一种苹果果实红肉性状鉴定方法及特异引物对

本发明属于生物领域，涉及一种苹果果实红肉性状鉴定方法及特异引物对。

背景技术：

1、苹果是世界范围内广泛栽培的一种落叶果树，苹果果实是人体维生素以及多酚类物质的主要摄取来源。其中黄酮类化合物作为一种人体容易吸收的游离多酚类物质具有抗氧化、抗衰老、预防心血管疾病等作用，对人体具有较高的营养和保健价值。我国苹果栽培面积和年生产量均居世界首位。但我国近些年的育种目标过分注重果实的表观及耐储性，使得我国目前70％左右栽培品种为类黄酮含量低、营养质量差的富士苹果。具有高营养品质的特色栽培品种少，品种结构不合理。因此培育一种类黄酮含量高的品种是目前育种工作者新的育种目标。

2、近些年国内外有效利用现代分子生物学技术，积极探索特色果树资源或新品种在品质性状形成与调控机理方面的取得了较大的进步，越来越多的与苹果产量、抗性、品质等相关的功能基因被克隆、鉴定。红肉苹果中含有较高含量的黄酮类成分近些年被世界各地育种者广泛关注。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种苹果果实红肉性状鉴定方法及特异引物对。

2、本发明提供了一个引物对，命名为特异引物对乙，由序列表的序列5所示的单链dna分子和序列表的序列6所示的单链dna分子组成。

3、本发明还保护所述特异引物对乙在鉴定苹果果肉花青苷含量中的应用。

4、所述鉴定苹果果肉花青苷含量为鉴定苹果植株的果肉花青苷含量。

5、所述应用的目的为筛选果肉花青苷含量高的苹果植株。

6、本发明还保护所述特异引物对乙在鉴定或选育红肉苹果中的应用。

7、所述鉴定或选育红肉苹果为鉴定或选育生产红肉苹果的苹果植株。

8、所述应用的目的为筛选生产红肉苹果的苹果植株。

9、所述应用中，供筛选的苹果植株为：r1r1基因型的苹果品种和r6r6基因型的苹果品种进行杂交，获得的杂交后代。

10、本发明还保护一种鉴定苹果植株的果肉花青苷含量的方法，包括如下步骤：

11、以供试苹果植株的基因组dna为模板，采用所述特异引物对乙进行pcr扩增；

12、如果pcr扩增产物为一种且大小为385bp，供试苹果植株为m1m1基因型；如果pcr扩增产物为两种且大小分别为385bp和222bp，供试苹果植株为m1m2基因型；

13、m1m1基因型苹果植株的果肉花青苷含量高于m1m2基因型苹果植株的果肉花青苷含量。

14、本发明还保护一种鉴定或选育生产红肉苹果的苹果植株的方法，包括如下步骤：

15、以供试苹果植株的基因组dna为模板，采用所述特异引物对乙进行pcr扩增；

16、如果pcr扩增产物为一种且大小为385bp，供试苹果植株为m1m1基因型；如果pcr扩增产物为两种且大小分别为385bp和222bp，供试苹果植株为m1m2基因型；

