1.一种nrasq61位点突变的先天性巨大黑痣小鼠模型的构建方法,其特征在于,所述方法包括:采用crispr/cas9技术,获得可进行条件性过表达tyr-lsl-nrasq61k基因的h11定点敲入小鼠模型。
2.如权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述方法中,采用crispr/cas9技术,通过同源重组的方式,在h11基因位点定点插入tyr-lsl-nras(q61k)-wpre-polya表达框。
3.如权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述方法中,采用crispr/cas9技术,将nrasq61k突变基因和黑色素细胞特异性酪氨酸酶tyr基因启动子序列及lsl序列重组。
4.如权利要求3所述的构建方法,其特征在于,所述方法中,所述重组黑色素细胞特异性酪氨酸酶基因tyr启动子序列与nras(q61k)突变基因间插入loxp-stop-loxp(lsl)序列。
5.如权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述nrasq61位点突变包括nrasq61k突变、nrasq61r突变、nrasq61r突变、或brafv600e突变;其中,所述nrasq61k突变的序列如seqid no.1所示;所述nrasq61r突变序列如seq id no.2所示;所述brafv600e突变序列如seqid no.3所示。
6.如权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述构建方法包括以下步骤:
7.如权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述方法中,将h11位点插入tyr-lsl-nras(q61k)-wpre-polya基因的f1代小鼠和dpp3-cre小鼠杂交,获得双阳性f2代小鼠,该小鼠中lsl片段被剪切,仅在黑色素细胞条件性表达nrasq61k突变基因,即获得所述先天性巨大黑痣小鼠模型。
8.一种按如权利要求1-7之任一项所述方法构建得到的先天性巨大黑痣小鼠模型。
9.如权利要求1-7之任一项所述的构建方法、如权利要求8所述的先天性巨大黑痣小鼠模型在研究疾病病理机制、筛选靶向治疗药物、制备靶向治疗药物中的应用。
10.如权利要求9中的应用,其特征在于,所述应用中,以中国gcmn患者携带的主要驱动基因nrasq61k为基础,构建黑色素细胞选择性表达nrasq61k突变基因的小鼠模型。
11.一种引物,其特征在于,