聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物的制备方法和用途与流程

1.本发明属于有机合成和药物领域，具体涉及一种用于前列腺肿瘤治疗的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物的制备方法和用途，特别是涉及通过将阿比特龙与聚乙二醇单甲醚反应制备聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物，以及此聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。


背景技术：

2.前列腺癌(prostate cancer，pca)是指发生于男性前列腺组织中的恶性肿瘤，常发生在腺体外周或者后叶的腺泡腺管上皮部位。pca的发病率与患者的年龄有一定关系，多发病于中老年男性，且80％以上的前列腺患者是雄激素依赖性的前列腺癌，其较强的病理异质性，病人5年生存率仅为28％。全世界每年约有68万男性被确诊为pca患者，其中22万因为该疾病而导致死亡。以往数据显示，威胁男性健康的第一恶性肿瘤是肺癌，而最新数据表明，pca将会取而代之成为新的最大威胁，目前占男性恶性肿瘤发病率的21％。
3.醋酸阿比特龙作为一种新型的雄激素合成抑制剂，可中断睾丸、肾上腺和肿瘤本身的雄激素合成，全面抑制人体内雄激素的产生，显著降低psa水平，而且能够有效的减小肿瘤体积，明显延长晚期前列腺癌患者的患者生命，副作用小，安全性较高。醋酸阿比特龙是一种脂溶性化合物，其辛醇-水分配系数5.12(log p)，属于几乎不溶或不溶于水。根据fda公开的资料，醋酸阿比特龙片生物利用度极低，由于极低的水溶解性，导致人体对其吸收不良，大部分药物被排泄，不易达到预期的治疗，故需加大剂量来提高药效，这样不仅增加了用药成本，同时也增大其对机体的毒副作用。此外，口服给药后，醋酸阿比特龙的药动学受食物的影响非常大，与食物尤其高脂饮食同服时体内药物暴露量显著增加，患者需要在服药前后2小时严格禁食。文献报道，服用醋酸阿比特龙同时进行低脂饮食，会使醋酸阿比特龙c
max
和auc值分别增加7倍和5倍，而同时进行高脂饮食会相应增加17倍和10倍。因此，醋酸阿比特龙应避免与食物同服。
4.针对阿比特龙生物利用度极低以及毒副作用等现状，目前解决的方法主要集中在改变剂型方面。例如：将阿比特龙通过单乳液溶剂蒸发法制备成plga纳米粒以提高阿比特龙生物利用度，或将阿比特龙包封或键合在血清白蛋白等生物材料上，提高水溶性；但是前者没有实质性解决水溶性问题，后者药效没有得到显著性提高，而且这一系列制剂改良方式制备工艺复杂、难以实现规模化生产，且无法有效提高阿比特龙的活性以及降低毒性。因此，对阿比特龙进行水溶性改造，有效提高其抗前列腺肿瘤效果，降低体内毒性，制备高效、低毒，易于工业化生产的水溶性阿比特龙化合物及制剂是目前研究的重点。
5.本实验室长期致力于水溶性化合物的研究，前期开发了多氨基多羧酸修饰阿比特龙衍生物和水溶性紫杉醇，生产工艺简单，在保证肿瘤抑制效果的同时降低了体内毒性。在此基础上，我们进一步对阿比特龙进行水溶性改造，通过聚乙二醇单甲醚基团结构修饰，我们得到了一系列结构新颖的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物，水溶性得到极大提高，且毒性大大降低，丰富了水溶性阿比特龙的基础研究内容，扩宽了治疗前列腺肿瘤的药物
和途径，为今后的临床应用提供理论依据。


技术实现要素：

6.本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种注射用聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物。
7.本发明的第二个目的是提供一种聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物的制备方法。
8.本发明的第三个目的是提供一种聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物的药物制剂，其中包含作为活性成分的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物和赋形剂、增溶剂、增溶乳化剂、抗氧化剂。
9.本发明的第四个目的是提供一种聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物及其药物制剂作为抗肿瘤药物的用途。
10.本发明的技术方案概述如下：
