一株具有缓解慢性酒精性肝损伤功效的鼠李糖乳酪杆菌及其应用的制作方法

本发明涉及微生物领域，尤其涉及一株具有缓解慢性酒精性肝损伤功效的鼠李糖乳酪杆菌及其应用。

背景技术：

1、酒精性肝损伤属化学性肝损伤之一，主要是由于长期大量饮酒而引发的一系列肝脏病变，最初表现为肝脏脂肪变性和酒精性脂肪肝，进而发展成酒精性肝炎、肝纤维化和肝硬化，甚至肝功能衰竭。在我国，酒精导致的肝脏损伤性疾病已经成为仅次于病毒性肝炎之后的第二大肝脏疾病，严重威胁到我国国民的健康。目前，酒精性肝损伤的防治措施包括戒酒、药物治疗、营养支持以及肝脏移植。其中药物治疗作用机制大多为解酒降脂、抗氧化以及清除自由基，但由于肝病患者肝功能减退，许多药物在肝中代谢又会进一步损伤肝脏。鉴于药物治疗存在的缺陷，针对酒精性肝损伤病症寻找一种健康有效的干预或治疗途径显得意义重大。

2、乳酸菌通常是指一类能发酵碳水化合物且代谢产物主要为乳酸的细菌，是在世界范围内被公认为安全的食品级益生菌。文献调研结果发现，针对酒精性肝损伤病症的菌种的研究较少，虽然王玉华等人发现鼠李糖乳酪杆菌b10发酵液具有一定的降低酒精引起的hif基因表达从而修复肠道上皮保护功能的作用，但是其研究没有提及鼠李糖乳酪杆菌b10活菌体在预防或治疗酒精性肝损伤中的作用。因此，通过筛选得到我国具有自主知识产权的菌种，并开发相关益生菌制品显得意义重大。

技术实现思路

1、为解决上述问题，本发明提供了一株具有缓解慢性酒精性肝损伤功效的鼠李糖乳酪杆菌，该鼠李糖乳酪杆菌具有显著的缓解酒精性肝损伤功效，可广泛用于开发缓解酒精性肝损伤相关益生功能产品。

2、为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

3、一株具有缓解慢性酒精性肝损伤功效的鼠李糖乳酪杆菌，所述鼠李糖乳酪杆菌命名为whh2557，已在2023年3月3日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址为广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，微生物保藏编号为gdmcc no：63222，微生物分类命名为鼠李糖乳酪杆菌lacticaseibacillus rhamnosus。

4、本发明所述的鼠李糖乳酪杆菌whh2557由发明人从中国新疆福海林牧区采集的酸奶中分离得到。该鼠李糖乳酪杆菌具备良好的黏附特性、耐酸耐胆盐特性、抗氧化能力和肠道屏障保护功能，能够显著降低血清中谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活性，并恢复肝脏甘油三脂水平；改善肝脏重量和肝脏系数，减少肝脏脂肪空泡和炎症细胞浸润，具有显著的缓解酒精性肝损伤功效。

5、一种含有上述鼠李糖乳酪杆菌的菌体培养物，所述菌体培养物为菌液或菌剂。

6、一种组合物，含有上述鼠李糖乳酪杆菌或上述菌体培养物，以及生理上可接受的赋形剂和/或稀释剂。

7、作为优选，所述组合物为具有预防和/或治疗酒精性肝损伤功能的食品、药品或保健品。

8、作为优选，所述药品或保健品为口服形式。

9、作为更优选，所述食品为发酵乳、乳酪、含乳饮料、乳粉或发酵果蔬，所述药品为胶囊、粉剂或片剂，所述保健品为胶囊、粉剂或片剂。

10、上述鼠李糖乳酪杆菌或上述菌体培养物或上述组合物用于制备降低酒精对小肠细胞损伤产品中的应用。

11、在酒精诱导的ht-29细胞模型实验中，鼠李糖乳酪杆菌whh2557可提高ht-29细胞的存活率，降低酒精对小肠细胞的致死作用。

12、上述鼠李糖乳酪杆菌或上述菌体培养物或上述组合物用于制备修复酒精性损伤肠道的屏障保护功能产品中的应用。

13、在酒精诱导的ipec-j2细胞模型实验中，鼠李糖乳酪杆菌whh2557能够降低ipec-j2细胞电阻值降低率，恢复酒精诱导的ipec-j2细胞的损伤。

14、上述鼠李糖乳酪杆菌或上述菌体培养物或上述组合物用于制备降低酒精性损伤肝的肝重和肝脏指数的产品中的应用。

15、在酒精性肝损伤小鼠模型实验中，口服剂量为2×108cfu/d的鼠李糖乳酪杆菌whh2557能够显著降低酒精性肝损伤小鼠的肝重和肝脏指数，维持小鼠的正常体重。

