松香烷型二萜类化合物及其制备方法、药物组合物和应用与流程

本发明涉及医药，尤其是涉及松香烷型二萜类化合物及其制备方法、药物组合物和应用。

背景技术：

1、在全球范围内，由于人口老龄化的加剧，预计2040年相比2020年，癌症负担将增加50%，届时全新新发癌症病例数将达到近3000万。这在正经历社会和经济转型的国家中最为显著。其中肺癌、结直肠癌、胃癌、肝癌、乳腺癌发病率逐年上升，死亡率也居高不下，严重影响人民的健康和生命安全。

2、目前临床上常用的化疗药物疗效明显但容易出现药物耐受和肝肾、血液系统损伤等一系列副作用，不利于患者长期应用。中医药作为我国优秀的传统文化宝库，其治疗癌症历史悠久，且中药品种众多，活性成分丰富多样，因此从中药中寻找高效低毒的抗癌天然化合物是行之有效的途径。

3、月腺大戟为《中国药典》收载中药狼毒的来源之一，味辛，性平，归肝、脾经，具有逐水祛痰，破积杀虫的功效，临床常用于治疗乳腺癌、肝癌等恶性肿瘤。且现代研究表明，月腺大戟中的二萜类化合物类型丰富，具有良好的抗肿瘤作用。因此，从月腺大戟中寻找新型抗肿瘤活性的二萜类化合物具有重要的现实价值。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供松香烷型二萜类化合物、其制备方法、药物组合物和在制备抗肿瘤药物中的应用，所述松香烷型二萜类化合物从月腺大戟中提取分离而得，获得了两个具有相同的二萜母核的松香烷型二萜类化合物(+)-ebracdine a和(-)-ebracdine a。

2、为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

3、本发明一方面提供了一种松香烷型二萜类化合物，其是具有如下式i或式ⅱ所示的结构：

4、

5、ⅰ

6、

7、ⅱ 。

8、本发明另一方面提供了上述松香烷型二萜类化合物的制备方法，所述松香烷型二萜类化合物是从月腺大戟中提取分离获得。

9、所述松香烷型二萜类化合物的制备方法，包括以下步骤：

10、s1、取干燥的月腺大戟，加入溶剂回流提取，合并提取液后浓缩，得浸膏；

11、s2、将浸膏加入到其8-12倍质量的水中混悬后，依次用石油醚和二氯甲烷萃取，舍弃石油醚萃取物，将二氯甲烷萃取物经硅胶柱色谱，使用石油醚-乙酸乙酯洗脱，收集馏分后利用硅胶薄层层析检识，254nm和365 nm下观察rf值相同的荧光斑点和10%硫酸香草醛显色为灰色的斑点结果合并相似馏分依次得到11个馏分，分别命名为a、b、c、d、e、f、g、h、i、j和k；

12、s3、利用hplc-uv追踪目标化合物紫外吸收情况（λmax= 210, 280 nm），选择馏分f经ods柱色谱，使用甲醇-水梯度洗脱，收集到50-60个馏分后，利用硅胶薄层层析检识，合并为8个馏分f1~f8，利用hplc-uv追踪目标化合物紫外吸收情况（λmax= 210,280 nm），选择馏分f6经硅胶柱色谱，使用环己烷-乙酸乙酯梯度洗脱，收集到50-60个馏分后，利用硅胶薄层色谱检识，合并为7个馏分l1~l7，利用hplc-uv追踪目标化合物紫外吸收情况（λmax= 210,280 nm），选择馏分l3经硅胶柱色谱，使用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，收集到40-50个馏分后，利用硅胶薄层色谱检识，合并为10个馏分m1~m10；

13、s4、以乙腈-水为流动相，采用hplc法，利用c18色谱柱可在馏分m2中制备得到式ⅰ和式ⅱ所示的松香烷型二萜类化合物外消旋体；再以正己烷-异丙醇为流动相，采用hplc法，利用手性色谱柱可在上述外消旋体中制备得到结构式如式ⅰ和式ⅱ所示的松香烷型二萜类化合物。

14、具体地，在所述步骤s1中，所述溶剂为92-98v%的乙醇水溶液，且其加入质量为月腺大戟的5-10倍，回流提取的次数为2-3次，每次提取1-3h。

15、具体地，在所述步骤s2中，将二氯甲烷萃取物经硅胶柱色谱时，使用体积比为（100：0）-（0：100）的石油醚-乙酸乙酯进行洗脱。更具体地，石油醚-乙酸乙酯的体积比为100︰0、90︰10、80︰20、70︰30、60︰40、50︰50、40︰60、30︰70、20︰80、10︰90和0︰100。

16、具体地，在所述步骤s3中，将馏分f经ods柱色谱时，根据化合物的极性，结合其分离度等因素，使用体积比为（30：70）-（100:0）的甲醇-水进行梯度洗脱。更具体地，所述甲醇-水的体积比为30︰70、40︰60、50︰50、60︰40、70︰30、80︰20、90︰10、100︰0。

17、具体地，在所述步骤s3中，将馏分f6经硅胶柱色谱时，使用体积比为5:1、4:1、3:1和1:1的环己烷-乙酸乙酯进行梯度洗脱。

18、具体地，在所述步骤s3中，将馏分l3经硅胶柱色谱时，使用体积比为（100：0）-（0：100）的二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱。更具体地，二氯甲烷-甲醇的体积比为100︰0、90︰10、80︰20、70︰30、60︰40、50︰50、40︰60、30︰70、20︰80、10︰90、0︰100。

19、具体地，在所述步骤s4中，在hplc法分离馏分m2时所用的流动相中，根据化合物的极性，结合其分离度等因素，乙腈和水的体积比可为（68：32）-（72：28），优选乙腈和水的体积比为70:30，结构式如式i和ⅱ所示的松香烷型二萜类化合物外消旋体的保留时间为25-27 min。

20、在所述步骤s4中，利用手性色谱柱，根据化合物的极性，正己烷-异丙醇的体积比可为（92:8）-（87:13）为流动相将外消旋体拆分得到化合物1和2的保留时间分别为22-25min和 26-30 min。优选地，正己烷-异丙醇的体积比为90:10。

21、本发明又一方面提供了含有上述松香烷型二萜类化合物的药物组合物。

22、具体地，在上述技术方案中，所述药物组合物的剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、糖浆剂、膏剂、冲剂、滴丸或微丸中的任一种。

23、所述药物组合物还包括药学上可接受的载体或赋形剂。也就是说，含有作为活性成分的本发明的松香烷型二萜类化合物和常规药物赋形剂或辅剂或载体的药物组合物亦包含在本发明内。

24、本发明再一方面提供了上述松香烷型二萜类化合物或上述药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。

25、本发明与现有技术相比，具有以下优点：

26、（1）本发明提供了一种目前尚未见报道的松香烷型二萜类化合物，并进一步提供了一种操作简单可行、重现性好、提取纯度高的从月腺大戟中提取获得所述松香烷型二萜类化合物的方法；

27、（2）试验结果表明，本发明所提供的松香烷型二萜类化合物对乳腺癌细胞t47d和mcf-7、肝癌细胞hepg2和非小细胞肺癌细胞a549均具有明显的杀伤作用，尤其是对肝癌细胞hepg2和乳腺癌细胞mcf-7具有显著抑制活性，且化合物(+)-ebracdine a活性显著优于(-)-ebracdine a和阳性药顺铂（cisplatin），可用于开发抗肿瘤类药物，尤其针对临床化疗阶段药物。