11.一种注射用聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物，具有下述结构：
[0012][0013]
其中，其中，或分子量为350的聚乙二醇单甲醚或分子量为550的聚乙二醇单甲醚或分子量为750的聚乙二醇单甲醚或分子量为1000的聚乙二醇单甲醚或分子量为1200的聚乙二醇单甲醚或分子量为2000的聚乙二醇单甲醚。
[0014]
一种聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物的制备方法，其特征是以聚乙二醇单甲醚和丁二酸酐为起始原料，首先合成甲氧基聚乙二醇丁二酸酯，然后在dcc/dmap酯化条件下，与阿比特龙反应得到聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物，所述的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物具有下述结构：
[0015]
[0016]
其中，其中，或分子量为350的聚乙二醇单甲醚或分子量为550的聚乙二醇单甲醚或分子量为750的聚乙二醇单甲醚或分子量为1000的聚乙二醇单甲醚或分子量为1200的聚乙二醇单甲醚或分子量为2000的聚乙二醇单甲醚。
[0017]
上述方法优选的是将1mmol甲氧基聚乙二醇和2mmol丁二酸酐溶于1.0ml甲苯中，加入0.5mmol三乙胺，快速升温至60℃，搅拌12h，tlc(二氯甲烷：甲醇＝8:1)监测反应，碘熏显色。反应完毕后加入水，二氯甲烷萃取3次，有机层用1m hcl洗涤2次，再用饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥，旋干，得到甲氧基聚乙二醇丁二酸酯，收率84-95％。将1mmol甲氧基聚乙二醇丁二酸酯、1.2mmol阿比特龙和0.5mmol 4-二甲氨基吡啶(dmap)溶于10ml二氯甲烷中，加入1.0mmol二环己基碳二亚胺(dcc)，室温搅拌反应20h。过滤，滤液依次用水和饱和的食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥，旋干，制备薄层色谱分离纯化得到聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物。
[0018]
一种聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物的药物制剂，其特征是活性成分为聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物，冻干赋形剂为甘露醇或葡萄糖，助溶剂为碳酸氢钠或碳酸钠或碳酸钾或氢氧化钠或氢氧化钾，乳化助溶剂为甘油或聚乙二醇(分子量300或400)或丙二醇，抗氧化剂为亚硫酸氢钠或亚硫酸钠或硫代硫酸钠。
[0019]
一种聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物及其药物制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0020]
本发明的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物水溶性好，在碳酸氢钠水溶液中可完全溶解，且制备方式简单、便捷、收率高，适用于规模化生产，在抗肿瘤方面有显著的效果，可用于治疗前列腺癌肿瘤，具有高效低毒的特点。
附图说明
[0021]
图1为本发明实施例1的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2a的合成路线。
[0022]
图2为本发明实施例2的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2b的合成路线。
[0023]
图3为本发明实施例3的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2c的合成路线。
[0024]
图4为本发明实施例4的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2d的合成路线。
[0025]
图5为本发明实施例5的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2e的合成路线。
[0026]
图6为本发明实施例5的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2e的高分辨质谱图。
