1.一种含多巴的重组iv型胶原蛋白的纯化生产方法,其特征在于:包括以下步骤:
2.根据权利要求1所述一种含多巴的重组iv型胶原蛋白的纯化生产方法,其特征在于:所述预处理具体包括以下步骤:发酵结束后放罐,得到含有毕赤酵母工程菌表达所得重组iv型胶原蛋白的发酵液,将所述发酵液依次进行固液分离、过滤澄清及超滤浓缩。
3.根据权利要求1所述一种含多巴的重组iv型胶原蛋白的纯化生产方法,其特征在于:所述毕赤酵母工程菌表达的重组iv型胶原蛋白包括一个或多个由选取自天然iv型胶原蛋白中的肽段构成的融合序列单元。
4.根据权利要求1所述一种含多巴的重组iv型胶原蛋白的纯化生产方法,其特征在于:所述预处理中,超滤浓缩采用≤6kd卷式滤膜超滤系统,截留液电导率小于0.5ms/cm。
5.根据权利要求1所述一种含多巴的重组iv型胶原蛋白的纯化生产方法,其特征在于:所述磷酸盐为十二水合磷酸氢二钠和二水合磷酸二氢钠,所述硫酸铜、酪氨酸酶、mmc复合阳离子交换填料、十二水合磷酸氢二钠及二水合磷酸二氢钠在所述中间品料液中的添加量依次为0.01~0.02g/l、100~200u/l、25%~30%、0.9~1.1g/l及0.32~0.35g/l;所述酶促反应的具体条件为:于22~28℃下搅拌3~4h。
6.根据权利要求1所述一种含多巴的重组iv型胶原蛋白的纯化生产方法,其特征在于:所述置换具体包括以下步骤:将酶促反应所得原液用酸或酸溶液调节ph至3.5~4.5后搅拌1~2h,其中所述酸为盐酸、硫酸、柠檬酸、冰乙酸中的一种。
7.根据权利要求1所述一种含多巴的重组iv型胶原蛋白的纯化生产方法,其特征在于:所述淋洗采用的酸溶液为ph3.5~4的乙酸溶液或柠檬酸溶液;所述洗脱的具体条件为:将经过置换及淋洗后的mmc复合阳离子交换填料浸泡于10~15mm、ph6.5~7的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液中一次以上,每次浸泡时间≥30min。
8.根据权利要求1所述一种含多巴的重组iv型胶原蛋白的纯化生产方法,其特征在于:所述后处理具体包括以下步骤:将所述洗脱液超滤浓缩后进行冷冻干燥,或者将所述洗脱液超滤浓缩后进行内毒素去除、冷冻干燥。
9.根据权利要求8所述一种含多巴的重组iv型胶原蛋白的纯化生产方法,其特征在于:所述后处理中,超滤浓缩采用≤6kd卷式滤膜超滤系统,截留液电导率小于0.1ms/cm,内毒素去除采用阴离子层析柱。
10.根据权利要求8所述一种含多巴的重组iv型胶原蛋白的纯化生产方法,其特征在于:经冷冻干燥所得冻干粉为纯度大于95%的含多巴的重组iv型胶原蛋白,且多巴含量大于0.3%。