用于诱导Tscm细胞的培养基、培养方法及其应用与流程

本发明涉及细胞培养，尤其涉及一种用于诱导tscm细胞的培养基、培养方法及其应用。

背景技术：

1、干细胞样记忆t细胞(stem cell-like memory t cells，tscm)是一群具有自我更新、在体内能长期生存以及分化为不同亚群的干细样t细胞。tscm细胞具有高表达cd62l、ccr7、cd122、il-7rα、sca-1、bcl-2等分子，低表达cd44、cd25、cd69、cd127等分子的表型特征。tscm细胞在抗原刺激后可以迅速扩增并分化为效应t细胞(teff)、中央记忆t细胞(tcm)和效应记忆t细胞(tem)，从而产生强烈的免疫效应。tscm细胞在抗原再次刺激时可以快速扩增并分化为不同效应亚群并形成记忆免疫。tscm细胞因其具有高效的免疫应答和持久的免疫记忆的能力，被认为是细胞免疫治疗、疫苗接种和抗衰老的关键免疫效应细胞。

2、然而，由于正常人体内的tscm细胞极为稀少，这成为其临床转化应用的绊脚石。目前已有多种方法用于诱导和扩增tscm细胞，包括使用特定的细胞因子、小分子药物、基因编辑等。这些方法可以提高tscm细胞的数量和质量，增强其抗肿瘤和抗感染的能力，为细胞免疫治疗提供更多的选择和可能。因此，需要一种能够有效扩增tscm细胞的方式，提高其培养效率，保持其表型和功能的稳定，为细胞免疫的临床应用提供更多的选择和可能。

技术实现思路

1、本发明提供一种用于诱导tscm细胞的培养基、培养方法及其应用，用以解决现有技术诱导tscm细胞效率低、难度大等问题。

2、作为本发明的第一方面，本发明提供一种用于诱导tscm细胞的培养基，包括：500～1500u/ml il-2、1～100ng/ml il-15、1～100μm tws119、0.5～5μm汉黄芩素、0.5～5μm金丝桃苷、1～20μm阿魏酸和1～10％自体血浆。

3、根据本发明提供的一种用于诱导tscm细胞的培养基，所述培养基包括：

4、700u/ml il-2、5ng/ml il-15、20μm tws119、1μm汉黄芩素、1μm金丝桃苷、5μm阿魏酸，和10％自体血浆。

5、作为本发明的第二方面，本发明还提供一种用于同时诱导tscm细胞及inkt细胞的培养基，所述培养基包括：

6、500～1500u/ml il-2、1～100ng/ml il-15、10～1000ng/mlα-galcer、10～1000ng/ml 7dw8-5、1～100μm tws119、10～1000ng/ml gm-csf、1～100ng/ml il-4、10～1000u/ml tnf-α、1～100ng/ml lps、0.5～5μm汉黄芩素、0.5～5μm金丝桃苷、1～20μm阿魏酸、1～10％自体血浆。

7、作为本发明用于同时诱导tscm细胞及inkt细胞的培养基的优选方案，所述培养基包括：700u/ml il-2、5ng/ml il-15、50ng/mlα-galcer、50ng/ml 7dw8-5、20μm tws119、50ng/ml gm-csf、10ng/ml il-4、100u/ml tnf-α、20ng/ml lps、1μm汉黄芩素、1μm金丝桃苷、5μm阿魏酸、10％自体血浆。

8、本发明的用于同时诱导tscm细胞及inkt细胞的培养基，能同时扩增tscm细胞及inkt细胞，经此培养基体系后，培养的到的c1型和c2型inkt细胞在cd3+t细胞中的占比分别为12.0％和17.5％；得到的干细胞样记忆cd8+t细胞在cd8+t细胞中的占比为55.3％。此培养基能在有效扩增tscm细胞，在此基础上还能同时诱导扩增inkt细胞，且此培养基体系其能促进ifn-γ分泌，经此培养基体系培养在得到的混合细胞(inkt细胞和tscm细胞)在无激动剂和靶细胞刺激的情况下即可分泌高水平的ifn-γ，能够达到486.76pg/ml。