[0027]
图7为本发明实施例5的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2e的核磁共振氢谱图。
[0028]
图8为本发明实施例6的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2f的合成路线。
[0029]
图9为本发明实施例7的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2g的合成路线。
[0030]
图10为本发明实施例8的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2h的合成路线。
[0031]
图11为本发明实施例9的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2i的合成路线。
[0032]
图12为本发明实施例10的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2j的合成路线。
[0033]
图13为本发明实施例21的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2a-2j对人前列腺
癌细胞du145的抗肿瘤作用。
[0034]
图14为本发明实施例21的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2a-2j对人前列腺癌细胞lncap的抗肿瘤作用。
[0035]
图15为本发明实施例21的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2a-2j对人前列腺癌细胞pc-3的抗肿瘤作用。
[0036]
图16为本发明实施例21的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2a-2j对人正常肝细胞l 02的细胞毒性。
[0037]
图17为本发明实施例22的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物对健康icr雄性小鼠血常规影响的实验结果图。
[0038]
图18为本发明实施例22的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物对健康icr雄性小鼠血生化影响的实验结果图。
[0039]
图19为本发明实施例22的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物对健康icr雄性小鼠组织病理影响的实验结果图。
[0040]
图20为本发明实施例23的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物对du145前列腺癌荷瘤小鼠的体内抗肿瘤作用实验结果照片。
[0041]
图21为本发明实施例23的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物对du145前列腺癌荷瘤小鼠的体重影响实验结果图。
[0042]
图22为本发明实施例23的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物对du145前列腺癌荷瘤小鼠的体内抗肿瘤作用实验结果图。
[0043]
图23为本发明实施例23的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物对du145前列腺癌荷瘤小鼠的脏器指数影响实验结果图。
具体实施方式
[0044]
下面通过实施例对本发明作进一步说明，其目的仅在于更好的理解本发明的内容而非限制本发明的保护范围：
[0045]
实施例1聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2a的合成
[0046]
将1mmol甲氧基聚乙二醇和2mmol丁二酸酐溶于1.0ml甲苯中，加入0.5mmol三乙胺，快速升温至60℃，搅拌12h，tlc(二氯甲烷：甲醇＝8:1)监测反应，碘熏显色。反应完毕后加入水，二氯甲烷萃取3次，有机层用1m hcl洗滴2次，再用饱和的食盐水洗滴3次，无水硫酸钠干燥，旋干得到甲氧基聚乙二醇丁二酸酯，收率95％。将1mmol甲氧基聚乙二醇丁二酸酯、1.2mmol阿比特龙和0.5mmol 4-二甲氨基吡啶(dmap)溶于10ml二氯甲烷中，加入1.0mmol二环己基碳二亚胺(dcc)，室温搅拌反应20h。过滤，滤液依次用水和饱和的食盐水洗滴3次，无水硫酸钠干燥，旋干，制备薄层色谱分离纯化得到聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2a(合成路线见图1)。
