一株有抗糖化抗衰功能的副干酪乳酪杆菌CCFM1355及其后生元

本发明涉及一株有抗糖化抗衰功能的副干酪乳酪杆菌ccfm1355及其后生元，属于微生物技术及医药。

背景技术：

1、非酶糖基化在人体内发生的较为广泛，其机理是还原糖上的羰基与蛋白质、脂质或核酸等大分子上的游离氨基发生非酶性缩合反应，即糖类对蛋白质的非酶修饰。晚期糖基化终末产物(age)是糖化反应所生成的稳定共价加成物，它们在体内与对应受体或蛋白质发生反应，随着年龄的增长，人体内的age也会缓慢蓄积，参与多种疾病的病理变化，如糖尿病、炎症、神经退行性疾病和心血管疾病等。

2、皮肤是人体最大的器官，也是生物体与环境之间的边界。因此，皮肤不仅受到内部老化过程的影响，而且还受到各种外部压力的影响导致明显的皮肤结构变化，不仅影响其年轻的外观，而且影响其各种生理功能。近年来，age在皮肤老化中的作用受到越来越多的讨论。cn116650579a公开了油茶花提取物在祛斑美白和抗糖化方面的应用，确定了油茶花提取物抑制酪氨酸酶的活性，抑制黑色素的合成，具备抗糖化功效，确定了油茶花提取物在防治与黑色素、age相关疾病上的作用，如雀斑、黄斑、肤色暗沉等，拓展了其在药品和日化用品中的应用。

3、为了开发更高效全面地抗糖化产品，可以根据糖化损伤的发生发展提出4条路径的抗糖策略，并基于这些路径筛选潜在有效的生物原料：(1)减少age的生成；(2)阻碍age-rage(age受体)结合；(3)破坏age与蛋白质的交联；(4)抑制age-rage结合后信号激活。目前研究最多的是竞争糖化反应中间产物或者限制中间体反应生成age的条件、从而减少age的产生与积累。例如，专利cn110506106a披露了副干酪乳杆菌kf00816可以降低糖基化终末产物含量，但是其对age含量降低的效果仍有限，并且，仅仅限制age的产生是不够的，因为其受体rage-age特异性结合会迅速引发下游多途径的其他损伤，因此减少二者的结合也是待解决的重点目标之一。因此，寻找一株能够更高效的降解age，并能通过抑制上述糖化损伤路径，进一步抑制age诱导的糖化损伤的发生的益生菌株，具有十分重要的科学意义和实用价值。

技术实现思路

1、为了解决上述技术问题，本发明提供了一种副干酪乳酪杆菌(lacticaseibacillus paracasei)ccfm1355后生元在制备抗糖化、延缓衰老的产品中的应用。

2、本发明提供了一株副干酪乳酪杆菌(lacticaseibacillus paracasei)ccfm1355，所述副干酪乳酪杆菌ccfm1355于2023年10月25日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为gdmcc no：63925。

3、所述副干酪乳酪杆菌(lacticaseibacillus paracasei)ccfm1355的16s rdna序列如seq id no.1所示。

4、本发明还提供了一种副干酪乳酪杆菌ccfm1355后生元，所述副干酪乳酪杆菌ccfm1355后生元包括副干酪乳酪杆菌ccfm1355的培养物、干燥物、灭活物和/或破碎物。

5、在一种实施方式中，所述培养物为将副干酪乳酪杆菌ccfm1355用发酵培养基培养所得培养液上清；优选为，将所述副干酪乳酪杆菌ccfm1355接种于发酵培养基中培养，获得培养液，收集得到的培养上清液。

6、在一种实施方式中，所述干燥物为将副干酪乳酪杆菌ccfm1355经干燥处理制备得到的粉剂，所述干燥处理可以为热干燥、喷雾干燥、真空冷冻干燥、流化床干燥或真空干燥。

7、在一种实施方式中，所述灭活物为将副干酪乳酪杆菌ccfm1355经过灭活处理得到的灭活细胞，所述灭活处理可以为热处理或冻干处理；优选为，将所述副干酪乳酪杆菌ccfm1355接种于发酵培养基中培养，收集菌泥，经60～65℃，25～35min的热处理后得到的灭活菌体细胞。

