一种防治草莓根腐病的微生物菌剂及其制备方法

本发明涉及农业微生物，具体涉及一种防治草莓根腐病的微生物菌剂及其制备方法。

背景技术：

1、草莓是一种重要的经济作物，近年来，随着种植面积的提高、种植结构的调整，草莓从单一的露地栽培模式转变为设施栽培模式。但是，由于草莓设施栽培过程中低温、高湿、封闭、连茬种植及周年生产的特点，导致种植土壤理化性质恶化，病原菌数量累积增加，造成病害发生日趋严重，严重影响了草莓的品质和产量，制约草莓产业的可持续发展。

2、草莓根腐病是一种危害严重、影响范围广泛的土传病害，是导致草莓产量和质量降低的主要因素。草莓根腐病田间发病症状复杂，引起发病的病原菌种类较多，在草莓的整个生育期均可引起发病，其具有突发性和毁灭性的特点，一旦发生，便很难防治，给草莓生产带来巨大损失。当前因缺少高抗根腐病的草莓品种，因此草莓根腐病的防治仍以化学防治为主，以生物防治为核心的绿色防控技术还缺乏高效的菌剂产品及其应用技术。

3、近年来，化学药剂防治作物病害产生的农药残留问题，以及由此导致的相关食品安全问题非常突出，而生防菌剂由于其广谱防病效果、多重抗病机制及对环境友好的特点，被越来越多的应用到作物病害防控中，成为减少或替代农药的重要资源。因此亟待开发一种高效的生防菌剂，并将其应用于草莓根腐病的绿色防控中，有力推动草莓产业的可持续发展。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供了一种防治草莓根腐病的微生物菌剂及其制备方法，该微生物菌剂能够高效防治草莓根腐病，从而促进草莓植株生长；另外，使用该微生物菌剂具有绿色环保、无农药残留的特点，在使用后可避免致病菌产生抗药性。

2、为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：

3、一种防治草莓根腐病的微生物菌剂，由多粘类芽孢杆菌paenibacillus polymyxa和假真菌样芽孢杆菌bacillus pseudomycoides复配而成，均为本实验分离保存。所述多粘类芽孢杆菌paenibacillus polymyxa于2022年09月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为cgmcc no.25858，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号；假真菌样芽孢杆菌bacillus pseudomycoides于2022年09月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为cgmcc no.25859，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

4、优选地，所述多粘类芽孢杆菌菌剂和假真菌样芽孢杆菌菌剂的质量比为1：1。

5、进一步地，所述多粘类芽孢杆菌paenibacillus polymyxa和假真菌样芽孢杆菌bacillus pseudomycoides有效活菌数均不少于1.0×1010cfu/g。

6、为实现本发明目的，本发明还提供一种上述防治草莓根腐病的微生物菌剂的制备方法，包括如下步骤：

7、s1菌株筛选鉴定

8、将草莓根腐病病原菌拟盘多毛孢菌及尖孢镰刀菌接种至马铃薯葡萄糖琼脂培养基中央，将待筛选菌株接种于培养基边缘，28℃恒温培养箱培养5天后，观察拮抗细菌对草莓根腐病原菌的抑菌状况，根据实验结果筛选鉴定获得抑菌效果明显的多粘类芽孢杆菌paenibacillus polymyxa菌株和假真菌样芽孢杆菌bacillus pseudomycoides；

9、s2菌株发酵

10、(1)菌种培养：将低温保存的所述多粘类芽孢杆菌paenibacillus polymyxa和假真菌样芽孢杆菌bacillus pseudomycoides分别接种于na固体培养基上，培养得到单菌落，接种至nb培养基中，于30℃、180r/min振荡培养18-24h后获得种子液，其浓度不低于1.0×108cfu/ml；

11、(2)发酵培养：将步骤(1)得到的多粘类芽孢杆菌种子液和假真菌样芽孢杆菌种子液按5％的接种量分别接种于发酵罐中，于30℃、转速180r/min、溶氧量20％～22％的条件下培养36h，完成发酵，保证发酵液中菌体浓度为1.0×1010cfu/ml，芽孢产生率达90％以上；

12、(3)芽孢杆菌菌剂制备：向将步骤(2)得到的多粘类芽孢杆菌发酵液和假真菌样芽孢杆菌发酵液中分别添加5％的可溶性淀粉，搅拌均匀，直接进行喷雾干燥，得到多粘类芽孢杆菌菌剂和假真菌样芽孢杆菌菌剂；

13、(4)微生物菌剂的制备：将步骤(3)得到的多粘类芽孢杆菌菌剂和假真菌样芽孢杆菌菌剂按质量比1：1进行混合得到防治草莓根腐病的微生物菌剂。

14、优选的，步骤(2)中，发酵培养的培养基配方(g/l)：牛肉浸粉5，蛋白胨10，酵母浸粉5，氯化钠5，葡萄糖10，ph 7.0。

15、与现有技术相比，本发明有益效果如下：

16、本发明中将多粘类芽孢杆菌菌剂和假真菌样芽孢杆菌菌剂复配作为微生物菌剂，不仅显著降低了草莓根腐病的发病率，而且多粘类芽孢杆菌和假真菌样芽孢杆菌复配菌剂效果要优于单独接种多粘类芽孢杆菌和假真菌样芽孢杆菌菌剂，二者在防治草莓根腐病方面存在协同作用，可高效稳定的应用于草莓根腐病的绿色防控。本发明能够高效防治草莓根腐病，从而促进草莓植株生长；另外，使用该微生物菌剂具有绿色环保、无农药残留的特点，在使用后避免了致病菌产生抗药性。

技术特征：

1.一种防治草莓根腐病的微生物菌剂，其特征在于，由多粘类芽孢杆菌paenibacilluspolymyxa和假真菌样芽孢杆菌bacillus pseudomycoides复配而成，所述多粘类芽孢杆菌bacillus pseudomycoides于2022年09月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为cgmcc no.25858；假真菌样芽孢杆菌bacillus pseudomycoides于2022年09月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为cgmccno.25859。

2.根据权利要求1所述的一种防治草莓根腐病的微生物菌剂，其特征在于，多粘类芽孢杆菌菌剂和假真菌样芽孢杆菌菌剂的质量比为1：1。

3.根据权利要求1或2所述的一种防治草莓根腐病的微生物菌剂，其特征在于，所述多粘类芽孢杆菌paenibacillus polymyxa和假真菌样芽孢杆菌bacillus pseudomycoides有效活菌数均不少于1.0×1010cfu/g。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的一种防治草莓根腐病的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

5.根据权利要求4所述的一种防治草莓根腐病的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，发酵培养的培养基配方(g/l)为：牛肉浸粉5，蛋白胨10，酵母浸粉5，氯化钠5，葡萄糖10g，ph7.0。

技术总结
一种防治草莓根腐病的微生物菌剂及其制备方法，微生物菌剂由多粘类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa、假真菌样芽孢杆菌Bacillus pseudomycoides复配而成，多粘类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa的保藏编号为CGMCC No.25858，假真菌样芽孢杆菌Bacillus pseudomycoides的保藏编号为CGMCC No.25859。制备方法：将上述两种菌发酵培养后，按1：1比例复配为可湿性粉剂，其施用方式为根部浇灌。本发明制备的微生物菌剂可有效防治草莓根腐病，促进草莓植株生长，并且在使用后不会引起致病菌抗药性产生及农药残留和环境污染。

技术研发人员：杨瑞先,刘萍,李娟,卢明媚,孙高峰
受保护的技术使用者：洛阳理工学院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12