靶向组蛋白去乙酰化酶8蛋白水解嵌合体、制备方法及其应用

本发明涉及药物设计合成，尤其涉及靶向组蛋白去乙酰化酶8蛋白水解嵌合体、制备方法及其应用。

背景技术：

1、蛋白降解靶向嵌合体(protacs)技术是一种通过泛素-蛋白酶体途径化学诱导靶蛋白降解的新型策略。protacs诱导蛋白降解的作用机制为：protacs在进入细胞后，其结构中的靶蛋白配体(poi ligand)特异性地与靶蛋白(poi)结合，另一端的e3连接酶配体(e3ligand)与e3连接酶(e3 ligase)结合，从而形成poi-protac-e3 ligase的三元复合物，然后e3连接酶介导泛素结合酶e2，将三元复合物中的靶蛋白poi泛素化，三元复合物解离后，被多泛素化标记的靶蛋白会被输送到蛋白酶体中进行降解，从而选择性地降低靶蛋白水平。

2、截至2021年12月，可被protacs降解的蛋白质靶标增加至130多个，涵盖癌症、免疫紊乱、病毒感染、神经退行性疾病等多个疾病领域，其中又以癌症领域的应用为主。其中，arvinas的arv-110和arv-471已进入临床ii期，是protac药物中临床进展最快的。一些研发初创企业已经获得了罗氏、赛诺菲、默克、辉瑞、吉利德等全球大型制药公司的关注。

3、组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,hdacs)作为表观遗传学调控的重要功能蛋白，近些年已经引起科学家的广泛关注。hdac8是ⅰ类hdacs，即zn2+依赖性hdacs，其主要分布于细胞核和细胞质中，通常诱导组蛋白去乙酰化并抑制基因转录。hdac8的失调与多种疾病的发生发展紧密相关，尤其是肿瘤，如胃癌、结肠癌、肺癌和乳腺癌等。随着对hdac8靶点结构与功能研究的不断深入，以hdac8为靶标的小分子选择性抑制剂陆续被报道。如：pci-34051、ncc149、oji-1、a8b4等。但是这些抑制剂效果不佳，副作用大。鉴于protacs的独特作用机制，例如能够靶向蛋白的非酶功能等特点，发展针对hdac8的protacs相关药物，对于肿瘤及其它疾病的治疗具有重要意义。截止目前，仅有一例文献报道的基于hdac8抑制剂ncc-149而发展的hdac8-protacs降解剂(chem.commun.2022,58,4635-4638.)，发明人课题组正在开发基于hdac8抑制剂pci-34051结构和crbn为e3连接酶而设计的hdac8-protacs降解剂(cn202210122650.8)。在此基础上，开发更多地选择性靶向组蛋白去乙酰化酶8的降解药物具有重要意义。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题是背景技术中所述的现有技术缺陷，提供靶向组蛋白去乙酰化酶8蛋白水解嵌合体、制备方法及其应用。

2、为了解决上述问题，本发明提出以下技术方案：

3、第一方面，本发明提供靶向组蛋白去乙酰化酶8蛋白水解嵌合体，所述嵌合体具有如式9x-1、9x-2所示的至少一化合物或其药学上可接受的盐：

4、

5、式9x-1、9x-2中的手性位点可任意为r或s，m为1～4的整数，n为1～4的整数。

6、第二方面，本发明提供一种如第一方面所述的靶向组蛋白去乙酰化酶8蛋白水解嵌合体的制备方法，所述制备方法包括包括以下步骤：

7、s1、将化合物1和化合物2分别溶于有机溶剂中得到第一溶液和第二溶液，往第一溶液中加入nah进行反应得到反应液，然后将第二溶液滴加至反应液中继续进行反应，得到化合物3；

8、s2、将化合物3溶于甲醇溶液中，加入pd/c反应得到化合物4；

9、s3、将化合物4、化合物5a或化合物5b、及碳酸钾溶于无水dmf中，搅拌加热至90℃，反应8h，反应完毕，得到化合物6a-6h；

10、s4、将化合物6a-6h溶于无水二氯甲烷中，与三氟乙酸在常温下反应，得到反应液；向反应液中加入石油醚，搅拌均匀后，在真空下抽除溶剂，得到浓缩的残留物；将化合物7、edci、hobt溶于dmf中，加入到上述浓缩的残留物中，冷却至5℃，再加入dipea，温度恢复至室温，继续反应18h，得到化合物8x-1或8x-2；