[0047]
实施例2聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2b的合成
[0048]
将1mmol甲氧基聚乙二醇和2mmol丁二酸酐溶于1.0ml甲苯中，加入0.5mmol三乙胺，快速升温至60℃，搅拌12h，tlc(二氯甲烷：甲醇＝8:1)监测反应，碘熏显色。反应完毕后加入水，二氯甲烷萃取3次，有机层用1m hcl洗滴2次，再用
饱和的食盐水洗滴3次，无水硫酸钠干燥，旋干得到甲氧基聚乙二醇丁二酸酯，收率93％。将1mmol甲氧基聚乙二醇丁二酸酯、1.2mmol阿比特龙和0.5mmol 4-二甲氨基吡啶(dmap)溶于10ml二氯甲烷中，加入1.0mmol二环己基碳二亚胺(dcc)，室温搅拌反应20h。过滤，滤液依次用水和饱和的食盐水洗滴3次，无水硫酸钠干燥，旋干，制备薄层色谱分离纯化得到聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2b(合成路线见图2)。
[0049]
实施例3聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2c的合成
[0050]
将1mmol甲氧基聚乙二醇和2mmol丁二酸酐溶于1.0ml甲苯中，加入0.5mmol三乙胺，快速升温至60℃，搅拌12h，tlc(二氯甲烷：甲醇＝8:1)监测反应，碘熏显色。反应完毕后加入水，二氯甲烷萃取3次，有机层用1m hcl洗滴2次，再用饱和的食盐水洗滴3次，无水硫酸钠干燥，旋干得到甲氧基聚乙二醇丁二酸酯，收率91％。将1mmol甲氧基聚乙二醇丁二酸酯、1.2mmol阿比特龙和0.5mmol 4-二甲氨基吡啶(dmap)溶于10ml二氯甲烷中，加入1.0mmol二环己基碳二亚胺(dcc)，室温搅拌反应20h。过滤，滤液依次用水和饱和的食盐水洗滴3次，无水硫酸钠干燥，旋干，制备薄层色谱分离纯化得到聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2c(合成路线见图3)。
[0051]
实施例4聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2d的合成
[0052]
将1mmol甲氧基聚乙二醇和2mmol丁二酸酐溶于1.0ml甲苯中，加入0.5mmol三乙胺，快速升温至60℃，搅拌12h，tlc(二氯甲烷：甲醇＝8:1)监测反应，碘熏显色。反应完毕后加入水，二氯甲烷萃取3次，有机层用1m hcl洗滴2次，再用饱和的食盐水洗滴3次，无水硫酸钠干燥，旋干得到甲氧基聚乙二醇丁二酸酯，收率90％。将1mmol甲氧基聚乙二醇丁二酸酯、1.2mmol阿比特龙和0.5mmol4-二甲氨基吡啶(dmap)溶于10ml二氯甲烷中，加入1.0mmol二环己基碳二亚胺(dcc)，室温搅拌反应20h。过滤，滤液依次用水和饱和的食盐水洗滴3次，无水硫酸钠干燥，旋干，制备薄层色谱分离纯化得到聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2d(合成路线见图4)。
[0053]
实施例5聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2e的合成
[0054]
将1mmol甲氧基聚乙二醇(分子量为350的聚乙二醇单甲醚)和2mmol丁二酸酐溶于1.0ml甲苯中，加入0.5mmol三乙胺，快速升温至60℃，搅拌12h，tlc(二氯甲烷：甲醇＝8:1)监测反应，碘熏显色。反应完毕后加入水，二氯甲烷萃取3次，有机层用1mhcl洗滴2次，再用饱和的食盐水洗滴3次，无水硫酸钠干燥，旋干得到甲氧基聚乙二醇丁二酸酯，收率88％。将1mmol甲氧基聚乙二醇丁二酸酯、1.2mmol阿比特龙和0.5mmol 4-二甲氨基吡啶(dmap)溶于10ml二氯甲烷中，加入1.0mmol二环己基碳二亚胺(dcc)，室温搅拌反应20h。过滤，滤液依次用水和饱和的食盐水洗滴3次，无水硫酸钠干燥，旋干，制备薄层色谱分离纯化得到聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2e(合成路线见图5，高分辨质谱见图6，核磁共振氢谱见图7)。
[0055]
实施例6聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2f的合成