17、m1m1基因型苹果植株为候选的生产红肉苹果的苹果植株。

18、所述供试苹果植株为：r1r1基因型的苹果品种和r6r6基因型的苹果品种进行杂交，获得的杂交后代。

19、本发明还保护一种引物组合，由特异引物对甲和特异引物对乙组成；

20、所述特异引物对甲由序列表的序列1所示的单链dna分子和序列表的序列2所示的单链dna分子组成；

21、所述特异引物对乙为以上所述特异引物对乙。

22、本发明还保护所述引物组合在鉴定苹果果肉花青苷含量中的应用。

23、所述鉴定苹果果肉花青苷含量为鉴定苹果植株的果肉花青苷含量。

24、所述应用的目的为筛选果肉花青苷含量高的苹果植株。

25、本发明还保护所述引物组合在鉴定或选育红肉苹果中的应用。

26、所述鉴定或选育红肉苹果为鉴定或选育生产红肉苹果的苹果植株。

27、所述应用的目的为筛选生产红肉苹果的苹果植株。

28、本发明还保护一种苹果育种方法，包括如下步骤：

29、(1)将r1r1基因型的苹果品种和r6r6基因型的苹果品种进行杂交，获得杂交后代；

30、(2)从r1r6基因型的杂交后代中选择m1m1基因型的植株；

31、r1r1基因型、r6r6基因型和r1r6基因型的判断方法如下：以供试苹果植株的基因组dna为模板，采用所述特异引物对甲进行pcr扩增，如果pcr扩增产物显示为一条带且大小为493bp，供试苹果植株为r6r6基因型；如果pcr扩增产物显示为一条带且大小为392bp，供试苹果植株为r1r1基因型；如果pcr扩增产物显示为两条带且大小分别为493bp和392bp，供试苹果植株为r1r6基因型；

32、m1m1基因型的判断方法如下：以供试苹果植株的基因组dna为模板，采用所述特异引物对乙进行pcr扩增；如果pcr扩增产物为一种且大小为385bp，供试苹果植株为m1m1基因型。

33、所述苹果育种的目标为选育果肉花青苷含量高的苹果。

34、所述苹果育种的目标为选育果肉花青苷含量高的苹果植株。

35、所述苹果育种的目标为选育红肉苹果。

36、所述苹果育种的目标为选育生产红肉苹果的苹果植株。

37、所述r1r1基因型的苹果品种具体可为‘嘎啦’苹果。

38、所述r6r6基因型的苹果品种具体可为‘紫红1号’苹果。

39、获得杂交后代的方法具体包括如下步骤：收集‘紫红1号’苹果植株的花粉，对除去雄蕊的‘嘎啦’苹果植株进行杂交授粉，获得杂交种子；将得到的杂交种子进行低温沙藏层积；待种子发芽后播种并育苗，得到实生苗。

40、本发明的发明人通过大量的实验发现了一个分子标记，基于该分子标记开发了特异引物对乙。特异引物对乙可用于紫红1号和嘎啦的杂交后代植株的果肉花青苷含量。将特异引物对甲和特异引物对乙联合使用，可鉴定供试苹果植株的果肉花青苷含量，从而用于高花青苷含量的苹果育种。本发明对于本领域技术人员通过分子生物学辅助育种，分析杂交亲本及后代群体，有针对性的选择目标后代，对提高育种效率，缩短育种年限，降低育种成本有重要意义。采用本发明提供的引物组合和方法鉴定苹果植株的果肉花青苷含量，能够做到早识别、早排除，有针对的选择育种目标，同时能够降低育种成本、提高育种效率，对培育高花青苷含量红肉苹果品种提供重要理论依据。

技术特征：

1.引物对，命名为特异引物对乙，由序列表的序列5所示的单链dna分子和序列表的序列6所示的单链dna分子组成。

2.权利要求1所述特异引物对乙在鉴定苹果果肉花青苷含量中的应用。

3.权利要求1所述特异引物对乙在鉴定或选育红肉苹果中的应用。

4.一种鉴定苹果植株的果肉花青苷含量的方法，包括如下步骤：

5.一种鉴定或选育生产红肉苹果的苹果植株的方法，包括如下步骤：

6.引物组合，由特异引物对甲和特异引物对乙组成；

7.权利要求6所述引物组合在鉴定苹果果肉花青苷含量中的应用。

8.权利要求6所述引物组合在鉴定或选育红肉苹果中的应用。

9.一种苹果育种方法，包括如下步骤：

技术总结
本发明公开了一种苹果果实红肉性状鉴定方法及特异引物对。本发明提供了一个引物对，命名为特异引物对乙，由序列表的序列5所示的单链DNA分子和序列表的序列6所示的单链DNA分子组成。本发明还保护所述特异引物对乙在鉴定苹果果肉花青苷含量中的应用。本发明还保护所述特异引物对乙在鉴定或选育红肉苹果中的应用。采用本发明提供的引物组合和方法鉴定苹果植株的果肉花青苷含量，能够做到早识别、早排除，有针对的选择育种目标，同时能够降低育种成本、提高育种效率，对培育高花青苷含量红肉苹果品种提供重要理论依据。

技术研发人员：王楠,刘文军,陈学森,张宗营,于蕾,梅卓欣,李志强,张淑辉,张静,毛志泉
受保护的技术使用者：山东农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12