11、s5、取nh2oh溶液冷却至5℃，加入碱试剂，搅拌溶解得到羟胺溶液；将化合物8x-1或8x-2溶于meoh/thf溶液中，再加入羟胺溶液中，反应完毕后加入酸试剂中和，得到化合物9x-1或9x-2；

12、其中，步骤s1-s2的合成路线如下：

13、

14、步骤s3的合成路线如下：

15、

16、步骤s4的合成路线如下：

17、

18、其中，化合物7的手性位点可任意为r或s；m为1～4的整数、n为1～4的整数。

19、具体地，由于手性结构不同，本发明的化合物7可任意为以下5种结构：

20、

21、具体地，当化合物7的结构式如下7-1所示时，

22、

23、化合物5a的m＝1，合成的化合物为9a：

24、

25、化合物5a的m＝2，合成的化合物为9b：

26、

27、化合物5a的m＝3，合成的化合物为9c：

28、

29、化合物5a的m＝4，合成的化合物为9d：

30、

31、化合物5b的n＝1，合成的化合物为9e：

32、

33、化合物5b的n＝2，合成的化合物为9f：

34、

35、化合物5b的n＝3，合成的化合物为9g：

36、

37、化合物5b的n＝4，合成的化合物为9h：

38、

39、进一步地，步骤s1-s5中，还包括对各步骤得到的产物进行浓缩分离纯化的步骤。

40、具体地，步骤s1-s5中，为了提高相应产物的收率和纯度，在得到初步反应产物后还包括进一步采用萃取、洗涤、浓缩以及通过硅胶柱分离的手段对产物进行浓缩分离纯化的步骤。

41、进一步地，步骤s1中，所述有机溶剂为n,n-二甲基乙酰基胺。

42、进一步地，步骤s4中，所述浓缩的残留物无需纯化。

43、进一步地，步骤s5中，所述碱试剂为氢氧化钠；所述酸试剂为醋酸。

44、进一步地，步骤s5中，所述meoh/thf溶液中meoh和thf的体积比为1:1。

45、第三方面，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括如第一方面所述的靶向组蛋白去乙酰化酶8蛋白水解嵌合体，或者包括如第二方面所述制备方法制得的靶向组蛋白去乙酰化酶8蛋白水解嵌合体。

46、进一步地，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体和/或辅剂。

47、本发明所述的药物组合物，该药物组合物以第一方面所述的靶向组蛋白去乙酰化酶8蛋白水解嵌合体作为活性成分，不排除配制体系和给药方式的变动、对上述嵌合体进行简单化学修饰调整后的衍生物、药用盐、多化合物以及多降解剂合用等情况。

48、具体地，本发明提供的如上所述的化合物的药学上可接受的盐可以为：钠盐、钾盐、铵盐、氨基酸盐、乳酸盐、盐酸盐、磷酸盐、醋酸盐、苹果酸盐、枸椽酸盐或天冬氨酸盐等，本发明不对药物盐做具体限定。

49、在本发明中，可将本发明的靶向组蛋白去乙酰化酶8蛋白水解嵌合体作为活性成分配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的载体介质；配制好的药物可以通过常规途径进行给药，包括但并不限口服、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、皮内、或局部给药。

50、当本发明的药物组合物的剂型为用于口服施用的药物时，其含有安全有效量的本发明的靶向组蛋白去乙酰化酶8蛋白水解嵌合体以及药学上可接受的载体和/或辅剂，口服施用的药物可制成片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、乳剂、糖浆剂、软膏剂、栓剂等常用剂型；本发明中，不对载体和/或辅剂做具体限定。

51、本发明的药物组合物还可以被制成注射剂，可以在无菌操作环境下与注射用水、生理盐水、葡萄糖水制成注射剂，上述注射剂可通过常规方法进行制备。

52、第四方面，本发明提供了如第一方面所述的靶向组蛋白去乙酰化酶8蛋白水解嵌合体、第三方面所述的药物组合物在制备用于预防或治疗与hdac8活性或表达异常相关疾病的药物中的应用。

53、具体地，上述相关疾病为血液瘤、实体瘤等肿瘤、病毒感染以及寄生虫病。

54、与现有技术相比，本发明所能达到的技术效果包括：

55、本发明提供的靶向组蛋白去乙酰化酶8蛋白水解嵌合体是基于pci-34051结构和vhl为e3连接酶而设计的hdac8-protacs，具有选择性靶向组蛋白去乙酰化酶8降解的效果，实验证明其能够显著降解肿瘤细胞中的去乙酰化酶8，提示其在制备预防或治疗与hdac8活性或表达异常相关疾病药物，尤其是抗肿瘤活性药物方面的价值。