一种Jurkat效应细胞及其构建方法和用途与流程

文档序号:34383064发布日期:2023-06-08 04:24阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种构建jurkat效应细胞的方法,其特征在于,包括以下步骤:通过在jurkat细胞中对nur77基因终止密码子区域进行基因编辑的同时,将报告基因定点并同框敲入nur77基因的编码框后,以保证报告基因的表达调控同内源性基因nur77的表达一致。

2.根据权利要求1所述的一种构建jurkat效应细胞的方法,其特征在于,使用选自zfn、talen或/和crispr-cas9的基因编辑方法递送基因编辑物质。

3.根据权利要求1或2所述的一种构建jurkat效应细胞的方法,其特征在于,基因编辑物质为同源修复模板dsdna,其核苷酸序列如seq id no.8所示。

4.根据权利要求1或2所述的一种构建jurkat效应细胞的方法,其特征在于,使用cas9蛋白和sgrna形成的rnp复合体进行电转。

5.根据权利要求4所述的一种构建jurkat效应细胞的方法,其特征在于,所述sgrna的靶向核苷酸序列如seq id no:1~7中至少一项所示。

6.根据权利要求1或2所述的一种构建jurkat效应细胞的方法,其特征在于,所述报告基因为绿色荧光蛋白和荧光素酶基因组合的双重报告基因。

7.根据权利要求1或2所述的一种构建jurkat效应细胞的方法,其特征在于,所述方法包括以下具体步骤:

8.一种基于nur77信号通路的jurkat效应细胞其特征在于,根据权利要求1或2所述的方法制备。

9.权利要求8所述的jurkat效应细胞在car和tcr分子特异性功能筛选和评估中的应用。

10.权利要求8所述的jurkat效应细胞在抗体展示文库高通量筛选car分子中的应用。


技术总结
本发明提供了一种Jurkat效应细胞及其构建方法和用途。该效应细胞的构建是通过在Jurkat细胞中,对Nur77基因终止密码子区域进行基因编辑的同时,将两个报告基因GFP和luciferase定点敲入Nur77基因的编码框后,以保证报告基因的表达调控同内源性Nur77基因的表达一致。该效应细胞可通过Nur77信号强弱来反应和评估CAR和TCR分子的特异性功能,包括抗原依赖信号和非抗原依赖Tonic信号的强弱。本发明方法高效、经济、便捷且结果稳定准确。

技术研发人员:刘平磊,刘达春,张盼,郑勇
受保护的技术使用者:上海药明生物技术有限公司
技术研发日:
技术公布日:2024/1/13
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