一种有效分离大麻二酚、次大麻二酚、四氢大麻酚的方法

本发明涉及一种有效分离大麻二酚、次大麻二酚、四氢大麻酚的方法，特别涉及一种利用配位色谱分离大麻二酚、次大麻二酚、四氢大麻酚的方法，属于生物医药。

背景技术：

1、大麻二酚(cannabidiol，简称cbd)是一种从大麻植物中提取的天然产物，具有很好的药用价值，具有抗肿瘤、神经保护、代谢和免疫调节、抗炎、抗氧化、保护心血管、抗菌等作用。大麻中主要包含的化学成分除cbd外还有四氢大麻酚(thc)及次大麻二酚(cbdv)。thc是大麻中的一种致幻成分，具备神经活性，被广泛认为是大麻中最重要的活性物质，但由于thc具有致幻作用以及成瘾性，可以用于提炼毒品，严重危害社会健康。cbdv是一种天然存在于大麻植物中的植物大麻素，在结构上与cbd类似。这两种类似物用传统的色谱法和结晶法都很难去除，导致了cbd分离纯化的难度大，收率低。

2、大麻二酚不仅是一种在医药、食品、保健品、日化用品等领域极具发展前景的天然活性成分，并且可以拮抗thc在人体内产生的致幻作用，因此极受大众的关注。

3、大麻二酚分子式为c21h30o2，一般为白色至淡黄色结晶，熔点为66～67℃，几乎不溶于水，溶于乙醇、甲醇、苯、氯仿等有机溶剂。cbd结构如下：

4、

5、目前，cbd的纯化工艺还存在着批次产量小、收率低、产品纯度低等缺陷，并且目前的大多数技术手段工艺复杂、提取纯化工序繁琐，不适宜工业化生产。cbd的纯化工艺主要有树脂吸附和层析分离两种。其中层析分离又包括硅胶层析、氧化铝层析、聚酰胺柱层析工艺。

6、cn111747826a、cn110386861a、cn110156568a等采用大孔树脂吸附、硅胶柱层析工艺纯化大麻二酚的方法，但此工艺载量小、收率低、工业化产量不足。

7、cn111960930a采用三级纯化工艺，ab-8填料大孔树脂梯度洗脱，再经硅胶柱洗脱，最后通过c18填料的制备型液相色谱，得到高纯度大麻二酚溶液。该工艺虽然产品纯度高但工艺繁琐复杂、生产成本高昂，不适合工业化生产。

8、cn110655453a公开了一种次大麻二酚的提取分离方法，采用有机溶剂萃取富集次大麻二酚，经聚酰胺树脂柱、中性氧化铝和键合硅胶柱纯化富集，结晶获得高纯度的次大麻二酚。此工艺需要经多次纯化工艺，操作繁琐复杂，对设备要求高，生产成本高，不适合工业化生产。

9、针对以上目前常用的分离工艺，还存在着一定的局限性：当前大多数的分离工艺所采用的大孔吸附树脂很难将cbd与类似物cbdv及thc三者完全分离开，往往需要多次纯化，这也导致最终收率低、工艺繁琐复杂，同时所得到的大麻二酚纯度达不到要求；聚酰胺树脂会同时吸附解析cbd与thc两种物质，从而很难将两者分离开，必须结合其他工艺才可获得高纯度cbd溶液。硅胶由于为一次性使用，生产成本高。同时硅胶柱层析载量小，最终导致提取效率低。以上分离技术所用的的c18、氧化铝、硅胶填料生产成本高，并且这些材料的柱床压力均较高，对设备要求很高，难以工业化生产。对于需要多次纯化的分离工艺，所需洗脱剂耗量较大且更为复杂，对环境造成了更大污染。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题是：从大麻植物获取的大麻粗品中的主要成分包括大麻二酚、次大麻二酚和四氢大麻酚，这三种的结构极其相似，因此现有的大麻二酚的分离纯化技术难以完全将三者有效分离且需要经多次纯化工艺，操作繁琐复杂，需要中高压下进行洗脱，对设备要求高，生产成本高，不适合工业化生产等问题。

2、为了解决上述技术问题，本发明提供了一种有效分离大麻二酚、次大麻二酚、四氢大麻酚的方法，以配位树脂作为填料，采用色谱分离纯化的方法从大麻二酚粗品中分离得到大麻二酚纯品，所述的配位树脂为hz-6560、hz-6563、hz-6566和hz-6567中的一种。

3、优选地，所述色谱分离纯化的方法中，以极性有机溶剂a和非极性有机溶剂b的混合液作为洗脱液。

4、优选地，所述的极性有机溶剂a为甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯、二氯甲烷和氯仿中的一种或几种的混合物；所述的非极性有机溶剂b为石油醚、甲基环己烷、甲苯、二甲苯、戊烷、正己烷和1,2-二氯乙烷中的一种或几种的混合物。

5、优选地，所述的洗脱液中极性有机溶剂a和非极性有机溶剂b混合的体积比为20：80～80：20。

6、更优选地，所述的极性溶剂为乙酸乙酯和/或氯仿；所述的非极性溶剂为正己烷；所述极性溶剂与非极性溶剂的体积比为20～40：60～80。

7、优选地，所述分离纯化的方法包括：对装填有配位树脂的层析柱进行预处理、上样和洗脱步骤。

8、优选地，所述对层析柱进行预处理的步骤包括：依次采用无水乙醇溶液进行活化和洗脱液进行平衡。

9、优选地，所述上样步骤中的上样量为5-15mg/ml柱体积。

10、优选地，所述洗脱为等度洗脱，所述等度洗脱的流程为用洗脱液对层析柱冲洗，所述洗脱的流速为0.2-5柱体积/小时，洗脱液的体积为9-12个柱体积，之后结束洗脱，收集富含大麻二酚的组分，浓缩后即得到大麻二酚纯品。

