N-2,6-二甲苯基-哌啶-2-甲酰胺亚硝胺的制备方法与流程

本发明属于医药合成，具体涉及n-2,6-二甲苯基-哌啶-2-甲酰胺亚硝胺的制备方法。

背景技术：

1、亚硝胺化合物，包含亚硝基结构，是某些动物的基因毒性物质，有些已被国际癌症研究机构(iarc)等列为可能或潜在的人类致癌物。这些亚硝胺化合物，在人用药物注册技术要求国际协调会(international conference on harmonization，简称ich)指导文件m7(r1)中被称为“ 关注组群”化合物，评估和控制药品中的dna反应性(致突变)杂质以限制潜在的致癌风险(2018年3月)。ich指南建议，将包括亚硝胺化合物在内的任何已知致突变/致癌物控制在人类癌症风险可忽略的摄入量水平。

2、目前，美国食品和药物管理局(fda)已鉴定出七种亚硝胺杂质，这些杂质理论上可能存在于药品中，因为使用了可能导致亚硝胺形成的制备工艺和材料：n ,n-二甲基亚硝胺(ndma)、n-亚硝基二乙胺(ndea)、n-亚硝基-n-甲基-4-氨基丁酸(nmba)、n-亚硝基异丙基乙胺(nipea)、n-亚硝二异丙胺(ndipa)、n亚硝二丁胺(ndba)和n-亚硝基甲基苯胺(nmpa)。其中，有五种杂质(ndma、ndea、nmba、nipea和nmpa)实际上已在原料药或药品中检测到。

3、n-2,6-二甲苯基-哌啶-2-甲酰胺（cas号：15883-20-2）是罗哌卡因，布比卡因等原料药的中间体。公布号cn111965279b的专利也提及n-2,6-二甲苯基-哌啶-2-甲酰胺。布比卡因长效酰胺类局麻药，适用于外周神经阻滞、硬脊膜外阻滞和蛛网膜下腔阻滞。常用其盐酸盐，为白色结晶性粉末，无臭、味苦。局麻作用强于利多卡因(约强4倍)。其0.25%-0.5%溶液引起局麻的时间一般为4-10分钟，0.75%溶液起效较之略快。用其0.5%溶液加肾上腺素作硬膜外阻滞麻醉，作用可维持5小时。由于本品在血液内浓度低，体内蓄积少，作用持续时间长，故为较安全的长效局麻药。罗哌卡因的ndsri要求是1500ng每天。与单纯亚硝胺杂质不同，ndsri指的是那些药物分子本身参与亚硝胺杂质形成的类型。这些药物中通常都含有二级胺（包括叔胺）结构，为亚硝胺的形成提供了氨基单元。除了需要研究api的ndsri以外，也要检测监控重要中间体的相应的亚硝胺杂质。为了评估罗哌卡因，布比卡因等产品的安全性，也需要n-2,6-二甲苯基-哌啶-2-甲酰胺亚硝胺这样的关键中间体的亚硝胺化合物。

技术实现思路

1、鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的是提供n-2,6-二甲苯基-哌啶-2-甲酰胺亚硝胺的制备方法，能用于制备n-2,6-二甲苯基-哌啶-2-甲酰胺亚硝胺的标准品。

2、为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供以下技术方案：

3、n-2,6-二甲苯基-哌啶-2-甲酰胺亚硝胺的制备方法，包括如下步骤：

4、取n-2,6-二甲苯基-哌啶-2-甲酰胺和亚硝酸钠，溶解，加入柠檬酸，搅拌；

5、用lc-ms检测n-2,6-二甲苯基-哌啶-2-甲酰胺完全转化为n-亚硝胺n-2,6-二甲苯基-哌啶-2-甲酰胺后，停止反应；

6、取反应完全后的合成溶液，经过分离纯化后，得到n-亚硝胺n-2,6-二甲苯基-哌啶-2-甲酰胺，所述n-亚硝胺n-2,6-二甲苯基-哌啶-2-甲酰胺的结构式为：。