[0056]
将1mmol甲氧基聚乙二醇(分子量为550的聚乙二醇单甲醚)和2mmol丁二酸酐溶于1.0ml甲苯中，加入0.5mmol三乙胺，快速升温至60℃，搅拌12h，tlc(二氯甲烷：甲醇＝8:1)监测反应，碘熏显色。反应完毕后加入水，二氯甲烷萃取3次，有机层用1mhcl洗滴2次，再用饱和的食盐水洗滴3次，无水硫酸钠干燥，旋干得到甲氧基聚乙二醇丁二酸酯，收率86％。将
1mmol甲氧基聚乙二醇丁二酸酯、1.2mmol阿比特龙和0.5mmol 4-二甲氨基吡啶(dmap)溶于10ml二氯甲烷中，加入1.0mmol二环己基碳二亚胺(dcc)，室温搅拌反应20h。过滤，滤液依次用水和饱和的食盐水洗滴3次，无水硫酸钠干燥，旋干，制备薄层色谱分离纯化得到聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2f(合成路线见图8)。
[0057]
实施例7聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2g的合成
[0058]
将1mmol甲氧基聚乙二醇(分子量为750的聚乙二醇单甲醚)和2mmol丁二酸酐溶于1.0ml甲苯中，加入0.5mmol三乙胺，快速升温至60℃，搅拌12h，tlc(二氯甲烷：甲醇＝8:1)监测反应，碘熏显色。反应完毕后加入水，二氯甲烷萃取3次，有机层用1mhcl洗滴2次，再用饱和的食盐水洗滴3次，无水硫酸钠干燥，旋干得到甲氧基聚乙二醇丁二酸酯，收率84％。将1mmol甲氧基聚乙二醇丁二酸酯、1.2mmol阿比特龙和0.5mmol 4-二甲氨基吡啶(dmap)溶于10ml二氯甲烷中，加入1.0mmol二环己基碳二亚胺(dcc)，室温搅拌反应20h。过滤，滤液依次用水和饱和的食盐水洗滴3次，无水硫酸钠干燥，旋干，制备薄层色谱分离纯化得到聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2g(合成路线见图9)。
[0059]
实施例8聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2h的合成
[0060]
将1mmol甲氧基聚乙二醇(分子量为1000的聚乙二醇单甲醚)和2mmol丁二酸酐溶于1.0ml甲苯中，加入0.5mmol三乙胺，快速升温至60℃，搅拌12h，tlc(二氯甲烷：甲醇＝8:1)监测反应，碘熏显色。反应完毕后加入水，二氯甲烷萃取3次，有机层用1mhcl洗滴2次，再用饱和的食盐水洗滴3次，无水硫酸钠干燥，旋干得到甲氧基聚乙二醇丁二酸酯，收率85％。将1mmol甲氧基聚乙二醇丁二酸酯、1.2mmol阿比特龙和0.5mmol 4-二甲氨基吡啶(dmap)溶于10ml二氯甲烷中，加入1.0mmol二环己基碳二亚胺(dcc)，室温搅拌反应20h。过滤，滤液依次用水和饱和的食盐水洗滴3次，无水硫酸钠干燥，旋干，制备薄层色谱分离纯化得到聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2h(合成路线见图10)。
[0061]
实施例9聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2i的合成
[0062]
将1mmol甲氧基聚乙二醇(分子量为1200的聚乙二醇单甲醚)和2mmol丁二酸酐溶于1.0ml甲苯中，加入0.5mmol三乙胺，快速升温至60℃，搅拌12h，tlc(二氯甲烷：甲醇＝8:1)监测反应，碘熏显色。反应完毕后加入水，二氯甲烷萃取3次，有机层用1mhcl洗滴2次，再用饱和的食盐水洗滴3次，无水硫酸钠干燥，旋干得到甲氧基聚乙二醇丁二酸酯，收率87％。将1mmol甲氧基聚乙二醇丁二酸酯、1.2mmol阿比特龙和0.5mmol 4-二甲氨基吡啶(dmap)溶于10ml二氯甲烷中，加入1.0mmol二环己基碳二亚胺(dcc)，室温搅拌反应20h。过滤，滤液依次用水和饱和的食盐水洗滴3次，无水硫酸钠干燥，旋干，制备薄层色谱分离纯化得到聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2i(合成路线见图11)。
[0063]
实施例10聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2j的合成
[0064]
