一种解脂耶氏酵母基因工程菌及其应用

文档序号:34737424发布日期:2023-07-12 21:20阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种解脂耶氏酵母(yarrowia lipolytica)的基因工程菌,所述基因工程菌为在解脂耶氏酵母po1f中敲除基因pex10、并表达来源于高山被孢霉菌(mortierella alpine)的c16/18延长酶基因maelo3、来源于拟南芥(arabidopsis thaliana)的延长酶基因atkcs和来源于海甘蓝(crambe abyssinica)的延长酶基因crakcs的菌株,其特征在于,所述基因工程菌还表达来源于碎米荠属(cardamine graeca)的延长酶基因cgkcs。

2.如权利要求1所述的基因工程菌,其特征在于,所述基因工程菌含有1个拷贝的延长酶基因cgkcs;或,所述基因工程菌含有1个拷贝的延长酶基因cgkcs和2个拷贝的所述延长酶基因cgkcs和来源于高山被孢霉菌的去饱和酶基因mad15d的融合基因cgkcs-l-mad15d。

3.如权利要求1所述的基因工程菌,其特征在于,所述基因工程菌还过表达其自身的二酰基甘油转移酶基因dga1;

4.如权利要求2所述的基因工程菌,其特征在于,所述基因工程菌共含有2个拷贝其自身的二酰基甘油转移酶基因dga1,还含有1个拷贝的所述二酰基甘油转移酶基因dga1和其自身的δ9去饱和酶基因ole1的融合基因ole1-l-dga1。

5.如权利要求1~4任一项所述的基因工程菌,其特征在于,所述c16/18延长酶基因maelo3的核苷酸序列如seq id no:37所示;和/或,所述延长酶基因atkcs的核苷酸序列如seq id no:34所示;和/或,所述延长酶基因crakcs的核苷酸序列如seq idno:35所示;和/或,所述延长酶基因cgkcs的核苷酸序列如seq id no:33或seq idno:36所示;和/或,所述二酰基甘油转移酶基因dga1的核苷酸序列如seq id no:38所示;和/或,所述融合基因cgkcs-l-mad15d的核苷酸序列如seq id no:39所示;和/或,所述融合基因ole1-l-dga1的核苷酸序列如seq id no:40所示。

6.一种如权利要求1~5任一项所述的基因工程菌的构建方法,其特征在于,所述构建方法包含将待表达基因整合至解脂耶氏酵母的基因组中,所述整合的方法为在解脂耶氏酵母中转入包含待表达基因的整合表达质粒;和/或,所述构建方法基于crispr/cas9操作系统。

7.如权利要求6所述的构建方法,其特征在于,当所述构建方法基于crispr/cas9操作系统时,包含如下步骤:

8.如权利要求6或7所述的构建方法,其特征在于,所述donor质粒或所述整合表达质粒中的待表达基因的启动子为uas4b+tef;和/或,所述donor质粒的骨架为phr_hrgfp;和/或,所述sgrna质粒的骨架为pcrispryl;和/或,所述整合表达质粒的骨架为pina1269或p3204;

9.一种生产神经酸的方法,其特征在于,所述方法包括在培养基中发酵如权利要求1~5任一项所述的基因工程菌,并从中分离得到神经酸;所述培养基优选ypd培养基;

10.如权利要求1~5任一项所述的基因工程菌在生产神经酸中的应用。


技术总结
本发明提供了一种解脂耶氏酵母基因工程菌及其应用。所述基因工程菌为在解脂耶氏酵母Po1f中敲除基因PEX10、并表达来源于高山被孢霉菌的C16/18延长酶基因MaELO3、来源于拟南芥的延长酶基因AtKCS和来源于海甘蓝的延长酶基因CraKCS的菌株,所述基因工程菌还表达来源于碎米荠属的延长酶基因CgKCS。进一步表达来源于高山被孢霉菌的去饱和酶基因MaD15D,并过表达菌株自身的二酰基甘油转移酶基因DGA1和其自身的Δ9去饱和酶基因OLE1后,在摇瓶发酵中神经酸的产量为111.6mg/L,通过外源添加1%的菜籽油,神经酸的产量可以达到185.1mg/L。本发明构建的解脂耶氏酵母基因工程菌,其操作简便,性能稳定可靠,能够应用于大规模的商业化生产。

技术研发人员:韦柳静,冯鑫,赵鑫茹,杨敬林,王磊,花强,陈骏
受保护的技术使用者:华东理工大学
技术研发日:
技术公布日:2024/1/13
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