7、于本发明一实施例中，所述lc-ms检测条件为：

8、

9、                                                                    。

10、于本发明一实施例中，取n-2,6-二甲苯基-哌啶-2-甲酰胺和亚硝酸钠，用乙腈水溶液溶解，加入柠檬酸，50-70℃搅拌10~30min。

11、于本发明一实施例中，取n-2,6-二甲苯基-哌啶-2-甲酰胺和亚硝酸钠时，n-2,6-二甲苯基-哌啶-2-甲酰胺和亚硝酸钠的摩尔比为1:（0.1-1）。

12、于本发明一实施例中，所述乙腈水溶液的浓度为30%~80%。

13、于本发明一实施例中，所述分离纯化的液相色谱条件包括如下：

14、色谱柱：welch xtimate c18 40*100mm, 5μm；

15、流动相a：0.1%tfa（三氟乙酸）；

16、流动相b：乙腈；

17、流速：25ml/min；

18、进样量：1000μl；

19、柱温：室温；

20、检测波长：220nm和254nm。

21、进一步的，所述分离纯化的液相色谱条件还包括如下：

22、梯度洗脱程序为：

23、

24、                                                       。

25、于本发明一实施例中，还包括如下步骤：

26、得到n-亚硝胺n-2,6-二甲苯基-哌啶-2-甲酰胺后，收集分离纯化后的馏分，用旋转蒸发仪去除大部分乙腈，然后转移至冷冻干燥机，进行冻干处理，得到冻干后的n-亚硝胺n-2,6-二甲苯基-哌啶-2-甲酰胺。

27、于本发明一实施例中，还包括如下步骤：

28、对所述n-亚硝胺n-2,6-二甲苯基-哌啶-2-甲酰胺进行hplc纯度检测：取所述冻干后的n-亚硝胺n-2,6-二甲苯基-哌啶-2-甲酰胺，使用制备级乙腈溶解，配置成浓度为1mg/ml的待测样品，hplc分析条件为：流速1ml/min，检测波长254nm，进样量5ul，qc-hplc的液相色谱条件为：

29、 时间（min） 流动相a（0.05%tfa） 流动相b（乙腈） 0 95% 5% 20 5% 95% 24 5% 95% 24.1 95% 5% 28 95% 5%

30、于本发明一实施例中，还包括如下步骤：

31、对所述n-亚硝胺n-2,6-二甲苯基-哌啶-2-甲酰胺进行质谱测定：用四极杆飞行时间质谱测定n-亚硝胺n-2,6-二甲苯基-哌啶-2-甲酰胺的工作对照品的精确分子量，用乙腈溶解工作对照品，过滤，装入液相小瓶，流动相为甲酸水；离子源为esi，正负离子模式下检测工作对照品分子量，检测范围50~2000。

32、于本发明一实施例中，还包括如下步骤：

33、对所述n-亚硝胺n-2,6-二甲苯基-哌啶-2-甲酰胺进行核磁共振波谱仪检测：

34、精密称取对三甲基间苯三酚，加入dmso-d6试剂，振摇使其完全溶解，作为内标母液；

35、精密称取所述n-亚硝胺n-2,6-二甲苯基-哌啶-2-甲酰胺，加入所述内标母液，振摇使其完全溶解，作为供试品溶液，将溶液转移至核磁管中备用；

36、定量核磁仪器参数设置：采用90°脉冲，脉冲程序为zg30，谱宽(swh)设置为8200hz，谱宽(sw)设置为20ppm，空扫次数(ds)为2s，采样次数(ns)为32次，采样时间(aq)为4s，采样点数(td)为65536，接收器增益(rg)为101，弛豫延迟时间(d1)为10s；

37、数据处理与qhnmr计算：将采集到的氢谱进行傅里叶变换，然后对图谱基线校正和相位校正，对选定的内标定量峰和样品定量峰进行积分，积分5次，取峰面积的平均值，计算公式如下：

38、；

39、其中，ps，pr分别为样品与内标物质量百分含量；ms，mr分别为样品与内标物相对分子质量；as，ar分别为样品与内标物定量峰积分面积；ns，nr分别为样品与内标物定量峰包含的质子数；ms，mr分别为样品与内标物称样量。

40、本发明的有益效果是：

41、本发明成功合成了n-亚硝胺n-2,6-二甲苯基-哌啶-2-甲酰胺，其可作为标准品，hplc检测n-亚硝胺n-2,6-二甲苯基-哌啶-2-甲酰胺的纯度为99.66%，定量核磁检测n-亚硝胺n-2,6-二甲苯基-哌啶-2-甲酰胺的含量为97.5%，且通过高分辨质谱测定了分子式和分子量，进一步用核磁氢谱和核磁碳谱分别确认了结构。本发明制备方法中包含的检测方法还可用于监控多种含n-亚硝胺n-2,6-二甲苯基-哌啶-2-甲酰胺的药物，监控其质量。比如评估罗哌卡因，布比卡因等产品的安全性。