将1mmol甲氧基聚乙二醇(分子量为2000的聚乙二醇单甲醚)和2mmol丁二酸酐溶于1.0ml甲苯中，加入0.5mmol三乙胺，快速升温至60℃，搅拌12h，tlc(二氯甲烷：甲醇＝8:1)监测反应，碘熏显色。反应完毕后加入水，二氯甲烷萃取3次，有机层用1mhcl洗滴2次，再用饱和的食盐水洗滴3次，无水硫酸钠干燥，旋干得到甲氧基聚乙二醇丁二酸酯，收率89％。将1mmol甲氧基聚乙二醇丁二酸酯、1.2mmol阿比特龙和0.5mmol 4-二甲氨基吡啶(dmap)溶于10ml二氯甲烷中，加入1.0mmol二环己基碳二亚胺(dcc)，室温搅拌反应20h。过滤，滤液依次用水和饱和的食盐水洗滴3次，无水硫酸钠干燥，旋干，制备薄层色谱分离纯化得到聚乙
二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2j(合成路线见图12)。
[0065]
实施例11 2a冻干粉针剂的制备
[0066]
取实施例1制备的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2a 0.2g，甘露醇6g，亚硫酸氢钠0.01g，溶于40ml注射用水中，再加入1g药用活性炭，室温搅拌20min，过滤除活性炭，再用0.22μm滤膜过滤除菌，分装到5ml的西林瓶中，每瓶2ml，冷冻干燥。
[0067]
实施例12 2b冻干粉针剂的制备
[0068]
取实施例2制备的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2b 2.0g，葡萄糖20g，碳酸氢钠0.4g，亚硫酸钠0.03g，溶于100ml注射用水中，再加入10g药用活性炭，室温搅拌20min，过滤除活性炭，再用0.22μm滤膜过滤除菌，分装到10ml的西林瓶中，每瓶5ml，冷冻干燥。
[0069]
实施例13 2c冻干粉针剂的制备
[0070]
取实施例3制备的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2c 0.2g，葡萄糖8g，甘油0.2ml，亚硫酸钠0.01g，溶于80ml注射用水中，再加入1g药用活性炭，室温搅拌20min，过滤除活性炭，再用0.22μm滤膜过滤除菌，分装到5ml的西林瓶中，每瓶2ml，冷冻干燥。
[0071]
实施例14 2d冻干粉针剂的制备
[0072]
取实施例4制备的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2d 2.0g，甘露醇30g，碳酸钠0.6g，亚硫酸钠0.05g，溶于200ml注射用水中，再加入10g药用活性炭，室温搅拌20min，过滤除活性炭，再用0.22μm滤膜过滤除菌，分装到10ml的安西林瓶中，每瓶5ml，冷冻干燥。
[0073]
实施例15 2e冻干粉针剂的制备
[0074]
取实施例5制备的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2e 0.2g，甘露醇8g，聚乙二醇(分子量300)0.5ml，硫代硫酸钠0.01g，溶于40ml注射用水中，再加入1g药用活性炭，室温搅拌20min，过滤除活性炭，再用0.22μm滤膜过滤除菌，分装到5ml的西林瓶中，每瓶2ml，冷冻干燥。
[0075]
实施例16 2f冻干粉针剂的制备
[0076]
取实施例6制备的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2f 2.0g，葡萄糖30g，碳酸钾0.45g，亚硫酸钠0.01g，溶于200ml注射用水中，再加入10g药用活性炭，室温搅拌20min，过滤除活性炭，再用0.22μm滤膜过滤除菌，分装到10ml的西林瓶中，每瓶5ml，冷冻干燥。
[0077]
实施例17 2g冻干粉针剂的制备
[0078]
取实施例7制备的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2g 0.2g，甘露醇6g，亚硫酸氢钠0.01g，溶于40ml注射用水中，再加入1g药用活性炭，室温搅拌20min，过滤除活性炭，再用0.22μm滤膜过滤除菌，分装到5ml的西林瓶中，每瓶2ml，冷冻干燥。
[0079]
实施例18 2h冻干粉针剂的制备
[0080]
取实施例8制备的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2h 2.0g，葡萄糖20g，碳酸氢钠0.4g，亚硫酸钠0.03g，溶于100ml注射用水中，再加入10g药用活性炭，室温搅拌20min，过滤除活性炭，再用0.22μm滤膜过滤除菌，分装到10ml的西林瓶中，每瓶5ml，冷冻干燥。
[0081]
实施例19 2i冻干粉针剂的制备
[0082]
