一种靶向CA9的融合嵌合抗原受体、重组表达载体及其应用的制作方法

文档序号:34164968发布日期:2023-05-15 00:20阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种靶向表达ca9表面抗原细胞且分泌il-15sa融合蛋白或il-36γ,cxcl11并在膜上表达ccr8或cxcr6的融合嵌合抗原受体,其特征在于,包含cd8α信号肽、靶向ca9的scfv、strepii标签蛋白,cd8α铰链域,cd28跨膜结构域和cd28细胞内信号结构域,41-bb共刺激域,cd3ζ信号传导域,分泌il-15sa、il-36γ或cxcl11融合蛋白的结构域,膜表达ccr8或cxcr6的结构域。

2.根据权利要求1所述融合嵌合抗原受体,其特征在于,所述靶向ca9的scfv的氨基酸序列包括如seq id no:1至seq id no:24;其对应的核苷酸序列包括seq id no:25至seqid no:48。

3.根据权利要求1所述融合嵌合抗原受体,其特征在于,所述cd8α信号肽的氨基酸序列如seq id no:49所示,strep ii标签蛋白的氨基酸序列如seq id no:51所示,cd8α铰链域的氨基酸序列如seq id no:53所示,cd28跨膜域的氨基酸序列如seq id no:55所示,cd28细胞内信号结构域的氨基酸序列如seq id no:57所示,4-1bb共刺激域的氨基酸序列如seqid no:59所示,cd3ζ信号传导域的氨基酸序列如seq id no:61所示。

4.根据权利要求1所述融合嵌合抗原受体,其特征在于,所述cd8α信号肽的核苷酸序列如seq id no:50所示,strep ii标签蛋白的核苷酸序列如seq id no:52所示,cd8α铰链域的核苷酸序列如seq id no:54所示,cd28跨膜域的核苷酸序列如seq id no:56所示,cd28细胞内信号结构域的核苷酸序列如seq id no:58所示,4-1bb共刺激域的核苷酸序列如seqid no:60所示,cd3ζ信号传导域的核苷酸序列如seq id no:62所示。

5.根据权利要求1所述融合嵌合抗原受体,其特征在于,所述分泌il-15sa融合蛋白结构域的氨基酸序列如seq id no:63所示,分泌il-36γ融合蛋白结构域的氨基酸序列如seqid no:65所示,分泌cxcl11融合蛋白结构域的氨基酸序列如seq id no:67所示。

6.根据权利要求1所述融合嵌合抗原受体,其特征在于,所述分泌il-15sa融合蛋白结构域的核苷酸序列如seq id no:64所示,分泌il-36γ融合蛋白结构域的核苷酸序列如seqid no:66所示,分泌cxcl11融合蛋白结构域的核苷酸序列如seq id no:68所示。

7.根据权利要求1所述融合嵌合抗原受体,其特征在于,所述膜表达ccr8结构域的氨基酸序列如seq id no:69所示,膜表达cxcr6结构域的氨基酸序列如seq id no:71所示。

8.根据权利要求1所述融合嵌合抗原受体,其特征在于,所述膜表达ccr8结构域的核苷酸序列如seq id no:70所示,膜表达cxcr6结构域的核苷酸序列如seq id no:72所示。

9.表达权利要求1-8中任一项所述的融合嵌合抗原受体的重组表达载体,其特征在于,包括融合嵌合抗原受体表达框,所述融合嵌合抗原受体表达框由可在t细胞中表达的启动子和位于所述启动子下游的编码所述融合嵌合抗原受体的核酸组成。

10.根据权利要求9所述的重组表达载体,其特征在于,所述启动子为rsv启动子,cmv启动子,sv40启动子、ef-1α启动子。

11.根据权利要求9所述的重组表达载体,其特征在于,所述重组表达载体通过将所述编码融合嵌合抗原受体的核酸插入慢病毒表达载体中的ef-1a启动子的3’下游得到。

12.如权利要求1-8中任一项所述的融合嵌合抗原受体或如权利要求9-11任一项所述的重组表达载体在制备治疗肿瘤的产品中的应用。

13.根据权利要求12所述的应用,其特征在于,所述肿瘤包括肺鳞癌,肺腺癌,膀胱尿路上皮癌,乳腺浸润癌,宫颈鳞癌和腺癌,胆管癌,多形成性胶质细胞瘤,头颈癌,肾透明细胞癌,肾乳头状细胞癌,胰腺癌,直肠癌,肉瘤,胸腺癌,胃癌,子宫内膜样癌。


技术总结
本发明提出了一种靶向CA9的融合嵌合抗原受体、重组表达载体及其应用,属于基因工程技术领域。一种靶向表达CA9表面抗原细胞且分泌IL‑15SA融合蛋白或IL‑36γ,CXCL11并在膜上表达CCR8或CXCR6的融合嵌合抗原受体,包含CD8α信号肽、靶向CA9的scFv、Strep II标签蛋白,CD8α铰链域,CD28跨膜结构域和CD28细胞内信号结构域,41‑BB共刺激域,CD3ζ信号传导域,分泌IL‑15SA、IL‑36γ或CXCL11融合蛋白的结构域,膜表达CCR8或CXCR6的结构域。本发明的融合嵌合抗原受体表达于T细胞中,增强免疫细胞浸润,募集更多的免疫细胞,起到更好的抑制肿瘤的效果。

技术研发人员:张同存,孙钒,吕梦清,崔烨挺
受保护的技术使用者:武汉波睿达生物科技有限公司
技术研发日:
技术公布日:2024/1/12
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