一种甜瓜白粉病抗性相关的KASP标记及其应用的制作方法

本发明属于植物抗病育种，尤其涉及一种甜瓜白粉病抗性相关的kasp标记及其应用。

背景技术：

1、甜瓜(cucumis melo l.)属于葫芦科(cucurbitaceae)黄瓜属(cucumis)一年生二倍体植物，因其风味、口感在世界范围内广泛种植，并成为深受消费者欢迎的高档果、致富果。白粉病是目前甜瓜栽培中面临的重要威胁，严重影响甜瓜的产量、品质，是甜瓜生产的世界性病害。白粉病防治已经成为生产中急需解决的问题。目前生产中白粉病的防治主要通过农药等化学药剂使用、隔离设施等时空隔离、以及通过抗病品种应用。其中化学药剂容易造成环境污染，且存在威胁人身健康的风险。时空隔离则成本较大，不适合我国目前耕地不足且规模小而散的现状。而抗病品种的应用则可以克服以上风险，适应我国国情，经济、环保、有效。

2、目前，甜瓜品种主要有传统常规的材料杂交纯化的常规品种，双亲杂交品种，辐射等物理化学诱变育种，以及分子标记辅助选择等生物技术育种。传统育种技术周期长、抗病鉴定费时费力、成本高，且效果不稳定，特别对于抗病育种，病原菌变异速度较快，传统育种具有品种选育成功后不适应市场的风险。诱变育种尽管可以获得新的基因资源，但不确定性较高，筛选成本较大，且后代存在回复突变可能，性状不稳定。分子标记辅助选择育种可通过探寻白粉病抗性基因紧密连锁的突变位点，设计开发相关分子标记，用于育种选择，可大大缩短育种周期，提高选择效率，降低成本，且所选育品种可快速投入市场，解决生产上的难题。

技术实现思路

1、本发明实施例的目的在于提供一种甜瓜白粉病抗性相关的kasp标记及其应用，旨在解决现有育种中甜瓜白粉病抗病品种选育效率低，成本高，且相关基因不足的缺陷，通过基因分型和表型鉴定，挖掘一个与已检索到公布的抗病位点不同的可引起功能性非同义突变的位点，并开发相关的分子标记和应用。

2、本发明实施例的目的通过下述技术方案实现：

3、本发明一方面提供了一种甜瓜抗白粉病相关的突变位点，所述的突变位点位于甜瓜2号染色体上melo3c015361.2基因的第7901位核苷酸g→a突变，所述melo3c015361.2基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。

4、本发明另一方面提供了一种甜瓜白粉病抗性相关的kasp标记，应用上述突变位点，所述kasp标记的引物序列如下：

5、感病位点结合上游引物(如seq id no.2所示)：

6、5’-gaaggtcggagtcaacggattcaggaagcttatataaaatgctttatt-3’；

7、抗病位点结合上游引物(如seq id no.3所示)：

8、5’-gaaggtgaccaagttcatgctcaggaagcttatataaaatgctttatc-3’；

9、共用下游引物(如seq id no.4所示)：

10、5’-agttcaagttctagttgctgtgga-3’。

11、本发明还公开了一种甜瓜白粉病抗性相关的kasp标记的应用，用于抗白粉病甜瓜的筛选。

12、本发明还公开了一种甜瓜白粉病抗性相关的kasp标记的应用，用于甜瓜抗白粉病的抗性鉴定。

13、进一步的，所述甜瓜白粉病抗性相关的kasp标记的应用，用于抗白粉病甜瓜育种。

14、进一步的，所述的抗白粉病甜瓜育种优选为甜瓜白粉病抗性标记辅助育种。

15、所述的甜瓜抗白粉病的抗性鉴定，具体鉴定方法步骤如下：

16、(1)提取待筛选的甜瓜材料的基因组dna；

17、(2)利用上述的kasp标记的引物序列，采用竞争性等位基因特异性pcr方法对甜瓜基因组dna进行扩增检测；

18、(3)扩增检测结果判断：

19、(3.1)扩增结果为c，则为甜瓜纯合抗病材料；

20、(3.2)扩增结果为t，则为甜瓜纯合感病材料；

21、(3.3)扩增结果为c/t则为甜瓜杂合抗病材料。

22、进一步的，所述甜瓜材料，为甜瓜叶片、甜瓜果实的甜瓜待鉴定部位。

23、本发明的有益效果是：

24、1、本发明的kasp引物是通过对两个亲本(抗病和感病)及其正反交f1进行苗期白粉病接种鉴定，发现抗病性显性遗传，然后对两个亲本进行重测序，筛选差异位点，对f2代两个极端分离池进行差异位点基因型分析，结合生物信息学分析，筛选功能性突变位点，通过自然群体验证，获得的甜瓜白粉病抗性相关基因位点设计的引物。

25、2、本发明的突变位点经检索，未发现有相同的甜瓜白粉病抗性位点公开。

26、3、本发明开发的kasp引物用于甜瓜白粉病抗性材料筛选和品种选育，具有高效、准确性高、无污染的特点。

技术特征：

1.一种甜瓜抗白粉病相关的突变位点，其特征在于：所述的突变位点位于甜瓜2号染色体上melo3c015361.2基因的第7901位核苷酸g→a突变，所述melo3c015361.2的序列如seqid no.1所示。

2.一种甜瓜白粉病抗性相关的kasp标记，其特征在于，所述kasp标记的引物序列如下：

3.权利要求2所述的甜瓜白粉病抗性相关的kasp标记的应用，其特征在于，用于抗白粉病甜瓜的筛选。

4.权利要求2所述的甜瓜白粉病抗性相关的kasp标记的应用，其特征在于，用于甜瓜抗白粉病的抗性鉴定。

5.权利要求2所述的甜瓜白粉病抗性相关的kasp标记的应用，其特征在于，用于抗白粉病甜瓜育种。

6.根据权利要求5所述的甜瓜白粉病抗性相关的kasp标记的应用，其特征在于，所述的抗白粉病甜瓜育种为甜瓜白粉病抗性标记辅助育种。

7.根据权利要求4所述的甜瓜白粉病抗性相关的kasp标记的应用，其特征在于，所述的甜瓜抗白粉病的抗性鉴定，具体鉴定方法步骤如下：

8.根据权利要求7所述的甜瓜白粉病抗性相关的kasp标记的应用，其特征在于，所述甜瓜材料，为甜瓜叶片、甜瓜果实的甜瓜待鉴定部位。

技术总结
本发明公开了一种甜瓜白粉病抗性相关的KASP标记及其应用，属于植物抗病育种技术领域。所述KASP标记的引物序列如下：感病位点结合上游引物如SEQ ID NO.2所示，抗病位点结合上游引物如SEQ ID NO.3所示，共用下游引物如SEQ ID NO.4所示。本发明的甜瓜白粉病抗性相关的KASP标记的应用，可以应用于抗白粉病甜瓜的筛选、甜瓜抗白粉病的抗性鉴定、以及用于抗白粉病甜瓜育种，具有高效、准确性高、无污染的特点。

技术研发人员：邢乃林,臧全宇,马二磊,郝芳敏,王毓洪,黄芸萍,严蕾艳
受保护的技术使用者：宁波市农业科学研究院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12