一种纳豆芽孢杆菌的发酵方法及其应用与流程

本发明涉及微生物培养领域，特别是涉及纳豆芽孢杆菌的发酵方法。

背景技术：

1、纳豆芽孢杆菌(bacillus subtilis subsp.natto)，属于枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)纳豆亚种，可从纳豆制品或自然界稻谷中分离得到，是一类革兰氏阳性、好氧的芽孢杆菌。纳豆芽孢杆菌能在5～55℃生长，最适生长温度为37℃，最适ph为7.0。纳豆芽孢杆菌能够产生纳豆激酶、维生素k2、异黄酮和抗菌脂肽等活性成分，被广泛应用于动物饲料生产、食品保鲜、化妆品生产和水质净化等方面。但是目前通过普通发酵工艺获得的纳豆芽孢杆菌发酵产物作为化妆品原料其保湿能力仍有待提高。

2、冬虫夏草(cordyceps sinensis(berk)sacc.)，是一种虫生真菌，属麦角菌目(clavicipitales)、麦角菌科(clavicipitaceae)、虫草属(cordyceps)，又名虫草、夏草冬虫。天然冬虫夏草主要产自青藏高原，具有多种药理功能和抗癌活性物质，长期以来一直被视为珍贵的中药和藏药。由于生长条件受到严格限制，天然冬虫夏草价格昂贵且产量有限，远远不能满足市场需求。通过发酵工艺制备的人工虫草具有与野生虫草相似的化学成分和药理作用，弥补了野生虫草产量的严重短缺。随着生物发酵技术的飞速发展，人工虫草已经可以规模化生产，大大降低了虫草的食用成本。

技术实现思路

技术特征：

1.一种纳豆芽孢杆菌的发酵方法，其特征在于，所述方法包含以下步骤：

2.如权利要求1所述的发酵方法，其特征在于，在步骤(1)中，固体培养基的配比为：胰蛋白胨1～2％、酵母浸出粉0.1～1％、氯化钠0.5～2％、琼脂0.5～2％、余量为纯水，调节ph为6～8。

3.如权利要求1所述的发酵方法，其特征在于，在步骤(2)中，涂布梯度为原液的4-12倍，获得成熟单菌落。

4.如权利要求1所述的发酵方法，其特征在于，在步骤(3)中，种子培养基：蔗糖1～4％、酵母浸出粉0.1～2％、余量为纯水，调节ph为6～8。

5.如权利要求1所述的发酵方法，其特征在于，在步骤(4)中，还包括放罐条件：ph为6～8，od值为10-30，甘油残余量<10mg/ml。

6.如权利要求1所述的发酵方法，其特征在于，在步骤(5)中，发酵产物制备包含级联发酵上清制备和/或级联发酵溶胞制备。

7.如权利要求6所述的发酵方法，其特征在于，所述的级联发酵上清制备包括将上述步骤(4)的发酵液离心、加热、过滤除菌，即得。

8.如权利要求6所述的发酵方法，其特征在于，所述的级联发酵溶胞制备包括将上述步骤(4)的发酵液重悬、破胞、离心、加入甘露醇、冻干，即得；所述加入甘露醇的量为破胞液质量体积比的1～6％。

9.一种纳豆芽孢杆菌的发酵产物，其特征在于，所述发酵产物由权利要求1～8之一的方法制备得到。

10.如权利要求9所述发酵产物在用于制备食品、药品、保健品的应用。

技术总结
本发明涉及一种纳豆芽孢杆菌的发酵方包含以下步骤：(1)固体培养基的配制；(2)单菌落培养；(3)种子制备；(4)放大发酵：将上述步骤(3)成熟种子液接入罐体，移种量为2％‑4％，发酵罐体系配比为：甘油1～4％、酵母浸出粉1～3％，余量为冬虫夏草发酵上清，调节pH为6～8；(5)发酵产物制备。利用本发明纳豆芽孢杆菌的发酵方法制备得到的级联发酵上清和/或级联发酵溶胞不仅可以降低冬虫夏草发酵液中的内毒素含量，还可以提高HaCaT细胞的IC50和降低透明质酸酶IC50，意味着具备更优的保湿效果，进一步的能够促进角质形成细胞愈合，可用于制备相应的食品、药品、保健品。

技术研发人员：刘宇,郑子瑞,张薇,张光旭,杨玉婷
受保护的技术使用者：杭州微致生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/19