一种表达ASFVD117L基因的重组PRRSV的拯救方法和应用与流程

文档序号:34601940发布日期:2023-06-29 01:02阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种表达asfv d117l基因的重组prrsv的拯救方法,其特征在于,包括如下步骤:

2.根据权利要求1所述的一种表达asfv d117l基因的重组prrsv的拯救方法,其特征在于,步骤(1)~(4)中所述扩增条件为:98℃变性2min,1个循环;98℃变性20s,55-60℃退火20s,72℃延伸按2-4kbp/min,34个循环;最后72℃延伸5min。

3.根据权利要求2所述的一种表达asfv d117l基因的重组prrsv的拯救方法,其特征在于,步骤(5)中所述同源重组条件为:

4.根据权利要求1所述的一种表达asfv d117l基因的重组prrsv的拯救方法,其特征在于,步骤(6)~(7)中所述扩增条件为:98℃变性2min,1个循环;98℃变性20s,55-60℃退火20s,72℃延伸按2-4kbp/min,34个循环;最后72℃延伸5min。

5.根据权利要求4所述的一种表达asfv d117l基因的重组prrsv的拯救方法,其特征在于,步骤(8)中所述同源重组条件为:

6.根据权利要求1所述的一种表达asfv d117l基因的重组prrsv的拯救方法,其特征在于,步骤(9)中所述转染细胞表达的步骤为:将marc145细胞传代培养,然后将质粒pbr322-cmv-rjxa1r-p17转染细胞,转染后收获细胞及培养上清,于-80℃反复冻融,离心后收取上清得到病毒液。

7.一种表达asfv d117l基因的重组prrsv,其特征在于,通过权利要求1~6任一项所述的方法制备得到。

8.权利要求7所述的一种表达asfv d117l基因的重组prrsv在制备非洲猪瘟疫苗中的应用。


技术总结
本发明属于基因工程及疫苗制备技术领域,公开了一种表达ASFV D117L基因的重组PRRSV的拯救方法和应用。所述拯救方法包括以扩增的pBR322‑CMV‑linear作为载体,segment4A、P17、segment4B作为插入片段进行同源重组,得到pBR322‑CMV‑segment4‑P17质粒;以扩增的pBR322‑CMV‑linear作为载体,PRRSV JXA1R株基因组五个PCR扩增片段作为插入片段进行同源重组,得到pBR322‑CMV‑rJXA1R‑P17质粒,然后转染细胞表达,得到重组PRRSV。本发明方法病毒拯救成功率高,可用于开发非洲猪瘟及其它猪病疫苗。

技术研发人员:陈瑞爱,温良海,张古月,黄梅,董楠,杨小云
受保护的技术使用者:华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
技术研发日:
技术公布日:2024/1/13
当前第2页1 2 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1