抗(dupilumab)，一种il-4rα的单克隆抗体拮抗剂，被批准用于治疗中度至重度湿疹。然而，当前的治疗选择仅提供暂时的、不完全的症状缓解。

3、il22是il10细胞因子家族的成员，其取决于环境情况而在各种炎性和组织反应中具有多种功能。il22主要由淋巴细胞(例如t辅助1(th1)细胞、th17细胞和th22细胞、γδt细胞、自然杀伤(nk)细胞和先天性淋巴细胞(ilc)3以及非淋巴细胞(例如纤维母细胞、中性粒细胞、巨噬细胞和肥大细胞)产生(关于概述，参见：lanfranca mp等人,j.mol.med.(berl)(2016)94(5):523-534)。il22通过由il22受体1(il22r1，也被称为il22ra1或白介素-22受体亚基α-1)和il10受体2(il10r2)构成的异二聚跨膜受体复合物进行信号传导，而il10通过il10r1和il10r2进行信号传导。与il-10家族的其他成员类似，il22经由il22r1/il10r2复合物和随后的jak信号转导蛋白和转录活化因子(stat)信号传导通路(包括jak1、tyk2和stat3)介导其作用。与il10不同，还报道il22经由多种mapk通路(例如erk1/2、jnk和p38)进行信号传导。在皮肤中，il22通过与表达在角质形成细胞上的il22r1结合来作用于这些细胞。

4、与il10细胞因子家族中的其他成员不同，il22具有可溶性分泌受体，称为il22结合蛋白(il22bp，也被称为il22ra2或白介素-22受体亚基α2)。尽管il22bp与il22r1链共有最高的结构同源性，但il22bp与il22r1相比呈现高得多的针对il22的亲和力并且因此阻止il22与il22r1的结合。

5、已证实，对il22具有特异性的il22bp阻断il22的活性。所有il22的抑制已在严重特应性皮炎患者或高基线il22表达患者中显示有效信号(guttman-yassky e等人,j amacad dermatol.2018；78(5):872-881和brunner pm等人,j allergy cin immunol.2019；143(1):142-154)。还提出将il22r1的抑制作为用于抑制il22的潜在治疗选择，其还将部分阻断il-20和il-24的作用。迄今为止，不存在经设计以特异性靶向生物活性il22的治疗选择，所述il22未与il22bp结合因此对il22bp的正常生物功能无影响。

6、th22细胞因子il22的增加的表达是特应性皮炎(ad)中的特征性发现结果。然而，尚未完全理解在体内il22在ad的发病机制中的特定作用。尚未具体地研究il22在ad的发展和维持中的作用，但已假设il22通过损害皮肤屏障功能、免疫失调和瘙痒症而在ad的发展中发挥重要作用。

7、us8906375和us7901684公开了结合il22的抗体和此类抗体在治疗ad中的有效性。us7737259公开了可用于治疗银屑病的特异性抗il22抗体。

技术实现思路

1、本发明通过提供具有本文所述的功能和结构特性的抗il22抗体解决了对特应性皮炎的新治疗的需要。

2、本发明提供了结合人白介素22(il22)的分离的抗体，其中该抗体能够抑制或减弱il22与il22受体1(il22r1)和il22结合蛋白(il22ra2)的结合。

3、本发明还提供了结合人il22的分离的抗体，其由一组特定的cdr序列和/或可变区序列限定。

技术特征：

1.一种分离的抗体，其结合白介素22(il22)并抑制或减弱il22与il22受体1(il22r1)的结合。

2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体与il22上的区域结合，使得所述结合在空间上阻断il22和il22r1之间的相互作用。

3.根据权利要求1或2所述的抗体，其中所述抗体抑制或减弱il22与il22结合蛋白(il22ra2)的结合。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的抗体，其中所述抗体结合人和/或食蟹猴il22。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的抗体，其中所述抗体对于人il22具有小于100pm的解离平衡常数(kd)。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的抗体，其中所述抗体特异性结合对应于由seq idno：1定义的il22的氨基酸序列的残基72-85的多肽vrligeklfhgvsm(seq id no：96)。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的抗体，其中所述抗体结合人il22的表位，所述表位包含选自人il22(seq id no：1)的如以抗体和il22之间小于的接触距离测定的lys44、phe47、gln48、ile75、gly76、glu77、phe80、his81、gly82、val83、ser84、met85、ser86、arg88、leu169、met172、ser173、arg175、asn176和ile179的五个或更多个残基。

8.根据权利要求7所述的抗体，其中所述结合使用x射线晶体学测定。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的抗体，其包含：