取实施例9制备的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2i 0.2g，葡萄糖8g，甘油0.2ml，亚硫酸钠0.01g，溶于80ml注射用水中，再加入1g药用活性炭，室温搅拌20min，过滤除活性炭，再用0.22μm滤膜过滤除菌，分装到5ml的西林瓶中，每瓶2ml，冷冻干燥。
[0083]
实施例20 2j冻干粉针剂的制备
[0084]
取实施例10制备的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2j 2.0g，甘露醇30g，碳酸钠0.6g，亚硫酸钠0.05g，溶于200ml注射用水中，再加入10g药用活性炭，室温搅拌20min，过滤除活性炭，再用0.22μm滤膜过滤除菌，分装到10ml的安西林瓶中，每瓶5ml，冷冻干燥。
[0085]
实施例21聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物的体外抗肿瘤效果(du 145、lncap、pc-3和l02)
[0086]
由实施例1-10制备的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2a-2j对人前列腺癌细胞du 145、lncap、pc-3和人正常肝细胞l02的体外抗肿瘤评价，包括如下步骤：
[0087]
取对数生长期的人前列腺癌细胞du 145、lncap、pc-3和人正常肝细胞l02，胰蛋白酶消化后，重悬在含15％胎牛血清的rpmi 1640或f-12k培养基中，以密度为1
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104细胞/孔接种于96孔板，然后将96孔板放入细胞孵育箱中培养24h。
[0088]
弃去培养基，每孔中加入不同浓度的药物溶液100μl，药物浓度依次为2.5μm、5μm、10μm、20μm、40μm、80μm及160μm，重复5个复孔，放入培养箱中孵育48h。
[0089]
cck8法检测细胞存活率：吸出孔中液体，每孔中加入10μl cck8试剂及100μl无血清培养基，继续培养2h。酶标仪检测各孔在450nm处的光吸收值。以无化合物孵育培养的细胞作为空白对照，计算细胞存活率，结果见图13-16。
[0090]
由图13-16可知，大部分聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2a-2j的体外抗肿瘤效果(du 145、lncap、pc-3)优于阿比特龙abi，且对人前列腺癌细胞的毒性大于人正常肝细胞，显示出高效低毒的抗肿瘤效果。
[0091]
实施例22聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物的毒性研究
[0092]
由实施例5制备的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2e对icr健康雄性小鼠给药28天后血常规、血生化及病理组织的影响，包括如下步骤：
[0093]
icr小鼠20只，每组5只，共6组(ns组，每天1次；阳性对照组abi 150mg/kgp.o.；2e 75mg/kg p.o.组；2e 150mg/kg p.o.组；2e 35mg/kg i.v.组；2e 52.5mg/kg i.v.组。
[0094]
灌胃每天给药1次，静脉每周给药1次，治疗28天后取血送检；脱颈处死所有小鼠，解剖收集心、肝、脾、肺、肾、睾丸，10％甲醛固定脏器，石蜡包埋后切片，he染色后进行组织病理学检查(血常规实验结果见图17，血生化实验结果见图18，组织病理学实验结果见图19)。
[0095]
由图17可知，聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2e对健康雄性icr小鼠血常规的影响较小；相比于阳性对照组，2e对健康雄性icr小鼠的淋巴细胞数目和单核细胞数目影响较小，提示2e的毒性低于阿比特龙。
[0096]
由图18可知，聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2e对健康雄性icr小鼠血生化的影响较小；相比于阳性对照组，2e对健康雄性icr小鼠的丙氨酸氨基转移酶和天冬氨酸氨基转氨酶的影响更小，提示2e的毒性低于阿比特龙。
[0097]
