1.一种表达asfv d117l基因的重组prrsv的拯救方法,其特征在于,包括如下步骤:
2.根据权利要求1所述的一种表达asfv d117l基因的重组prrsv的拯救方法,其特征在于,步骤(1)~(4)中所述扩增条件为:98℃变性2min,1个循环;98℃变性20s,55-60℃退火20s,72℃延伸按2-4kbp/min,34个循环;最后72℃延伸5min。
3.根据权利要求2所述的一种表达asfv d117l基因的重组prrsv的拯救方法,其特征在于,步骤(5)中所述同源重组条件为:
4.根据权利要求1所述的一种表达asfv d117l基因的重组prrsv的拯救方法,其特征在于,步骤(6)~(7)中所述扩增条件为:98℃变性2min,1个循环;98℃变性20s,55-60℃退火20s,72℃延伸按2-4kbp/min,34个循环;最后72℃延伸5min。
5.根据权利要求4所述的一种表达asfv d117l基因的重组prrsv的拯救方法,其特征在于,步骤(8)中所述同源重组条件为:
6.根据权利要求1所述的一种表达asfv d117l基因的重组prrsv的拯救方法,其特征在于,步骤(9)中所述转染细胞表达的步骤为:将marc145细胞传代培养,然后将质粒pbr322-cmv-rjxa1r-p17转染细胞,转染后收获细胞及培养上清,于-80℃反复冻融,离心后收取上清得到病毒液。
7.一种表达asfv d117l基因的重组prrsv,其特征在于,通过权利要求1~6任一项所述的方法制备得到。
8.权利要求7所述的一种表达asfv d117l基因的重组prrsv在制备非洲猪瘟疫苗中的应用。