本发明涉及蛋白肽提取纯化，尤其涉及一种低嘌呤含量的金枪鱼鹅肌肽的制备方法。
背景技术：
1、嘌呤是存在人体内的一种物质，主要是以嘌呤核苷酸的形式存在，在能量供应、代谢调节等方面有着重要的作用，尿酸是人体尿液里的一种物质，是嘌呤代谢的终产物，常见的尿酸代谢异常情况是尿酸偏高，尿酸过高就会引起痛风。关于降低尿酸的方法，普遍有两种，一是控制饮食，禁食高嘌呤食物及饮酒，但是见效慢，只适用于轻微症状。二是药物治疗，虽然通过药物治疗见效快，起到舒缓作用，但是长期服用药物不可避免的对身体造成副作用。有学者发现：鹅肌肽具有稳定的水溶性和显著的抗氧化、抗衰老、降尿酸等功能，目前已将其用作天然的抗氧化剂和降尿酸食疗产品。
2、金枪鱼是一种大洋性高度洄游鱼类，鱼体肌肉发达，在金枪鱼鱼肉组织中存在丰富的鹅肌肽活性成分。近年来，对金枪鱼鹅肌肽的研究吸引了许多学者的注意。
3、中国发明专利cn112592316b提出了一种应用膜过滤降低金枪鱼鹅肌肽原料中嘌呤含量的方法，该发明通过对金枪鱼鱼浆先经过两次沸水过滤，将两次过滤后的滤液混合均匀后，再通过陶瓷膜和有机膜进行两次超滤膜过滤，最后将所得滤液经过浓缩干燥，从而得到含低嘌呤的金枪鱼鹅肌肽最终产物。这种方法虽然降低了金枪鱼中嘌呤的含量，但是最终产物的鹅肌肽含量不高，在应用于改善痛风的效果不佳。
4、中国发明专利cn111004181a提出了一种金枪鱼鹅肌肽的制备方法，该方法通过对金枪鱼鱼肉进行处理，过滤后，在滤液中加入氯化胆碱类低共熔溶剂进一步提取鹅肌肽，最后在加入稳定剂；该发明提高了金枪鱼的利用率，并通过稳定剂，提高了金枪鱼鹅肌肽的稳定性，更有利于后续加工，但是该方法并未对鱼肉中嘌呤进行分离去除，导致产品中嘌呤含量过高。
技术实现思路
1、有鉴于此，本发明的目的在于提出一种低嘌呤含量的金枪鱼鹅肌肽的制备方法，以解决金枪鱼鹅肌肽中嘌呤含量过高的问题。
2、基于上述目的，本发明提供了一种低嘌呤含量的金枪鱼鹅肌肽的制备方法，具体制备步骤如下：
3、(1)将金枪鱼鱼肉进行破碎并加入去离子水进行研磨，随后进行超声震荡，得到金枪鱼鱼浆；
4、(2)将鱼浆与去离子水混合，在55-65℃的条件下加热2-3h，趁热进行过滤，得到沉淀物1和上清液1；
5、(3)将沉淀物1进行喷雾干燥，得到干粉，再将干粉与氯化胆碱类低共熔溶剂混合，在90-110℃，700-900rpm下搅拌1-3h，冷却至室温后，进行过滤，得到沉淀物2和上清液2；
6、(4)将上清液1和上清液2混合均匀得到混合液，再将低共熔溶剂和磷酸氢二钾溶液加入到混合液中，在200rmp下，震荡0.5-1h。待振荡停止后，将所得液体放入离心机中，在3000rmp下，离心5-10min，待两相完全分离后，取上液相；
7、(5)将上液相先用1-3kda的超滤膜进行过滤，再将所得滤液用160-180da有机膜进行第二次超滤膜过滤，得到初产物；
8、(6)将初产物与去离子水混合，在2-6℃下放置16-26h，然后10000-13000rpm转速离心1-3h，得到沉淀物3，将沉淀物3与稳定剂溶液按重量比1:3混合，均质、干燥成粉，得金枪鱼鹅肌肽产物。
9、优选的，所述步骤(1)中金枪鱼鱼肉与去离子水的质量比为1:1。
10、优选的，所述步骤(1)中超声振荡功率为100w,时间为1-2h。
11、优选的，所述步骤(2)中过滤所用的筛网目数为210目，金枪鱼鱼浆与去离子水的质量比为1:8
12、优选的，所述步骤(2)中氯化胆碱类低共熔溶剂由氢键受体和氢键供体按照摩尔比1:3-5组成，氢键受体为氯化胆碱，氢键供体为乙二醇，甘油，醋酸和乳酸的一种或者几种组成。
13、优选的，所述氯化胆碱类低共熔溶剂的制备方法为加热法，制备步骤为将氯化胆碱和氢键供体混合后，在60-70℃下，以300-600rpm，搅拌2h后形成均匀的透明液体，室温冷却后，仍为均匀的透明液体，则说明氯化胆碱类低共熔溶剂制备成功。
