技术特征：
1.一组用于特异性扩增疟原虫基因的pcr引物，其特征在于，所述引物包含如seq id no:1所示的正向引物、和如seq id no:2所示的反向引物。2.一组用于特异性筛查三日疟原虫的引物和探针组合，其特征在于，所述引物对包含如seq id no:1所示的正向引物、如seq id no:2所示的反向引物，所述探针包含如seq id no:3所示的探针。3.一组用于特异性筛查卵形疟原虫的引物和探针组合，其特征在于，所述引物对包含如seq id no:1所示的正向引物、如seq id no:2所示的反向引物，所述探针包含如seq id no:4和/或seq id no:5所示的探针。4.一组用于特异性筛查恶性疟原虫的引物和探针组合，其特征在于，所述引物对包含如seq id no:1所示的正向引物、如seq id no:2所示的反向引物，所述探针包含如seq id no:6所示的探针。5.一组用于特异性筛查间日疟原虫的引物和探针组合，其特征在于，所述引物对包含如seq id no:1所示的正向引物、如seq id no:2所示的反向引物，所述探针包含如seq id no:7所示的探针。6.一种基于pcr方法筛查或辅助筛查疟原虫的引物和探针组合，其特征在于，所述引物对包含如seq id no:1所示的正向引物、如seq id no:2所示的反向引物，所述探针包含如seq id no:3至seq id no:7所示的探针中的任意一条、任意两条、任意三条、任意四条、或五条。7.根据权利要求2-6中任一项权利要求所述的引物和探针组合，其特征在于，所述探针序列的5’端标记有荧光报告基团，所述探针序列的3’端标记有荧光淬灭基团；当所述探针位于同一反应体系时，其中筛选不同种类疟原虫的荧光报告基团光谱范围不同。8.根据权利要求7所述的引物和探针组合，其特征在于，所述荧光报告基团选自fam、vic、rox、cy5和/或hex；所述荧光淬灭基团选自bhq1、bhq2、bhq3、和/或eclipse。9.根据权利要求8所述的引物和探针组合，其特征在于：其中使用的各探针及其5’端标记的荧光报告基团和3’端标记的荧光淬灭基团如下：筛选三日疟原虫的探针如seq id no:3所示，其5’端荧光标记为fam，3’端荧光标记为bhq1；筛选卵形疟原虫w亚型的探针如seq id no:4所示，其5’端荧光标记为vic，3’端荧光标记为bhq1；筛选卵形疟原虫c亚型的探针如seq id no:5所示，其5’端荧光标记为vic，3’端荧光标记为bhq1；筛选恶性疟原虫的探针如seq id no:6所示，其5’端荧光标记为rox，3’端荧光标记为bhq2；筛选间日疟原虫的探针如seq id no:7所示，其5’端荧光标记为cy5，3’端荧光标记为bhq3。10.如权利要求6-9任一项权利要求所述的引物和探针组合，其为数字pcr(dpcr)反应所用的引物和探针组合。11.一种筛查疟原虫的数字pcr反应预混液，其特征在于，所述数字pcr反应预混液包含如权利要求1-9任一项所述的引物和/或探针。12.根据权利要求11所述的数字pcr反应预混液，其还包括选自以下的一种、两种、三种、四种或五种组分：热启动taq酶、udg酶、dntps，牛血清白蛋白和mg
2+
离子。13.一种数字pcr微流控卡盒，其含有权利要求11或权利要求12所述的数字pcr反应预混液。
14.一种用于筛查疟原虫的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求11或12所述的数字pcr(dpcr)反应预混液。15.根据权利要求14所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括疟原虫阳性对照、和/或阴性对照。16.根据权利要求14所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括权利要求13所述的数字pcr微流控卡盒。17.一种筛查疟原虫的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：(1)处理血浆样品；(2)制备数字pcr扩增混合液，其含有步骤(1)提供的待检测样本和根据权利要求11或12所述的数字pcr预混液和蒸馏水；(3)在数字pcr微流控卡盒内制备微滴，并进行pcr扩增反应；(4)使用数字pcr微流控卡盒读取仪进行微滴pcr扩增反应后的荧光信号读取；(5)结果分析。18.根据权利要求1所述的引物、权利要求6所述的引物和探针、权利要求11或12所述数字pcr反应预混液或权利要求13所述数字pcr微流控卡盒在制备用于筛查疟原虫的定量检测试剂盒中的用途。
技术总结
本申请涉及疟原虫的多重数字PCR快速检测体系及检测方法，可以高灵敏的检出血液中疟原虫的种类和密度，尤其在应用于无症状感染者和低密度水平分析时优势突出，对预防疟原虫感染的漏检、误检效果显著。同时在疟疾伴随诊断中，还可以配合治疗策略的有效调整，更加有效管控药物的使用，加强耐药控制，降低病人的耐药风险。险。
技术研发人员：关明 蒋浩琴 董柳 张选 王雅琦 张昉
受保护的技术使用者：苏州锐讯生物科技有限公司
技术研发日：2022.10.26
技术公布日：2023/3/2