9、作为本发明的第三方面请求保护上述方案中用于同时诱导tscm细胞及inkt细胞的培养基在同时培养诱导tscm细胞及inkt细胞的应用。

10、本发明的第四方面，本发明还提供一种用于同时诱导tscm细胞及inkt细胞的培养方法，所述方法包括：

11、获取待处理细胞；

12、根据预设的培养时长，基于上述第二方面所指出任意一种用于同时诱导tscm细胞及inkt细胞的培养基，培养所述待处理细胞；

13、收集培养后的所述待处理细胞备用。

14、根据本发明提供的一种用于同时诱导tscm细胞及inkt细胞的培养方法，所述待处理细胞的接种密度为5×106个/ml。

15、根据本发明提供的一种用于同时诱导tscm细胞及inkt细胞的培养方法，所述待处理细胞为pbmc，所述培养时长为14天。

16、本发明还提供一种试剂盒，所述试剂盒包括如上所述任意第一方面所指出的用于诱导tscm细胞的培养基，所述试剂盒用于诱导tscm细胞的培养或/和外泌体制备。

17、本发明还提供一种试剂盒，所述试剂盒包括如第二方面所指出的用于同时诱导tscm细胞及inkt细胞中任意一项培养基，所述试剂盒用于同时诱导tscm细胞及inkt细胞的培养或/和外泌体制备。

18、本发明提供的一种用于诱导tscm细胞的培养基、培养方法及其应用，该培养基包括：500～1500u/ml il-2、1～100ng/ml il-15、1～100μm tws119、0.5～5μm汉黄芩素、0.5～5μm金丝桃苷、1～20μm阿魏酸和1～10％自体血浆。

19、在此基础上还提供一种能够实现同时诱导tscm细胞和inkt细胞的培养基，经过本发明提供的培养基，可获得大量的tscm细胞，若共同诱导，则可产生在cd3+t细胞中的占比近30％的inkt细胞，在cd8+t细胞中的占比12％的tscm细胞。此外，还能够促进以ifn-γ为代表的细胞因子的高水平分泌，为细胞诱导培养、外泌体制备等方面提供了有效手段。

技术特征：

1.一种用于诱导tscm细胞的培养基，其特征在于，包括：500～1500u/ml il-2、1～100ng/ml il-15、1～100μm tws119、0.5～5μm汉黄芩素、0.5～5μm金丝桃苷、1～20μm阿魏酸以及1～10％自体血浆。

2.根据权利要求1所述的用于诱导tscm细胞的培养基，其特征在于，所述培养基包括：

3.一种用于同时诱导tscm细胞及inkt细胞的培养基，其特征在于，所述培养基包括：

4.根据权利要求3所述的用于同时诱导tscm细胞及inkt细胞的培养基，其特征在于，所述培养基包括：

5.一种如权利要求3或4所述的用于同时诱导tscm细胞及inkt细胞的培养基在同时培养诱导tscm细胞及inkt细胞的应用。

6.一种用于同时诱导tscm细胞及inkt细胞的培养方法，其特征在于，所述方法包括：

7.根据权利要求6所述的用于同时诱导tscm细胞及inkt细胞的培养方法，其特征在于，所述待处理细胞的接种密度为5×106个/ml。

8.根据权利要求6所述的用于同时诱导tscm细胞及inkt细胞的培养方法，其特征在于，所述待处理细胞为pbmc，所述培养时长为14天。

9.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1～2中任意一项培养基，所述试剂盒用于诱导tscm细胞的培养或/和外泌体制备。

10.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求3～4中任意一项培养基，所述试剂盒用于同时诱导tscm细胞及inkt细胞的培养或/和外泌体制备。

技术总结
本发明提供一种用于诱导Tscm细胞的培养基、培养方法及其应用，涉及细胞培养技术领域，该培养基包括：500～1500U/mL IL‑2、1～100ng/mL IL‑15、1～100μM TWS119、0.5～5μM汉黄芩素、0.5～5μM金丝桃苷、1～20μM阿魏酸和1～10％自体血浆。在此基础上，本发明还提供同时诱导Tscm细胞和iNKT细胞的培养基，能够提高Tscm的转化效率，实现同时诱导Tscm细胞和iNKT细胞的培养基，提高细胞的分化效率。此外，经本发明同时诱导Tscm细胞和iNKT细胞培养基及其培养方法得到的混合细胞能够在无激动剂和靶细胞刺激的情况下即可分泌高水平的细胞因子。

技术研发人员：白宗科,陈复兴,张月圆
受保护的技术使用者：深圳泽医细胞治疗集团有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/24