1.一种用于产生体节的方法,所述方法包括:
2.根据权利要求1所述的方法,还包括向步骤(a)的培养基中添加胰岛素、knock-out血清替代物、运铁蛋白-硒和bmp4中的一种或更多种。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的方法,其中所述wnt激活剂选自由以下组成的组:chir99021、wnt3a和rspo3。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法,其中所述向培养基中添加至少一种wnt激活剂在获得所述球形聚集体之后12至36小时内进行。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法,其中所述去除所述wnt激活剂在8至36小时的范围内进行。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法,还包括在包含中胚层细胞和内胚层细胞的所述聚集体出现后,向所述培养基中添加至少一种nodal抑制剂。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法,其中所述细胞外基质或其组分的量在1%至15%vol/vol的范围内。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法,还包括在步骤(d)中添加选自由以下组成的组的至少一种化合物:wnt激活剂和bmp抑制剂。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法,还包括在所述获得多于一个体节后去除细胞外基质或其组分。
10.一种用于产生肌源性祖细胞的方法,所述方法包括:
11.根据权利要求所述10的方法,其中所述一种或更多种生长因子包括hgf、igf和fgf2。
12.根据权利要求10-11中任一项所述的方法,其中步骤(a)在悬浮液中进行。
13.根据权利要求10-12中任一项所述的方法,还包括向步骤(d)的培养基中添加选自以下的化合物中的至少一种:bmp抑制剂和wnt激活剂。
14.根据权利要求10-13中任一项所述的方法,还包括在步骤(d)之前去除所述细胞外基质或其组分。
15.根据权利要求10-14中任一项所述的方法,其中每种生长因子的浓度在1ng/ml至25ng/ml的范围内。
16.根据权利要求15所述的方法,其中所述一种或更多种生长因子是igf,并且igf的浓度在1ng/ml至5ng/ml的范围内。
17.根据权利要求10-16中任一项所述的方法,其中所述肌源性祖细胞包括成肌细胞和肌细胞。
18.根据权利要求10-17中任一项所述的方法,还包括向步骤(a)的培养基中添加胰岛素、knock-out血清替代物、运铁蛋白-硒和bmp4中的一种或更多种。
19.根据权利要求10-18中任一项所述的方法,其中所述wnt激活剂选自:chir99021、rspo3和wnt3a。
20.根据权利要求10-19中任一项所述的方法,其中所述向培养基中添加至少一种wnt激活剂在获得所述球形聚集体之后12至36小时内进行。
21.根据权利要求10-20中任一项所述的方法,其中所述去除所述wnt激活剂在8至36小时的范围内进行。
22.根据权利要求10-21中任一项所述的方法,还包括在包含中胚层细胞和内胚层细胞的所述聚集体出现后,向所述培养基中添加至少一种nodal抑制剂。
23.根据权利要求10-22中任一项所述的方法,其中所述细胞外基质或其组分的量在1%至15%vol/vol的范围内。