16、上述鼠李糖乳酪杆菌或上述菌体培养物或上述组合物用于制备降低血清中谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性的产品中的应用。

17、在酒精性肝损伤小鼠模型实验中，口服剂量为2×108cfu/d的鼠李糖乳酪杆菌whh2557能够显著降低酒精性肝损伤小鼠血清中谷丙转氨酶(ast)和谷草转氨酶(alt)的水平，具有缓解酒精性肝损伤的作用，且效果优于口服剂量为100mg/kg阳性药物水飞蓟素。

18、上述鼠李糖乳酪杆菌或上述菌体培养物或上述组合物用于制备降低肝脏甘油三酯水平产品中的应用。

19、在酒精性肝损伤小鼠模型实验中，口服剂量为2×108cfu/d的鼠李糖乳酪杆菌whh2557能够显著降低肝脏中甘油三酯(tg)水平，改善酒精引起的肝脏脂肪积累，从而防治酒精性脂肪肝的发展。

20、上述鼠李糖乳酪杆菌或上述菌体培养物或上述组合物用于制备减少酒精性损伤肝的肝脏脂肪空泡和炎症细胞浸润产品中的应用。

21、在酒精性肝损伤小鼠模型实验中，口服剂量为2×108cfu/d的鼠李糖乳酪杆菌whh2557能够有效减少肝脏脂肪空泡和炎症细胞浸润，进而有效缓解动物肝脏病理损伤。

22、与现有技术相比，本发明所提供的鼠李糖乳酪杆菌whh2557的耐酸耐胆盐能力、黏附特性明显优于商业菌lgg和常规菌株，该鼠李糖乳酪杆菌可通过口服进入肠道，并且与其他菌群的竞争能力强，可在肠道表面长时间定植，改善菌群；鼠李糖乳酪杆菌whh2557的抗氧化能力明显强于商业菌lgg，可有效缓解酒精损伤小肠细胞能力和修复肠上皮细胞屏障能力；并且鼠李糖乳酪杆菌whh2557还可降低由酒精损伤肝脏的重量、肝脏指数和tg含量，减轻肝脏组织细胞的脂肪变性，减少炎症细胞浸润，从而降低血清中ast和alt水平，达到了缓解酒精性肝损伤，预防酒精性脂肪肝的效果；本发明的有益效果具体说明如下：

23、(1)本发明所提供的鼠李糖乳酪杆菌whh2557具备良好的耐酸耐胆盐特性。在ph2.5环境下，孵育4h存活率为96.84％，在0.3％胆盐浓度下，孵育8h存活率为67.54％；

24、(2)本发明所提供的鼠李糖乳酪杆菌whh2557具备良好的黏附特性，在ht-29细胞模型试验中，单细胞黏附菌数为8.97～10.27，是对照商业菌株lgg的2.68倍以上；

25、(3)本发明所提供的鼠李糖乳酪杆菌whh2557具有较强的抗氧化能力，其清除dpph为54.61±1.12％，清除羟自由基的能力为46.38±3.54％，分别是对照商业菌株lgg的2.21倍和1.58倍；

26、(4)本发明所提供的鼠李糖乳酪杆菌whh2557具备较强的减少酒精损伤小肠细胞的能力，在酒精损伤ht-29细胞模型试验中，2×108cfu/ml菌株使细胞存活率升高至54.36±1.89％，是对照商业菌株lgg的1.26倍以上；

27、(5)本发明所提供的鼠李糖乳酪杆菌whh2557具备较强的保护肠上皮细胞屏障能力，在酒精损伤ipec-j2细胞模型试验中，1×108cfu/ml菌株孵育细胞6h，受损单层细胞电阻值的降低率为52.24±1.10％，显著优于对照商业菌株lgg；

28、(6)本发明所提供的鼠李糖乳酪杆菌whh2557经小鼠体内实验表明可有效缓解肝脏损伤性病变，使小鼠肝脏重量降低17.39％，肝脏指数降低19.93％；血清中ast水平降低33.23％，alt水平降低31.03％；肝脏中tg含量降低30.19％；减轻肝脏组织细胞的脂肪变性，减少炎症细胞浸润，从而缓解酒精性肝损伤，预防酒精性脂肪肝；

29、(7)本发明所提供的鼠李糖乳酪杆菌whh2557所属的鼠李糖乳酪杆菌是被囊括于卫生部2022年更新的《可用于食品的菌种名单》。