一种唾液宿主关联乳杆菌及其应用的制作方法

本发明属于微生物，具体涉及一种唾液宿主关联乳杆菌及其应用。

背景技术：

1、肠道微生物与人体健康息息相关，且被形象的称为“微生物器官”。肠道菌群作为机体重要的组成部分，正常状况下肠道菌群保持动态稳定，在促进营养物质消化吸收、维持肠道正常生理功能、调节机体免疫等众多生命活动中发挥重要的作用。然而肠道菌群容易受到各种因素的影响，例如：环境因素、饮食和生活习惯、精神因素、疾病状态、肿瘤治疗、抗生素使用以及年龄等众多因素。

2、人体肠道菌群在受到上述因素影响后发生紊乱，即肠道菌群失调，可表现为肠道有益菌的缺失、病原菌的过度繁殖、肠道屏障功能受损以及肠道炎症的发生，进一步引起宿主的胃肠道疾病，包括便秘、腹泻、腹痛、腹胀等情况，严重的可发展成炎症性肠病、溃疡性结肠炎、肠易激综合征等疾病，极大地影响人体健康和生活质量。

3、目前，利用肠道益生菌来改善肠道健康以及预防或治疗肠道疾病越来越受到关注。肠道益生菌可以增强肠道黏膜屏障功能、阻止病原菌的黏附和定植、增强系统的免疫反应，从而达到维护肠道健康的作用。例如，中国发明专利申请cn 102711778a公开了一株动物双歧杆菌乳亚种dn-173010，并通过小鼠实验和组织学研究验证了其发酵乳能减轻溃疡性结肠炎。公开号为cn107312726a的专利申请文本公开了一种植物乳杆菌，此植物乳杆菌可抑制肠道内大肠杆菌、沙门氏菌、猪链球菌以及金黄色葡萄球菌等有害菌的生长。

4、益生菌也被用来预防或改善一些药物，如抗生素等引起的副作用。在临床上，与化疗相关的副作用也是很常见的。消化系统反应就是最常见的副作用之一，如恶心、呕吐、腹泻和便秘等。以5-fu为例，5-fu被磷酸化为5-fdump或者5-fump后，对增殖的小肠细胞较敏感，能导致小肠黏膜损伤并干扰肠细胞的分裂引起肠壁细胞坏死及肠壁的广泛炎症，造成吸收和分泌细胞数量失衡，进而导致腹泻。另外，化疗药物还会造成细胞dna损伤和线粒体功能障碍，导致ros产生和细胞凋亡。ros可以诱导nf-κb激活，进一步上调促炎因子的表达，导致上皮、内皮和结缔组织的损伤。在肠上皮发生损伤的情况下，有害细菌极易定植，肠道微生态遭到破坏，进而造成致病菌感染，促进腹泻发生发展。

5、唾液宿主关联乳杆菌（又名唾液联合乳杆菌）是肠道益生菌中的重要成员之一。mingfei yao等人（ npj biofilms microbiomes. 2021, 7(1):58.）研究发现，唾液宿主关联乳杆菌对dss（葡聚糖硫酸钠）诱导的小鼠肠道炎症有较好改善作用。另外，专利cn114621895b公开了一种能够抑制具核梭菌并改善口气的唾液联合乳杆菌。尚无研究报道唾液宿主关联乳杆菌在化疗药物引起的腹泻中的作用。

技术实现思路

1、本发明首先提供了一种唾液宿主关联乳杆菌（ ligilactobacillus salivarius）菌株，所述菌株选自保藏号为cctcc no: m 20231936的唾液宿主关联乳杆菌lsali-2。

2、在一些具体实施方式中，本发明所述的唾液宿主关联乳杆菌（ ligilactobacillus  salivarius）的16s rdna序列与seq id no.1一致。

3、在一些具体实施方式中，本发明所述的唾液宿主关联乳杆菌（ ligilactobacillus  salivarius）具有编码氨基酸序列如seq id no.2所示的产乙酸相关酶的基因。

