1.一种功能化磁性纳米颗粒应用于卵转铁蛋白分离的方法,其特征在于:首先将50~250ml新鲜蛋清使用50~250ml蒸馏水进行稀释,并使用1.0%~5.0%的硫酸铵以及1.0%~3.0%的柠檬酸进行初步除杂并复溶后获得上清液,之后使用1.5~2.5ml浓度为1.0mg/ml~3.0mg/ml的伴刀豆球蛋白a对150mg~300mg磁性纳米颗粒进行修饰,修饰完毕后加入至预先处理好的上清液中进行吸附,吸附过程在ph 5.0~8.0、温度30~50℃条件下进行0.5~3h,吸附完成后,使用ph 4.0~6.0pbs缓冲液对纳米颗粒进行解吸,解吸时间为0.5~3h,解吸完成后,收集洗脱液,使用10~50kda超滤膜进行脱盐,冻干12~48h后,获得纯度为80%~90%的卵转铁蛋白。
2.如权利要求1所述的一种功能化磁性纳米颗粒应用于卵转铁蛋白分离的方法,其特征在于:所述的初步除杂是指使用50~250ml蒸馏水与50~250ml新鲜蛋清进行混合,在0~8℃,150~300rpm条件下磁力搅拌0.5~3.5h,搅拌结束后,将稀释上清液在4~8℃,2000~4000rpm条件下离心30~60min以除去不溶性杂质,离心结束后,收集上清液,在上清液中加入1.0%~5.0%的硫酸铵以及1.0%~3.0%的柠檬酸以初步沉淀卵转铁蛋白粗品,之后在4~8℃,2000~4000rpm条件下离心10~60min以获取粗品卵转铁蛋白,离心结束后,将粗品卵转铁蛋白复溶至ph 7.4~10.0的磷酸盐缓冲液中作为后续的吸附上清液。
3.如权利要求1所述的一种功能化磁性纳米颗粒应用于卵转铁蛋白分离的方法,其特征在于:修饰磁性纳米颗粒的步骤为:每100~400mg的磁性纳米颗粒与10~50ml ph 6.0的磷酸盐缓冲液充分混合后,在额定功率为500~700w的超声功率下超声20~40min形成胶体溶液,随后,将2~10ml浓度为2.0~4.0mg/ml的腈氨溶液加入到胶体溶液中,继续超声20~40min,然后向该溶液中加入0.5~2ml浓度为0.5~2.5mg/ml的伴刀豆球蛋白a溶液,继续超声20~40min,整个超声过程在冰浴上进行,超声结束后,用磁铁在烧杯底部吸附伴刀豆蛋白修饰后的磁性纳米颗粒,去掉反应溶液,用磷酸盐缓冲液对磁性纳米颗粒进行清洗后,将其悬浮在磷酸盐缓冲液中,保存备用。
4.如权利要求1所述的一种功能化磁性纳米颗粒应用于卵转铁蛋白分离的方法,其特征在于:所述的吸附和解吸过程是将上述制备的纳米颗粒加入至吸附上清液中,在温度30~50℃条件下进行0.5~3h的充分吸附,吸附过程在气浴摇床内进行,摇晃速率为100~200rpm,吸附结束后,用磁铁在烧杯底部吸附磁性纳米颗粒以除去反应上清液,之后将吸附完毕的磁性纳米颗粒加入至ph 4.0~6.0pbs缓冲液中对颗粒进行洗脱0.5~3h,收集洗脱液。
5.如权利要求1所述的一种功能化磁性纳米颗粒应用于卵转铁蛋白分离的方法,其特征在于:所述的脱盐和冻干步骤是指,使用10~50kda超滤离心管进行脱盐,将洗脱液加入超滤离心管中在4~8℃,5000~8000rpm条件下离心10~30min以除去残留的盐与杂质,随后将获得的溶液在–80℃条件下存储4~8h后,使用真空冷冻干燥机冻干24~72h,获得冻干的卵转铁蛋白样品。