检测肝癌的标志基因组合物、试剂盒和用途的制作方法

本发明涉及生物，尤其涉及一种评估肝癌风险和/或检测肝癌的生物标志基因组合、试剂盒和用途。

背景技术：

1、2018年，人类癌症导致了全世界大量死亡，其中大多数被诊断为晚期。到目前为止，在远端转移之前进行干预提供了改善预后的最大机会，因此开发在症状出现之前检测癌症的敏感、可靠和微创的试验是非常合乎需要的。在众多癌种中，肝癌(hepatocellularcarcinoma，hcc)作为一种严重危害人类健康的重大疾病，不仅发病率高，而且隐匿、进展快、复发率和死亡率高，被称为“癌中之王”。到医院就诊的肝癌患者大多为中或晚期，若不治疗自然病程仅3-6个月。目前，中国ivd市场暂无已获批的肝癌辅助诊断试剂盒，肝癌主要的诊断方式为腹部mri和ct等影像学检查。与市场上的其他诊断方法相比，这种方法检测结果相对精确，是临床肝癌诊断的金标准。但其缺点也比较明显，其主要缺点为：

2、(1)影像学所需设备价格高，难以在基层医院应用；

3、(2)检测费用相对较高，需求经验丰富的临床医生进行操作及诊断；

4、(3)ct对于小于1cm或者密度近似正常肝实质的肝癌难以显示；

5、(4)ct具有放射性；

6、(5)mri：体内有金属异物时无法检测。

7、另外，针对肝癌早期检测，目前国内外指南仅推荐肝癌发病风险升高的人群每6个月进行b超检查(也可以用ct或mri代替)，可同时选择甲胎蛋白(a-fetoprotein,afp)检测。但b超在肝癌早期缺乏良好的敏感性，容易发生漏诊，且容易受到操作者、仪器等多种因素的影响。血清afp特异性和敏感性均不高，慢性或活动性肝炎、肝硬化、睾丸或卵巢胚胎源性肿瘤均会导致afp升高，而约30％的肝癌患者afp水平正常。来自中国的研究显示，在hbv感染或者慢性肝硬化的人群中，单独使用b超、单独使用afp或者两者联合进行肝癌筛查的检出率分别为84％、69％和92％，阳性预测值(positivepredictivevalue，ppv)分别为6.6％、3.9％和3.0％。现有推荐的筛查方式难以满足肝癌早期检测的需求，临床上亟需开发精准有效的针对肝癌早检的辅助诊断方式。

8、液体活检技术作为一种非侵入性的新型检测技术，在肿瘤早期筛查与诊断方面具有巨大的应用潜力。液体活检通过血液、唾液、尿液等体液样本对肿瘤信号进行检测分析，与传统组织活检相比，具有无创、实时动态监测、克服肿瘤异质性等优势。液体活检的肿瘤标志物主要包括基因组、表观遗传组、转录组、微生物组、蛋白组和代谢组等层面。肿瘤标志物在ctdna层面的特征主要包括点突变、片段化、拷贝数变异、甲基化等维度。其中dna甲基化异常是驱动癌症发生发展的重要表观遗传修饰之一，它往往在癌症病程的早期发生。肿瘤中普遍存在dna甲基化状态的改变。多项研究表明dna甲基化液体活检已成为肿瘤辅助诊断及筛查最具潜力的方法学之一。

9、因此本发明旨在提供效果良好的用于肝癌辅助诊断的体外诊断标志物和试剂盒，以用于临床上对疑似肝癌患者的辅助诊断。

技术实现思路

1、本发明提供了一种评估肝癌风险和/或检测肝癌的生物标志基因组合、试剂盒和用途，通过对来自个体的核酸样本中生物标志基因组合的甲基化水平进行检测，并将标志基因的甲基化水平与内参基因进行比较，根据比较结果判断个体是否具有肝癌风险或患有肝癌，为肝癌形成风险的相关性评估提供了一种低成本、高精确度的方法。

2、在一方面，本发明提供了一种用于评估肝癌风险和/或检测肝癌的生物标志基因组合，其中，该生物标志基因组合包含选自ak055957、bend4、dab2ip、emx1、otx1、ptpn18、rnf135和tspyl5中的任意至少4个基因。

3、另一方面，本发明提供了一种用于检测肝癌的试剂盒，其中，该试剂盒包含用于检测上述生物标志物基因组合的甲基化水平的检测试剂。

4、另一方面，本发明提供了一种检测上述生物标志基因组合的甲基化水平的试剂在制备试剂盒中的用途，该试剂盒用于评估个体患有肝癌的风险和/或检测肝癌。

技术特征：

1.一种用于评估肝癌风险和/或检测肝癌的生物标志基因组合，其中，所述生物标志基因组合包含选自ak055957、bend4、dab2ip、emx1、otx1、ptpn18、rnf135和tspyl5中的任意至少4个基因；

2.一种用于检测肝癌的试剂盒，其中，所述试剂盒包含用于检测权利要求1中所述生物标志物基因组合的甲基化水平的检测试剂。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其中，所述试剂盒包含内参基因的甲基化水平的检测试剂；

4.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其中，所述检测试剂包含用于检测所述生物标志基因组合中各个基因和/或所述内参基因甲基化水平的正向引物、反向引物和/或探针；

5.检测如权利要求1所述的生物标志基因组合的甲基化水平的试剂在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于评估个体患有肝癌的风险和/或检测肝癌。

6.根据权利要求5所述的用途，其中，评估个体患有肝癌的风险和/或检测肝癌包括：

7.根据权利要求6所述的用途，其中，所述(2)进一步包括：

8.根据权利要求7所述的用途，所述(1)包括对经过重亚硫酸氢盐处理的所述核酸样本进行预扩增处理。

9.根据权利要求7或8所述的用途，所述(1)包括：

10.根据权利要求6-9任一项所述的用途，其中，所述核酸样本是包含游离dna(cfdna)的样本。

技术总结
本发明提供了一种用于评估肝癌风险和/或检测肝癌的生物标志基因组合、试剂盒和用途，其中，该生物标志基因组合包含选自AK055957、BEND4、DAB2IP、EMX1、OTX1、PTPN18、RNF135和TSPYL5中的任意至少4个基因，为肝癌形成风险的相关性评估提供了一种低成本、高精确度的方法。

技术研发人员：游乾承,许佳悦,周雅,李冰思,汉雨生,张之宏
受保护的技术使用者：广州燃石医学检验所有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15