4、在一些具体实施方式中，本发明所述的唾液宿主关联乳杆菌（ ligilactobacillus  salivarius）具有编码氨基酸序列如seq id no.3所示的产乙酸相关酶的基因。

5、在一些具体实施方式中，本发明所述的唾液宿主关联乳杆菌（ ligilactobacillus  salivarius）具有编码氨基酸序列如seq id no.4所示的产丙酸相关酶的基因。

6、其次，本发明还提供了前述唾液宿主关联乳杆菌（ ligilactobacillus  salivarius）菌株的培养方法，所述方法包括将所述唾液宿主关联乳杆菌菌株接种至培养基，进行增殖培养，得到增殖的唾液宿主关联乳杆菌菌株。

7、在一些具体实施方式中，所述培养基每1 l蒸馏水含有bhi肉汤粉末15-20 g，mrs肉汤粉末10-15 g，改良 gam肉汤粉末12-17 g。

8、再次，本发明还提供了一种组合物，其活性成分含前述的唾液宿主关联乳杆菌（ ligilactobacillus salivarius）菌株，或含有通过前述的培养方法培养得到的唾液宿主关联乳杆菌（ ligilactobacillus salivarius）菌株。

9、在一些具体实施方式中，所述唾液宿主关联乳杆菌（ ligilactobacillus  salivarius）菌株作为唯一活性成分。

10、最后，本发明还提供了前述唾液宿主关联乳杆菌（ ligilactobacillus  salivarius）或前述组合物在制备改善肠道健康状况的产品中的应用。

11、在一些具体实施方式中，所述肠道健康状况是肠道炎症和/或肠道屏障损伤和/或肠道病原菌感染。

12、在一些具体实施方式中，所述肠道健康状况是化疗药物引起的腹泻。

13、在一些具体实施方式中，所述肠道病原菌选自以下任意一种或其组合：铜绿假单胞菌、志贺氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌、小肠结肠炎耶尔森菌、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌。

14、在一些具体实施方式中，所述化疗药物选自如下的一种或其组合：5-氟尿嘧啶、替加氟、5'-2'-脱氧尿苷、卡培他滨、替吉奥、紫杉醇、多西他赛、长春瑞滨、顺铂、卡铂、奈达铂、奥沙利铂、洛铂、环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑、卡莫司汀、伊立替康。

15、在一些具体实施方式中，本发明所述的唾液宿主关联乳杆菌（ ligilactobacillus  salivarius）具有如下生化鉴别特征：

16、在无氧三混培养基（bhi+mrs+改良gam）上的菌落形态为白色不透明状圆形、中间凸起、表面光滑湿润；

17、基因组无毒力基因；

18、基因组无耐药基因；

19、体外不溶血（即γ溶血）；

20、在一些具体实施方式中，本发明所述的唾液宿主关联乳杆菌（ ligilactobacillus  salivarius）具有如下功能鉴别特征：

21、（1）具有体外抗炎作用；

22、（2）能预防、改善、减轻或缓解化疗相关性腹泻、炎症以及肠道损伤；

23、（3）对铜绿假单胞菌、志贺氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌、小肠结肠炎耶尔森菌、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌具有抑菌活性。

24、本发明的唾液宿主关联乳杆菌具有如下特点：

25、（1）无毒力因子、无耐药基因、不溶血，具有良好的安全性；

26、（2）对多种致病菌具有抑制作用，能改善肠道屏障，抑制促炎因子的表达，能预防、改善、减轻或缓解化疗药物引起的腹泻、炎症以及肠道损伤；

27、（3）在改善化疗药物引起的腹泻的效果上与化药洛哌丁胺相当。

28、本发明的菌株保藏信息如下：

29、菌株名称：唾液宿主关联乳杆菌（ ligilactobacillus salivarius）lsali-2

30、保藏日期：2023年10月18日

31、保藏单位：中国典型培养物保藏中心（china center for type culturecollection，cctcc），地址：湖北省武汉市武汉大学，邮编：430072，电话：027-68754052。

32、保藏编号：cctcc no: m 20231936。