一种植物多基因编辑系统及其组装方法

文档序号:36775509发布日期:2024-01-23 11:45阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种多基因编辑系统,其特征在于,包括模板载体、供体载体组和接受载体;

2.根据权利要求1所述的多基因编辑系统,其特征在于,所述snrna启动子为pmosu6a、pmosu6b、pmosu6c、pmosu3、posu6a、posu6b、posu6c和posu3中的任一种。

3.根据权利要求1或2所述的多基因编辑系统,其特征在于,所述模板载体含有3个以上所述sgrna支架-snrna启动子,所述模板载体中相邻的所述sgrna支架-snrna启动子之间的转录方向相反;不相邻的所述sgrna支架-snrna启动子之间的转录方向相同或相反,相同转录方向的所述sgrna支架-snrna启动子之间至少间隔1000bp。

4.根据权利要求3所述的多基因编辑系统,其特征在于,所述的模板载体包括pgn3701a和pgn3702a;所述pgn3701a具有4个串联的所述sgrna支架-snrna启动子,所述sgrna支架的核苷酸序列为seq id no.1中408-511位碱基,所述snrna启动子为pmosu6a、pmosu6b、pmosu6c和pmosu3;所述pgn3702a具有4个串联的sgrna支架-snrna启动子,所述sgrna支架的核苷酸序列为seq id no.2中第425-528位碱基,所述snrna启动子为posu6a、posu6b、posu6c和posu3。

5.根据权利要求2所述的多基因编辑系统,其特征在于,所述pmosu6a的核苷酸序列如seq id no.1中第516-738位碱基所示;所述pmosu6b的核苷酸序列如seq id no.1中第2437-2625位碱基所示;所述pmosu6c的核苷酸序列如seq id no.1中第5538-5731位碱基所示;所述pmosu3的核苷酸序列如seq id no.1中第8174-8347位碱基所示。

6.根据权利要求2或5所述的多基因编辑系统,其特征在于,所述posu6a的核苷酸序列如seq id no.2中第4273-4715位碱基所示;所述posu6b的核苷酸序列如seq id no.2中第1321-1649位碱基所示;所述posu6c的核苷酸序列如seq id no.2中第558-1295位碱基所示;所述posu3的核苷酸序列如seq id no.2中第3863-4244位碱基所示。

7.根据权利要求1-6任意一项所述的多基因编辑系统,其特征在于,所述attl1是一条链的核苷酸序列为seq id no.3中第2024-2123位核苷酸或是seq id no.10的双链dna片段;所述attl2是一条链的核苷酸序列为序列是seq id no.9的双链dna片段;所述attl3是一条链的核苷酸序列为序列是seq id no.8的双链dna片段;所述attl4是一条链的核苷酸序列为序列是seq id no.5的双链dna片段;所述attl5是一条链的核苷酸序列为序列是seqid no.4的双链dna片段;所述attr1是一条链的核苷酸序列为序列是seq id no.11的双链dna片段;所述attr2是一条链的核苷酸序列为序列是seq id no.12的双链dna片段;所述attr3是一条链的核苷酸序列为序列是seq id no.7的双链dna片段;所述attr4是一条链的核苷酸序列为序列是seq id no.6的双链dna片段;所述attr5是一条链的核苷酸序列为序列是seq id no.3中第4275-4398位核苷酸的双链dna片段。

8.根据权利要求1或7所述的多基因编辑系统,其特征在于,所述cas融合蛋白为dsteme-ng、pco-dcas9-3x(srdx)或pco-dcas9-vp64;所述dsteme-ng含有所述cas9蛋白和碱基编辑酶,所述碱基编辑酶为胞苷脱氨酶和/或腺苷脱氨酶;所述pco-dcas9-vp64含有dcas9和具有转录激活作用的蛋白质;所述pco-dcas9-3x(srdx)含有dcas9和具有转录抑制作用的蛋白质。

9.权利要求1~8任一项所述的多基因编辑系统的如下应用:

10.多基因编辑载体系统的组装方法,其特征在于,包括如下步骤:


技术总结
本发明公开了一个植物多基因编辑系统及其组装方法,属于生物技术领域。该系统包括8个供体载体,2个模板载体和4个接受载体。该系统利用Golden Gate的方法,构建具有不同数目的sgRNA表达盒且含有不同Gateway重组臂的入门载体;最后通过重组反应,将不同的入门载体组装到接受载体上,实现多基因编辑表达载体的构建。本发明可将多个sgRNA表达盒组装到单一表达载体,可实现多靶点操作基因组的目标,包括敲除、碱基编辑、转录抑制或激活。因此本植物编辑系统适用于多基因敲除、多基因高强度调控和双饱和单碱基编辑,可应用于如多倍体植物改良、多成员基因家族编辑、复杂代谢通路研究等,具有重要应用价值。

技术研发人员:崔学安,吴苏亭,秦冠男,张治国,王志伟,陈国鑫,吴金霞,孙学辉,路铁刚
受保护的技术使用者:中国农业科学院生物技术研究所
技术研发日:
技术公布日:2024/1/22
当前第2页1 2 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1