乳酸乳球菌乳亚种YF11转录调控因子YthA

本发明涉及细菌转录调控因子，特别是涉及一个乳酸乳球菌乳亚种yf11转录调控因子ytha及编码转录该调控因子的基因，含有乳酸乳球菌乳亚种yf11的转录调控因子ytha基因ytha的载体，含有该载体的重组乳酸乳球菌及应用。

背景技术：

1、转录调控因子是一类能与基因上特殊序列特异性结合，从而在特定的时间与空间控制基因转录量的蛋白质分子。在细菌的生长死亡以及对外界环境的反应过程中，转录因子对dna进行的转录水平的调控是十分关键的因素。大肠杆菌基因组中有300多个基因编码这样的蛋白质，大多是序列特异性的dna结合蛋白，能够与特定的启动子结合。一个给定的转录因子可以调控一个或多个靶基因的转录,而一个基因也可以被一个或多个转录因子所调控。同时，不同的转录因子之间也可以相互调控,于是这些基因和转录因子共同构成了一个复杂的基因转录调控网络。转录因子能够识别的特殊dna碱基序列称为转录因子结合位点(transcription factor binding sites,tfbs)，通常位于启动子中或者上游区域，长度一般为5-20bp。转录因子通常能够调控多个基因，每个基因的结合位点各不相同但会有一定的相似性。

2、乳酸乳球菌(lactococcus lactis)是一种无芽孢、革兰氏染色阳性细菌。它具有代谢相对简单、不产生内毒素或者毒性物质、生长快速、不形成包涵体等特点，具有很好的生物安全性，适合于表达和分泌外源蛋白，可以作为活载体制作疫苗，在食品工业、生物制药及疫苗研究领域具有重要应用前景。作为一种常用的工业菌株，乳酸乳球菌随着发酵产生的乳酸会导致发酵液ph下降，影响菌株的生长甚至死亡，进而影响重要产物的产量。乳链菌肽(nisin)是一个由34个氨基酸组成的具有抑菌作用的小肽，对于大多数革兰氏阳性菌具有抑菌效果，与化学合成防腐剂相比更是具有高效、安全、无毒、无副作用的优点。nisin生产的困境在于乳酸乳球菌在发酵过程中，菌体生长的最适环境与nisin稳定的ph之间存在矛盾。乳酸乳球菌在ph中性环境下生长势头良好，但随着发酵时间的延长，自身代谢的乳酸使发酵液的ph持续降低，抑制菌体的生长，而且乳酸大量积累本身还会抑制nisin的合成；而nisin则在ph2.0条件下非常稳定，随着ph值的升高，稳定性变差，活性降低。故构建耐酸菌株使其在低ph下正常生长生产具有很好的工业价值和研究意义。

技术实现思路

1、本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种乳酸乳球菌乳亚种yf11转录调控因子ytha。

2、本发明的第二个目的是提供一种编码上述乳酸乳球菌乳亚种yf11转录调控因子ytha基因ytha。

3、本发明的第三个目的是提供一种含有上述基因ytha的载体。

4、本发明的第四个目的是提供一种含有上述载体的重组乳酸乳球菌。

5、本发明的第五个目的是提供一种上述重组乳酸乳球菌在发酵生产nisin中的应用。

6、本发明的技术方案概述如下：

7、乳酸乳球菌乳亚种yf11转录调控因子ytha，所述转录调控因子ytha的氨基酸序列如seq id no.1所示。

8、编码上述乳酸乳球菌乳亚种yf11转录调控因子ytha的基因ytha，所述基因ytha的核苷酸序列如seq id no.2所示。

9、含有上述基因ytha的载体。

10、含有上述载体的重组乳酸乳球菌。

11、上述重组乳酸乳球菌在发酵生产nisin中的应用。

12、本发明优点：

13、实验结果表明，与对照菌株相比，摇瓶发酵实验中，本发明的重组乳酸乳球菌在酸性发酵液中的存活率提高，nisin耐受能力增强，nisin稳定性增加，从而提高了nisin产量。

技术特征：

1.乳酸乳球菌乳亚种yf11转录调控因子ytha，其特征是所述转录调控因子ytha的氨基酸序列如seq id no.1所示。

2.编码权利要求1的乳酸乳球菌乳亚种yf11转录调控因子ytha的基因ytha，其特征是所述基因ytha的核苷酸序列如seq id no.2所示。

3.含有权利要求2所述基因ytha的载体。

4.含有权利要求3所述载体的重组乳酸乳球菌。

5.权利要求4所述重组乳酸乳球菌在发酵生产nisin中的应用。

技术总结
本发明公开了乳酸乳球菌乳亚种YF11转录调控因子YthA，所述转录调控因子YthA的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；编码上述乳酸乳球菌乳亚种YF11转录调控因子YthA的基因ythA，所述基因ythA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。实验结果表明，与对照菌株相比，摇瓶发酵实验中，本发明的重组乳酸乳球菌在酸性发酵液中的存活率提高，nisin耐受能力增强，nisin稳定性增加，从而提高了nisin产量。

技术研发人员：乔建军,吴昊,刘金贵,熊慧,赵秀丽
受保护的技术使用者：天津大学浙江绍兴研究院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12