8、在一种实施方式中，所述破碎物为将副干酪乳酪杆菌ccfm1355经过破碎得到的破碎物；优选为，将所述副干酪乳酪杆菌ccfm1355接种于发酵培养基中培养，收集菌泥，重悬菌泥至发酵培养基50-80％体积，高压均质，得到菌体破碎物。

9、在一种实施方式中，所述后生元可通过真空干燥、喷雾干燥、真空冷冻干燥、流化床干燥等各类干燥方法干燥成粉末或直接使用。

10、在一种实施方式中，制备所述后生元时所使用的副干酪乳酪杆菌ccfm1355菌体浓度为不低于5.0×107cfu/ml。

11、本发明还提供了一种产品，所述产品含有上述副干酪乳酪杆菌ccfm1355，和/或副干酪乳酪杆菌ccfm1355后生元。

12、在一种实施方式中，所述产品包含食品、保健品、药品或化妆品。

13、在一种实施方式中，所述食品包括上述组合物及常规辅料。

14、在一种实施方式中，所述常规辅料包括填充剂、矫味剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、抗酸剂、以及营养强化剂中的一种或多种。

15、在一种实施方式中，所述保健品包括上述组合物及常规辅料。

16、在一种实施方式中，所述常规辅料包括填充剂、矫味剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、抗酸剂、以及营养强化剂中的一种或多种。

17、在一种实施方式中，所述药品包含上述组合物、药物载体和/或药用辅料。

18、在一种实施方式中，所述药用辅料包含赋形剂以及附加剂。

19、在一种实施方式中，所述药用辅料包含溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、ph值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂与反絮凝剂、助滤剂或释放阻滞剂中的至少一种。

20、在本发明的一种实施方式中，所述化妆品包括上述组合物、基质原料和/或常规辅料。

21、在本发明的一种实施方式中，所述基质原料包括油脂类原料、蜡类原料、合成油脂原料、粉质原料、胶质原料、凝剂、表面活性剂。

22、在本发明的一种实施方式中，所述常规辅料包括保湿剂、美白剂、矫味剂、粘合剂、润滑剂、防腐剂、薄膜剂、抗氧化剂、乳化剂以及化妆品营养添加剂中的一种或多种。

23、在一种实施方式中，所述产品为所述副干酪乳酪杆菌ccfm1355在含花生衣的培养基中发酵后的发酵物。

24、在一种实施方式中，所述含花生衣的培养基的配方包括：花生衣提取物1-10g/l、1-5g/l葡萄糖、1-10g/l酵母粉、2-6g/l碳酸钙；优选为，花生衣提取物5g/l、4g/l葡萄糖、5g/l酵母粉、4g/l碳酸钙。

25、本发明还提供了一种提升花生衣抗糖化，或预防和/或延缓衰老效果的方法，所述方法包括将含花生衣的培养基与含所述副干酪乳酪杆菌ccfm1355的微生物混合，发酵。

26、在一种实施方式中，所述含花生衣的培养基的配方包括：花生衣提取物1-10g/l、1-5g/l葡萄糖、1-10g/l酵母粉、2-6g/l碳酸钙；优选为，花生衣提取物5g/l、4g/l葡萄糖、5g/l酵母粉、4g/l碳酸钙。

27、在一种实施方式中，所述副干酪乳酪杆菌混合时的接种量为1-5％(v/v)，优选为2％(v/v)。

28、在一种实施方式中，所述发酵条件为：发酵温度25-40℃，发酵时间10-30h；优选为，发酵温度37℃，发酵时间18-24h。

29、在一种方式中，所述提升花生衣的抗糖化，或预防和/或延缓衰老包括提升花生衣的以下至少一方面的作用：

30、(1)体外抑制荧光age生成；

31、(2)缓解丙酮醛造成的hsf细胞活力下降；

32、(3)降低血液age水平；

33、(4)增强皮肤rage竞争性受体ddost基因的表达水平；

34、(5)增强衰老皮肤弹性性能；

35、(6)增强皮肤cu/zn-sod基因表达水平。

36、本发明还提供了根据上述方法发酵得到的发酵组合物。

37、本发明还提供了上述副干酪乳酪杆菌ccfm1355，或副干酪乳酪杆菌ccfm1355后生元，或所述发酵组合物在制备抗糖化、或预防和/或延缓衰老的产品中的应用。