14、优选的，所述步骤(3)中干粉与氯化胆碱类低共熔溶剂的质量比为1:10-16。
15、优选的，所述步骤(4)中低共熔溶剂，混合液和磷酸氢二钾溶液的质量比为8-12:0.05-0.15:20-30，磷酸氢二钾溶液浓度为1.25g/ml。
16、优选的，所述步骤(6)中初产物与去离子水的质量比为1:10。
17、优选的，所述步骤(6)中稳定剂溶液由果胶，低聚果糖和山梨糖醇混合，溶于60-70℃的去离子水中，搅拌至完全溶解，冷却至室温得到，稳定剂溶液与初产物的质量比为1:3。
18、优选的，所述稳定剂溶液的组成为按质量百分数计的1％的果胶、1％低聚果糖和1％山梨糖醇，其余为去离子水。
19、本发明的有益效果：
20、(1)本发明通过对金枪鱼鱼肉进行研磨震荡再升温提取，有利于金枪鱼体内的蛋白质的提取。
21、(2)本发明通过先加入氯化胆碱类低共熔溶剂对金枪鱼鱼肉中的蛋白质进一步提取，再对提取液中的鹅肌肽进行萃取富集，不仅使得鹅肌肽得到富集，而且实现了与嘌呤的分离，达到了去除了嘌呤的目的。
22、(3)本发明使用160-180da的有机膜进行过滤，进一步除去了嘌呤，同时提高了鹅肌肽的占比。
23、(4)本发明将稳定剂加入到鹅肌肽初产物中，一方面提高其稳定性，使其不易变质，另一方面也使得其口感更好。
1.一种低嘌呤含量的金枪鱼鹅肌肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种低嘌呤含量的金枪鱼鹅肌肽的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中金枪鱼鱼肉与去离子水的质量比为1:1。
3.根据权利要求1所述的一种低嘌呤含量的金枪鱼鹅肌肽的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中过滤所用的筛网目数为210目，金枪鱼鱼浆与水的质量比为1:8。
4.根据权利要求1所述的一种低嘌呤含量的金枪鱼鹅肌肽的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中氯化胆碱类低共熔溶剂由氢键受体和氢键供体按照摩尔比1:3-5组成，氢键受体为氯化胆碱，氢键供体为乙二醇，甘油，醋酸和乳酸的一种或者几种组成。
5.根据权利要求4所述的一种低嘌呤含量的金枪鱼鹅肌肽的制备方法，其特征在于，所述氯化胆碱类低共熔溶剂的制备方法为加热法，制备步骤为将氯化胆碱和氢键供体混合后，在60-70℃下，以300-600rpm，搅拌2h后形成均匀的透明液体，室温冷却后，仍为均匀的透明液体，则说明氯化胆碱类低共熔溶剂制备成功。
6.根据权利要求1所述的一种低嘌呤含量的金枪鱼鹅肌肽的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中干粉与氯化胆碱类低共熔溶剂的质量比为1:10-16。
7.根据权利要求1所述的一种低嘌呤含量的金枪鱼鹅肌肽的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中低共熔溶剂，混合液和磷酸氢二钾溶液的质量比为8-12:0.05-0.15:20-30，磷酸氢二钾溶液浓度为1.25g/ml。
8.根据权利要求1所述的一种低嘌呤含量的金枪鱼鹅肌肽的制备方法，其特征在于，所述步骤(6)中初产物与去离子水的质量比为1:10。
9.根据权利要求1所述的一种低嘌呤含量的金枪鱼鹅肌肽的制备方法，其特征在于，所述步骤(6)中。稳定剂由果胶，低聚果糖和山梨糖醇混合，溶于60-70℃的去离子水中，搅拌至完全溶解，冷却至室温得到，稳定剂溶液与初产物的质量比为1:3。
10.根据权利要求9所述的一种低嘌呤含量的金枪鱼鹅肌肽的制备方法，其特征在于，所述稳定剂溶液的组成为按质量百分数计的1％的果胶、1％低聚果糖和1％山梨糖醇，其余为去离子水。