由图19可知，病理切片镜检结果，聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2e各组心、肾、睾丸未见异常改变。聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2e 52.5mg/kg i.v.组肝细胞脂质变性，门管区胆管增生；其它各组肝窦结构清晰，肝细胞完整，未见明显炎症、坏死等病理改变。相比于ns组，阳性对照组、2e 52.5mg/kg i.v.组和2e 150mg/kg p.o.组出现脾脏多核巨细胞增生的现象。相比于ns组，阳性对照组和2e 150mg/kg p.o.组出现肺内局部血管周围炎症细胞浸润或间质性肺炎现象。阳性对照组间质内肾母细胞增生，其它各组肾脏
皮质及髓质内肾小球及肾小管未见明显异常改变，聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2e各组未见异常病理改变。总体表明，聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2e毒性低于阿比特龙。
[0098]
实施例23聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物对人前列腺癌du145裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用
[0099]
由实施例5制备的聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2e治疗移植性前列腺癌du145荷瘤小鼠的在体实验过程，包括如下步骤：
[0100]
取对数生长期的人前列腺癌du145细胞株，在无菌条件下制备成1
×
107个/ml的细胞悬液，以0.1ml每只接种于裸鼠右侧腋窝皮下，待肿瘤生长至100-200mm3后，将动物随机分组。
[0101]
将造模成功的裸鼠随机分为7组，每组6只，正常组normal裸鼠不给予任何治疗；模型组ns注射等量生理盐水，每天1次；阳性对照组abi(150mg/kg p.o.)，每天灌胃给药1次；2e 75mg/kg p.o.组和2e 150mg/kg p.o.组，每天灌胃给药1次；2e 35mg/kg i.v.组和2e 52.5mg/kg i.v.组，均每周尾静脉给药1次。治疗28天后，处死小鼠，手术剥取瘤块称重，实验结果见图20。
[0102]
用游标卡尺测量裸鼠移植瘤直径，动态观察阿比特龙抗肿瘤效果。小鼠体重和肿瘤大小的测量：肿瘤直径的测量次数为每周2次，测量肿瘤长、宽，根据公式：肿瘤体积(mm3)＝1/2
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长
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宽2，绘制小鼠体重增长曲线和肿瘤生长曲线，结果见图21-22。
[0103]
最后一次给药两天后，处死小鼠，解剖取出心、肝、脾、肺、肾以及睾丸，并称取其重量，计算脏器指数[脏器指数＝脏器重量/(体重-肿瘤重量)，单位：mg/g]，脏器指数实验结果见图23。
[0104]
由图20和图22可知，经过28天对比治疗，阳性对照组abi和聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2e治疗组均可明显抑制du145肿瘤增长，阳性对照组abi、2e灌胃组和2e静脉给药组，肿瘤生长得到显著抑制，且2e 35mg/kg i.v.组和2e 52.5mg/kg i.v.组肿瘤抑制效果显著优于阳性对照组abi。与模型对照组相比，阳性对照组abi、2e 75mg/kg p.o.组、2e150mg/kg p.o.组、2e 35mg/kg i.v.组和2e 52.5mg/kg i.v.组肿瘤抑制率分别为45.2％，50.7％、56.4％、75.6％和81.4％。
[0105]
由图21可知，经过28天对比治疗，在相同条件下，阳性对照组abi以及2e静脉给药组的体重略微低于正常组和模型组，总体趋势表现为荷瘤裸鼠体重增长各个组间差异较小，表明聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2e对裸鼠体重的影响较小。
[0106]
由图23可知，经过28天对比治疗，在相同条件下，模型组脾脏指数明显增加，脾脏增大，表明模型组小鼠机体免疫能力降低；相比于正常组和模型组，阳性对照组abi小鼠睾丸萎缩，睾丸指数显著降低，表明阿比特龙存在生殖毒性；除此之外，阳性对照组abi和2e 52.5mg/kg i.v.组小鼠肝脏指数增高，其他脏器指数，如心、肺、肾，阳性对照组abi和模型组之间未发现显著性差异；相比于模型组，聚乙二醇单甲醚修饰阿比特龙化合物2e治疗组其他脏器指数，如心、肺、肾、睾丸未发现显著性差异，说明2e在治疗剂量下的脏器毒性低于阿比特龙。