38、在一种实施方式中，所述糖化包括血液和/或其他组织器官中糖化衰老标志物age的积累。

39、在一种实施方式中，所述衰老包括皮肤衰老。

40、在一种实施方式中，所述皮肤衰老包含皮肤干燥、弹性降低、松弛、皱纹产生、氧化损伤或胶原蛋白流失。

41、在一种实施方式中，所述应用包括如下1)-9)至少一种作用：

42、1)体外抑制荧光age的生成；

43、2)缓解age形成中间体(丙酮醛)对皮肤成纤维细胞(hsf)造成的损伤或功能下降；

44、3)降低高糖处理下皮肤成纤维细胞的nfkb1基因表达水平，或mmp-9基因表达水平；或提升高糖处理下皮肤成纤维细胞的ddost基因表达水平，或egr2基因表达水平；

45、4)降低皮肤或血液中age水平；

46、5)降低皮肤或血液中tnf-α或il-6水平；

47、6)增加衰老皮肤角质层含水量或皮肤弹性性能；

48、7)提升衰老皮肤iii型胶原蛋白合成酶col3a1基因表达水平，或提升衰老皮肤iii型胶原蛋白含量，或降低衰老皮肤金属蛋白酶mmp-9基因表达水平；

49、8)降低皮肤rage基因的表达，或提升rage竞争性受体ddost基因的表达；

50、9)降低皮肤nfkb1基因表达水平，或提升cu/zn-sod基因表达水平。

51、在一种实施方式中，所述产品中，所述副干酪乳酪杆菌ccfm1355制备的后生元的剂量不低于10mg/kg体重。

52、有益效果：

53、本发明的副干酪乳酪杆菌(lacticaseibacillus paracasei)ccfm1355及其制备的后生元外用和口服皆具有缓解宿主受到糖化损伤并减少相应衰老问题的能力，具体体现在：

54、(1)抑制体外果糖-牛血清蛋白体系中荧光age的生成；

55、(2)预防丙酮醛对皮肤成纤维细胞(hsf)损伤模型中细胞活力的下降；

56、(3)预防高葡萄糖培养下皮肤成纤维细胞(hsf)受糖损伤后的ddost mrna、mmp-9mrna、egr2 mrna、nfkb1 mrna表达异常；

57、(4)减少衰老个体血清、皮肤中的age含量；

58、(5)减少衰老个体血清和皮肤中炎症标志物il-6和tnf-α的含量；

59、(6)减少糖化损伤造成的衰老个体背部皮肤角质层含水量的降低的情况；

60、(7)缓解糖化损伤造成的衰老个体背部皮肤弹性性能降低的情况；

61、(8)减少糖化损伤造成的衰老个体背部皮肤iii型胶原蛋白含量的降低的情况；

62、(9)缓解衰老个体由于age-rage结合介导的背部皮肤糖化损伤加剧；

63、(10)缓解衰老个体受糖化损伤引发的胶原蛋白合成、降解和炎症反应。

64、此外，副干酪乳酪杆菌(lacticaseibacillus paracasei)ccfm1355发酵花生衣能够提升花生衣的以下能力：

65、(1)体外抑制荧光age生成能力；

66、(2)预防丙酮醛造成的hsf细胞活力下降的能力；

67、(3)抑制血清age生成能力；

68、(4)抑制age-rage结合缓解皮肤糖化损伤的能力；

69、(5)提升皮肤的弹性性能；

70、(6)提升花生衣原本缓解皮肤糖化后氧化应激的能力。

71、因此，副干酪乳酪杆菌(lacticaseibacillus paracasei)ccfm1355及其制备的后生元在缓解宿主受到糖化损伤并减少相应衰老的产品中，具有巨大的应用前景。

72、生物材料保藏

73、副干酪乳酪杆菌(lacticaseibacillus paracasei)ccfm1355，分类学命名为lacticaseibacillus paracasei，已于2023年10月25日藏于保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为gdmcc no:63925，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼。