一种先天性巨大黑痣动物模型的构建方法及其应用

文档序号:37551020发布日期:2024-04-08 14:00阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种nrasq61位点突变的先天性巨大黑痣小鼠模型的构建方法,其特征在于,所述方法包括:采用crispr/cas9技术,获得可进行条件性过表达tyr-lsl-nrasq61k基因的h11定点敲入小鼠模型。

2.如权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述方法中,采用crispr/cas9技术,通过同源重组的方式,在h11基因位点定点插入tyr-lsl-nras(q61k)-wpre-polya表达框。

3.如权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述方法中,采用crispr/cas9技术,将nrasq61k突变基因和黑色素细胞特异性酪氨酸酶tyr基因启动子序列及lsl序列重组。

4.如权利要求3所述的构建方法,其特征在于,所述方法中,所述重组黑色素细胞特异性酪氨酸酶基因tyr启动子序列与nras(q61k)突变基因间插入loxp-stop-loxp(lsl)序列。

5.如权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述nrasq61位点突变包括nrasq61k突变、nrasq61r突变、nrasq61r突变、或brafv600e突变;其中,所述nrasq61k突变的序列如seqid no.1所示;所述nrasq61r突变序列如seq id no.2所示;所述brafv600e突变序列如seqid no.3所示。

6.如权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述构建方法包括以下步骤:

7.如权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述方法中,将h11位点插入tyr-lsl-nras(q61k)-wpre-polya基因的f1代小鼠和dpp3-cre小鼠杂交,获得双阳性f2代小鼠,该小鼠中lsl片段被剪切,仅在黑色素细胞条件性表达nrasq61k突变基因,即获得所述先天性巨大黑痣小鼠模型。

8.一种按如权利要求1-7之任一项所述方法构建得到的先天性巨大黑痣小鼠模型。

9.如权利要求1-7之任一项所述的构建方法、如权利要求8所述的先天性巨大黑痣小鼠模型在研究疾病病理机制、筛选靶向治疗药物、制备靶向治疗药物中的应用。

10.如权利要求9中的应用,其特征在于,所述应用中,以中国gcmn患者携带的主要驱动基因nrasq61k为基础,构建黑色素细胞选择性表达nrasq61k突变基因的小鼠模型。

11.一种引物,其特征在于,


技术总结
本发明公开了一种先天性巨大黑痣动物模型的构建方法及其应用,采用CRISPR/Cas9技术,将中国先天性巨大黑痣患者最常见的NRASQ61K突变基因和黑色素细胞特异性酪氨酸酶(TYR)基因启动子序列及LSL序列重组后转入小鼠基因组特定位点(H11)中,构建黑色素细胞特异性表达NRASQ61K突变基因的转基因小鼠,即先天性巨大黑痣模型小鼠,其具有和先天性巨大黑痣临床患者相同的致病基因和相似的表型。本发明为临床先天性巨大黑痣的病因学研究,以及为进一步的靶向治疗策略的选择提供了良好的研究工具,具有广泛应用前景。

技术研发人员:李青峰,余庆雄
受保护的技术使用者:上海交通大学医学院附属第九人民医院
技术研发日:
技术公布日:2024/4/7
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