10.根据权利要求1-9中任一项所述的抗体，其中所述轻链可变区包含seq id no：22中给出的序列。

11.根据权利要求1-9中任一项所述的抗体，其中所述重链可变区包含seq id no：24中给出的序列。

12.根据权利要求1-9中任一项所述的抗体，其中所述轻链可变区包含seq id no：22中给出的序列，或与其至少90％相同的序列；并且所述重链可变区包含seq id no：24中给出的序列，或与其至少90％相同的序列。

13.根据权利要求1-9中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含轻链可变区和重链可变区，其中

14.根据权利要求9所述的抗体，其中每个cdr含有多至三个氨基酸取代，并且其中此类氨基酸取代是保守的。

15.根据权利要求9所述的抗体，其中轻链可变区和重链可变区的其余部分分别与seqid no：22和24具有至少90％的同一性。

16.根据权利要求1-15中任一项所述的抗体，其中所述抗体是全长抗体。

17.根据权利要求1-15中任一项所述的抗体，其中所述抗体是抗体片段。

18.根据权利要求17所述的抗体，其中所述抗体片段是fab、fab’、f(ab’)2、fv、dsfv、scfv或dsscfv。

19.根据权利要求18所述的抗体，其中所述抗体是包含轻链和重链的fab，所述轻链包含seq id no：26中给出的序列，所述重链包含seq id no：28中给出的序列。

20.根据权利要求18所述的抗体，其中所述抗体是包含含有分别在seq id no：5/6/7/8/9/10中给出的序列的cdr-l1/cdr-l2/cdr-l3/cdr-h1/cdr-h2/cdr-h3的fab，并且轻链和重链的其余部分分别与seq id no：26和28具有至少90％的同一性或相似性。

21.根据权利要求16所述的抗体，其中所述抗体是包含轻链和重链的igg1，所述轻链包含seq id no：26中给出的序列，所述重链包含seq id no：30中给出的序列。

22.根据权利要求16所述的抗体，其中所述抗体是包含含有分别在seq id no：5/6/7/8/9/10中给出的序列的cdr-l1/cdr-l2/cdr-l3/cdr-h1/cdr-h2/cdr-h3的igg1，并且轻链和重链的其余部分分别与seq id no：26和30具有至少90％的同一性或相似性。

23.根据权利要求16所述的抗体，其中所述抗体是包含轻链和重链的igg4p，所述轻链包含seq id no：26中给出的序列，所述重链包含seq id no：32中给出的序列。

24.根据权利要求16所述的抗体，其中所述抗体是包含含有分别在seq id no：5/6/7/8/9/10中给出的序列的cdr-l1/cdr-l2/cdr-l3/cdr-h1/cdr-h2/cdr-h3的igg4p，并且轻链和重链的其余部分分别与seq id no：26和32具有至少90％的同一性或相似性。

25.一种分离的多核苷酸，其编码根据权利要求1至24中任一项所述的抗体。

26.一种携带权利要求25的多核苷酸的表达载体。

27.一种宿主细胞，其包含如权利要求26所定义的载体。

28.一种产生权利要求1至24中任一项的抗体的方法，其包括在允许产生抗体的条件下培养权利要求27的宿主细胞，并回收所产生的抗体。

29.一种药物组合物，其包含权利要求1至24中任一项的抗体和药学上可接受的佐剂或载体。

30.权利要求1至24中任一项的抗体或如权利要求29所定义的药物组合物，其用于通过疗法来治疗人体或动物体的方法中。

31.权利要求1至24中任一项的抗体或如权利要求29所定义的药物组合物，其用作药物。

32.权利要求1-24中任一项的抗体或如权利要求29所定义的药物组合物用于制造药物的用途。

33.如权利要求1-24中任一项所定义的抗体或根据权利要求29所述的药物组合物，其用于治疗炎性皮肤病状。

34.一种治疗或预防炎性皮肤病状的方法，其包括向有需要的患者施用治疗有效量的如权利要求1-24中任一项所定义的抗体或如权利要求29所定义的药物组合物。

35.根据权利要求1-24中任一项所述的抗体或根据权利要求29所述的药物组合物在制备用于治疗炎性皮肤病状的药物中的用途。

36.根据权利要求33所述的抗体或药物组合物、根据权利要求34所述的方法或根据权利要求35所述的用途，其中所述炎性皮肤病状是银屑病、银屑病关节炎、接触性皮炎、慢性手部湿疹或特应性皮炎。

技术总结
本发明涉及与IL22结合并抑制其与其一种或多种天然配体相互作用的抗体。提供了此类抗体的具体实例。还提供了抗体的治疗用途以及产生此类抗体的方法。

技术研发人员：J·M·D·拉斯特里克,J·P·希尔瓦,K·L·泰森,P·C·艾略特,S·F·R·雷森,Z·阿达史
受保护的技术使用者：UCB生物制药有限责任公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15