11、与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

12、(1)本发明采用配位色谱分离法可以实现将cbd、cbdv、thc三者完全分离，通过利用配位树脂中的配基与cbd形成配位络合物，增大了cbd、thc与cbdv间的保留时间差异，从而达到了良好的分离效果；本发明通过选择特定的配位树脂在特定洗脱条件下，得到了一种高效分离纯化大麻二酚的方法，分离选择性好，该方法纯化得到的大麻二酚纯品纯度达到99％以上，收率达到80％以上，适合于高纯度cbd的分离纯化；

13、(2)本发明针对现有技术的不足，提供了一种有效分离大麻二酚、次大麻二酚、四氢大麻酚的新型工艺，本发明提供的大麻二酚的纯化方法纯度高、只需一步纯化工艺即可将大麻二酚、次大麻二酚、四氢大麻酚完全分离，操作简单方便并且对设备要求低，溶液消耗量较小，对环境友好，同时降低了生产成本，适用于规模化生产；

14、(3)本发明通过一步纯化可将cbd与类似物cbdv及thc三者完全分离开，分离得到的大麻二酚纯度可达到高于99％；本发明的分离方法工艺流程简单，常温常压下即可实现分离效果，对设备要求低，操作简单可控，实施过程稳定；本发明的方法只需一步工艺提纯，不需要多步提纯，从而使得收率更高并降低了生产成本；同时获得的产品纯度高，收率高，适于工业化生产。

技术特征：

1.一种有效分离大麻二酚、次大麻二酚、四氢大麻酚的方法，其特征在于，以配位树脂作为填料，采用色谱分离纯化的方法从大麻二酚粗品中分离得到大麻二酚纯品，所述的配位树脂为hz-6560、hz-6563、hz-6566和hz-6567中的一种。

2.根据权利要求1所述的有效分离大麻二酚、次大麻二酚、四氢大麻酚的方法，其特征在于，所述色谱分离纯化的方法中，以极性溶剂和非极性溶剂的混合液作为洗脱液。

3.根据权利要求2所述的有效分离大麻二酚、次大麻二酚、四氢大麻酚的方法，其特征在于，所述的极性溶剂为甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯、二氯甲烷和氯仿中的至少一种；所述的非极性溶剂为石油醚、甲基环己烷、甲苯、二甲苯、戊烷、正己烷和1,2-二氯乙烷中的至少一种。

4.根据权利要求2或3所述的有效分离大麻二酚、次大麻二酚、四氢大麻酚的方法，其特征在于，所述的洗脱液中极性溶剂和非极性溶剂混合的体积比为20：80～80：20。

5.根据权利要求4所述的有效分离大麻二酚、次大麻二酚、四氢大麻酚的方法，其特征在于，所述的极性溶剂为乙酸乙酯和/或氯仿；所述的非极性溶剂为正己烷；所述极性溶剂与非极性溶剂的体积比为20～40：60～80。

6.根据权利要求4所述的有效分离大麻二酚、次大麻二酚、四氢大麻酚的方法，其特征在于，所述分离纯化的方法包括：对装填有配位树脂的层析柱进行预处理、上样和洗脱步骤。

7.根据权利要求6所述的有效分离大麻二酚、次大麻二酚、四氢大麻酚的方法，其特征在于，所述对层析柱进行预处理的步骤包括：依次采用无水乙醇溶液进行活化和洗脱液进行平衡。

8.根据权利要求6所述的有效分离大麻二酚、次大麻二酚、四氢大麻酚的方法，其特征在于，所述上样步骤中的上样量为5-15mg/ml柱体积。

9.根据权利要求6所述的有效分离大麻二酚、次大麻二酚、四氢大麻酚的方法，其特征在于，所述洗脱为等度洗脱，所述等度洗脱的流程为用洗脱液对层析柱冲洗，所述洗脱的流速为0.2-5柱体积/小时，洗脱液的体积为9-12个柱体积，之后结束洗脱，收集富含大麻二酚的组分，浓缩后即得到大麻二酚纯品。

技术总结
本发明公开了一种有效分离大麻二酚、次大麻二酚、四氢大麻酚的方法。本发明使用色谱分离纯化的方法，以配位树脂作为填料，洗脱液采用极性和非极性溶剂的混合液，从大麻二酚粗品中分离得到纯度≥99％的大麻二酚纯品。本发明通过一步纯化就将大麻二酚与类似物四氢大麻酚、次大麻二酚完全分离开。本发明利用配位树脂中的配基与CBD形成配位络合物，增大了CBD、THC与CBDV间的保留时间差异，从而达到了良好的分离效果；本发明通过选择特定的配位树脂和特定洗脱条件，可以将CBD、CBDV、THC完全分离，分离选择性佳，本发明的分离方法得到的大麻二酚纯度可达到99％以上，收率可达到80％以上，适合于高纯度CBD的分离纯化。

技术研发人员：宁方红,董汛,崔娜,王大元,江邦和,张振宇,刘坐镇
受保护的技术使用者：华东理工大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16